REAL ACADEMIA DE CIENCIAS EXACTAS, FISICAS, QUIMICAS Y NATURALES DE ZARAGOZA

LAS CIANOBACTERIAS: COOPERACIN VERSUS COMPETENCIA

DISCURSO DE INGRESO LEDO POR LA ACADMICA ELECTA Ilma. Sra. Da. MARA LUISA PELEATO SNCHEZ EN EL ACTO DE SU RECEPCIN SOLEMNE CELEBRADO EL DA 16 DE JUNIO DEL AO 2011 Y DISCURSO DE CONTESTACIN POR EL Ilmo. Sr. D. CARLOS GMEZ-MORENO CALERA ACADMICO NUMERARIO

ZARAGOZA 2011

REAL ACADEMIA DE CIENCIAS EXACTAS, FISICAS, QUIMICAS Y NATURALES DE ZARAGOZA

LAS CIANOBACTERIAS: COOPERACIN VERSUS COMPETENCIA

DISCURSO DE INGRESO LEDO POR LA ACADMICA ELECTA Ilma. Sra. Da. MARA LUISA PELEATO SNCHEZ EN EL ACTO DE SU RECEPCIN SOLEMNE CELEBRADO EL DA 16 DE JUNIO DEL AO 2011 Y DISCURSO DE CONTESTACIN POR EL Ilmo. Sr. D. CARLOS GMEZ-MORENO CALERA ACADMICO NUMERARIO

ZARAGOZA 2011

Depsito legal: Z-?????? Imprime: Sdad. Coop. De Artes Grficas Librera General Pedro Cerbuna, 23 50009 Zaragoza
imprentalg@efor.es

LAS CIANOBACTERIAS: VERSUS COMPETENCIA COOPERACION

POR LA Ilma. Sra. Do na MAR IA LUISA PELEATO SANCHEZ

Excelentsimo Sr. Presidente de la Academia de Ciencias de Zaragoza, Ilustrsimos Sres. Acadmicos, Seoras y Seores:

En primer lugar, quiero expresar mi agradecimiento, tanto al Seor Presidente, como a todos los Seores Acadmicos por el honor que supone esta inesperada distincin. No puedo dejar de recordar a mi predecesor, Don Horacio Marco Moll, por muchas razones acumuladas durante muchos aos de convivencia, y agradecerle todo lo que aos aport a mi formacin como profesora de esta universidad. Mucho tiempo ha pasado, pero recuerdo con nitidez comentar con l, casi 30 aos atrs, el escrito que present en su propia entrada en esta institucin y la exhaustiva y cuidadosa bsqueda bibliogrfica que llev a cabo para la disertacin. En aquel momento, la cronobiologa era un tema puntero, que implicaba un enfoque nuevo y original, tan apenas esbozado en la bibliografa cientfica. Fue muy interesante para mi en aquel momento vislumbrar lo que haba detrs de lo aparentemente sencillo, como los ritmos circadianos de muchos procesos biolgicos, y la existencia de lo que hoy llamamos los relojes moleculares. Han pasado muchos aos, nuestra disciplina ha avanzado de forma exponencial, y la biologa molecular ha revolucionado nuestro conocimiento. Con una clara visin de futuro, el propio don Horacio citaba en su texto: Esperamos que los continuos avances de la Biologa Molecular, muy especialmente en lo que se refiere a los procesos de regulacin gnica, proporcionen en el da de maana la clave esencial para entender todos estos procesos autorregulados refirindose a una propuesta de un posible modelo terico que explicara el funcionamiento de los relojes biolgicos. Aunque queda mucho por comprender, as ha sido. Por otra parte, no puedo dejar de agradecer a otro profesor Acadmico, el doctor Carlos Gmez-Moreno el papel crucial que ha desempeado en mi vida profesional. l me introdujo all en el ao 83 en el emocionante mundo de las cianobacterias y su fisiologa. A lo largo de todos estos aos, no tengo sino palabras de agradecimiento incondicional por su apoyo, confianza, autoridad moral, ejemplo y enseanzas. No solo he aprendido en el mbito cientfico, sino tambin en el personal. Estos pensamientos no suelen formularse con nitidez debido al pudor que producen, pero quiero aprovechar esta ocasin para decir pblicamente, gracias, muchas gracias, en el sentido ms amplio posible. 7

Mi abuela Avelina Tovar, nacida en la dcada de 1870, tambin profesora de lo que hoy es esta Universidad, hablaba de sus discpulos, trmino que en la infancia nos resultaba chocante a mi y a mis hermanos. Pasados muchos aos desde aquel entonces, creo que discpulo es una palabra muy hermosa. Yo me considero discpula de mucha gente, pues de todos ellos he aprendido muchas cosas. He mencionado ya anteriormente a Don Horacio y al profesor Gmez-Moreno, y hay otras muchas personas que me han enriquecido como profesor y como persona. Don Cruz Rodrguez Muoz, de saber enciclopdico y bondad infinita, me ense a mirar a la realidad cercana y a lo cotidiano con ojos cientficos, revelndose lo que esconda lo pequeo como maravilloso. Doa Pilar Laguia me enseo la entrega a la docencia y la generosidad en el trabajo. De muchsimos compaeros (Juan Marin, hoy tambin compaero en esta institucin) he aprendido enormemente. Muy especialmente tuve la inmensa suerte de encontrarme con Mara Teresa Muio y Jos lvaro Cebrin, que me abrieron la puerta del quehacer cientfico, me introdujeron en la investigacin y me ensearon a hacerla, y sobre todo, transmitindome su entusiasmo. Pienso que la smosis y el transporte activo funcionan en los laboratorios en el flujo de adquisicin de conocimientos y actitudes. En este sentido, no he podido tener mejor entorno, y creo que me he visto rodeada de una largusima lista (inviable para ser incluida en este texto) de colegas, becarios y compaeros muy notables. En mi grupo, tambin puedo demostrar que los mecanismos de cooperacin han sido ms eficaces que los de competencia, y mi quehacer no sera mi quehacer sin el codo a codo con Mara Fillat y tambin Mara Teresa Bes. Por ltimo, como todos los profesores, he aprendido de mis alumnos, que afortunadamente todos los aos siguen igual de jvenes, aunque yo haya acumulado algunas arrugas ms. Por ltimo, no puedo dejar de decir que el amor a la Biologa fue una semilla que sembr mi padre y que ha sido un tesoro durante todos estos aos, ya que vengo a esta casa a disfrutar. Soy muy afortunada. Tratar de ser merecedora de llevar la medalla de mi antecesor, Don Horacio, y aportar la ilusin que l puso en el trabajo acadmico y en engrandecer todo lo posible esta institucin.

Resumen Las cianobacterias son unos organismos que no forman aparentemente parte de nuestro entorno cotidiano, y sin embargo, afectan fuertemente la vida en el planeta, y por supuesto, nuestra supervivencia. Han sido organismos cruciales en la evolucin de los seres vivos en la tierra, y determinaron sin duda el camino evolutivo del resto de los organismos. Las cianobacterias, ancestros de las actuales, fueron las que evolutivamente desarrollaron la fotosntesis oxignica, y ese hecho fue un evento nico y determinante en la historia de nuestro planeta. Adems, ancestros de estas cooperaron con otras clulas primitivas, permitiendo una endosimbiosis que desemboc en la existencia de formas de vida auttrofa muy variadas, entre ellas, las plantas superiores. En estos momentos, desempean un papel relevante como productores primarios a gran escala, y contribuyen sustancialmente a mantener en la biosfera los ciclos de carbono, oxgeno y nitrgeno. Son fuente de principios activos importantes, y se consideran un material biolgico muy relevante para obtener biocombustibles, a la vez que pueden actuar como sumideros de CO2, de forma que pueden paliar el calentamiento global. Sin embargo, tambin pueden dar lugar a problemas importantes, y como se comentar posteriormente, las cianobacterias pueden producir floraciones o proliferaciones masivas que pueden provocar problemas sanitarios y medioambientales. En alguna ocasin, estas cianobacterias pueden producir metabolitos secundarios de carcter txico para organismos eucariotas, lo que llamamos cianotoxinas. Las cianobacterias son organismos procariotas, y se engloban en el reino monera, y comparten caractersticas comunes con otras bacterias fotosintticas, as como con el resto del las bacterias. Durante mucho tiempo, se han considerado algas, Cianophyta, literalmente algas azules. Su nombre vulgar, algas verde azuladas o cianofitas, todava aparece frecuentemente en la literatura no especializada. Las cianobacterias cambiaron el curso evolutivo de los seres vivos En trminos de la historia de la Tierra y de la vida, las cianobacterias ocupan un lugar privilegiado. La adquisicin de la capacidad bioqumica de utilizar agua como fuente de electrones para la fotosntesis parece que ocurri entre unos 2500-3000 millones de aos atrs. Algunos autores piensan que pudo se algo ms tardo, entre 2300-2400 millones de aos. Sin embargo las cianobacterias parece que surgieron hacia 3800 millones de aos atrs, 9

aunque hasta unos 2400 millones de aos no se encuentra registro de presencia de oxgeno significativa en la atmosfera y superficie. Las formaciones fsiles de cianobacterias son los primeros vestigios claros de vida en nuestro planeta, y las datos geobiolgicos permiten hacer este tipo de especulaciones. Sin entrar en detalles acerca de las primeras clulas, s podemos pensar, basndonos en evidencias fsiles y metablicas, que a medida que se intensific la competencia por sustratos orgnicos producidos de forma geoqumica, los organismos que fueron capaces de adquirir autonoma energtica tuvieron una fuerte ventaja evolutiva. Las bacterias fotosintticas, generando una fuente inagotable de poder reductor, superaron el mayor obstculo de la evolucin de las clulas, la disponibilidad de energa. Desarrollaron centros de reaccin fotoqumicos que pueden utilizar energa solar para producir directamente molculas reducidas necesarias para procesos asimilatorios. Un grupo de este tipo de organismos, los ancestros de las cianobacterias, fueron capaces de utilizar el agua circundante como fuente de electrones para la fotorreduccin, inagotable frente a los sustratos que utilizaban las otras bacterias fotosintticas. Requiri adquirir una sofisticada maquinaria fotosinttica, con complejos metaloproticos capaces de obtener electrones del agua, as como acoplar dos centros fotoqumicos, necesarios para salvar la diferencia de potencial redox entre el agua y el NADPH. Las homologas estructurales que existen entre fotosistemas actuales sugieren que este cambio implic la cooperacin de un fotosistema derivado de las bacterias verdes (fotosistema I) y otro derivado de las bacterias prpuras (fotosistema II). Aunque no podemos reconstruir como se gener este eficaz mecanismo, este es un claro ejemplo de cmo no es solo la competencia la fuerza impulsora de los cambios evolutivos, sino que en muchos casos la cooperacin conduce a la evolucin. La aparicin del oxgeno en el planeta provoc un cambio espectacular, nico y definitivo en la posterior evolucin de todos los seres vivos, incluso de la qumica de la corteza terrestre. Los organismos existentes en aquel momento llevaron tres destinos distintos con resultados que podemos inferir claramente. Se piensa que la mayora se extingui, ya que no fue capaz de adaptar sus estructuras y metabolismo a una atmosfera oxidante. Otro grupo qued restringido a hbitats pobres o carentes de oxgeno, y son los ancestros de los grupos que actualmente pueblan nichos extremos, tales como por ejemplo los fondos de pantanos, ricos en metano y pobres en oxgeno. Un tercer grupo, no solo fue capaz de resistir la presencia de oxgeno, adaptando sus estructuras y metabolismo a su presencia, sino que obtuvo una ventaja enorme de su presencia, y optimiz el metabolismo energtico, obteniendo una mayor cantidad de energa metablica. De este tipo de organismos descendemos todos nosotros. Uno de los problemas ms interesantes que se plantea la comunidad cientfica es cmo las 10

cianobacterias mismas fueron capaces, en los primeros momentos de soportar el oxgeno, y posteriormente adaptar el metabolismo a su presencia. La pregunta es cmo pudieron producirlo sin envenenarse a si mismas?. De hecho, algunos procesos como la fijacin de nitrgeno que llevan a cabo las cianobacterias diaztrofas remanentes, ocurre nicamente de forma anaerobia, y la nitrogenasa, el complejo enzimtico responsable de la reduccin del dinitrgeno atmosfrico, evolutivamente no ha adaptado su funcin a la presencia de oxgeno. Por esta razn, se han desarrollado estrategias de evitacin del oxgeno muy sofisticadas e interesantes. Los organismos de la tierra primitiva tuvieron que desplegar mecanismos de proteccin contra el incremento de los niveles de oxgeno; de hecho todos los organismos actuales, presentamos una gran batera de mecanismos de defensa de detoxificacin para evitar el dao oxidativo, herederos de los que se generaron en aquel momento. A pesar de esto, se postula que la acumulacin de alteraciones oxidativas en nuestras macromolculas puede ser una causa importante de envejecimiento. Entre las explicaciones para la aparicin de estos mecanismos de proteccin, se considera posible que el hecho de carecer el planeta de una pantalla de ozono que impidiera que radicales libres generados por la luz ultravioleta, podra haber ejercido la presin selectiva necesaria para que se generara toda la defensa oxidativa. Es importante resaltar que las grandes lagunas de nuestro conocimiento solo pueden ser subsanadas mediante especulaciones, quizs errneas en muchos detalles. No podemos retroceder en el tiempo para conocer los detalles moleculares que tuvieron lugar hace miles de millones de aos, pero los eventos metablicos antiguos han dejado muchos vestigios en organismos actuales, y eso nos permite reconstruir con cierta certeza algunos procesos. Las cianobacterias pueden ser consideradas el grupo ms importante de organismos que se han originado en nuestro planeta. Sus adquisiciones evolutivas determinaron la evolucin de todo el resto de organismos. Su capacidad de utilizar agua como donador de electrones para la fotosntesis impuls una produccin primaria explosiva frente a las restricciones impuestas por la disponibilidad de otras fuentes de electrones que los fotoauttrofos estaban utilizando, como H2S, H2 , Fe2+. Por otra parte, su capacidad de fijar nitrgeno atmosfrico increment su xito. Adems de los cambios en lo que se refiere al oxgeno, estos organismos captaron cada vez mas carbono para formar materia orgnica, lo que cre suelo y sustratos para ser incorporados a las redes trficas. Las cianobacterias cooperaron con otros, dando lugar a sinergias metablicas muy importantes. La endosimbiosis que las cianobacterias establecieron con otras estirpes celulares introdujo la fotoautotrofa en los eucariotas, contribuyendo a la trasformacin de los medios acuticos y terrestres. Las consecuencias se traslucen en prcticamente todos los ecosistemas 11

del planeta. Hace unos 100 millones de aos, tras una infeccin que dio lugar a una primera endosimbiosis, un ancestro de las cianobacterias se incorpor a algunas de estas clulas. En este caso, parece que fue ingestin, no infeccin (Margulis y Chapman 1998). Prochloron, una cianobacteria actual, sera un cloroplasto si careciera de pared celular, y se puede encontrar en el interior de un celentreo en lugar de una planta. De hecho, hoy da sigue habiendo protistas que incorporan cianobacterias y establecen unas relaciones metablicas y fisiolgicas muy estrechas de mutuo beneficio (Bodyl et al, 2007). Segn Margulis , el hambre habra sido el motor de estas uniones (Margulis y Bermudes 1985) y un aliado fotoauttrofo fue muy valioso. Este es otro ejemplo de que la evolucin no siempre ocurre mediante competencia, sino como resultado de cooperacin. La idea de la cooperacin como fuerza evolutiva, choca frontalmente con la idea darwinista de la lucha por la vida, y la competencia como motor de la evolucin, a travs de la seleccin natural (Fernndez Valiente, 2002 ). La vida no es solo competencia, como nos han hecho creer, la vida, como proceso unitario es sobre todo cooperacin, un delicado equilibrio entre la cooperacin de las partes y la competencia de los todos. (Fernndez Valiente, 2002). Las cianobacterias inicialmente ingeridas dieron lugar posteriormente por coevolucin a los plastidios actuales presentes en todas las algas y plantas superiores, quedando su genoma reducido tras incorporarse la mayora de sus genes al genoma del otro simbionte. Negociacin qumica y transferencia gentica estara en la base de muchos eventos trascendentales en la evolucin de la vida (Margulis 2009). Otra simbiosis relevante que han establecido las cianobacterias es la que constituyen los lquenes, cuando el fotobionte es una cianobacteria. En este caso, el potencial metablico del conjunto les permite sobrevivir en condiciones que seran impensables para cada uno de los simbiotas por separado. La cianobacteria, fotoauttrofa y diaztrofa, proporciona nutrientes al conjunto, y el hongo proporciona la humedad necesaria para la supervivencia. De esta forma, los lquenes son los primeros pobladores de suelos muy hostiles y pobres, que posteriormente y sobre el sustrato que han originado los lquenes, puede pasar a sustentar otros tipos de organismos. Es interesante resaltar que la transferencia horizontal de genes es un mecanismo que se postula crucial en la evolucin de las cianobacterias. Se trata de otro mecanismo de cooperacin, que enriquece el acerbo gentico y por lo tanto la capacidad de supervivencia (Margulis 2009). Pueden encontrarse numerosos ejemplos que muestran que este evento ha sucedido frecuentemente, como puede deducirse del estudio de los genomas completos de cianobacterias que se conocen. Esta capacidad es algo que faculta la utilidad de estos organismos en biotecnologa.

12

Colonizan ambientes extremos y muy variados Hay ms de 10000 gneros catalogados, y como ocurre con el resto de las bacterias, probablemente la taxonoma tiene que ser revisada en profundidad utilizando no solo criterios morfolgicos y metablicos, sino tambin genmicos. Se pueden encontrar cianobacterias virtualmente en todas partes: no solo en aguas continentales o marinas, sino en suelos, aguas termales, tundras muy fras, paredes hmedas de las entradas de las cuevas, charcos, catacumbas, en cubiertas de los barcos, refrigeradores de aires acondicionados, cortinas de ducha, cantos rodados, desages, cisternas, refrigeradores de centrales nucleares, tundra siberiana, desiertos, hielos antrticos No solamente tienen unos requerimientos nutricionales muy bajos y se adaptan a utilizar luz de muchas longitudes de onda y a bajas intensidades, sino que tambin han desarrollado mecanismos de supervivencia en ambientes extremos, en los que hasta hace unos aos no se consideraban compatibles con la vida. En los ltimos aos ha habido un inters creciente por este tipo de organismos, los extremfilos, como fuente de enzimas muy tiles en biotecnologa (por ejemplo la TAC Polimerasa aislada de un extremfilo, que ha permitido la revolucin en la Biologa Molecular que conllev la incorporacin de la tcnica de PCR, Polimerase Chain Reaction gracias a una DNA polimerasa capaz de funcionar a temperaturas altas), as como por la presencia de metabolitos secundarios no usuales que pudieran tener inters. Muchas cianobacterias estn entre los organismos extremfilos que pueden ser muy interesantes, y su potencial est por explorar. Presentan una gran complejidad morfolgica y fisiolgica: Comparado con otros procariotas, las cianobacterias pueden ser clulas grandes, con compleja morfologa y una gran diversidad. Hay unicelulares, filamentosas, ramificadas o no, y con gran variacin en el tamao. Pueden tambin formar colonias con diferente grado de complejidad. Las cianobacterias tienen una caracterstica que muy pocos procariotas poseen, la capacidad de llevar a cabo diferenciacin celular. Esta diferenciacin, que supone una expresin gnica diferencial, lleva a la generacin de clulas especializadas, como por ejemplo los heterocistos. En estas clulas se lleva a cabo la fijacin de nitrgeno por la enzima nitrogenasa, que solo es activa en ambiente anaerbico, probablemente vestigio de una situacin previa a la fotosntesis oxignica. En ausencia de nitrgeno disponible en el medio, algunas cianobacterias filamentosas responden con un complejo sistema de seales (Flores y Herrero, 2009) y una de las clulas que se origina tras divisin celular, se diferencia a heterocisto. Se producen varias escisiones en el genoma, y se produce una regulacin gnica

13

diferencial y generacin de informacin de posicin, ya que est regulado que se origine un determinado patrn espacial de distribucin de los heterocistos en el filamento.

Figura 1: Cianobacteria filamentosa fijadora de nitrgeno. Cuando hay deficiencia de nitrgeno, se establecen las seales moleculares de diferenciacin celular y se originan unas clulas especializadas dnde puede ocurrir la fijacin de nitrgeno, los heterocistos. La nitrogenasa se inactiva en presencia de oxgeno, y la expresin diferencial de genes en esta clula origina el ambiente anaerobio en el que es posible este proceso. Las clulas vegetativas vecinas, con las que se comunica e intercambia molculas, producen gran cantidad de oxgeno como consecuencia de la fotosntesis. En el panel de la derecha se observa un esquema de la reorganizacin gnica que se produce en el opern nif durante la diferenciacin de los heterocistos con la escisin de varias regiones del genoma. Esto permite la expresin de los genes que codifican las subunidades del complejo de la nitrogenasa (nifH, nifD y nifk), adems de otras protenas implicadas en el proceso. Otras cianobacterias, normalmente unicelulares, en lugar de separar en el espacio la fotosntesis y la fijacin de nitrgeno, utilizan la estrategia de separar estos procesos en el tiempo.

Todos los cambios estn orquestados por NtcA, un regulador transcripcional global que se encuentra en todas las cianobacterias (Flores y Herrero, 2008). Se integran una serie de seales internas, externas y de comunicacin entre las clulas de un filamento. Es interesante resaltar la comunicacin celular que se establece entre las distintas clulas de un filamento, indicativo de la sofisticacin que se ha alcanzado en estos procariotas. Esta regulacin gnica diferencial tiene como consecuencia importantes cambios morfolgicos y fisiolgicos. El heterocisto es una clula mayor y ms redondeada que las vecinas, y engrosa su pared con capas de glicolpidos y polisacridos especficos, para evitar entrada del oxgeno que estn generando las clulas vegetativas vecinas. No se expresan los genes del fotosistema II, ni por lo tanto se ensambla ste, para evitar la fotolisis del agua y el consiguiente desprendimiento de oxgeno, incompatible no solo con la actividad de la nitrogenasa, sino con la expresin del opern nifHDK que codifica los polipptidos que constituyen su complejo. Solo el fotosistema I est expresado y ensamblado, y la fotosntesis trascurre en su forma cclica, 14

dando lugar nicamente a fuerza protomotriz para impulsar la sntesis de ATP a travs de la bomba de protones ATPasa. Esto implica que en el heterocisto no va a producirse la fotorreduccin de NADP+. Otro aspecto importante de esta expresin gnica diferencial afecta a los genes que codifican los polipptidos y componentes que ensamblan los fotosistemas, y es que no se sintetizan tan apenas ficobiliprotenas, y mucha menor cantidad de clorofila a, la nica presente en las cianobacterias. Por lo tanto, presentan un color ms plido y sin los matices azules que tienen las clulas vegetativas. No llevan a cabo el ciclo de Calvin-Benson, y faltan todas las enzimas implicadas en este proceso, de hecho, en cierta forma, podemos considerar al heterocisto como una clula hetertrofa. Los genes del opern nif (nitrogen fixation) se expresan, y la fijacin de nitrgeno puede ocurrir. Un hecho curioso es que algunas protenas con papel relevante en la fotosntesis, juegan un nuevo papel en los heterocistos en la cadena de transporte de electrones a la nitrogenasa, como trabajos nuestros demostraron hace aos (Razquin et al. 1996). Otro ejemplo de la complejidad de las cianobacterias podra ser la capacidad de adaptacin cromtica y la respuesta a las distintas longitudes de onda de la luz, muy importante para la supervivencia y productividad primaria en capas no superficiales de las aguas o sustratos. Las distintas bilinas que poseen estos organismos formando parte de su aparato fotosinttico les permiten aprovechar un rango mucho ms amplio de longitudes de onda del que pueden utilizar otros organismos del fitoplancton. Se han identificado fitocromos, probables ancestros de los presentes en las plantas superiores, que actan como fotorreceptores. Podramos decir de forma muy simplificada, que las cianobacterias ven, y como consecuencia de la lectura del tipo, intensidad de la luz, ngulo y duracin relativa del periodo de oscuridad con respecto al da (fotoperiodo) desencadenan una serie de cascadas de regulacin gnica que permite adaptar su fisiologa a las circunstancias ambientales (Kehoe et al., 2010). Simultneamente, poseen sistemas de proteccin frente a luz ultravioleta, que pueden tener inters biotecnolgico muy interesante. Tambin en relacin con esta adaptacin cromtica, algunas cianobacterias poseen un complejo sistema de posicionamiento vertical en el cuerpo de agua, las vesculas de gas. Este sistema de movilidad puede llegar a ser tan eficaz como los flagelos de otras bacterias, y est fuertemente regulado por procesos luz/fotosntesis. La calidad y cantidad de luz cambia en funcin de la profundidad de los cuerpos de agua. El crecimiento de las cianobacterias y todos los fotoauttrofos ocurre si pueden residir suficiente tiempo por encima del punto critico en que la fotosntesis simplemente se compensa por la respiracin. Las cianobacterias que poseen estos sistemas de flotacin intermitente, pueden posicionarse cerca de la superficie del agua y 15

recibir una dosis mayor de luz que otra clulas del fitoplancton. Adems, las cianobacterias que poseen vesculas de gas, sombrean a otros competidores fotosintticos situados en capas inferiores. Esta posicin, les puede permitir tambin tener acceso al CO2 que se difunde desde la atmsfera, y tal vez a mayor cantidad de nutrientes. No obstante, la ventaja de competicin por luz es la ms importante (Walsby 1994). Otra ventaja adaptativa importante de las cianobacterias frente a otros fotoauttrofos del fitoplancton es su capacidad para sobrevivir en condiciones limitantes de hierro. Las metaloprotenas son esenciales en procesos clave, y entre estas, las ferroprotenas son mayoritarias. Participan en cadenas de transferencia de electrones clave, como por ejemplo en la fotosntesis, la respiracin, la asimilacin y la fijacin de nitrgeno. Los organismos acuticos tienen muy frecuentemente limitada la biodisponibilidad de hierro, un metal esencial para la vida. Es muy abundante en la corteza terrestre, pero debido a la presencia de oxgeno y en pH alcalinos, forma hidrxidos insolubles que provocan que la deficiencia de hierro sea algo muy frecuente en ecosistemas acuticos. De hecho, en grandes regiones ocenicas, llamadas HNLC (high nutrients low chlorophyll), con muy baja productividad primaria, se demostr mediante fertilizacin in situ que era el hierro lo que estaba limitando la productividad (Coale et al. 1996). Las cianobacterias han desarrollado evolutivamente una serie de mecanismos encaminados a optimizar su supervivencia en medios limitantes de hierro. Adquieren hierro por medio de siderforos, y son capaces de sustituir protenas que contienen hierro por otras con otro tipo de cofactores, como flavinas. Ha sido muy estudiado el caso de la sustitucin de la ferredoxina, una protena sulfofrrica que acepta electrones del fotosistema I, por flavodoxina, una pequea protena que contiene un grupo FMN y que es un caso curioso de convergencia funcional, ya que estructuralmente las dos protenas no presentan homologa. Cuando hay deficiencia de hierro, estas flavoprotenas llevan a cabo eficazmente las funciones de la ferredoxina (Fillat et al., 1990,1991) (Peleato et al, 1994) (Vigara et al., 1998) . Sin embargo, es curioso resaltar que en el heterocisto, la flavodoxina no parece sustituir a una ferredoxina especfica que participa en la cadena de transporte a la nitrogenasa (Razquin et al. 1994), aunque el sistema prioriza que el heterocisto no est tan afectado por la carencia de hierro (Razquin et al, 1996), y esta clula parece actuar como una especie de sumidero del metal (Razqun, Tesis Doctoral 1994). Sin duda, uno de los principios fundamentales de la vida es la cooperacin entre clulas. Es evidente en el caso de organismos pluricelulares, desde un cierto tipo de colonias organizadas a los humanos, vemos claramente como hay una comunicacin y cooperacin que armonizan la fisiologa de todos los pluricelulares. En las organizaciones coloniales, se observa un esbozo claro de cooperacin entre las clulas individuales. Esto lo podemos observar incluso 16

en los procariotas: las cianobacterias filamentosas como por ejemplo Anabaena, en ausencia de nitrgeno combinado en el medio diferencian una de cada 8-10 clulas, que se especializa en la fijacin de nitrgeno. Esta clula especializada, el heterocisto, suministra nitrgeno a las clulas vecinas, las vegetativas, mientras que estas proporcionan carbono como fuente de materia y energa al heterocisto. Contrariamente a lo que pudiera parecer, en los ltimos aos se ha puesto de manifiesto que los organismos unicelulares se comunican y tambin cooperan (Wingreen y Levin 2006). Estos organismos pueden ser bacterias, hongos o protistas, y la comunicacin-respuesta puede ser interespecfica o intraespecifca. Como otros procariotas, las cianobacterias se comunican con otros individuos de la poblacin, y mandan mensajes moleculares al medio externo. Estas molculas tambin pueden ser de accin aleloptica contra competidores de otras especies o su misma especie. Un caso muy interesante son las molculas de comunicacin llamadas de quorum sensing, es decir, de informacin poblacional que dan a las clulas retroalimentacin de regulacin gnica sobre el tamao de la propia poblacin y genera respuestas sociales coordinadas. Las clulas producen, excretan y son capaces de detectar molculas (normalmente pequeas) llamadas autoinductores. A altas concentraciones de los autoinductores, las cianobacterias entran en un nuevo estatus fisiolgico que mediante una expresin gnica especfica, se caracteriza por una respuesta colectiva que adoptan todas las clulas de la poblacin. Este nuevo comportamiento puede ser agregarse en colonias, formacin de biofilms, sntesis de toxinas, e intercambios de DNA entre otras respuestas. La comunicacin interespecfica est menos estudiada y es mucho ms difcil de tipificar, pero sin duda, tambin se ha puesto de manifiesto que hay muchsimos ejemplos de complejos consorcios de microorganismos que se comunican y cooperan, como por ejemplo los tapetes microbianos o los biofilms. En estos casos hay unas fuertes sinergias en que las potencialidades metablicas de cada uno de los integrantes se utilizan para mutuo beneficio. Claramente estos ejemplos y otros muchos de cooperacin estn lejos de la pura competicin darwiniana. Esta cooperacin implica una comunicacin que permita ajustar el comportamiento a las circunstancias ambientales a y a la densidad de poblacin. Esta cooperacin parece tener tambin sus disidentes, y hay un inters creciente por casos de tramposos entre los microorganismos, as como ciertos mecanismos polica que contrarresta a aquellos (Wingreen y Levin 2006). Este mismo fenmeno se pone de manifiesto en el contexto de las interacciones entre bacterias y hospedadores, en que los hospedadores favorecen las simbiosis con unos organismos y las impiden con otros muy parecidos.

17

Las cianobacterias un papel muy relevante en la introduccin de nitrgeno en los ecosistemas y en la productividad primaria de los ocanos La vida en la tierra tal como la conocemos no sera posible si algunos de los procariotas no hubieran conservado la capacidad de fijar nitrgeno atmosfrico. El nitrgeno, aunque es un elemento abundante en la corteza terrestre, es muy poco biodisponible, y la mayora del nitrgeno combinado que circula en los ciclos de materia, procede de fijacin biolgica. Esta capacidad que conservan algunas cianobacterias, tiene una gran relevancia ecolgica y econmica. En los ocanos, se lleva a cabo el 30% de la introduccin de nitrgeno global, y la mayor parte debido a las cianobacterias. Esta diazotrofa, junto con su fotoautotrofa, hace que fitoplancton marino sea responsable aproximadamente el 66% de la produccin primaria del planeta. Muchas cadenas trficas tienen su base en la productividad primaria de cianobacterias. Sin duda, las cianobacterias son organismos cuyo crecimiento tiene unos requerimientos nutricionales muy bajos, con capacidad de obtener por si mismas carbono y nitrgeno en presencia de luz. Esta caracterstica hace que sean especialmente interesantes en biotecnologa, debido al bajo costo de la produccin de su biomasa. El uso de las cianobacterias como abono verde ha sido tradicionalmente utilizado por la humanidad. Como se ha indicado anteriormente, los suelos son de forma natural limitantes en el macronutriente nitrgeno, e incluso en la agricultura actual, los abonos nitrogenados suponen un alto coste econmico y medioambiental. Las cianobacterias han sido tradicionalmente utilizadas en Asia como fertilizantes naturales en campos de arroz, ya sea en forma de vida libre o en simbiosis con una especie de un helecho llamado Azolla. En agricultura sostenible, las cianobacterias libres o asociadas, as como el uso de otros procariotas capaces de fijar dinitrgeno atmosfrico (especialmente el binomio Rhizobium/leguminosa), son las grandes apuestas todava por investigar a fondo en un modelo de lo que se llama agricultura sostenible. La biotecnologa ha tratado desde hace muchos aos de incorporar la maquinaria biolgica de la fijacin de nitrgeno a plantas, y utilizar tcnicas de ingeniera gentica tratando de generar una nitrogenasa tolerante al oxgeno. Esto no ha sido posible. En la actualidad, las lneas de trabajo estn enfocadas a optimizar otros aspectos de la fijacin biolgica de nitrgeno, como por ejemplo que la maquinaria de fijacin biolgica de nitrgeno no se vea inhibida por la presencia de nitrgeno fijado, de forma que sea compatible la fijacin de nitrgeno con la presencia de cantidades pequeas de abonos nitrogenados. La coexistencia de ambos aportes de nitrgeno mejorara la productividad de las cosechas. Otra lnea de trabajo est encaminada a seleccionar cepas de cianobacterias con alta eficacia para la fijacin biolgica de nitrgeno, y/o con alta eficacia para establecer simbiosis o 18

asociacin con otros organismos. As mismo, se estn dedicando muchos esfuerzos en buscar cepas resistentes a estreses ambientales, especialmente el estrs salino o el estrs de altas temperaturas. El conocimiento de los mecanismos de reconocimiento especfico entre las cianobacterias y las plantas con las que establecen simbiosis, puede permitir pensar en ampliar el rango de hospedadores. Las cianobacterias son hoy da un importante eslabn del ecosistema global, y contribuyen con ms del 30% del oxgeno liberado a la atmosfera cada ao. Por otra parte, la capacidad de incorporar CO2, mayoritariamente al ciclo de Calvin, pero tambin mediante otros procesos mediados por otras enzimas, implica que son unos organismos que pueden ser utilizados para secuestrar CO2 de la atmsfera, y de hecho, como se explicar posteriormente, ha habido propuestas de fertilizar grandes regiones ocenicas para generar gran cantidad de biomasa de cianobacterias, y tratar de disminuir el problema que supone el creciente incremento de CO2 atmosfrico.

Son fuente de multitud de metabolitos bioactivos de potencial inters farmacolgico, todava inexplorados. Las cianobacterias producen gran cantidad de metabolitos con inters teraputico, que incluyen antivirales, antitumorales, inhibidores de enzimas, protectores de luz ultravioleta entre otros efectos. (Skulberg 2005) (Gademann y Kobylinska 2009) (Jones et al, 2009). Se considera que la mayora de los metabolitos secundarios de las cianobacterias estn por describir, y que constituyen uno de los grupos de bacterias ms prometedores en la bsqueda de nuevos productos bioactivos. La cianobacteria marina Lyngbya majuscula y otras especies del gnero Lyngbya han mostrado ser una fuente excelente de productos bioactivos, adems de presentar algunos en cantidades suficientes para ser organismos muy txicos. Adems de los productos naturales, las cianobacterias pueden ser utilizadas para la produccin de metabolitos de inters, mediante recombinacin gnica, insertando los genes implicados en su sntesis. Hay una larga lista de compuestos que se han estudiado desde el punto de vista farmacolgico, pero solo se han identificado algunas de las rutas biosintticas, y muy pocos genes responsables de la sntesis de estas molculas. Muchos de estos metabolitos son pptidos, alcaloides y polictidos, y su mecanismo de accin es muy variado. Los pptidos producidos por las cianobacterias son muy abundantes, y pueden ser lineales, cclicos, sintetizados por los ribosomas en base a un mensaje gentico, o de sntesis no ribosomal. Las cianobactinas son una familia de pequeos pptidos cclicos de sntesis 19

ribosomal, generalmente modificados por modificaciones postraduccionales. Estas molculas han mostrado un potencial farmacolgico importante, en especial son muy interesantes como frmacos antipaldicos y antitumorales (Sivonen et al. 2010). Muy frecuentemente son antimitticos que afectan a la polimerizacin de la tubulina de agentes infecciosos, y se aslan de distintas especies del genero Nostoc, entre otros. Un pptido lineal, aeruginosina 103-A, aislada de Microcystis viridis (NIES-103) es un inhibidor de la coagulacin, afectando a la trombina (Kodani et al. 1998). Entre una gran variedad de alcaloides presentes en muchos gneros de cianobacterias, algunos tienen alto potencial antitumoral, as como efectos sobre la proliferacin de otras clulas del fitoplancton. Un alcaloide aislado de Nodularia harveyana, muestra accin aleloptica contra otras especies de cianobacterias (Volk 2008) por lo que podra ser utilizado para controlar la proliferacin de cianobacterias productoras de toxinas. Otros alcaloides, por ejemplo los aislados de Hapalosiphon fontinalis, Fischerella musciola, Tolypothrix tjipanasensis y Hapalosiphon weilwitschi, muestran tambin actividad alguicida, fungicida e insecticida (Gademann y Portmann 2008), pudiendo ser utilizados en plagas agrcolas. Fischerellina-A, obtenida de Fischerella muscicola UTEX 1829 es un potente inhibidor del fotosistema II, y afecta a cianobacterias, algas y plantas, pudiendo ser utilizado como herbicida. Especialmente relevantes son la calothrixina-A y la calothrixina-B, aisladas de cepas del gnero Calothrix capaces de inhibir el crecimiento de una cepa resistente a la cloroquina del parsito Plasmodium falciparum que causa la malaria (Rickards et al. 1999). Synechococcus PCC 6301 transformado con genes de compuestos txicos para mosquitos, procedentes de Bacillus thuringiensis y Bacillus sphaericus podran ser una buena alternativa para destruir larvas de mosquitos que los ingieren y poder combatir as enfermedades transmitidas por mosquitos (Sangthongpitag et al. 1997). Muchos de estos compuestos son potentes antivirales, y se han ensayado con xito para combatir infecciones por HIV, herpex simplex, citomegalovirus humanos, y virus de gripes. Bauerinas A-C, aisladas de Dichtrix baueriana es eficaz contra virus herpes simplex (HSV-2) (Larsen et al. 1994). Se ha utilizado Nostoc ellipsosporum para producir cianovirinas recombinantes (Mori et al. 1998) que han sido utilizadas como antivirales tiles en el tratamiento de HIV. Las protecciones que las cianobacterias han desarrollado a lo largo de la evolucin para evitar daos de la luz ultravioleta pueden ser tiles para ser utilizadazas como protectores solares. Son molculas derivadas de aminocidos, de pequeo peso molecular, incoloras y solubles en agua. Otro tipo de estas molculas pueden ser pigmentos solubles, localizados en la pared 20

externa de las cianobacterias, cuya sntesis puede incrementarse sometiendo a las clulas a estreses como altas temperaturas, altas intensidades de luz, desecacin e irradiacin con UVA, deficiencia de nitrgeno entre otros. Adems, estos pigmentos tienen capacidad antiinflamatoria y antiproliferativa (Rastogi y Sinha 2009), por lo que tienen un alto potencial farmacolgico.

Las cianobacterias han sido utilizadas para nutricin humana y son fuente de suplementos alimenticios. Algunas culturas han incluido tradicionalmente ciertas especies de cianobacterias en su dieta. Sirva de ejemplo la sopa de Nostoc que se consume en muchas regiones de China, llamada sopa Fa Cai, que por su alto coste se considera un manjar. En America del Sur, hay consumo de colonias globulares de Nostoc recolectadas en los lagos el altiplano peruano, que se comercializan hasta en Cuzco. En el Chad se utiliza un alimento tradicional, del que hay datos de su utilizacin desde el siglo IX, llamado Dih. Un misin cientfica europea lo dio a conocer en los aos 50, y se trataba de unos roscos o tortas secos de color verde tirando a azul, que se podan encontrar en los mercados de la regin del Kanem. La investigacin mostr que este " dih " provena de la masa de cianobacterias cosechadas en la superficie de charcos altamente alcalinos y secos de la arena de las riberas del lago Chad. Las mujeres embarazadas piensan que comiendo dih, su color oscuro enmascarar y proteger al bebe para que ningn brujo pueda echarle mal de ojo. Esta cianobacteria se denomin Spirulina, por su aspecto de filamento espiral. Desde hace centenares de aos, este particular producto muy apreciado en la regin no era tan slo consumido en toda la zona del Kanem sino que tambin era objeto de un intenso trfico en todo el Sahel, a travs de las caravanas. Spirulina se supone que fue tambin fuente de alimento para los Aztecas y otras civilizaciones mesoamericanas hasta el siglo XVI. Las cosechaban del lago Texcoco y hay citas de la poca en que se indica que tortas de este material eran vendidas en los mercados. Les llamaban Teocuitlatl, que quera decir excremento de la piedra. Aunque esta cianobacteria sigue presente en el lago, no se consume hoy da. En los aos 70, y en base a una composicin que pareca idnea como suplemento alimenticio, (ya que tiene una altsima proporcin de protenas (hasta el 70% de peso seco) as como vitaminas, cidos grasos esenciales y otros elementos), se empez a comercializar masa celular de Spirulina como suplemento alimenticio. Sin embargo, sus protenas son deficientes en metionina, cistena y lisina (Aaronson y Dubinsky 1982), aunque en menor medida que en 21

general otras protenas de origen vegetal, incluidas las procedentes de las leguminosas. La primera planta de produccin a gran escala fue de la compaa Sosa Texcoco, y desde entonces hay numerosas plantas de produccin en todo el mundo. La Spirulina se ha comercializado con un matiz de suplemento-milagro, y aunque sin duda sus bondades nutricionales estn claras, hay que tener precaucin en su consumo, pues hemos detectado que algunos de estos preparados pueden estar contaminados con otras cianobacterias txicas y pueden ser muy dainas para la salud de quien las consume. Uno de los argumentos para el consumo de Spirulina es su contenido en ciertos cidos grasos. El cido gamma-linolnico (GLA) es un cido graso poliinsaturado que se encuentra en muy bajas proporciones en los alimentos, y al que se le atribuyen muchas funciones teraputicas. Se est utilizando actualmente para tratar enfermedades de la piel, vasculares y neuronales, como el Parkinson y la esclerosis mltiple. Su ingesta tambin ayuda a mantener bajos los niveles de colesterol. Normalmente el contenido de lpidos en las cianobacterias es bajo, pero se considera que aproximadamente la mitad pueden ser cidos grasos. Algunas cianobacterias como Spirulina se consideran una de las fuentes con mayor contenido de linolnico. Aphanizomenon flos-aquae contiene tambin cantidades significativas de este cido graso (Kushak et al. 2000). Sin duda, las cianobacterias son una buena fuente de vitaminas, y 20 g de Spirulina aportan toda la vitamina B12 requerida en un da, as como el 70% de B1 (tiamina), el 50% de B2 (riboflavina) y el 12% de B3 (niacina) (Watanabe et al. 2002)). Spirulina es rica en tocoferol (vitamina E) (Hudson y Karis 1974). Aunque Spirulina es la cianobacteria que frecuentemente se comercializa liofilizada como suplemento alimenticio, otras especies como Aphanizomenon flos-aquae, Anabaena hassali, Microcystis pulverana, Nostoc punctiforme, Phormidium bijugatum tienen tambin cantidades significativas de vitaminas del grupo B. Los pigmentos fotosintticos que contienen las cianobacterias han sido tambin considerados para su uso en alimentacin. Las cianobacterias contienen nicamente clorofila a, y adems de los carotenoides que se encuentran en los complejos antena de los fotosistemas (antioxidantes muy utilizados, presentes en todos los vegetales), contienen unos pigmentos llamados ficoeritrinas y ficobilinas, que forman parte tambin de las antenas, unidos a una serie de protenas especificas. Las ficobiliprotenas confieren el matiz azulado que da nombre al grupo, cianobacterias, bacterias azules. Adems de las ficobilinas, tambin pueden contener eritrinas, y tener tonalidades rojizas. Estas ficobiliprotenas han sido utilizadas en los ltimos aos comercialmente en usos cosmticos, y mayoritariamente como colorante alimentario. Colores azules o rojos de helados y caramelos, as como sombras de ojos, delineadores o pintalabios incorporan estos pigmentos que se consideran inofensivos y no causan alergias. 22

Las ficobilinas tienen un altsimo coeficiente de extincin y tambin se podran utilizar comercialmente como cromforos para analtica o biosensores. Las cianobacterias pueden tener un alto contenido de carbohidratos, dependiendo este de las condiciones de cultivo utilizadas. Las cianobacterias almacenan glucgeno, muy parecido al glucgeno animal. Adems, sintetizan otros carbohidratos que estn implicados en homeostasis osmtica, como trehalosa, y sacarosa. De hecho, la sacarosa parece estar implicada en el transporte de esqueletos carbonados al heterocisto. Los polisacridos de la pared contribuyen tambin a el contenido en carbohidratos de las cianobacterias, y adems, algunas cepas, como Synechococcus sp. MA (FERM P-15099) produce polihidroxibutirato (PHB) en alta proporcin, que puede ser utilizado para produccin de plsticos biodegradables. Biocombustibles a partir de cianobacterias La biomasa procedente de cianobacterias para la obtencin de biocombustibles est despertando un inters importante como alternativa para la obtencin de energa sostenible. Como ya se ha comentado posteriormente, las cianobacterias muestran unos requerimientos nutricionales muy rsticos, son transformables genticamente, tienen una alta tasa de duplicacin, y algunas cepas pueden presentar caractersticas muy interesantes para ser transformadas en combustibles. Adems, el proceso puede formar parte de un programa de biorremediacin de aguas eutrofizadas, secuestra CO2 de la atmsfera, y no desva alimentos de consumo humano. En aos recientes, utilizar cosechas (soja, remolacha, caa de azcar, maz) normalmente destinadas a consumo humano y/o animal para biocombustibles, ha generado problemas a pases en desarrollo, provocando escasez y caresta de alimentos bsicos. Adems, la biomasa procedente de cianobacterias o macroalgas, tampoco implica deforestacin, otro de los problemas de los biocombustibles de origen vegetal. Se ha desarrollado abundante tecnologa para la produccin de biomasa de cianobacterias a gran escala, y se ha optimizado el uso de determinados tipos de cianobacterias. Por ejemplo, han seleccionado cepas ricas en lpidos (algunas de ellas, entre el 50 y el 70% referido a peso seco) para maximizar la produccin de los biodiesel, o utilizando cepas recombinantes, se puede optimizar el proceso adicionando vas metablicas fermentativas, que den lugar directamente a etanol. Estos procesos estn utilizndose ya a nivel industrial en muchos pases, incluso en nuestro pas hay algunas plantas piloto, e incluso aparecen en la publicidad de alguna conocida petrolera, como una energa renovable. Aunque inicialmente se construyeron estanques al aire libre para su cultivo, en la actualidad se cultivan en reactores que optimizan la utilizacin de la luz y la cosecha de las clulas. 23

Una alternativa biotecnolgica muy interesante, es la generacin de hidrgeno a nivel productivo por cianobacterias fijadoras de nitrgeno, o otras cianobacterias con distintos tipos de hidrogenasas. Durante la fijacin biolgica de nitrgeno, el complejo de la nitrogenasa tienen tambin actividad hidrogenasa y se produce H2 como producto del proceso; adems, tambin existen otras hidrogenasas que podran ser interesantes para estos fines. Utilizando determinadas cepas a nivel de planta piloto, se han descrito resultados muy esperanzadores, abaratando el coste casi 7 veces con respecto al coste del hidrgeno obtenido del agua (Abed et al. 2009). Los ensayos piloto de produccin de H2 se han llevado a cabo utilizando tres estrategias: en primer lugar, aprovechando la hidrogenasa bidireccional (Ananyev et al. 2008), en segundo lugar, usando la actividad hidrogenasa de la nitrogenasa (Lindberg et al, 2000 y 2004), y una tercera posibilidad consistira en la introduccin de una hidrogenasa eficiente de algn otro organismo que no sea una cianobacteria (Tamagnini et al. 2007) (Angermayr et al, 2009). En este ltimo caso no debe olvidarse que el cultivo de un organismos fotosinttico es mucho ms econmico que cuando se utiliza otro tipo de bacteria hetertrofa, y por eso, la produccin de hidrgeno por las cianobacterias tiene muchas ventajas (Benemann 1996) (Dutta et al. 2005). Se han descrito 14 gneros de cianobacterias apropiados para producir hidrgeno (Dutta et al. 2005), aunque probablemente queda mucho por explorar. Hay abundante bibliografa que describe el efecto de factores ambientales y nutricionales sobre la produccin de hidrgeno en muchas cianobacterias. Tambin se ha dedicado esfuerzo a tratar de minimizar el efecto del oxgeno sobre la produccin de hidrgeno, cuando es la nitrogenasa la enzima de eleccin. La inmovilizacin de las cianobacterias en diversas matrices (de poliuretano y espumas de polivinilo) podra ser una solucin interesante para cualquier tecnologa que implique el uso de clulas completas de las cianobacterias. Markov (Markov et al. 1997) patent un mtodo para la inmovilizacin de las cianobacterias en las superficies externas de fibras en un fotorreactor. Cuando la solucin nutritiva se agita, el hidrgeno producido por las cianobacterias pasa al interior de las fibras y se colecta en un recipiente adecuado. Biorremediacion La biorremediacin es la utilizacin de organismos vivos para paliar problemas medioambientales. Las cianobacterias tienen un alto potencial como organismos que pueden contribuir a resolver algunos problemas de contaminacin o desequilibrios ambientales. Ellas solas, o en sinergia con otros organismos, (por ejemplo, formando parte de tapetes 24

microbianos), tienen capacidad de degradar un alto nmero de compuestos orgnicos xenobioticos que pueden alterar nuestro medio ambiente. Tambin se ha puesto de manifiesto su eficacia en la regeneracin de aguas residuales o eutrofizadas. Algunas cepas de cianobacterias han mostrado alta eficacia para degradar colorantes sintticos, como rojo de metilo, fucsina bsica utilizados en industrias textiles o papel impreso. Estos colorantes son muy txicos para el medioambiente, y carcinognicos. Las cianobacterias son tambin una interesante alternativa para el tratamiento de aguas residuales (Hall et al, 1995). Anabaena sp. PCC 7120 y Nostoc ellipsosporum tienen la propiedad de degradar lindano (Kuritz y Wolk, 1995), un tema que tambin el grupo del profesor GmezMoreno estudi (Bueno et al. 2004). Esta investigacin estuvo motivada por la idea de aportar soluciones a un grave problema medioambiental en nuestro entorno, fundamentalmente debido a los ismeros del producto comercial no biodegradables, y que se obtienen simultneamente en el proceso industrial. Las industrias farmacuticas producen desechos como residuos de antibiticos que no pueden liberarse al medio ambiente. Nuestros ros contienen una alta concentracin de frmacos procedentes del alcantarillado, entre ellos antibiticos. Afortunadamente, algunas cianobacterias como por ejemplo Phormedium valderianum BDU (30.501), son capaces de utilizar ciertos antibiticos como fuente de nitrgeno, degradndolos al utilizarlos (Prabaharan et al. 1994). Las cianobacterias, solas o en combinacin con otros organismos, muestran una gran capacidad de restauracin de suelos degradados. Los vertidos de fuel o suelos contaminados, especialmente en climas extremos, pueden ser paliados mediante tapetes de cianobacterias con eficacia (Abed et al. 2006). Suelos muy pobres, en climas ridos o semiridos, pueden incrementar su fertilidad mediante los exopolisacridos de las cianobacterias que mejoran la estructura del suelo, y el nitrgeno procedente de la fijacin biolgica (Maqubela et al., 2010). Obtencin de bioplsticos En condiciones de exceso de nutrientes, los microorganismos pueden almacenar diversos materiales para reserva futura. Las cianobacterias pueden acumular polihidroxialcanoatos, PHAs, que polimerizan y pueden formar grnulos en el citosol. Los PHAs pueden considerarse plsticos con propiedades similares a las del polipropileno, y se considera que es un material biodegradable, potencial sustituto de plsticos no degradables procedentes de derivados de petrleo. Tambin se propone su uso como biomaterial en medicina y farmacologa. Algunas cepas de cianobacterias pertenecientes a los gneros Spirulina y 25

Synechocystis, han mostrado acumulacin de hasta un 7% de PHAs referido a peso seco (Abed et al, 2009). PHBs tambin pueden ser producidos por las cianobacterias, tal como se ha mencionado anteriormente.

Las cianobacterias pueden causar problemas Una de las formas ms frecuentes de contaminacin de los ecosistemas acuticos es a travs de su enriquecimiento en exceso de nutrientes, conocida como eutrofizacin (eutrofo en griego: bien nutrido). Cuando este fenmeno ocurre naturalmente es un proceso lento, que puede durar hasta cientos de aos y forma parte de transformacin general del lago en pantano y finalmente en prado. Esto ocurre porque los nutrientes introducidos masivamente en el sistema generan una gran biomasa de organismos, de vida generalmente efmera, que al morir se acumulan sobre el fondo y no son totalmente consumidos por organismos degradadores. Con la intervencin antrpica, este fenmeno se acelera drsticamente. A partir de la Revolucin Industrial y la Revolucin Verde, con el modelo de grandes urbanizaciones y grandes reas de agricultura intensiva, se ha incrementado notablemente el aporte de nutrientes que provienen de aguas residuales no tratadas, de fertilizantes inorgnicos industriales o extractivos, abonos orgnicos y de desechos de industriales. Por estas razones, ya en 1999, se describi que en Europa, Asia y Amrica ms del 40% de los lagos estaban eutrofizados (Vitousek et al. 2009). La eutrofizacin est ntimamente asociada con la proliferacin del fitoplancton, llamada Bloom o floracin, que pasa a dominar la parcela del fitoplancton de un cuerpo de agua. Un fenmeno de este tipo se considera problemtico a partir de una concentracin de 20000 clulas/mL que equivale aproximadamente a 10 !g/L de clorofila a. Los blooms causan graves impactos en un ecosistema. La proliferacin de las cianobacterias en la comunidad de fitoplancton bloquea o disminuye la luz en las capas ms profundas. Por esta razn, toda la flora presente en los estratos inferiores no recibe luz y muere. Durante la proliferacin masiva de cianobacterias, el oxgeno disuelto (DO) en el agua disminuye, y durante la noche frecuentemente hay carencia de DO. Esto es debido a que, las clulas muertas son descompuestas, y esto requiere el consumo de mucho oxgeno (Diersing, 2009). Este ambiente anxico afecta negativamente a los organismo de diferentes niveles trficos de la cadena alimentaria y adems, el agua pasa a tener tanto un sabor como un olor desagradables. Debido a los pocos requerimientos nutricionales, incluyendo la enorme ventaja que supone la diazotrofa, y a capacidades importantes como mecanismos para solventar la deficiencia de 26

hierro, las cianobacterias son capaces de crecer en medios muy pobres, y predominar en la poblacin del fitoplancton. Estos blooms o floraciones, que en medios marinos pueden constituir las llamadas mareas rojas, con dinoflagelados, muy frecuentemente pueden estar dominados por cianobacterias, ya que tienen una tasa de duplicacin muy alta. En aguas continentales pueden formar grandes masas o natas, que pueden dar lugar problemas diversos, adems de generar malos olores y sabores desagradables y la inutilizacin del agua para muchos usos. Las molculas ms frecuentes que confieren este olor y sabor desagradables son las geosminas y el 2-metilisoborneol. Algunos de estos blooms de cianobacterias, pueden ser txicos, y los problemas ya no son solo medioambientales, sino tambin sanitarios. Algunas cepas de cianobacterias pueden sintetizar potentes toxinas Teniendo en mente la famosa frase de Paracelso, Todo es veneno, nada es sin veneno, solo la dosis hace el veneno, algunos de los metabolitos secundarios que producen algunas cianobacterias estn en dosis que resultan txicas para humanos y animales. Por esta razn, desde el punto de vista antropocntrico, se habla de cianotoxinas. No obstante, no hay que olvidar que estas mismas cianotoxinas pueden tener su accin teraputica asociada, y que otros principios activos que hemos citado anteriormente, ingeridos indiscriminadamente y en dosis altas, pueden ser txicos tambin. Una cuestin muy interesante es el hecho de que la sntesis de cianotoxinas implica un desvo de materia y energa muy considerables del metabolismo primario, y que la clula no va utilizar en multiplicarse. En algunos casos, concretamente cuando se trata de endotoxinas, no se conoce todava claramente el papel de la toxina, y es un tema sujeto a discusin. La pregunta ms evidente es que ventaja adaptativa les confiere poseer la capacidad de sntesis de las toxinas, e inmediatamente despus debe de plantearse la pregunta de porqu se han perdido en la mayora de los casos los genes responsables de la sntesis. La sntesis de toxinas no suele ser constitutiva, se trata de una respuesta generalmente inducible, y parece bastante claro que esta capacidad se ha ido perdiendo durante la evolucin (Rantala et al. 2004). Solo algunas cepas de cianobacterias conservan la capacidad de producir toxinas, y en realidad, muy pocas son txicas, pero estas son muy abundantes y ubicuas, y con mucha capacidad de competencia. De hecho, se considera que dos gneros, Microcystis y Anabaena son las responsables de la mayor parte de los blooms txicos del planeta. Una misma cepa puede sintetizar varios tipos de cianotoxinas, y un misma toxina puede ser generada por muchas cianobacterias distintas.

27

Gnero cionabacteria Anabaena Anabaenopsis Aphanizomenon Cylindrospermopsis Hapalosiphon Lyngbya Microcystis Nodularia Nostoc Oscillatoria Phormidium Planktothrix Raphidiopsis Schizothrix Synechocystis Umezakia Woronichinia

Toxina producida Microcistina, Anatoxina-a, Saxitoxina y Cilindrospermopsina Microcistina Anatoxina-a, Saxitoxina y Cilindrospermopsina Saxitoxinas y Cilindrospermopsina Microcistinas Saxitoxinas, Lingbiatoxinas-a y Apliatoxina-a Microcistinas Nodularinas Microcistinas Microcistina, Anatoxina-a, Lingbiatoxina-a y Apliatoxina Anatoxina-a Microcistina y Saxitoxina Anatoxina-a y cilindrospermopsina Lingbiatoxina-a y Apliatoxina Microcistina Anatoxina-a y cilindrospermopsina Microcistinas

Tabla 1. Algunos gneros de cianobacterias potencialmente productoras de toxinas y las toxinas que pueden generar. Adaptado de Codd et al. (2005).

Las cianotoxinas pueden ser molculas muy variadas, y aunque se estn identificando continuamente molculas txicas nuevas, se clasifican en grupos en base a diferentes criterios. Estas cianotoxinas pueden clasificarse segn el efecto en humanos y animales (hepatotxicas, neurotxicas, citotxicas, dermatotxicas), o en base a su naturaleza qumica: pptidos cclicos, alcaloides, polictidos... En los ltimos aos, se han incorporado a la categoria de cianotoxinas algunos aminocidos no proteicos as como los lipopolisacridos que forman parte de la pared de las cianobacterias. Los pptidos cclicos estn formados por aminocidos proteicos y no proteicos y lo ms 28

curioso es que son pptidos de sntesis no ribosomal, mediante grandes complejos que implican pptido sintetasas (nonribosomal peptide synthetases, NRPS) y polictido sintasas (polyketide synthases, PS). Aunque muchos de estos pptidos tienen funcin desconocida, hay dos tipos que constituyen las cianotoxinas ms ubicuas y de mayor incidencia, las microcistinas y las nodularinas. Ambas dos comparten un aminocido llamado Adda (cido 3 amino-9-metoxi-2,6,8-trimetil-10-fenildeca-4,6-dienoico) que es el responsable de la toxicidad en ltimo trmino. Ambos son potentes hepatotxicos. Las microcistinas, heptapptidos cclicos, son una familia de cerca de 100 variantes, que afectan a dos aminocidos variables, adems de cambios en las cadenas laterales, que pueden tener distinto grado de toxicidad. La forma ms abundante es la microcistina-LR, que tiene leucina y arginina en las posiciones variables. La sntesis de microcistina la llevan a cabo enzimas modulares del tipo pptido sintetasa y polictido sintasa, codificadas en un opern bidireccional (mcy, en Microcystis aeruginosa) de 55 kb compuesto por 10 genes que se transcriben bidireccionalmente a partir de un promotor central comn (Tillett et al. 2000). Las nodularinas son pentapptidos cclicos y tambin existen diversas variantes y el opern que codifica los genes implicados en la sntesis de la nodularina (nda) tiene una organizacin muy similar al opern de la microcistina. Las microcistinas y nodularinas tienen un mecanismo de accin idntico, e inhiben a dos enzimas clave de organismos eucariotas, protena-fosfatasas 1 y 2A. Se considera que aproximadamente un 30% de las protenas de eucariotas pueden estar fosforiladas, y la dinmica fosforilacin/defosforilacin afecta a muchsimos procesos celulares. Las cascadas de fosforilacin de protenas es un mecanismo de transduccin de seales crucial, y la falta de actividad de estas fosfatasas desgobierna todo el metabolismo celular. El hecho de que se consideren hepatotxicas es debido a que no atraviesan fcilmente membranas, y son internalizadas por las vas de transporte de los cidos biliares, por lo que el hgado es el rgano diana ms afectado. En los hepatocitos, se produce una desestructuracin del citoesqueleto, debido a una hiperfosforilacin que altera la dinmica de polimerizacin/despolimerazacin de los microtbulos. Esto provoca su destruccin y la muerte por fallo heptico (MacKintosh et al. 1990). No obstante tambin se ha descrito que las microcistinas, directa o indirectamente producen dao oxidativo, y que son capaces de unirse a las ATPasas (Mikhailov et al, 2003), as como producir citotoxicidad en queratinocitos (Hernandez et al, 2007). Es relevante destacar que afectan al ciclo celular y que en dosis subletales se considera un promotor tumoral importante (Zhou et al. 2002). Las fosfatasas de procariotas no parecen verse afectadas por estas toxinas, que de hecho son endotoxinas y se acumulan en grandes cantidades. 29

En 1998, la Organizacin Mundial de la Salud (OMS), indic la concentracin mxima recomendada 1g/L en aguas para el consumo humano. En 2003, esta recomendacin fue incorporada a la legislacin Espaola a travs del Real Decreto 140/2003. En cuanto a las aguas de recreo, la OMS propone que se usen las cantidades de cianobacterias como valor gua. En el artculo 8 de la Directiva Marco Europea 2006/7/CE, se propone considerar la potencialidad del sistema para albergar grandes poblaciones de cianobacterias: Cuando el perfil de las aguas de bao indique propensin a la proliferacin de cianobacterias, se llevar a cabo un control adecuado que permita la identificacin oportuna de los riesgos para la salud. Por lo tanto, no seala ningn nivel de cianotoxinas lmite, ya que todava no se conocen todas las cianotoxinas y por otra parte, no existen patrones disponibles para muchas de las que estn identificadas. Esta Directiva fue trasladada a la Legislacin Espaola a travs del Real decreto 234/2007. Las cianobacterias pueden sintetizar un gran nmero de alcaloides, y algunos de ellos estn en dosis txicas. Estas pequeas molculas pueden ser potentes neurotxicos, citotxicos o irritantes de la piel. Las neurotoxinas ms frecuentes son las saxitoxinas, las anatoxinas y la anatoxina-a. Las saxitoxinas estn muy relacionadas con las toxinas que pueden producir algunos dinoflagelados, las PSPs (paralytic shellfish poisons) que se producen en mareas rojas txicas. Resulta muy curioso el hecho de que sinteticen la misma molcula dos grupos de organismos tan alejados entre s filogenticamente. Son exotoxinas, y potentes neurotoxinas al unirse a los canales de sodio en los canales inicos, por ejemplo en las neuronas implicadas en la contraccin muscular. Las anatoxinas son alcaloides que mimetizan un neurotransmisor, la acetilcolina, y bloquean a la acetilcolinesterasa, provocando la interrupcin de la transmisin del impulso nervioso. La anatoxina a es un organofosfato natural, y no se ha detectado variantes estructurales. La lyngbyatoxina, que provoca dermatitis severa en primera instancia, activa protein-kinasas C, por lo que de nuevo afecta a procesos de fosforilacin/defosforilacin y desregula el ciclo celular, por lo que se considera que puede ser promotor tumoral. La cilindrospermopsina es un alcaloide hepatotxico, que inhibe la sntesis de protenas, entre otros procesos. Los lipopolisacridos (LPS) son componentes de la pared que forman parte de la pared externa, y como todos los Gram negativos, pueden afectar a otros organismos, incapacitando defensas. No obstante, se considera que los LPS de cianobacterias son menos txicos que los de otras bacterias hetertrofas. En los ltimos aos se ha descrito que un aminocido no proteico llamado b-metilamino Lalanina (BMAA) se acumula en determinadas cianobacterias y puede causar graves daos. Se 30

describi en cianobacterias endofticas, pero posteriormente se ha encontrado en numerosas especies de vida libre. Se une a los receptores de glutmico, y es altamente neurotxico, provocando a bajas dosis efectos neurodegenerativos importantes. Algunas cianotoxinas se han ensayado con xito como frmacos, fundamentalmente antitumorales. Factores que afectan a la expresin de los genes implicados en la sntesis de microcistinas La microcistina es la cianotoxina ms abundante y ubicua, y por lo tanto la comunidad cientfica ha dedicado un gran esfuerzo a su estudio. Uno de los problemas por resolver en lo que se refiere a la ocurrencia de blooms txicos, es la identificacin de los factores ambientales que provocan la sntesis de microcistinas. Son metabolitos secundarios inducibles, no constitutivos. No se sabe la razn, pero aparentemente bajo las mismas condiciones ambientales un ao un Bloom puede ser no txico y al ao siguiente, txico. Se han llevado a cabo numerosos estudios encaminados a esclarecer esta cuestin, y se ha considerado que la intensidad de la luz, temperaturas altas, disponibilidad de nutrientes, pH, salinidad, entre otros, podran ser determinantes en la expresin de la toxicidad. La bibliografa muestra resultados muy contradictorios, tanto en observaciones de campo como en ensayos de laboratorio. De hecho, pueden encontrarse citas para todos los gustos en referencia a un mismo factor. Por ejemplo, en distintos trabajos en la literatura se describen incrementos de toxina o descensos de la misma como consecuencia del impacto de un mismo factor. Las razones de esta heterogeneidad estriban en que distintas cepas con fenotipo distinto, incluso tratndose de la misma especie, puede comportarse diferentemente, las condiciones de cultivo y ensayo pueden variar, y los mtodos utilizados para extraer, analizar y referenciar la microcistina puede ser muy diferente. Por no citar la imposibilidad de comparar estudios de campo y de laboratorio. La mayora de los trabajos miden la microcistina formada, y hay muy pocos que incidan en la regulacin gnica del opern mcy. Sin duda, aunque es necesario el estudio detallado de todos los niveles de regulacin, los estudios transcripcionales han aportado datos importantes. El factor ambiental ms relevante en un organismo fotosinttico es la luz, las transiciones diarias luz/oscuridad as como cambios en la intensidad y en la gama espectral de luz. Hace algunos aos se determin que incremento de la intensidad de la luz induce la transcripcin del opern mcy, y que hay dos sitios de iniciacin de la transcripcin (tsp), uno asociado a alta luz y otro de baja intensidad de luz (Kaebernick et al. 2002; Kaebernick et al. 2000). Nuestro grupo de trabajo, utilizando la tcnica de RT-PCR a tiempo real ha realizado estudios transcripcionales 31

utilizando como gen modelo mcyD, una polictido sintasa modular. Su expresin es indispensable para la sntesis de microcistina, su transcripcin es la primera en uno de los sentidos del promotor bidireccional y est implicado en la sntesis de Adda, responsable de la toxicidad y comn en microcistinas y nodularinas. La RT-PCT a tiempo real es una cuantificacin relativa del cDNA del transcrito de un gen problema, basada en su expresin relativa respecto a un gen de referencia. La eleccin del gen de referencia es critica, pues es necesario que no este afectada su expresin en las condiciones del ensayo, para poder referir los datos a sus cambios. Nuestros datos indican que en el caso de Microcystis aeruginosa PCC7806, una cepa modelo, la transicin a intensidades de luz altas conlleva nicamente un aumento puntual de la transcripcin, pero que en oscuridad, los niveles de RNA mensajero descienden. La concentracin de microcistina en las clulas, correlacionaba con lo observado en el mensajero. Dado que la luz puede provocar estrs oxidativo en las membranas tilacoidales, se estudi el efecto de H2O2 as como metil viologeno y DCMU. El agua oxigenada provoc una disminucin de la transcripcin en tiempos iniciales, pero posteriormente se recuperaron niveles altos de mensajero. La concentracin de microcistina observada fue coherente con los datos de los niveles de mensajero. En el caso del metil violgeno, que desva electrones del fotosistema I para dar lugar a O2- el comportamiento fue anlogo, siendo en este caso los niveles de microcistina con respecto al control, mucho menores. El DCMU es una molcula que mimetiza la plastoquinona, y tras unirse a la subunidad D1 del fotosistema II, interrumpe el transporte electrnico fotosinttico, generando especies reactivas de oxgeno. En este caso se observ un efecto parecido al que provocaba la oscuridad, de forma que los niveles de mensajero disminuan, as como los de microcistina, aunque en este caso no tan acusadamente. De estos resultados se puede inferir que la transcripcin del opern mcy requiere una cadena fotosinttica activa. El hierro, como se ha mencionado anteriormente, es un elemento esencial y con baja biodisponibilidad, que determina el crecimiento del fitoplancton. El metabolismo del hierro en las cianobacterias, est principalmente bajo el control de una familia de reguladores transcripcionales globales, la familia Fur (Ferric uptake regulador). El modelo vigente es el un represor clsico que utiliza el hierro como correpresor, reconociendo secuencias especficas en los promotores de los genes blanco, llamadas cajas Fur o iron-boxes. La hiptesis de trabajo fue la disponibilidad de hierro podra estar regulando la expresin de las microcistinas, y que Fur sera el regulador implicado. En primer lugar, se identificaron in silico dos cajas de unin a Fur en el promotor bidireccional, y otras en promotores internos. Tras identificar, clonar, sobreexpresar y purificar un parlogo de Fur en Microcystis (Martin32

Luna et al. 2006a) y utilizando el promotor bidireccional, demostramos que haba unin (Martin-Luna et al, 2006b). Esta hiptesis qued demostrada cuando el estudio transcripcional mostr un incremento de mensajero y microcistina causado por deficiencia de hierro (Sevilla et al. 2008).

Figura 2: Estudio de la unin de la protena Fur a iron-boxes identificadas in silico en los promotores de los genes implicados en la sntesis de la cianotoxina microcistina. Ensayo de retardo en gel utilizando el promotor bidireccional del operon mcy, dividido en dos fragmentos, tal como se muestra en la imagen. La protena Fur de Microcystis aeruginosa PCC7806, (Martin-Luna et al, 2006a) se une a ambos fragmentos de la regin promotora de los genes (Martin-Luna 2006b).

Sin embargo, segn nuestros estudios, el exceso de nitrato no induca la sntesis de microcistina, aunque era uno de los factores al que la comunidad cientfica identificaba como causante de toxicidad, ya que su aumento esta ligado a la eutrofizacin. La disponibilidad de nitrgeno afecta fuertemente el crecimiento de la cianobacteria, pero no cambia la expresin gnica de mcyD ni de los niveles de microcistina/clula de forma significativa (Sevilla et al. 2010). El fosfato, otro de los responsables de la eutrofizacin, no afecta al crecimiento, y su deficiencia provoca fuertes cambios puntuales en la transcripcin, que correlacionan con la microcistina medida. El estrs salino y osmtico afectan negativamente (NaCl) o muy levemente (sacarosa) a la transcripcin, y esto se ve reflejado en una pequea disminucin de microcistina en ambos casos. La literatura sigue generando resultados contradictorios, y en nuestra opinin las tcnicas moleculares permiten aportar informacin muy valiosa que posteriormente debe ser considerada desde el punto de vista fisiolgico y ambiental. 33

Consideraciones finales Las cianobacterias son unos organismos que pasan desapercibidos en la vida cotidiana y que no forman parte de los conocimientos generales de la sociedad. Sin embargo, sin ellas, ni ustedes ni yo estaramos aqu en este momento. No solamente desde el punto de vista evolutivo, sino debido a que en la actualidad juegan papeles cruciales en los ciclos globales de algunos elementos y en las cadenas trficas como productores primarios. Por otra parte, su potencial biotecnolgico ha dado lugar a que puedan ser consideradas muy importantes para la economa mundial, y puedan jugar un papel relevante en modelos de desarrollo sostenible. En contrapartida a su contribucin positiva al ecosistema global, y debido al deterioro de la calidad de nuestras aguas, las cianobacterias pueden causar serios problemas sanitarios y ambientales, dada la capacidad de algunas de ellas de producir toxinas. Toxinas, que por otra parte, junto con otros metabolitos secundarios tienen potencial farmacolgico muy prometedor, aunque todava inexplorado. La evidencia en este grupo de organismos de que ha ocurrido y ocurre transferencia horizontal de genes y recombinacin homloga puede interpretarse en conflicto con conceptos neodarwinianos (Ward et al. 2008), ya que no hay competencia, sino colaboracin. Esta idea entronca con el anlisis del hecho de lo que supuso la endosimbiosis de una cianobacteria ancestral en clulas de la lnea evolutiva a eucariotas, mencionado anteriormente. Estas endosimbiosis se sigue observando que se producen profusamente en la actualidad con una amplia gama de organismos. La idea de la cooperacin como fuerza evolutiva, choca frontalmente con la idea darwinista de la lucha por la vida, y la competencia como motor de la evolucin, a travs de la seleccin natural, que se materializa en el acerbo gentico de la descendencia. Conforme conocemos ms, se hace evidente que grandes innovaciones evolutivas estn basadas en esta cooperacin, ms que en la confrontacin o competencia. Esto se olvida cuando el neodarwinismo social quiere explicar la evolucin de las sociedades en base a las leyes de la evolucin biolgica, basada de una forma reduccionista en la lucha por la existencia y la seleccin natural. El propio Darwin se opuso directamente a la "aplicacin brutal del su modelo evolutivo a las sociedades humanas (Darwin, 1871). Las cianobacterias, organismos clave en la vida tal como esta diseada en estos momentos, son el ejemplo de que sin duda la cooperacin de un procariota fotosinttico con otra clula ya producto de cooperacin, determin el camino evolutivo de toda la vida sobre la Tierra. La cooperacin crea potencialidades imposibles para las partes separadamente. Entender como surgi evolutivamente la cooperacin y como se ha mantenido, es un reto para los bilogos moleculares y para los estudiosos de la evolucin. La cooperacin puede entenderse como una convergencia del inters inmediato individual de muchos individuos. 34

Bibliografa:
(1999) 135 i 3-13520 Aaronson, S. y Dubinsky, Z. (1982) Mass production of microalgae. Experientia Suppl 43: 42-46.

Abed, R.M., Al-Thukair, A. y de Beer, D. (2006) Bacterial diversity of a cyanobacterial mat degrading petroleum compounds at elevated salinities and temperatures. FEMS Microbiol Ecol 57: 290-301.

Abed, R.M., Dobretsov, S. y Sudesh, K. (2009) Applications of cyanobacteria in biotechnology. J Appl Microbiol 106: 1-12.

Ananyev, G., Carrieri, D. y Dismukes, G.C. (2008) Optimization of metabolic capacity and flux through environmental cues to maximize hydrogen production by the cyanobacterium "Arthrospira (Spirulina) maxima". Appl Environ Microbiol 74: 6102-6113.

Angermayr, S.A., Hellingwerf, K.J., Lindblad, P. Y de Mattos, M.J. (2009) Energy biotechnology with cyanobacteria. Curr Opin Biotechnol 20: 257-263.

Benemann, J. (1996) Hydrogen biotechnology: progress and prospects. Nat Biotechnol 14: 11011103.

Bodyl, A., Mackienwicz, P. y Stiller, J.W. (2007) The intracellular cyanobacteria of Pulinella chromatophora: endosybionts or organelles? Trends in Microbiology, 15, 295-296.

Bueno, M., Fillat, M.F., Strasser, R.J., Maldonado-Rodriguez, R., Marina, N., Smienk, H., Gomez-Moreno, C. y Barja, F. (2004) Effects of lindane on the photosynthetic apparatus of the cyanobacterium Anabaena: fluorescence induction studies and immunolocalization of ferredoxinNADP+ reductase. Environ Sci Pollut Res Int 11: 98-106.

Coale, K.H.J., K.S. Fitzwater, S.E. Gordon, R.M. Tanner, S. Chavez, F.P. Ferioli, L. Sakamoto, C. Rogers, P. Millero, F. Steinberg, P. Nightingale, P. Copper, D. Cochlan, W.P. Landry, M.R. Constaninou, J. Rollwagen, G. Trasvina, A. Kudela, R. (1996) A massive phytoplankton bloom induced by an ecosystem-scale iron fertilization experiment in equatorial Pacific Ocean. Nature 383: 495-501.

35

Codd, G.A., Morrison, L.F. y Metcalf, J.S. (2005) Cyanobacterial toxins: risk management for health protection. Toxicol Appl Pharmacol 203: 264-272.

Darwin, C (1871): El origen del hombre y de la seleccin en relacin al sexo. Editorial Edalf, 1982.

Dutta, D., De, D., Chaudhuri, S. y Bhattacharya, S.K. (2005) Hydrogen production by Cyanobacteria. Microb Cell Fact 4: 36.

Fernndez Valiente, E. (2002) Hacia un nuevo concepto de evolucin. Arbor, 172, 17-39. Fillat, M.F., Borrias, W.E. y Weisbeek, P.J. (1991) Isolation and overexpression in Escherichia coli of the flavodoxin gene from Anabaena PCC 7119. Biochem J 280 ( Pt 1): 187-191.

Fillat, M.F., Edmondson, D.E. y Gomez-Moreno, C. (1990) Structural and chemical properties of a flavodoxin from Anabaena PCC 7119. Biochim Biophys Acta 1040: 301-307.

Flores, E. y Herrero, A. (2009) Compartmentalized function through cell differentiation in filamentous cyanobacteria. Nat Rev Microbiol 8: 39-50.

Gademann, K. y Kobylinska, J. (2009) Antimalarial natural products of marine and freshwater origin. Chem Rec 9: 187-198.

Gademann, K. y Portmann, C. (2008) Secondary Metabolites from Cyanobacteria: Complex Structures and Powerful Bioactivities. Curr. Org. Chem 12: 326J341.

Hall, D.O., Markov S.A., Watanabe Y. y Rao K.K. (1995) The potential applications of cyanobacterial photosynthesis for clean Technologies. Photosynthesis Research 46: 159-167,

Hudson, B.J. y Karis, I.G. (1974) The lipids of the alga Spirulina. J Sci Food Agric 25: 759-763.

Jones, A.C., Gu, L., Sorrels, C.M., Sherman, D.H. y Gerwick, W.H. (2009) New tricks from ancient algae: natural products biosynthesis in marine cyanobacteria. Curr Opin Chem Biol 13: 216223.

Kaebernick, M., Dittmann, E., Borner, T. Y Neilan, B.A. (2002) Multiple alternate transcripts direct the biosynthesis of microcystin, a cyanobacterial nonribosomal peptide. Appl Environ Microbiol 68: 449-455.

36

Kaebernick, M., Neilan, B.A., Borner, T. y Dittmann, E. (2000) Light and the transcriptional response of the microcystin biosynthesis gene cluster. Appl Environ Microbiol 66: 3387-3392.

Kehoe, D.M. (2010) Chromatic adaptation and the evolution of light color sensing in cyanobacteria. Proc Natl Acad Sci U S A 107: 9029-9030.

Kodani, S., Ishida, K. y Murakami, M. (1998) Aeruginosin 103-A, a thrombin inhibitor from the cyanobacterium Microcystis viridis. J Nat Prod 61: 1046-1048.

Kuritz, T. y Wolk, C.P. (1995) Use of filamentous cyanobacteria for biodegradation of organic pollutants. Appl Environ Microbiol 61: 234-238.

Kushak R.I., Drapeau C., Van Cott E.M. (2000) Favorable effects of blue-green algae Aphanizomenon flos-aquae on rat plasma lipids. JANA 2:59-65.

Larsen, L.K., Moore, R.E. y Patterson, G.M. (1994) beta-Carbolines from the blue-green alga Dichothrix baueriana. J Nat Prod 57: 419-421.

Lindberg, P., Hansel, A. y Lindblad, P. (2000) hupS and hupL constitute a transcription unit in the cyanobacterium Nostoc sp. PCC 73102. Arch Microbiol 174: 129-133.

MacKintosh, C., Beattie, K.A., Klumpp, S., Cohen, P. y Codd, G.A. (1990) Cyanobacterial microcystin-LR is a potent and specific inhibitor of protein phosphatases 1 and 2A from both mammals and higher plants. FEBS Lett 264: 187-192.

Margulis, L. (2009) Genome acquisition in horizontal gene transfer: symbiogenesis and macromolecular sequence analysis. Methods Mol Biol 532: 181-191.

Margulis, L. y Bermudes, D. (1985) Symbiosis as a mechanism of evolution: status of cell symbiosis theory. Symbiosis 1: 101-124.

Margulis, L. y Chapman, M.J. (1998) Endosymbioses: cyclical and permanent in evolution. Trends Microbiol 6: 342-345; discussion 345-346.

Markov, S.A., Weaver, P.F. y Seibert, M. (1997) Spiral tubular bioreactors for hydrogen production by photosynthetic microorganisms : design and operation. Appl Biochem Biotechnol 63-65: 577-584.

37

Martin-Luna, B., Hernandez, J.A., Bes, M.T., Fillat, M.F. y Peleato, M.L. (2006a) Identification of a Ferric uptake regulator from Microcystis aeruginosa PCC7806. FEMS Microbiol Lett 254: 63-70.

Martin-Luna, B., Sevilla, E., Hernandez, J.A., Bes, M.T., Fillat, M.F. y Peleato, M.L. (2006b) Fur from Microcystis aeruginosa binds in vitro promoter regions of the microcystin biosynthesis gene cluster. Phytochemistry 67: 876-881.

Mikhailov, A., Harmala-Brasken, A.S., Hellman, J., Meriluoto, J. y Eriksson, J.E. (2003) Identification of ATP-synthase as a novel intracellular target for microcystin-LR. Chem Biol Interact 142: 223-237.

Mori, T., Gustafson, K.R., Pannell, L.K., Shoemaker, R.H., Wu, L., McMahon, J.B. y Boyd, M.R. (1998) Recombinant production of cyanovirin-N, a potent human immunodeficiency virusinactivating protein derived from a cultured cyanobacterium. Protein Expr Purif 12: 151-158.

Peleato, M.L., Ayora, S., Inda, L.A. and Gomez-Moreno, C. (1994) Isolation and characterization of two different flavodoxins from the eukaryote Chlorella fusca. Biochem J 302 ( Pt 3): 807-811.

Phakama Maqubela, M., Nyari, P., Mnkeni, S y Muchaonyerwa, P (2010) In search of cyanobacteria strains with bioconditioning and biofertilization effects for degraded soils in the semi arid and arid areas of South Africa. 19th World Congress of Soil Science, Soil Solutions for a Changing World. 1 6 August 2010, Brisbane, Australia. Rantala, A., Fewer, D.P., Hisbergues, M., Rouhiainen, L., Vaitomaa, J., Borner, T. y Sivonen, K. (2004) Phylogenetic evidence for the early evolution of microcystin synthesis. Proc Natl Acad Sci U S A 101: 568-573.

Rastogi, R.P. y Sinha, R.P. (2009) Biotechnological and industrial significance of cyanobacterial secondary metabolites. Biotechnol Adv 27: 521-539.

Razquin, P. (1994) Transporte de electrones a la nitrogenasa en los heterocistos de Anabaena sp. Tesis Doctoral. Facultad de Ciencias, Universidad de Zaragoza

Razquin, P., Fillat, M.F., Schmitz, S., Stricker, O., Bohme, H., Gomez-Moreno, C. y Peleato, M.L. (1996) Expression of ferredoxin-NADP+ reductase in heterocysts from Anabaena sp. Biochem J 316 ( Pt 1): 157-160.

Razquin, P., Schmitz, S., Fillat, M.F., Peleato, M.L. y Bohme, H. (1994) Transcriptional and translational analysis of ferredoxin and flavodoxin under iron and nitrogen stress in Anabaena sp.

38

strain PCC 7120. J Bacteriol 176: 7409-7411. Rickards , R.W., Rothschild, J.M., Willis, A. C., de Chazal, N. M., Kirk, J., Kirk, K., Saliba, K.J. y Smith, G.D. (1999) Calothrixins A and B, novel pentacyclic metabolites from Calothrix

cyanobacteria with potent activity against malaria parasites and human cancer cells. Tetrahedrom 55: 13513-13520.

Sangthongpitag, K., Penfold, R.J., Delaney, S.F. y Rogers, P.L. (1997) Cloning and expression of the Bacillus sphaericus 2362 mosquitocidal genes in a non-toxic unicellular cyanobacterium, Synechococcus PCC6301. Appl Microbiol Biotechnol 47: 379-384.

Sevilla, E., Martin-Luna, B., Vela, L., Bes, M.T., Fillat, M.F. y Peleato, M.L. (2008) Iron availability affects mcyD expression and microcystin-LR synthesis in Microcystis aeruginosa PCC7806. Environ Microbiol 10: 2476-2483.

Sevilla, E., Martin-Luna, B., Vela, L., Bes, M.T., Peleato, M.L. y Fillat, M.F. (2010) MicrocystinLR synthesis as response to nitrogen: transcriptional analysis of the mcyD gene in Microcystis aeruginosa PCC7806. Ecotoxicology 19: 1167-1173.

Sivonen, K., Leikoski, N., Fewer, D.P. y Jokela, J. (2010) Cyanobactins-ribosomal cyclic peptides produced by cyanobacteria. Appl Microbiol Biotechnol 86: 1213-1225.

Skulberg, O.M. (2005) Cyanobacteria/cyanotoxin research--looking back for the future: the opening lecture of the 6th ICTC, Bergen, Norway. Environ Toxicol 20: 220-228.

Tamagnini, P., Leitao, E., Oliveira, P., Ferreira, D., Pinto, F., Harris, D.J., Heidorn, T. y Lindblad, P. (2007) Cyanobacterial hydrogenases: diversity, regulation and applications. FEMS Microbiol Rev 31: 692-720.

Tillett, D., Dittmann, E., Erhard, M., von Dohren, H., Borner, T. y Neilan, B.A. (2000) Structural organization of microcystin biosynthesis in Microcystis aeruginosa PCC7806: an integrated peptidepolyketide synthetase system. Chem Biol 7: 753-764.

Walsby, A.E. (1994) Gas vesicles. Microbiol Rev 58: 94-144.

Ward, D.M., Cohan, F.M., Bhaya, D., Heidelberg, J.F., Kuhl, M. y Grossman, A. (2008) Genomics, environmental genomics and the issue of microbial species. Heredity 100: 207-219.

39

Watanabe, F., Takenaka, S., Kittaka-Katsura, H., Ebara, S. y Miyamoto, E. (2002) Characterization and bioavailability of vitamin B12-compounds from edible algae. J Nutr Sci Vitaminol (Tokyo) 48: 325-331.

Wingreen, N.S. y Levin, S.A. (2006) Cooperation among microorganisms. PLoS Biol 4: e299. Vitousek, P.M., Naylor, R., Crews, T., David, M.B., Drinkwater, L.E., et al. (2009) Agriculture. Nutrient imbalances in agricultural development. Science 324: 1519-1520.

Volk, R.B. (2008) Screening of microalgae for species excreting norharmane, a manifold biologically active indole alkaloid. Microbiol Res 163: 307-313.

Zhou, L., Yu, H. y Chen, K. (2002) Relationship between microcystin in drinking water and colorectal cancer. Biomed Environ Sci 15: 166-171.

40

Abreviaturas:

ATP ATPasa DCMU EMSA Kb MV NADP+ NADPH NRPS pb PCC PCR PKS Real-time PCR RT-PCR

Trifosfato de adenosina ATP sintasa [3-(3,4-diclorofenil)-1,1 dimetilurea] Electrophoretic mobility shift assay (ensayo de retardo en gel) Kilobases Metil violgeno 2-Fosfodinucletido de nicotinamida y adenina (oxidado) 2-Fosfodinucletido de nicotinamida y adenina (reducido) Non-Ribosomal Peptide Synthetase (Pptido sintetasas no ribosomal) Pares de bases Coleccin de Cultivos del Instituto Pasteur Polymerase Chain Reaction (reaccin en cadena de la polimerasa) Polyketide synthase (Polictido sintasa) PCR a tiempo real Reverse transcription polymerase chain reaction

41

42