1

Wellcolex*
Colour Salmonella
FINALIDAD DE USO
Wellcolex* Colour Salmonella es un ensayo de ltex cualitativo sencillo
y rpido para el cribado, la deteccin y la identificacin del posible
serogrupo de Salmonella a partir de caldos de cultivo selenito F y de
medios de cultivo slidos. El ensayo Wellcolex* Colour Salmonella se
ha clasificado como altamente complejo segn CLIA.
RESUMEN Y EXPLICACIN DEL ENSAYO
El gnero Salmonella causa gran variedad de enfermedades humanas:
desde formas leves de gastroenteritis hasta enteritis por Salmonella
graves o mortales. Adems, un individuo puede ser portador sin
presentar sntomas. La identificacin precoz y exacta es muy importante
para determinar la terapia adecuada y controlar los brotes de la
enfermedad. La identificacin inicial de los organismos implica la
utilizacin de procedimientos bioqumicos y serolgicos. Para el anlisis
serolgico definitivo se necesita gran cantidad de antisueros diferentes
frente a los antgenos O asociados a clulas y a los antgenos H
flagelares y se debera realizar en laboratorios de referencia. Para los
laboratorios clnicos es til la identificacin del aislado del serogrupo O
antes de enviar la muestra a un laboratorio de referencia
4
.
PRINCIPIOS BIOLGICOS DEL PROCEDIMIENTO
En el ensayo Wellcolex* Colour Salmonella, se mezcla una muestra de
un cultivo con caldo selenito F (despus de una incubacin de 18 a 24
horas) o una suspensin de bacterias de agar slido con 2 reactivos,
que contienen una mezcla de suspensiones de partculas de ltex rojas,
azules y verdes. Cada una de estas partculas est recubierta de
anticuerpos especficos para los diferentes serogrupos de Salmonella.
Si los antgenos homlogos estn presentes en la muestra, las partculas
de un color de la mezcla se aglutinan y el color de las partculas
agregadas junto con el cambio de color del fondo indica el tipo de
antgenos presentes. Cada combinacin de colores se distingue
fcilmente de las dems combinaciones, de los resultados negativos
(las partculas permanecen en una suspensin homognea de color
gris/marrn) y de los resultados inespecficos poco habituales (las
partculas se aglutinan en agregados de color gris/marrn y el fondo es
de color claro).
REACTIVOS
CONTENIDO DEL KIT
Wellcolex* Colour Salmonella 50 ensayos 200 ensayos
(ZC50/30858301) (ZC52/30858302)
1. Reactivo de ltex 1 1 frasco cuentagotas 4 frascos cuentagotas
(tapn blanco) (tapones blancos)
2. Reactivo de ltex 2 1 frasco cuentagotas 4 frascos cuentagotas
(tapn blanco) (tapones blancos)
3. Control positivo rojo 1 frasco cuentagotas 1 frasco cuentagotas
(tapn rojo) (tapn rojo)
4. Control positivo azul 1 frasco cuentagotas 1 frasco cuentagotas
(tapn azul) (tapn azul)
5. Control positivo verde 1 frasco cuentagotas 1 frasco cuentagotas
(tapn verde) (tapn verde)
6. Bastoncillos desechables 2 paquetes 5 paquetes
7. Tarjetas de reaccin 1 paquete 4 paquetes
desechables
8. Dispensadores de muestra 2 paquetes 8 paquetes
desechables
9. Tubos de suspensin 1 paquete NINGUNO
desechables
10. Instrucciones de uso 1 1
11. Gua de resultados 1 1
DESCRIPCIN, PREPARACIN PARA EL USO Y
ALMACENAMIENTO
Para ms informacin, consulte el apartado Advertencias y
precauciones en este prospecto.
A menos que se indique lo contrario, se deben almacenar todos los
reactivos a una temperatura entre 2 y 8C (bajo estas condiciones los
reactivos del kit permanecen activos hasta la fecha de caducidad).
Reactivo de ltex 1
1 frasco cuentagotas (ZC50/30858301) o 4
frascos cuentagotas (ZC52/30858302) con
una suspensin de color gris/marrn de
partculas de ltex de poliestireno en tampn.
Conservante: Bronidox al 0,05%. Las
partculas de ltex estn recubiertas de
anticuerpos (de conejo) especficos:
Ltex rojo Grupo B de Salmonella
Ltex azul Grupo C de Salmonella
Ltex verde Grupo D
1
de Salmonella
Reactivo de ltex 2
1 frasco cuentagotas (ZC50/30858301) o 4
frascos cuentagotas (ZC52/30858302) con
una suspensin de color gris/marrn de
partculas de ltex de poliestireno en tampn.
Conservante: Bronidox al 0,05%. Las
partculas de ltex estn recubiertas de
anticuerpos (de conejo) especficos:
Ltex rojo Vi
Ltex azul Grupos E y G de Salmonella
Ltex verde Grupo A de Salmonella
Control positivo rojo
Suspensi n de bacteri as muer tas de
organismos del grupo B de Salmonella y
antgenos Vi. Conservantes: Bronidox al
0,05% y formalina al 0,5%.
Control positivo azul
Suspensi n de bacteri as muer tas de
organismos del grupo C y antgenos E de
Salmonella. Conservantes: Bronidox al
0,05% y formalina al 0,5%.
Control positivo verde
Suspensi n de bacteri as muer tas de
organismos del grupo A y antgenos D
1
de
Salmonella. Conservantes: Bronidox al
0,05% y formalina al 0,5%.
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
Slo para uso en diagnstico in vitro.
Slo para uso profesional.
Atencin: este producto contiene caucho natural seco.
Para ms informacin sobre los componentes potencialmente
peligrosos, consulte la hoja de seguridad de datos del fabricante y el
etiquetado de los productos.
Es
2
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
1. Manipule las muestras de origen humano y los materiales como
potencialmente infecciosos siguiendo los Procedimientos
normalizados de trabajo. Preferiblemente, este ensayo se debe
realizar en una cabina de seguridad para uso microbiolgico
1
.
2. Despus del uso, los materiales no desechables se deben esterilizar.
El mtodo adecuado es la esterilizacin con autoclave a una
temperatura de 121C durante 15 minutos. Los materiales
desechables se deben esterilizar con autoclave o incinerar. Las
salpicaduras de los materiales potencialmente infecciosos se deben
eliminar inmediatamente con papel absorbente y se debe limpiar la
zona contaminada con un desinfectante adecuado o con alcohol al
70%. Los materiales utilizados para limpiar las salpicaduras,
incluidos los guantes, se deben eliminar junto con los desechos
potencialmente infecciosos. No esterilice con autoclave los
materiales que contengan hipoclorito sdico.
3. No pipetee con la boca. Utilice guantes desechables, bata y
proteccin para los ojos cuando manipule las muestras y realice el
ensayo. Lvese bien las manos cuando haya terminado el anlisis.
4. Si cualquiera de los reactivos entra en contacto con la piel o los
ojos, lvese inmediatamente con agua abundante.
5. No ingiera los reactivos.
PRECAUCIONES DE MANIPULACIN
1. No utilice los reactivos transcurrida la fecha de caducidad.
2. Se debe evitar la contaminacin microbiana de los reactivos, ya
que puede reducir la duracin del producto y producir resultados
errneos.
3. Antes del uso, deje que los reactivos y las muestras alcancen la
temperatura ambiente (entre 18 y 30C) y, despus del uso, vuelva
a almacenarlos inmediatamente bajo las condiciones antes
indicadas. Los reactivos de ltex que presenten agregacin cuando
los dispense por primera vez pueden haber estado congelados y no
se deben utilizar.
4. Almacene los reactivos de ltex en posicin vertical a una
temperatura entre 2 y 8C. Despus de un perodo de
almacenamiento prolongado, es posible que el ltex se haya
agregado o secado en la boca del frasco. En este caso, se deben
agitar bien los frascos de ltex durante unos segundos hasta que
el contenido se haya resuspendido totalmente.
5. Los usuarios con problemas para distinguir los colores deberan
poder ver las aglutinaciones; sin embargo, les puede resultar difcil
diferenciar las reacciones de los colores. En este caso, un usuario
sin problemas para distinguir los colores debe examinar la reaccin.
6. Es importante tener en cuenta la calidad del caldo selenito F utilizado
para enriquecer la Salmonella, ya que un caldo que se haya
calentado a ms temperatura de la recomendada, que contenga un
precipitado rojo, que se haya almacenado durante perodos de tiempo
prolongados o que se haya almacenado a una temperatura superior
a 8C puede dar resultados errneos, por lo que no se debe utilizar
5
.
7. Cuando utilice frascos cuentagotas, es importante que los mantenga
en posicin vertical y que las gotas se formen en la punta del
cuentagotas. Si la boca del frasco se humedece, se forma un
volumen incorrecto en el extremo del cuentagotas y no en la punta;
en este caso, seque la boca del frasco antes de seguir con el ensayo.
8. Es importante que utilice un rotador plano. Para obtener resultados
ptimos, asegrese de que el rotador est nivelado y que est
ajustado para funcionar a una velocidad de 150 5 rpm.
9. No toque las zonas de reaccin de las tarjetas. Es importante que
se asegure de que las tarjetas de reaccin estn en posicin
horizontal en el rotador; en caso contrario, no se obtienen
aglutinaciones claramente visibles.
10. Asegrese de que los controles positivos se resuspendan
agitndolos bien manualmente o con un agitador de tubos tipo Vortex
durante 10 segundos. NO agite los reactivos de ltex con un agitador
de tubos tipo Vortex.
RECOGIDA DE LAS MUESTRAS Y PREPARACIN DE LOS
CULTIVOS
El ensayo se puede realizar directamente en caldo selenito F despus
de una incubacin de 18 a 24 horas. La calidad del caldo selenito F es
muy importante (para ms informacin, consulte el apartado
Precauciones de manipulacin en este prospecto).
Con este ensayo se pueden utilizar colonias que no fermenten la lactosa
crecidas en cultivos primarios con medios de cultivo selectivos (p.ej.,
agar de MacConkey, agar entrico Hektoen o agar de xilosa lisina
desoxicolato), en subcultivos del caldo enriquecido en estos medios de
cultivo o en cultivos puros (p.ej., agar con nutrientes en placas o en
tubos inclinados).
Si es necesario confirmar los resultados del ensayo, se puede realizar
un subcultivo de la suspensin bacteriana utilizada con el ensayo para
su posterior identificacin y, adems, se puede utilizar la misma
suspensin con el ensayo Wellcolex* Colour Shigella (ZC51/30858401).
Para ms informacin sobre la recogida de las muestras y la preparacin
de los cultivos, consulte un libro especializado
2,3,4
.
PROCEDIMIENTO
MATERIALES SUMINISTRADOS
El kit Wellcolex* Colour Salmonella contiene materiales suficientes para
50 ensayos (ZC50/30858301) o 200 ensayos (ZC52/30858302), para
ms informacin, consulte el apartado Contenido del kit en este
prospecto.
MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS
1. Solucin salina esterilizada al 0,85%.
2. El ensayo debe realizarse en un rotador plano con un dimetro orbital
de 38 mm (1.5 in.) y que funcione a una velocidad aproximada de
150 rpm. La velocidad y el dimetro orbital son fundamentales para
realizar el ensayo de manera correcta.
3. Tubo o frasco pequeo de cristal para hervir una muestra de caldo
selenito F (necesario si la muestra es positiva para el antgeno Vi).
4. Bao termosttico hirviente.
5. Solucin salina esterilizada que contiene 0,5 ml de formaldehdo al
35% por 100 ml (necesario si se detecta el antgeno Vi en una
suspensin de colonias).
6. Tubos de suspensin desechables (no se suministran con el ZC52/
30858302). Con este kit se pueden identificar colonias si se utiliza
un tubo de cristal o de plstico (poliestireno) inerte adecuado. No
son necesarios otros materiales o instrumentos.
Preparacin del caldo enriquecido
1. Asegrese de que los caldos de selenito F alcancen la temperatura
ambiente (entre 18 y 30C) antes de la inoculacin.
2. Inocule una muestra de heces del tamao de un guisante o 0,5 ml
de heces lquidas en 3 ml de solucin salina esterilizada o en caldo
selenito F en un recipiente con tapn de rosca. Emulsione el
contenido agitando bien manualmente o con un agitador de tubos
tipo Vortex asegurndose de que las muestras slidas se hayan
mezclado bien antes de la emulsin.
3. Deje reposar durante unos minutos para reducir el riesgo de
formacin de aerosoles. Inocule el caldo en una solucin de 1
volumen de emulsin y 10 volmenes de caldo e incube entre 18 y
24 horas a una temperatura de 37C. Asegrese de que los tapones
de los tubos y los frascos estn abiertos para dejar que el aire
pueda salir.
NOTA: Se han obteni do resul tados correctos i nocul ando
directamente los caldos de selenito F
9
. Es muy importante que la
muestra slida de heces se mezcle bien y se emulsione en el caldo
antes de la incubacin.
3
PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO
ATENCIN: Se deben tomar las precauciones adecuadas cuando
manipule cultivos vivos durante el procedimiento del ensayo.
Anlisis del caldo
NOTA: NO MEZCLE LOS CALDOS SELENITO F ANTES DEL
ANLISIS.
ZC50/52
Paso 1 Resuspenda los reactivos de ltex 1 y 2 agitndolos bien
durante unos segundos. Manteniendo los frascos en posicin
vertical dispense 1 gota (formada libremente por accin de
la gravedad, sin forzar) de cada reactivo de ltex en crculos
diferentes en una tarjeta de reaccin. Elimine las burbujas
de aire con el extremo de un bastoncillo.
Paso 2 Manteniendo un dispensador de muestras desechable en
posicin vertical, transfiera 1 gota (formada libremente por
accin de la gravedad, sin forzar) (40 l) de caldo selenito
F inoculado en cada uno de los 2 crculos asegurndose
de no agitar el caldo cuando retire las tarjetas del incubador.
Es importante que la muestra de caldo se recoja de la parte
sobrenadante de las heces asegurndose de que no recoja
heces con la muestra. Asegrese de que no se formen
burbujas de aire. Deseche el dispensador de manera
adecuada.
Paso 3 Mezcle el contenido de cada crculo con un bastoncillo y
extindalo para cubrir todo el crculo. Se puede utilizar el
mismo bastoncillo con los 2 crculos. A continuacin, se
debe desechar de manera adecuada.
Paso 4 Coloque la tarjeta en un rotador plano adecuado y mzclela
a una velocidad de 150 5 rpm durante 2 minutos (para
ms informacin, consulte el apartado Precauciones de
manipulacin en este prospecto). Apague el rotador y
examine la aglutinacin sin sacar la tarjeta del rotador.
Examine la tarjeta desde arriba a una distancia normal de
lectura (de 25 cm a 35 cm). No utilice lupa. El aspecto de
la aglutinacin debe ser fcilmente observable y reconocible
bajo iluminacin normal.
Si no est seguro de si se ha producido la aglutinacin,
repita el ensayo utilizando una gota de 40 l de caldo
negativo. No se debera producir una aglutinacin visible y
este resultado se puede utilizar para la comparacin.
Paso 5 Deseche las tarjetas de reaccin usadas de manera
adecuada. Vuelva a almacenar los reactivos en el
refrigerador (entre 2 y 8C).
Identificacin de colonias
ZC50/52
Paso 1 Dispense aproximadamente 200 l de solucin salina en un
tubo de suspensin. Se puede utilizar el dispensador de
muestras desechabl e que est graduado para
aproximadamente 200 l.
Paso 2 Despus de incubar el cultivo durante una noche, recoja
con la parte plana del bastoncillo 1 2 colonias sospechosas
de Salmonella de tamao medio (entre 1 mm y 2 mm), de
la placa de cultivo y emulsione con cuidado las bacterias en
la solucin salina. Si las colonias son pequeas, es necesario
recoger una cantidad mayor cubriendo el extremo del
bastoncillo. Deseche el bastoncillo de manera adecuada.
Paso 3 Resuspenda los reactivos de ltex 1 y 2 agitndolos bien
durante unos segundos. Manteniendo el frasco cuentagotas
en posicin vertical dispense 1 gota de cada reactivo de
ltex en crculos diferentes en una tarjeta de reaccin
plana. Elimine las burbujas de aire con el extremo de un
bastoncillo.
Paso 4 Manteniendo un dispensador de muestras desechable en
posicin vertical, transfiera 1 gota (40 l) de suspensin
bacteriana en cada uno de los 2 crculos. Asegrese de
que no se formen burbujas de aire. Deseche el dispensador
de manera adecuada.
Paso 5 Mezcle el contenido de cada crculo con un bastoncillo y
extindalo para cubrir todo el crculo. Se puede utilizar el
mismo bastoncillo con los 2 crculos. A continuacin, se
debe desechar de manera adecuada.
Paso 6 Coloque la tarjeta en un rotador plano adecuado y mzclela
a una velocidad de 150 5 rpm durante 2 minutos (para
ms informacin, consulte el apartado Precauciones de
manipulacin en este prospecto). Apague el rotador y
examine la aglutinacin sin sacar la tarjeta del rotador.
Examine la tarjeta desde arriba a una distancia normal de
lectura (de 25 cm a 35 cm). No utilice lupa. El aspecto de
la aglutinacin debe ser fcilmente observable y reconocible
bajo iluminacin normal. Si no est seguro de si se ha
producido la aglutinacin, repita el ensayo utilizando una
gota de 40 l de solucin salina. No se debera producir una
aglutinacin visible y este resultado se puede utilizar para
la comparacin.
Paso 7 Deseche las tarjetas de reaccin usadas de manera
adecuada. Vuelva a almacenar los reactivos de ltex en el
refrigerador (entre 2 y 8C).
RESULTADOS
LECTURA DE LOS RESULTADOS
Para ms informacin, consulte la gua de resultados Wellcolex* Colour
Salmonella.
Resultados negativos
Ninguno de los reactivos de ltex se aglutina y apenas cambia el color
gris/marrn homogneo durante el ensayo (consulte la ilustracin 1).
Sin embargo, debe tener en cuenta que dependiendo de la capacidad
visual del usuario, se puede observar una granulosidad dbil en las
muestras negativas.
Resultados positivos
Se produce un cambio de color en la reaccin debido a la aglutinacin
de una de las suspensiones de ltex con color de la mezcla
junto con el cambio de color del fondo (consulte las ilustraciones 3 a 5).
Habitualmente slo se aglutina un color en un reactivo de ltex, pero,
en los cultivos mixtos de Salmonella, se pueden aglutinar 2 colores en
un reactivo de ltex (consulte las ilustraciones 6 a 8) o un slo color en
ambos reactivos. Ambas reacciones se pueden distinguir fcilmente.
Si el tipo de reaccin es diferente a las que se muestran en las
ilustraciones 3 a 8, se debe comprobar el funcionamiento y la velocidad
del rotador y, si es necesario, ajustarlos.
Resultados inespecficos
Todas las partculas se aglutinan dando lugar a aglutinaciones de color
gris/marrn con un fondo claro (consulte la ilustracin 9). Es posible
que aparezcan algunas aglutinaciones de color gris/marrn en presencia
de reacciones positivas. Si se produce un cambio claro de color en el
ensayo, no tenga en cuenta las aglutinaciones de color gris/marrn.
Heces
En algunas ocasiones, especialmente cuando se analizan caldos de
cultivos, se pueden observar aglutinaciones en la mezcla de reaccin
(consulte la ilustracin 2). stas se diferencian de las reacciones
positivas o negativas y estn causadas habitualmente por la presencia
de heces en la muestra de caldo. Si no est seguro del resultado, vuelva
a analizar la muestra despus de dejar que las heces se sedimenten.
NOTA: Los caldos de selenito F que den resultados positivos
sospechosos o no interpretables se deben confirmar o volver a analizar
con procedimientos convencionales
2,3,4
.
CONTROL DE CALIDAD
Examen visual
Se debe comprobar siempre que los reactivos de ltex no se hayan
agregado cuando los dispense en la tarjeta de reaccin. Si se observa
aglutinacin antes de dispensar la muestra de caldo o suspensin
bacteriana, estos no se deben utilizar.
Procedimientos de control
Se deben realizar los procedimientos siguientes con cada envo de
reactivos y en cada serie analtica. En la prctica, una serie analtica
se puede definir como un perodo de anlisis de hasta 24 horas.
Procedimientos del control positivo
Compruebe el funcionamiento de los reactivos de ltex con los controles
positivos suministrados.
4
Si se detecta el antgeno Vi (aglutinacin roja en el reactivo de ltex 2),
recoja una nueva muestra de caldo selenito F o prepare una suspensin
del cultivo en solucin salina con formalina al 0,5% en un tubo o en un
frasco adecuado para matar las bacterias. Introduzca el tubo o el frasco
en un bao termosttico de agua hirviendo durante 5 minutos, deje
enfriar y vuelva a analizar la muestra con el reactivo de ltex 1. Tambin
puede preparar una nueva suspensin de al menos 400 l del cultivo
en solucin salina o agua destilada. Introduzca el tubo o el frasco en un
bao termosttico de agua hirviendo durante 30 minutos, deje enfriar y
vuelva a analizar la muestra con el reactivo de ltex 1. La aglutinacin
permite la identificacin del serogrupo de Salmonella; si no se produce
la aglutinacin con el reactivo de ltex 1, el cultivo no contiene
Salmonella. Tenga en cuenta que el antgeno Vi despus de hervirlo
todava reacciona con el reactivo de ltex 2.
Un resultado negativo indica que la muestra no contiene antgenos
pertenecientes a los serogrupos de Salmonella que se pueden detectar
con este kit. En los cultivos de heces se encuentran presentes, a
menudo, crecimientos mixtos de organismos que no fermentan la lactosa
y puede ser necesario repetir el ensayo con otras colonias si se obtienen
resultados negativos antes de desechar el cultivo como negativo.
Si se obtiene una reaccin inespecfica, el resultado se considera como
no interpretable y se deben utilizar los procedimientos convencionales
para la identificacin
2,3,4
.
En los caldos enriquecidos, las reacciones inespecficas pueden estar
causadas por muestras con exceso de heces mucoides. Transfiera al
menos 0,5 ml de caldo a un tubo o frasco de cristal adecuado, quite el
tapn e introdzcalo en un bao termosttico de agua hirviendo durante
5 minutos. Deje que las muestras alcancen la temperatura ambiente
(entre 18 y 30C) y repita el ensayo. Las muestras de caldo enriquecido
se deben analizar de la misma manera que el control negativo.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
El ensayo Wellcolex* Colour Salmonella ha sido diseado para el cribado
de Salmonella con caldos de selenito F y con medios de cultivo slidos
como ensayo de identificacin de cultivos. Este ensayo identifica los
aislados de los serogrupos de Salmonella, lo que es til para la mayora
de los fines, siempre que un laboratorio de referencia realice la
identificacin definitiva
4
. Para la identificacin definitiva se necesitan
ensayos bioqumicos y serolgicos convencionales
2,3,4
.

Los resultados
del ensayo Wellcolex* Colour Salmonella pueden servir de gua para
elegir los antisueros adecuados.
Se pueden producir en algunas ocasiones reacciones positivas falsas
debidas a la presencia de antgenos comunes a especies o gneros
heterlogos como los Citrobacter, que se pueden diferenciar mediante
ensayos bioqumicos convencionales. Tambin se puede encontrar el
antgeno Vi en bacterias diferentes a Salmonella
2
;

estas bacterias se
pueden identificar volviendo a analizar una muestra de caldo o una
suspensin de colonias despus de hervirlas para eliminar el antgeno
Vi. Si slo se produce la aglutinacin con el ltex rojo del reactivo de
ltex 2, el organismo no es Salmonella. Se debe tener mucho cuidado
si uno de estos organismos est presente en el caldo enriquecido junto
con Salmonella. En este caso, se recomienda confirmar el resultado
con un subcultivo del caldo antes de comunicar los resultados.
Un resultado negativo no excluye la presencia de Salmonella.
Por ejemplo, este ensayo no detecta todos los serogrupos de Salmonella,
pero detecta el serogrupo presente en ms del 99% de las cepas
presentes en muestras humanas procedentes del Reino Unido
6
y ms
del 98% de las muestras de EE.UU
7
. Adems, las concentraciones de
Salmonella en algunos cultivos de caldo pueden ser demasiado bajas
para dar resultados positivos. Esto puede ocurrir, por ejemplo, con los
cultivos que no se hayan incubado entre 18 y 24 horas.
Algunas preparaciones de caldos selenito F de poca calidad contienen
un precipitado de color rojo ladrillo y se deben interpretar con precaucin
los resultados de las muestras cultivadas en este medio.
RESULTADOS PREVISTOS
Las cepas pertenecientes a los serogrupos A, B, C, D, E o G o que
tengan el antgeno Vi producirn una aglutinacin roja, azul o verde
con el componente del reactivo de ltex 1 2 correspondiente.
Paso 1 Dispense 3 gotas de reactivo de ltex 1 y 3 gotas de reactivo de
ltex 2 en 6 crculos en una tarjeta de reaccin (1 gota en cada
crculo).
Paso 2 Aada 1 gota de cada control positivo en 2 crculos de la tarjeta
(un crculo contiene el reactivo de ltex 1 y el otro contiene el
reactivo de ltex 2).
Paso 3 Mezcle los reactivos utilizando un bastoncillo para mezclar
desechable para cada control positivo.
Paso 4 Agite la tarjeta en un rotador automtico a una velocidad de
150 5 rpm durante 2 minutos. Despus de los 2 minutos,
debe ser visible la aglutinacin final en los 6 crculos.
Paso 5 Deseche las tarjetas de reaccin usadas de manera adecuada.
El color del ltex aglutinado del reactivo 1 y del reactivo 2 debe
corresponder al color de los controles positivos (azul, rojo o verde).
Se pueden utilizar cultivos de serogrupos de Salmonella conocidos en
lugar de los controles positivos.
Procedimientos del control negativo
Repita el procedimiento de ensayo con solucin salina o con caldo
enriquecido en lugar de la muestra. No se debera producir una
aglutinacin significativa.
INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS
Los resultados positivos (aglutinacin coloreada) indican la presencia
e identifican, al mismo tiempo, los serogrupos de Salmonella (o los
antgenos Vi) presentes en las muestras de la manera siguiente:
REACCIN FONDO REACTIVO COMENTARIO PARA
1 2 EL ANLISIS CON
SEROGRUPO SELENITO
IDENTIFICADO
Aglutinacin Violeta/rosa D A Los colores pueden
verde o color oliva variar segn el color
en un reactivo. del caldo selenito.
La reaccin positiva
puede quedar
encubierta por
aglutinaciones de
color rojo/marrn.
Aglutinacin azul Naranja/rosa C E o G
en un reactivo
Aglutinacin roja Azul/turquesa B Vi
en un reactivo
Manchas irre- Gris/marrn Negativo Debido a la presencia
gulares de color (suave) de heces (si un reactivo
rojo/marrn presenta ms
oscuro en los aglutinacin que los
reactivos 1 y 2 dems, compruebe
cuidadosamente
las muestras positivas;
vase ms abajo).
Sin aglutinacin Gris/marrn Negativo
(suave)
Aglutinacin fina, Gris/marrn Inespecfico Si la reaccin es ms
granulosa o de suave o muy intensa en un reactivo,
color rojo/marrn claro puede indicar una
oscuro que se reaccin positiva.
suele presentar en Examine bien el color.
ambos reactivos. Hierva una muestra de
0,5 ml de la manera
que se describe a
continuacin.
Aglutinacin turquesa Rosa C y D A y E Compruebe que haya
en un reactivo o G color.
Aglutinacin naranja Azul B y D A y Vi
en un reactivo
Aglutinacin violeta Verde B y C E o G
en un reactivo y Vi
NOTA: Cuando utilice caldo selenito F, el color del fondo descrito en la
tabla anterior puede quedar encubierto y ser de color rosa o rojo/marrn.
En este caso, la identificacin se realiza utilizando slo el color de las
partculas de ltex aglutinadas.
5
Tabla 1
Identificacin de Salmonella en placas de cultivos
Resultados Resultados habituales
del ensayo
Wellcolex* POSI- NEGA-
Colour Salmonella TIVOS
a
TIVOS TOTAL
CULTIVOS POSITIVOS 65 1
b
66
PRIMARIOS NEGATIVOS 0 127 127
SUBCULTIVOS POSITIVOS 176 0 176
DE CALDO NEGATIVOS 0 147 147
SUBCULTIVOS POSITIVOS 191 2
b,c
193
PUROS NEGATIVOS 1
d
100
e
101
TOTAL 433 377 810
a
199 muestras del grupo B, 116 muestras del grupo C, 91 muestras del grupo
D, 23 muestras del grupo E, 2 muestras del grupo G y 2 muestras del grupo
D / Vi.
b
Bacteria no fermentadora de lactosa no identificada (reaccin para los grupos
E / G).
c
Citrobacter freundii (reaccin para los grupos E / G).
d
El ensayo Wellcolex* Colour Salmonella haba identificado correctamente el
grupo D del subcultivo de caldo.
e
Se incluyeron muestras de Escherichia coli, Proteus mirabilis, Campylobacter
jejuni, Citrobacter freundii, Enterobacter spp., Klebsiella aerogenes y bacterias
coliformes no especificadas.
Tabla 2
Identificacin de Salmonella en caldo selenito
Mtodos de cultivo habituales
POSITIVO NEGATIVO TOTAL
Resultados del POSITIVO 114
a
1
c
115
ensayo
Wellcolex* NEGATIVO 7
b
305
d
312
Colour Salmonella
TOTAL 121 306 427
a
57 muestras del grupo B, 27 muestras del grupo C, 19 muestras del grupo D, 8
muestras del grupo E, 1 muestra del grupo G, 1 muestra del grupo D/Vi y 1
muestra de los grupos C/E en la que se aislaron ambos grupos.
b
1 muestra del grupo B, 2 muestras del grupo C y 4 muestras del grupo D
identificadas con el ensayo Wellcolex* Colour Salmonella segn subcultivos
posteriores.
c
Citrobacter freundii (reaccin para los grupos E/G); la misma reaccin que en
cultivo de placa.
d
Se incluyeron muestras de Proteus spp., Citrobacter freundii, Escherichia coli,
Klebsiella aerogenes, Enterobacter spp., Shigella sonnei y bacterias coliformes
no especificadas.
BIBLIOGRAFA
1
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Pathogens According to Hazard and Categories of Containment, H.M.S.O.,
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9
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of a Coloured Latex Test for Rapid Diagnosis of Salmonella in Stool Specimens.
CARACTERSTICAS ESPECFICAS DEL FUNCIONAMIENTO
Evaluacin externa
Se realizaron 2 estudios para evaluar el ensayo Wellcolex* Colour
Salmonella:
(a) Un estudio realizado en diferentes laboratorios (5 laboratorios de
hospitales pblicos britnicos y 3 laboratorios de hospitales en
EE.UU.) con cultivos habituales para Salmonella.
Cada laboratorio realiz los anlisis en 1 o en ms de los tipos de
muestras siguientes de heces:
1) Caldos enriquecidos de selenito (selenito F).
2) Colonias negativas para lactosa de subcultivos con caldos
enriquecidos en placas de agar selectivo-diferencial.
3) Colonias negativas para lactosa de cultivos primarios en placas
de agar selectivo-diferencial (MacConkey, XLD, DCA, SS y
Hektoen).
4) Subcultivos puros de colonias negativas para lactosa en agar
nutriente.
Se ha utilizado un rotador durante todo el ensayo.
En las tablas 1 y 2 se muestran los resultados obtenidos.
Se determin el funcionamiento del ensayo Wellcolex* Colour
Salmonella comparando los resultados de muestras analizadas con
ensayos bacteriolgicos tradicionales.
En este estudio la sensibilidad y la especificidad del ensayo
Wellcolex* Colour Salmonella fueron (consulte las tablas 1 y 2):
Sensibilidad Especificidad
Cultivos de placas primarios 100% (65/65) 99,2% (127/128)
Subcultivos de caldo
enriquecido 100% (176/176) 100% (147/147)
Cultivos puros 99,5% (191/192) 98,0% (100/102)
Caldos selenito 94,2% (114/121) 99,7% (305/306)
En 9 cultivos sin Salmonella se encontraron antgenos Vi; ninguna
muestra reaccion con los componentes especficos para los
grupos de este ensayo.
El valor predictivo de los resultados positivos fue del 99,3% (432/
435) con los cultivos de placas y del 99,1% (114/115) con caldo
selenito. El valor predictivo de los resultados negativos fue del 99,7%
(374/375) y del 97,8% (305/312), respectivamente.
La prevalencia de Salmonella en las muestras analizadas fue del
44,8% (554/1237).
La frecuencia de reacciones no interpretables con el ensayo
Wellcolex* Colour Salmonella fue del 4,5% (9/202) con cultivos de
placas primarios, del 6,1% (21/344) con subcultivos de caldo
enriquecido, del 3,6% (11/305) con cultivos puros y del 2,1%
(9/436) con caldo selenito. Estas muestras se han excluido de las
tablas 1 y 2.
(b) Un estudio independiente realizado con aislados y con cultivos de
referencia.
En este estudio
8
, el ensayo Wellcolex* Colour Salmonella identific
correctamente 267 de 268 aislados y cultivos de referencia de
Salmonellae, en los que se incluyeron 10 aislados de cada uno de
los 10 serotipos de Salmonella ms comunes (S. typhimurium,
S. enteritidis, S. virchow, S. stanley, S. hadar, S. agona, S. heidelberg,
S. infantis, S. newport y S. braenderup), 10 cepas de S. typhi Vi+ y
10 cepas de Vi-, 10 fagotipos diferentes de S. paratyphi A y
S. paratyphi B y 75 cepas de los grupos C, D, E y G. No se
produjeron reacciones cruzadas con los grupos F y H. Entre los
otros grupos analizados (hasta el O-67 inclusive), se observ una
reaccin dbil con el ltex del grupo D en el reactivo 1 en un cultivo
de O-52 (S. utrecht); esta reaccin no se observ en otro cultivo
de O-52 (S. flottbek). S. uccle (O-3,54) reaccion de la manera
esperada con el reactivo del grupo E.
NOTA: Se pueden obtener ms detalles sobre los procedimientos
de las pruebas serolgicas y bioqumicas para la identificacin de
Salmonella en las publicaciones de W.H. EWING (1986)
2
.
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ENVASE
ZC50/30858301..................................................50 ensayos
ZC52/30858302............................................... 200 ensayos
Leyendas de los smbolos
N del catlogo
Dispositivos mdicos de diagnstico in vitro
Consultar instrucciones de uso (IFU)
Lmites de temperatura (Temp. de almacenamiento)
Cdigo del lote (n del lote)
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*Marca comercial.
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