PRACTICA N 7

PREPARADOS EN FRESCO
I. INTRODUCCION:
Permiten observar los organismos suspendidos en un lquido en condiciones de vida normal, sin
sufrir alteraciones ocasionadas por algunos colorantes; permite apreciar la movilidad, los cambios
citolgicos durante el proceso de divisin celular y en la formacin de esporas.
Se emplean las siguientes tcnicas:
1. Tcnica del Montaje Hmedo:
Las preparaciones hmedas se efectan colocando una gota del lquido que contiene los
microorganismos en estudio sobre una lmina portaobjeto y cubrindolo con una laminilla, evitando la
formacin de burbujas.
Si el material es slido o muy rico en grmenes, se coloca sobre la lmina portaobjeto una gota
de solucin salina y en ella se emulsiona la muestra en estudio y se cubre con una laminilla.
2. Tcnica de la gota pendiente:
Persigue el mismo propsito que el montaje hmedo, con la ventaja que hay menor distorsin
por el peso de la lmina cubreobjeto. Se utiliza lmina portaobjeto con excavacin central.
La tcnica consiste en colocar en el centro de una lmina cubreobjeto una gota de la suspensin
en estudio. El borde de la excavacin de la lmina portaobjeto se cubre con una delgada capa de vaselina
y luego se invierte sobre la laminilla presionando suavemente, guiando la gota de suspensin hacia el
centro de la concavidad; luego se procede a colocar en posicin normal la lmina portaobjeto para el
examen de microscopio.
El objetivo de la presente prctica es demostrar las variadas formas, disposicin y
movilidad de algunos microorganismos.
II. MATERIAL:
Materiales de laboratorio:
Material Biolgico:
- Yogurt
- Vinagre
- Agua estancada
Equipos:
- Microscopio ptico compuesto

Laminas
Laminillas
Gotero
Pipeta Pasteur

Reactivos:
Solucin Salina Fisiolgica

III. MTODO:
1.
2.
3.

Procese las muestras en estudio por las Tcnicas de montaje hmedo y gota pendiente descritas
en los prrafos anteriores.
Examine al microscopio las muestras procesadas primero con lentes de menor aumento y luego
con lentes de mayor aumento.
Observe cuidadosamente los microorganismos presentes en cada una de las muestras y haga un
estudio comparativo de la morfologa, estructuras y movimiento de los microorganismos que
logra observar.

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IV. RESULTADOS:
Observacin:
Aumento:
Preparado:
Coloracin:
Muestra:

Observacin:
Aumento:
Preparado:
Coloracin:
Muestra:

Observacin:
Aumento:
Preparado:
Coloracin:
Muestra:

Observacin:
Aumento:
Preparado:
Coloracin:
Muestra:

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V. DISCUSIN:

Despus de haber realizado su discusin escriba las respuestas a las siguientes preguntas:
1.

Qu ventajas ofrece un preparado en fresco?

2.

Qu objetivos del microscopio se utilizan para la observacin de preparados en fresco?

3.

Qu desventajas ofrece un preparado en fresco por la tcnica del montaje hmedo?

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PRACTICA N 8
OBSERVACIONES DE PREPARADOS EN SECO
I. INTRODUCCIN:
Un preparado en seco es cuando entre la lente frontal del objetivo y el preparado existe una
sustancia llamada aceite de cedro con un ndice de refraccin como el vidrio.
En general las bacterias y otros microorganismos son transparentes, lo que dificulta su estudio
cuando los exmenes se realizan en fresco. Por tal razn cuando se quiere conocer los detalles
morfolgicos, es necesario recurrir a tincin, es decir debido a que el ndice de refraccin de las bacterias
y otros microorganismos es muy semejante al del medio de montaje, las bacterias pueden a menudo no
ser visibles al microscopio ptico compuesto. Por ende, es necesario utilizar extensiones o frotices de
muestras fijadas y teidas.
Las coloraciones bacterianas se realizan para estudiar la morfologa, agrupaciones y estructuras
como cpsula, esporas, flagelos y otros, que ayudan a la identificacin de una especie o grupo particular.
Las bacterias tienen afinidad por los colorantes derivados de la anilina o especialmente por
aquellos de carcter bsico. Estos colorantes llevan en su parte cromfora carga electro-positiva, la que
tendra una fuerte afinidad por los electro-negativos que normalmente presentan las bacterias en su
protoplasma, entre los cuales se encuentran los cidos nucleicos y sus derivados.
Colorantes son aquella sustancia que tiene la propiedad de comunicar color a tros cuerpos de
cualquier naturaleza. Para que una sustancia sea colorante debe estar compuesta por:
MOLCULA INCOLORA + CROMFORO + AUXOCROMO = COLORANTE
CROMGENO
Cromgeno: Son las molculas que poseen potencialidad de coloracin; esta potencialidad est conferida
por un radical llamado cromforo.

Cromforo: Son grupos de tomos no saturados, susceptibles de dar coloracin a las molculas de las
cuales forman parte: la fuerza de los cromforos vara con la naturaleza de sus tomos y de su estructura.
Algunos de estos grupos dan reaccin bsica. Ejemplo:
Grupo Azo:
Grupo indemnico:

-N=N-N=

Otros dan reaccin cida. Ejemplo: Grupo Nitro: -NO2

Auxocromo: Son grupos no saturados, debido a esta instauracin influyen en el color.
Pueden ser:
a. Simples: Cuando cada uno encierra un tomo no saturado.
Ejemplo: - OH; -SO3H; NH2
b. Compuestos: Cuando cada uno encierra dos tomos no saturados.
Ejemplo:
Grupo hidroxilaminados
NHOH
Grupo hidronicos
- NHNH2
Grupo thiohidroxilaminado
SNH2
Los colorantes de mayor aplicacin son los derivados de alquitrn de hulla (anilinas) Ejemplo: Cristal
Violeta, Fucsina bsica, Safranina, Azul de metileno y Verde de malaquita. Actan mejor mediante la
adicin de mordientes, por que aumentan la permeabilidad de la pared celular y la membrana
citoplasmtica.

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Tipos de colorantes:
a.

Por su origen:
* Colorantes naturales: Son colorantes extrados de organismos, animales y plantas. Ejemplo:
Indigo, Orceina, carmn, tornasol, hematoxilina.
* Colorantes artificiales: Llamados tambin sintticos, son aquellos que se obtienen como
productos derivados, generalmente se le conoce como anilina.
de la destilacin de la hulla

b.

Por su reaccin Tintrea:

Bsicos: Son colorantes nucleares, muestran afinidad por las porciones cidas de la clula.
Ejemplo: Cristal violeta o violeta de genciana, azul de metileno, fuccina bsica, y otros
cidos: Son colorantes citoplasmticos, presentan fuerte afinidad por las porciones bsicas de la
clula. Ejemplo cido pcrico, eosina, fucsina cida, safranina y otros.
Neutros: Asocian un colorante cido y un bsico y poseen las propiedades de ambos. Ejemplo:
Eosina de azul de metileno.

En general las bacterias tienen afinidad por los colorantes derivados de la anilina o
especialmente por aquellos de carcter bsico. Estos. Estos colorantes llevan en su parte cromfera carga
electro-positiva, la que tendra una fuerte afinidad por los grupos electro-negativos que normalmente
presentan las bacterias en su protoplasma, entre los cuales se encuentran los cidos nucleicos y derivados.
Los tipos de coloraciones son:
Coloracin Simple
Coloracin diferencial
Coloracin especial
a) Coloracin Simple:
Es aquella en donde se utiliza un solo colorante en este caso las clulas se tien en forma
uniforme. Este procedimiento es usado cuando se quiere revelar rpidamente presencia de
microorganismos en diversas muestras y permiten examinar la morfologa, estructura y agrupacin de las
bacterias.
Para una buena tincin hay que tener en cuenta de la naturaleza bacteria, edad del cultivo o
muestra, el carcter cido o bsico del medio y preferentemente una buena aplicacin de la tcnica.
El objetivo de la presente prctica es reconocer, ejecutar los pasos de un preparado en seco y de
una coloracin simple
II. MATERIAL:
1. Biolgico:
* Yogurt
* Sarro dentario
2. Vidrio:
* Lmina portaobjeto
* Mechero de alcohol
3. Colorantes:
* Azul de metileno
*Cristal violeta
4. Metal:
* Asa bacteriolgica
5. Otros:
*Alcohol
*Algodn
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III. METODO:
Para obtener los preparados fijados y coloreados se deben realizar los siguientes pasos:
1. Extensin: Consiste en extender en un portaobjeto limpio y exento de grasa una gota de la suspensin
bacteriana. Para ello se hace uso de asa bacteriolgica.
2. Fijacin: Consiste en pasar el preparado suavemente por la flama de un mechero hasta que seque. La
finalidad es adherir la muestra a observar en la lmina portaobjeto y as evitar que se desprenda en los
lavados posteriores. Tambin se puede efectuar la fijacin con alcohol etlico, alcohol metlico, mezcla
de alcohol-ter, y otros.
3. Coloracin: Es el proceso de aplicar uno o ms colorantes de acuerdo a la tcnica empleada. Las
coloraciones son simples, diferenciales y especiales.
* En el caso de la coloracin simple los pasos son:
- Cubra el preparado con gotas de colorante y dejar actuar, dependiendo del colorante, durante 30, 1 a 3
minutos.
4. Lavado y secado: Para eliminar el exceso de colorante se lava el preparado ante un chorro de agua y
luego se seca al medio ambiente o ante la llama de un mechero.
5. Observaciones: Se ubican los preparados primero con el objetivo de menor aumento y luego se
examinan con el objetivo de inmersin utilizando una gota de aceite de cedro.

III. RESULTADOS:

Observacin:
Aumento:
Preparado:
Coloracin:
Muestra:

Observacin:
Aumento:
Preparado:
Coloracin:
Muestra:

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Observacin:
Aumento:
Preparado:
Coloracin:
Muestra:

Observacin:
Aumento:
Preparado:
Coloracin:
Muestra:

IV. Discusin:
1.

Qu ventajas ofrece un preparado en seco?

2.

Qu objetivos del microscopio se utilizan para la observacin de preparados en seco?

3.

Qu desventajas ofrece un preparado en seco?

V. Bibliografa:

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