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    Practica Trigliceridos

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    Este documento presenta un protocolo para la determinación de triglicéridos en suero mediante espectrofotometría. El objetivo es cuantificar la concentración de triglicéridos en una muestra de suero de un paciente y correlacionar los resultados con procesos fisiológicos y patologías. Se describe el fundamento bioquímico del método, los materiales y equipo requeridos, los pasos de la técnica, los cálculos para determinar la concentración de triglicéridos y los valores de referencia.

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    Este documento presenta un protocolo para la determinación de triglicéridos en suero mediante espectrofotometría. El objetivo es cuantificar la concentración de triglicéridos en una muestra de suero de un paciente y correlacionar los resultados con procesos fisiológicos y patologías. Se describe el fundamento bioquímico del método, los materiales y equipo requeridos, los pasos de la técnica, los cálculos para determinar la concentración de triglicéridos y los valores de referencia.

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    Este documento presenta un protocolo para la determinación de triglicéridos en suero mediante espectrofotometría. El objetivo es cuantificar la concentración de triglicéridos en una muestra de suero de un paciente y correlacionar los resultados con procesos fisiológicos y patologías. Se describe el fundamento bioquímico del método, los materiales y equipo requeridos, los pasos de la técnica, los cálculos para determinar la concentración de triglicéridos y los valores de referencia.

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    UNIVERSIDAD VERACRUZANA

    FACULTAD DE MEDICINA, CAMPUS XALAPA


    BIOQUIMICA BSICA
    M. en C.F. Marco Antonio Guadarrama Vzquez

    Lis de Veracruz: Arte, Ciencia, Luz

    PRACTICA- DETERMINACION DE TRIGLICRIDOS

    ALUMNO: ___________________________________________________ GRUPO: ________

    OBJETIVO
    El alumno realizar una determinacin de Triglicridos para cuantificar la concentracin en suero, mediante
    espectrofotometra. Aprender a correlacionar clnicamente los resultados obtenidos, con los procesos
    fisiolgicos, metablicos y las patologas propias de este metabolito.

    FUNDAMENTO:
    Los triglicridos son esteres de glicerol y cidos grasos que provienen de la dieta o son sintetizados
    en el hgado principalmente. Los triglicridos se transportan en el plasma en las lipoprotenas y son utilizadas
    por el tejido adiposo, musculo entre otros sitios anatmicos. Su principal funcin es suministrar energa a la
    clula. Concentraciones elevadas de triglicridos en suero pueden ser debidas a alteraciones hepatobiliares,
    diabetes mellitus, nefrosis, hipotiroidismo, alcoholismo, hiperlipoproteinemia familiar entre otras.
    Los triglicridos presentes en la muestra, al ser incubados

    con Lipoproteinlipasa (LPL) liberan

    glicerol y cidos grasos libres. El glicerol es fosforilado por Glicerolfosfato-deshidrogenasa (GPO) y ATP en
    presencia de Glicerolquinasa (GK) para producir Glicerol-3-fosfato (G3P) y ADP.

    El G3P es entonces

    convertido a Dihidroxiacetona-fosfato (DAP) y Perxido de hidrogeno (H2O2) por GPO.


    Al final el Perxido de hidrogeno (H2O2) reacciona con 4-aminofenazona (4-AF) y p-Clorofenol, reaccin
    catalizada por la peroxidasa (POD) dando una coloracin roja.

    MATERIAL Y EQUIPO:
    MATERIAL BIOLGICO
    Suero basal (ayuno)

    MATERIAL DE LABORATORIO Y REACTIVOS

    EQUIPO

    Tubos de Ensayo (4) 13x100 y (4)12x75

    Espectrofotmetro

    Gradilla

    Celdillas para espectrofotmetro

    Pipetas Pasteur con bulbo

    Centrfuga

    Puntillas para pipetas automticas

    Bao Mara

    Tubos al vaco sin aditivos

    Pipetas automticas de 1.0 ml

    Agujas para sistemas al vaco

    Pipetas automticas de 10 l

    Reactivo de Triglicridos
    Estndar de Triglicridos
    Agua destilada

    -1-

    UNIVERSIDAD VERACRUZANA
    FACULTAD DE MEDICINA, CAMPUS XALAPA
    BIOQUIMICA BSICA
    M. en C.F. Marco Antonio Guadarrama Vzquez

    Lis de Veracruz: Arte, Ciencia, Luz

    TCNICA:

    1.

    Realizar una extraccin de sangre venosa a un paciente en ayuno (en el tubo correspondiente para
    la obtencin de suero).

    2.

    Una vez coagulada la sangre, centrifugar la muestra a 3000 r.p.m. durante 5 minutos. Retirar el tubo
    de la centrifuga y separar el suero del paquete globular.

    3.

    Atemperar el reactivo a temperatura ambiente.

    4.

    Para medir la concentracin srica de triglicridos, pipetear en tres tubos de ensayo los siguientes
    volmenes (ml) y mezclar: **

    Blanco de reactivo

    5.

    Estndar

    Muestra

    Reactivo

    1.0 ml

    1.0 ml

    1.0 ml

    Estndar

    ---

    0.01 ml

    ---

    Muestra

    ---

    ---

    0.01 ml

    Incubar los tubos de ensayo a 37C por 5 minutos o a Temperatura ambiente 16-25C por 15
    minutos. **

    6.

    Leer la absorbancia de Estndar y de Muestra contra el Blanco de Reactivo, trasvasando el


    contenido de un tubo a una celdilla para espectrofotmetro. La lectura se realiza a 500 nm el color
    es estable durante al menos 2 horas. **
    **Consultar el inserto del reactivo.

    CLCULOS.
    Los valores derivan de la siguiente ecuacin:

    Triglicridos (mg/dl) =

    Dnde: AM es el valor de la absorbancia


    AE es la absorbancia del estndar
    CE es Concentracin del estndar en mg/dl.

    VALORES DE REFERENCIA
    TRIGLICRIDOS mg/dl

    TRIGLICERIDOS mmol/L

    BAJO

    Hasta 150

    Hasta 1.7

    INTERMEDIO

    151 - 199

    1.71 - 2.25

    ALTO

    200 - 499

    2.26 - 5.64

    500

    > 5.65

    MUY ALTO

    -2-

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    FACULTAD DE MEDICINA, CAMPUS XALAPA
    BIOQUIMICA BSICA
    M. en C.F. Marco Antonio Guadarrama Vzquez

    Lis de Veracruz: Arte, Ciencia, Luz

    REPORTE DE RESULTADOS

    ALUMNO: ___________________________________________________ GRUPO: ________

    LECTURA:
    ABSORBANCIA
    Estndar
    Muestra

    CLCULOS:

    Triglicridos (mg/dl) =

    RESULTADOS:
    TRIGLICRIDOS

    VALORES DE REFERENCIA
    mg/dl

    Hasta 150 mg/dl

    CONCLUSIONES:

    -3-

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