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Eficacia antibitica de Nasturtium

officinale sobre Pseudomonas
aeruginosa y Streptococcus pyogenes

Informe de investigacin
Realizado por:

Blas Garca, Jalinee Rosario 20132622C
Delfn Vargas, Ricardo Javier 20132551I
Pucar Palomino, Michel Jazmn 20131170A
Santiago Cano, Paola Georgina 20131241F
Velsquez Vila, Julio Csar 20131291C

Docente encargado:

MSc. Mendoza Rojas, Gilberto Alejandro



UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERA
Facultad de Ingeniera Ambiental
2014
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Dedicado a los familiares de cada uno de los participantes de este informe, por ser
para muchos el primer informe de investigacin realizado.

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Agradecemos a todos aquellos que nos apoyaron, especialmente a los encargados del
laboratorio de qumica y microbiologa de la Facultad de Ingeniera Ambiental: La sra.
Margarita y el sr. Oscar por la ayuda brindada durante el desarrollo de la experimentacin.
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RESUMEN
Se conoce ya la patogenicidad del gnero Pseudomonas y Streptococcus, en especial especies
oportunistas como P. aeruginosa y S. pyogenes que son microorganismos cuyas infecciones se
tratan comunmente en los hospitales. As como se conoce su patogenicidad tambin lo es su
tratamiento: antibiticos, que hasta la actualidad es efectivo. Sin embargo, tambien es conocido
los efectos adversos que pueden traer los antibioticos: cepas bacterianas ms resistentes,
efectos secundarios en el organismo, o incluso personas sensibles a ciertos tipos de antibiticos,
adems de en muchos casos ser costosos y no tener facil disponibilidad sobretodo en un pas
tan centralizado como lo es Per. Ante esto es necesaria la existencia de medicina alternativa;
el tratamiento medicinal con plantas tiene un gran potencial para ser un paleativo adecuado a
los antibiticos, pero para ello se deben de comprobar cientficamente los efectos positivos y
negativos que podrian tener una planta en nuestro organismo. Nasturtium officinale, conocido
como berro de agua, es una planta que crece en los ros y se dice que tiene la caracterstica de
curar tanto infecciones internas, como infecciones a la piel. Investigaciones anteriores han
demostrado que extractos alcohlicos de Nasturtium officinale son eficaces en el control de la
placa dental y bacterias relacionadas como S. mutans mutans. Por ello, en esta oportunidad se
evalu la actividad antibitica de Nasturtium officinale frente a bacterias que comunmente
producen infecciones a la piel (S. pyogenes) e infecciones internas (P. aeruginosa). Primero, a
travs de los procesos de calentamiento por bao mara y destilacin, se obtuvo un extracto
alcohlico del berro (se utiliz etanol concentrado al 99.1%), el cual una vez obtenido se puso a
refrigeracin. Las cepas bacterianas fueron inoculadas en caldo nutritivo e incubadas por
aproximadamente 20 horas. Luego se hizo replicaje, sembrando las bacterias por diseminacin
en placas petri con agar Mueller Hinton, por seguridad se utilizaron isopos de madera largos y
esterilizados. Para evaluar la eficacia del berro se utilizaron pequeos discos de papel filtro, los
cuales se sumergieron en soluciones de berro a distintas concentraciones: 100%, 66% y 50% y
posteriormente se colocaron en las placas sembradas. Como mecanismo de control en una placa
petri distinta a la del berro se colocaron discos de sensibilidad con penicilina. Finalizado el
sembrado y la colocacin de discos, se llevaron las placas petri a la incubadora y se dejaron all
por 24 horas a 37. Se pudo observar el crecimiento de P. aeruginosa por encima de los discos
de berro, indicando que la eficacia antibitica del extracto obtenido frente a esta bacteria es
nula; por su parte S. pyogenes tambin creci encima de los discos, a excepcin del disco de
mayor concentracin donde se form un pequeo alo de 6 a 4 mm alrededor, lo que indica que
el berro inhibo levemente el crecimiento de S. pyogenes. Se concluye que el extracto de berro
obtenido no fue efectivo, y no puede utilizarse como una alternativa a los antibiticos en el
tratamiento de infecciones de S. pyogenes y P. aeruginosa.
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Contenido
RESUMEN .....................................................................................................................................4
INTRODUCCION ............................................................................................................................6
Pseudomonas aeruginosa ........................................................................................................6
Streptococcus pyogenes ...........................................................................................................6
Nasturtium Officinale (berro) ...................................................................................................7
Clasificacin taxonmica ......................................................................................................7
Compuestos bioactivos del berro .........................................................................................7
OBJETIVOS ....................................................................................................................................8
OBJETIVO GENERAL ..................................................................................................................8
OBJETIVOS ESPECFICOS ...........................................................................................................8
MATERIALES Y MTODOS .............................................................................................................8
LUGAR DE INVESTIGACIN: ......................................................................................................8
MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS: ......................................................................................8
Parte Qumica: ......................................................................................................................8
Parte Microbiolgica: ...........................................................................................................9
METODOLOGA: .....................................................................................................................10
Parte Qumica: ....................................................................................................................10
Parte Microbiolgica: .........................................................................................................11
RESULTADOS ..............................................................................................................................13
Eficacia antibitica de la penicilina frente a P. aeruginosa.....................................................13
Eficacia antibiotica del extracto de berros a diferentes concentraciones frente a P.
aeruginosa .............................................................................................................................13
Eficacia antibiotica de la penicilina frente al S. pyogenes.......................................................14
Eficacia antibiotica del berro fente al S. pyogenes .................................................................14
CONCLUSIN ..............................................................................................................................14
DISCUSION .................................................................................................................................15
RECOMENDACIONES ..................................................................................................................15
FUENTES DE INFORMACIN .......................................................................................................15


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INTRODUCCION
Tanto Streptococcus como Pseudomonas son gneros de micoorganismos bastante frecuentes
que se encuentran distribuidos mundialmente en suelos, agua, plantas y animales, o en muy
pequeas cantidades en nuestros alimentos. Adems son responsables de un amplio espectro
de enfermedades, desde infecciones tpicas externas leves hasta internas muy severas cmo
fiebre reumtica o glomerulomefritis aguda por S. pyogenes, o neumona y endocarditis por P.
aeruginosa.
Pseudomonasaeruginosa
Bacteria Gram negativa, aerbica y patgena del gnero Pseudomonas. Se asocia
frecuentemente a infecciones del tracto urinario y del tracto respiratorio en humanos. Las
infecciones de P. aeruginosa tambin son habituales en pacientes bajo tratamiento por
quemaduras graves y otros tipos de dao traumtico de la piel. No es un patgeno estricto (no
siempre causan enfermedad), sino oportunista, que infecta individuos con poca capacidad de
resistencia. Adems de las infecciones del tracto urinario tambin puede causar infecciones
sistmicas, normalmente en individuos que han sufrido un dao muy extenso en la piel.
P. aeruginosa es resistente natural a muchos de los antibiticos ms utilizados, de modo que su
tratamiento es normalmente complicado. Esta resistencia se debe a un plsmido transferible de
resistencia. La polimixina, un antibitico que normalmente no se utiliza en humanos debido a su
toxicidad, es efectivo frente a P. aeruginosa se emplea en ciertas circunstancias.
Streptococcuspyogenes
Bacteria Gram positiva, anaerobia facultativa y patgena del grupo A de los Streptococcus. Es el
patgeno ms frecuente, siendo un importante causante de las enfermedades supurativas y no
supurativas. Aunque son la causa ms frecuente de faringitis bacteriana, tambin pueden
producir enfermedades graves con riesgo vital. Crecen ptimamente al incubar por 24 horas en
un medio enriquecido de agar sangre a 37C. No obstante pueden soportar temperaturas
mnimas de 25 C y mximas de 45 C. S. pyogenes es muy sensible a la penicilina.
Debido al contacto frecuente que se tiene con estas dos bacterias oportunistas (atacan cuando
las defensas del individuo disminuye) es recomendable preveer su accin patgena, para este
objetivo hace su aparicin el berro (Nasturtium officinale), un vegetal acutico de uso muy
comn en la preparacin de ensaladas, cuyo consumo podra inhibir el crecimiento de las
bacterias anteriormente mencionadas y funcionar como un agente preventivo a diversas
enfermedades. Adems, la fcil obtencin de esta planta permitira la produccin futura de un
medicamento de bajo costo, o sino la potenciacin de algn antibitico ya existente. A esto se
le agrega la caracterstica de que su consumo podra ser un tratamiento alternativo a diversas
infecciones, ya que los efectos secundarios del berro podran ser mucho menores que de los
antibiticos usuales.

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NasturtiumOfficinale (berro)
Clasificacin taxonmica
Reino Plantae

Divisin Magnoliophytina
Clase Magnoliopsida
Orden Capparales
Familia Brassicaceae
Especie Nasturtium officinale R. Br.

Es una planta que se encuentra cerca de agua corriente y su crecimiento depende de la velocidad
del agua, se necesita un flujo lento de agua para proporcionar nutrientes a la planta. Las races
filiformes forman una alfombra gruesa en los bordes de los arroyos. El presente tolerancia berro
contaminado el suelo y el agua contaminada por metales pesados, pero el producto cosechado
se puede acumular cantidades considerables de metales txicos como el cobre, el nquel, el zinc
y el cadmio (Smith, 2007; Keser y Saygideger, 2010).
Compuestos bioactivos del berro
Los compuestos bioactivos son compuestos orgnicos, por lo general de bajo peso molecular del
metabolismo secundario de las plantas y la accin de proteccin de la salud humana cuando
estn presentes en cantidades significativas en la dieta. Estos compuestos no son sintetizados
por el cuerpo humano (Aguilera et al. 2011).
En general, estos metabolitos secundarios estn relacionados con los sistemas de defensa
contra patgenos de las plantas, la radiacin ultravioleta y / o ataques de plagas. Ejercer diversas
actividades, tales como la actividad antioxidante, la modulacin de las enzimas de
desintoxicacin, la estimulacin del sistema inmune, actividad antiviral y antimicrobiana.
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Las plantas pertenecientes a la familia Brassicaceae, especialmente N.officinale mayora
presentes como compuestos bioactivos glucosinolatos(los flavonoides y cidos fenlicos) y
polifenoles (estilbenos y los lignanos).
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Determinar la eficacia antibitica del Nasturtium officinale sobre Pseudomona aeruginosa y
Streptococcus pyogenes.
OBJETIVOS ESPECFICOS
Evaluar la sensibilidad de las bacterias empleando el mtodo de Kirby Bauer.
Preparar el medio de cultivo agar Mueller-Hinton.
Preparar el inculo utilizando caldo de Mueller -Hinton y estandarizar la suspensin
con la escala de McFarland.
Sembrar la muestra.
Medir los halos formados alrededor de los discos.
MATERIALES Y MTODOS
LUGAR DE INVESTIGACIN:
Laboratorio 20 de fsico-qumica y laboratorio 22 de microbiologa de la Facultad de Ingeniera
Ambiental (FIA) de la Universidad Nacional de Ingeniera (UNI).
MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS:
Parte Qumica:
Materiales:
Mortero.
Vaso de precipitados de 500 ml.
Papel de filtro.
Matraz Erlenmeyer de 250 ml.
Equipos:
Equipo de destilacin simple.
Balanza electrnica.
Estufa elctrica.
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Reactivos:
Etanol concentrado.
Agua destilada.
Reactivo vegetal: hojas de Berro (Nasturtium officinale).
Parte Microbiolgica:
Materiales:
Vaso de precipitados de 500 ml.
Asa de Kolle.
Pipeta de 10 ml.
Placas Petri.
Tubos de ensayo.
Gradilla.
Guantes y mascarillas.
Mechero.
Pera de goma.
Hisopos con mango de madera estriles.
Equipos:
Incubadora.
Cocina elctrica.
Autoclave.
Refrigerador.
Reactivos:
Cepas puras de Pseudomona Aeruginosa y Streptococo Pyogenes.
Caldo nutritivo.
Mueller Hinton Agar.
Discos de penicilina.

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METODOLOGA:
Parte Qumica:
Se machacaron hojas verdes de berro y se form una pasta de color verde. Previamente se
prepar al 80% a partir de etanol concentrado y se procedi a mezclar 125 gr de la pasta de
berro con 125 ml de etanol al 80%.







Luego esta muestra se calent en bao Mara a 80
C por 4 horas, se dej a enfriar la muestra y se
procedi a tamizar para as obtener un lquido de
color verdoso oscuro.




Seguidamente se puso la solucin obtenida a destilar
calentando en bao Mara el matraz de destilacin por 2 horas
y media, obtenindose en el Erlenmeyer etanol y en el matraz
de destilacin extracto de berro, se llev el extracto a
refrigeracin.


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Parte Microbiolgica:
Se prepar 100 ml de caldo nutritivo y se verti en 4 tubos de ensayo, luego estos se llevaron a
esterilizar en el autoclave.
Despus se sembraron las bacterias en los tubos a partir de
cepas puras de Pseudomona Aeruginosa y Streptococo
Pyogenes por el mtodo de inoculacin y se mand a
incubar por 20 horas aprox.





Se calent el medio Mueller Hinton Agar previamente
preparado por un bao Mara y se verti en 4 placas
Petri cuidando que la profundidad sea de 0.4 cm y se
procedi a sembrar las bacterias a partir de los tubos
de ensayo, por el mtodo de diseminacin en 2 de
estas placas se sembr solo Pseudomona Aeruginosa
y en las otras 2 Streptococo Pyogenes.


Al extracto de berro preparado en la parte qumica se realiz la siguiente caracterizacin:
Tubo 1 Berro caliente al 100%.
Tubo 2 Berro fro al 100%.
Tubo 3 Berro fro al 66.67%
Tubo 4 Berro fro al 50%.

Despus se esper 20 minutos y se colocaron los discos de penicilina y de berro a diferentes
concentraciones, como se muestra en la siguiente tabla.

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Placas con:
Discos
con:

Concentraciones:
Temperatura: Imgenes:
P.
Aeruginosa.
Berro.
1 100% Caliente.

2 100% Fro.
3 66.67% Fro.
4 50% Fro.
S.
Pyogenes.
Berro.
1 100% Caliente.

2 100% Fro.
3 66.67% Fro.
4 50% Fro.
P.
Aeruginosa.
Penicilina.

S.
Pyogenes.
Penicilina.


Luego se llev a la incubadora por 48 horas, despus de este tiempo se realiz la observacin
macroscpica.
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RESULTADOS
Eficacia antibitica de la penicilina frente a P.aeruginosa

No se formaron halos de inhibicin de
la penicilina sobre la P.Aureginosa.

Eficacia antibiotica del extracto de berros a diferentes concentraciones frente a
P.aeruginosa

1-Berro al 100% caliente: No se
form halo de inhibicin.
2-Berro al100% fro: No se form
halo de inhibicin.
3-Berro al 50%: No se form halo de
inhibicin.
4-Berro al 66,66%: No se form halo
de inhibicin.



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Eficacia antibiotica de la penicilina frente al S.pyogenes

Si hubo formacin de halos de la
penicilina sobre el S.Pyogenes.

Eficacia antibiotica del berro fente al S.pyogenes

1. Berro al 100% caliente: Si se form
halo de inhibicin el cual tuvo un
dimetro de 6mm.
2. Berro al100% fro: S se form halo
de inhibicin el cual tuvo un
dimetro de 4mm.
3. Berro al 50%: No hubo formacin de
halo.
4. Berro al 66,66%: No hubo formacin
de halo
CONCLUSIN
El Nasturtium officinale no es eficiente en la inhibicin del crecimiento bacteriano de la P.
Aeruginosa.
El Nasturtium officinale posee un bajo rendimiento en la inhibicin del crecimiento
bacteriano del S. Pyogenes.
La penicilina es eficiente frente al S. Pyogenes debido a la formacin de un halo de inhibicin
notable.
La penicilina no es eficiente frente a la P. Aeruginosa.
A mayor concentracin del Nasturtium officinale aumenta ligeramente la eficacia
antibacteriana del mismo.
La variacin de la concentracin del extracto etanlico no influyo de manera significativa en
la inibicin de p.aeruginosa.
La penicilina es mas eficaz antibioticamente que el extracto etanolico del berro.
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DISCUSION
Los resultados esperados no se lograron posiblemente a una preparacin inadecuada del
extracto etanlico de Nasturtium officinale, ya que no se tomaron en cuenta los siguientes
aspectos:
La recoleccin de la planta en la temporada adecuada para uso teraputico.
El control de calidad de la materia prima (planta de Nasturtium officinale) tales como sus
propiedades organolpticas, su estado de conservacin, etc
El secado previo de la planta para asegurar la permanencia de sus sustancias activas.
El tiempo de maceracin de la planta y la constante agitacin.
Otros factores no relacionados con la extraccin que pudieron haber interferido con el resultado
esperado fueron:
La posibilidad de la concentracin excesiva de las bacterias ya que no se utiliz la escala
recomendada de Mc. Farland (0.5) segn el mtodo de Kirby Bauer.
La incorrecta realizacin de la siembra debido al mal esparcimiento de las UFC (unidades
formadoras de colonia) sobre el medio slido.
El no tener la certeza de que si la bacteria era o no S. Pyogenes, ya que al hacer la prueba
de catalasa dio positiva y al realizar la observacin microscpica no se observaron cadenas
de cocos.
RECOMENDACIONES
Realizar la extraccin de manera correcta siguiendo los pasos correspondientes, sin obviar
ninguno.
Emplear todos los materiales esterilizados previamente a su uso.
Emplear la escala 0.5 de Mc. Farland.
Realizar una correcta siembra en ambos tipos de medio y del tipo adecuado.
Usar la proteccin debida al manipular las cepas y los cultivos por su alto grado de
patogenicidad.
Adecuar la metodologa del proceso teniendo en cuenta los equipos que estn a su alcance.
Realizar pruebas bioqumicas a las bacterias para poder afirmar que son las bacterias
correctas.
Realizar de manera adecuada la resiembra de las bacterias para evitar su contaminacin
FUENTES DE INFORMACIN
1. MAYER BERNAL R. MIGUEL GUZMAN U. Revista Biomdica. 1984. El Antibiograma de discos.
Normalizacin de la tcnica de Kirby Bauer. Consultado: 11/05/2014. Disponible en:
www.revistabiomedica.org/index.php/biomedica/article/download/1891/1917
2. MICHAEL T. MADIGAN, JOHN M. MARTINKO, PAUL V. DUNLAP, DAVID P. CLARK. Brock,
Biologa de los microorganismos.
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3. LEY N 27300. Ley de aprovechamiento sostenible de las plantas medicinales. Consultado:
10/05/2014. Disponible en:
www.congreso.gob.pe/comisiones/1999/ambiente/ley27300.htm
4. BUFFON, Marinele Da Cruz Magalhes; LIMA, Maria Lcia Da Costa; LIMA, Vismar Costa
Neto; GALARDA, Izabel; CARVALHO, Joo Luiz de Souza; MIGUEL, Obdulio Gomes; MIGUEL,
Marilis Dalarmi. 2005. Estudo do efeito do extrato de Nasturtium officinale, R. BR. No
controle do crescimento de microganismos presentes na cavidade bucal e placa dentria in
vitro. Universidade Federal do Paran (UFPR). Consultado: 22/03/2014. Disponible en:
http://ojs.c3sl.ufpr.br/ojs/index.php/academica/article/download/545/3580
5. Osama A. Abu-Zinadah. 2008. Effects of watercress oil on the thermal and chemical burn
injuries in rabbits. King Abdulaziz University. Consultado: 22/03/2014. Disponible en:
www.kau.edu.sa/Files/320/Researches/52161_22293.pdf
6. Silvia R. Oliveira; Rui M. S. Cruz; Margarida C. Vieira; Cristina L. M. Silva; Maria N. Gaspar.
2009. Enterococcus faecalis and Pseudomonas aeruginosa behaviour in frozen watercress
(Nasturtium officinale) submitted to temperatura abuses. International Journal of
Refrigeration. Volume 32, Issue 3. Consultado: 22/03/2014. Disponible en:
www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0140700708001515
7. Gerard L. Penecilla; Celia P. Magno. 2011. Antibacterial activity of extracts of twelve
common medicinal plants from the Philippines. Journal of Medicinal Plants Research.
Consultado: 22/03/2014. Disponible en: www.academicjournals.org/journal/JMPR/article-
abstract/7BBEFEE22854
8. Smith, N. S. (2007). Watercress (Nasturtium officinale) Production Utilizing Brook Trout
(Salvelinus fontinalis) Flow-through Aquaculture Effluent. Dissertao de Mestrado. West
Virginia University. 124 pp.
9. Keser, G.; Saygideger, S. (2010). Effects of Lead on the Activities of Antioxidant Enzymes in
Watercress, Nasturtium officinale R. Br. Biological Trace Element Research, 137: 235-243.
10. Aguilera, Y.; Estrella, I.; Benitez, V.; Esteban, R. M.; Martn-Cabrejas, M. A. (2011).
Bioactive phenolic compounds and functional properties of dehydrated bean flours. Food
Research International, 44: 774780.