Practica de Laboratorio Coliformes

PRACTICA DE LABORATORIO DE CALIDAD DE AGUA, PARMETROS DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES GESTIN AMBIENTAL INGENIERA CIVIL
UNIVERSIDAD PILOTO DE COLOMBIA
Coliformes Totales Coliforme significa con forma de Coli, refirindose a la bacteria principal del grupo, la Escherichia Coli, descubierta por el bacterilogo alemn Theodor von Escherich en 1860. Von Escherich la bautiz como bacterium coli ("bacteria del intestino", del griego , kolon, "intestino"). Con posterioridad, la microbiologa sistemtica nombrara el gnero Escherichia en honor a su descubridor. La denominacin genrica coliformes designa a un grupo de especies bacterianas que tienen ciertas caractersticas bioqumicas en comn e importancia relevante como indicadores de contaminacin del agua y los alimentos, las bacterias de este gnero se encuentran principalmente en el intestino de los humanos y de los animales de sangre caliente, es decir, homeotermos, pero tambin ampliamente distribuidas en la naturaleza, especialmente en suelos, semillas y vegetales. Los coliformes se introducen en gran nmero al medio ambiente por las heces de humanos y animales, por tal motivo suele deducirse que la mayora de los coliformes que se encuentran en el ambiente son de origen fecal, sin embargo, existen muchos coliformes de vida libre. Tradicionalmente se los ha considerado como indicadores de contaminacin fecal en el control de calidad del agua destinada al consumo humano en razn de que, en los medios acuticos, los coliformes son ms resistentes que las bacterias patgenas intestinales y porque su origen es principalmente fecal. Por tanto, su ausencia indica que el agua es bacteriolgicamente segura, as mismo, su nmero en el agua es proporcional al grado de contaminacin fecal; mientras ms coliformes contiene el agua, mayor es la gravedad de la descarga de heces. Los coliformes son una familia de bacterias que se encuentran comnmente en las plantas, el suelo y los animales, incluyendo a los humanos. En general, las bacterias coliformes se encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en los sedimentos del fondo. Por su amplia diversidad el grupo coliformes ha sido divido en dos grupos: coliformes totales y coliformes fecales.
Coliformes Fecales No todos los coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario desarrollar pruebas para diferenciarlos a efectos de emplearlos como indicadores de contaminacin. Se distinguen, por lo tanto, los coliformes totales (que comprende la totalidad del grupo y los coliformes fecales aquellos de origen intestinal). Desde el punto de vista de la salud pblica esta diferenciacin es importante puesto que permite asegurar con alto grado de certeza que la contaminacin que presenta el agua es de origen fecal. Se define como coliformes fecales a aquellos que fermentan la lactosa a 44,5 45,5 C, anlisis que permite descartar a Enterobacter, puesto que sta no crece a esa temperatura. Si se aplica este criterio crecern en el medio de cultivo principalmente Escherichia coli (90%) y algunas bacterias de los gneros Klebsiella y Citrobacter. La prueba de coliformes fecales positiva indica un 90% de probabilidad de que el coliforme aislado sea E. coli. Las coliformes son una familia de bacterias que se encuentran comnmente en las plantas, el suelo y los animales, incluyendo a los humanos. La presencia de bacterias coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el suministro de agua puede estar contaminado con aguas negras u otro tipo de desechos en descomposicin. Generalmente, las bacterias coliformes se encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en los sedimentos del fondo. Se estima que E. coli O157: H7 causar hasta 120.000 enfermedades gastro intestinales cada ao slo en los EE.UU., lo que resulta en ms de 2.000 hospitalizaciones y 60 muertes. Sin embargo, el plazo para la salud los efectos a largo de E coli infeccin en adultos son en gran parte desconocida.
PROCEDIMIENTO PROPUESTO 1. Se preparan los caldos para realizar la prueba de laboratorio, para lo cual se utiliza caldo MENDO para coliformes totales y MFC para coliformes fecales.
2. Se alistan las cajas de petri previamente esterilizadas, en caso tal de no contar con una autoclave, es necesario lavarlas bien con agua destilada y colocarlas en contacto con un mechero prendido, limpiando previamente la superficie con alcohol.
3. Se toman los Pads y con la ayuda de unas pinzas se colocan en igual nmero de cajas de Petri previamente marcadas para determinar que tipo de ensayo se va a realizar ya sea de coliformes totales o fecales.
4. Por otra parte se toman 2,5 ml de caldo dependiendo el ensayo (coliformes totales o fecales) y se empapa el Pad en cada una de las cajas de Petri ya marcadas.
5. En esa lnea, se coloca el equipo de succin o filtracin y ayudado de unas pinzas, se procede a sacar la membrana empapada del caldo de la caja de petri y se coloca en el embudo para comenzar a verter el agua problema a analizar. Se recomienda analizar mnimo 1 ml y mximo 100 ml de muestra del agua, dependiendo del tamao de los Pads a utilizar en el ensayo y el grado de material orgnico en el agua.
6. Se acciona el succionador mecnico por tiempos para que la muestra se filtre lentamente y quede todo el pad impregnado del agua a analizar. 7. Luego se destapa con cuidado el embudo y con la ayuda de las pinzas se coloca el pad o membrana nuevamente en la caja de petri, y con las dems muestras se realiza el mismo procedimiento anteriormente nombrado.
8. Por ltimo las muestras de coliformes totales se llevan al horno que tiene una temperatura media entre 35 a 37 centgrados y las de coliformes fecales al horno que tiene una temperatura media de 45 a 47 centgrados, dejndolas por 24 horas. 9. Al da siguiente se cuentan las colonias y se escribe el dato en UFC (unidades formadoras de colonia).
PROTOCOLO Y ORIENTACIONES PARA LA RECOLECCIN DE MUESTRAS DE AGUA POTABLE

Recoleccin de las muestras para pruebas microbiolgicas Se recomienda tener en cuenta algunas precauciones generales tales como: En el sitio donde se va a recolectar la muestra el agua debe estar completamente mezclada (representatividad) Antes de recolectar la muestra NO se debe purgar el recipiente, se debe tomar la muestra directamente una vez, con guantes preferiblemente y tapar inmediatamente el recipiente. Si la muestra es tomada directamente de una llave en un punto, es necesario llevar alcohol antisptico y con una servilleta limpiar la salida de esta, luego, se debe calentar alrededor de 10 segundos con la ayuda de un mechero y realizar los pasos del paso anterior. Se debe identificar los recipientes de muestreo antes de recolectar la muestra utilizando lapicero, no utilizar lpiz ni lapicero de tinta mojada, con los datos solicitados en el tem de identificacin de la muestra. Es necesario asegurar la integridad de la muestra desde su recoleccin hasta el reporte de los resultados (cadena de custodia de la muestra), por lo cual se debe refrigerar la muestra, ya que la confiabilidad en estado fro del recipiente puede durar hasta 24 horas despus de la toma en campo.
TABLA DE RESULTADOS
Parmetro
Coliformes Totales Coliformes Fecales
Agua Problema
Agua Filtrada
Norma 2115 2007

0
Unidad
UFC/100 cm3
UFC/100 cm3

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