Gua de Practicas de Biologa Celular y Molecular

Universidad Ricardo Palma

PRACTICA N 4
INTERACCION DE SISTEMAS AUTOPOYETICOS ECUCARIOTAS
MULTICELULARES (SERES HUMANOS) Y PROCARIOTES (BACTERIAS)
EN EL CONTEXTO DE SU MEDIO AMBIENTE
INTRODUCCIN
La poblacin microbiana existente en nuestro entorno es grande y compleja.
Cientos de especies microbianas habitan normalmente en distintas partes de
nuestro cuerpo, incluidas la boca, el tracto intestinal y la piel. Al nacer, los
microbios inmediatamente empiezan a colonizar nuestros cuerpos, as como a
casi todos los objetos del mundo. Ellos flotan alrededor hasta que entran en
contacto con una superficie que ofrezca comida y resguardo. Se encuentran
ms frecuentemente en la oscuridad, en objetos hmedos que a menudo
entran en contacto con la comida, la suciedad o la vegetacin. Las superficies
del bao, los cepillos para el cabello, los refrigeradores, los lavaplatos y las
tablas de cocina tienen a menudo muchos microbios. Las manijas y las paredes
tienen menos porque son pobres en nutrientes y secos.
El visualizar de manera prctica el crecimiento de vida a travs de un cultivo
para clulas eucariotas o procariotas es un aporte esencial de la biologa, que
permite comprender de manera prctica, como se pueden estudiar clulas
procariotas por medio de la tcnica biolgica de cultivo. Observar la
interaccin de sistemas vivos autopoyeticos de naturaleza eucariota y
procariota en su medio ambiente normal, determinando la aparicin de
microorganismos bacterianos. Identificar y comprender a las estructuras
biomoleculares que determinan la interaccin de los microorganismos aislados
con el sistema autopoyetico multicelular humano y contextualizar dichas
interacciones en trminos de homeostasis o prdida de la misma es importante
como conocimiento de base para el estudiante de medicina que en ciclos
posteriores profundiza desde la disciplina microbiolgica y clnica estos
procesos.
Se dispone de una gran cantidad de medios y la clase que se debe de utilizar
depende de muchos factores, uno de los cuales es la clase de microorganismos
que se va a cultivar.
Para cultivar un microorganismo determinado proveniente de una muestra
clnica en particular Primero, debe contener los nutrientes adecuados para el
microorganismo especifico que se desea desarrollar, tambin debe contener
humedad suficiente, un pH ajustado de manera apropiada y
una
concentracin conveniente de oxigeno, tal vez ausente por completo.
Para favorecer el crecimiento microbiano un medio debe proporcionar una
fuente de energa as como fuentes de carbono, nitrgeno, azufre, fosforo y
cualquier otro factor de crecimiento que el organismo no pueda sintetizar.

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Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.

La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a

los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una
infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como
hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por
dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones
de fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa
se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.

Los medios de cultivo tambin se pueden clasificar en dos grupos: medios

lquidos y slidos.
Medios lquidos: un medio lquido es una infusin que se prepara disolviendo
en agua destilada unos gramos de extracto de carne comercial , adems se
puede aadir otros nutrientes como peptonas y glucosas as como cloruro
sdico y un tampn de pH. Este medio preparado se esteriliza en el autoclave.
Medios slidos: a un medio de cultivo liquido puede agregarse una sustancia
gelificante, como el agar en polvo, que se disuelve por ebullicin. Al enfriarse
convierte el medio lquido en slido.
Condiciones generales para el cultivo de microorganismos:
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1. Disponibilidad de nutrientes adecuados.
2. Consistencia adecuada del medio.
3. Presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases.
4. Condiciones adecuadas de humedad.
5. Luz ambiental.
6. pH.
7. Temperatura.
8. Esterilidad del medio.

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El material que se inocula sobre el medio se denomina inculo mediante la

tcnica de siembra por estra en placa o siembra en masa en placa. Durante la
incubacin a 37:C , las clulas microbianas individuales se reproducen tan
rpidamente que en un lapso de 18 a 24 horas producen masas visibles de
clulas denominadas colonias. Una colonia es visible a simple vista. Cada
colonia diferente es presumiblemente un cultivo puro de una sola clase de
microorganismo. Si dos clulas microbianas procedentes del inculo original
quedan muy cerca una de otra sobre el medio de Agar, la masa de clulas
observables no ser un cultivo puro.
La mayora de los microbios en nuestro cuerpo y otras superficies son
inofensivas, pero algunos son patgenos o causan enfermedad. Por esta razn,
queremos controlar el nmero de microbios que nos rodea. La posibilidad de
infectarnos aumenta con el nmero de microbios en los objetos circundantes.
PROCEDIMIENTO
En esta actividad tomars una muestra de un fomite (cualquier objeto
inanimado que pueda causar enfermedad en los organismos por contener
microorganismos como: tu celular, el control remoto de la televisin, una
moneda). Este fomite ayudar a confirmar la presencia de sistemas
autopoyticos denominados microbios.
1. Lava tus manos. Limpia t rea de trabajo frotando suavemente, con
solucin desinfectante en una toalla de papel. Saca tus cajas de Petri pero no
abras las cajas hasta que se te indique.
Toma tu placa Petri asignada y sin abrir y con t plumn indeleble, escribe el
nombre de tu compaero y la fecha. Abre la caja de hisopos de algodn y
escoge uno con cuidado para no tocar la punta. Limpia t objeto escogido con
todos los lados de la punta del hisopo voltendolo y retorciendo el hisopo a
medida que lo mueves por la superficie del objeto.
2. Use un hisopo estril frotndolo contra la mano, como se le indica para
luego inocular en el medio de cultivo con este e hisopo
3. Ahora abre la tapa de la caja y frota
suavemente en cada compartimiento de la
placa frota suavemente el hisopo en la superficie
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del medio de cultivo. Tus siembras slo deben dejar una impresin muy ligera
en el Agar.
4. Deja tu placa en la estufa de cultivo para esperar el resultado 24 a 48 horas.
5. Descarta todos los hisopos usados con desinfectante en el recipiente de
biodesechables acondiconado en cada mesa del laboratorio para este fin.
6. Despus de que hayan pasado dos das, mira tu placa Petri inicial. No la
abras. En un cuaderno anota lo observado con la asesora de tu profesor.
Indica si hubo aparicin de sistemas autopoiticos microscopicos en el medio,
que caractersticas generales tenan.
OBJETIVOS:
- Comprender de manera prctica, como se pueden estudiar clulas
procariotas por medio de la tcnica biolgica de cultivo.
- Observar la interaccin de sistemas vivos autopoiticos de naturaleza
eucariota y procariota en su medio ambiente normal, determinando la
aparicin de microorganismos bacterianos.
- Identificar y comprender a las
estructuras
biomoleculares que
determinan la interaccin de los microorganismos aislados con el
sistema autopoitico multicelular humano.
- Contextualizar dicha interaccin en trminos de homeostasis o prdida
de la misma.
MATERIAL
El alumno deber traer:

Material obligatorio
Mango Kolle

Asa de siembra en anillo y en punta.

Hisopos largos (tres por cada alumno) pueden comprar una bolsa por
grupo de laboratorio.

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1pliego de papel kraft por grupo de laboratorio.

Tijeras

Siembra en estra:

Clasificacin:

Cuestionario:
1.- Los macronutrientes son CHONPS Por qu son necesarios para la clula?
2.- Mencione 5 medios de cultivos y que bacteria crece en ellos.
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Referencias Bibliograficas:
Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case 2007. Introduccin
a la microbiologa. 9na edicin. Editorial Mdica Panamericana.

HOJA DE RESULTADOS:

Muestra 1:

Muestra 2:

................................

Muestra 3:

N Muestra
6

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Caracterstica
s
de
la
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
colonia
Forma
Elevacin
Borde
Color

---------------------------------------------------------------------------------VB Dra. Carola Chambers Medina

Fecha

PRACTICA

N 5

ORGANIZACIN CELULAR: CLULAS PROCARIOTICAS Y EUCARIOTAS

I) INTRODUCCIN
La clula unidad estructural, funcional y de continuidad de los sistemas
vivientes por su origen, se clasifica como:

Clula procariotica: Los organismos vivos que se denominan organismos

procariotes incluyen a las bacterias, presentan una estructura simple.
Los procariotas estn divididos en dos grandes grupos: Arqueobacterias que
se vinculan de forma ms estrecha con los eucariotas y los Eubacterias
(bacterias).
Dentro de las Aequeobacterias tenemos: metangenos, halfilos, acidfilos,
termfilos.
La estructura de la clula procariota est formada por lo siguiente:

Pared celular.
Membrana celular.
Citoplasma.
Mesosoma.
Plsmido.
Capsula.
Estructuras que le confieren movilidad: Cilios y flagelos.

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Clula eucaritica: presentan compartimentos definidos por membranas

celulares, El compartimiento ms grande recibe el nombre de citoplasma
y contiene las organelas, asociaciones supramoleculares (ribosomas,
microtbulos y microfilamentos) y dems molculas que participan en el
metabolismo celular.
En el ncleo se encuentra el material gentico organizado en cromatina,
adems se puede observar el nuclolo que es una organizacin
supramolecular ribonucleoproteica.
Los organismos eucariontes incluyen a los organismos ms conocidos,
agrupados en cuatro reinos: Animalia (animales), Plantae (plantas), Fungi
y Protista.
Las clulas vegetales presentan diferencia en la cubierta esta es muy
marcada y se conoce con el nombre de pared celular vegetal.
Clula Animal
Vegetal

Clula

BACTERIAS:
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Las Bacterias carecen de ncleo diferenciado; presenta un ADN circular
en doble hlice sin protenas asociadas; carecen de microtubulos y
estructuras relacionadas. En los procariotes no hay compactacin de los
cromosomas ni huso mittico. El ADN se duplica y las dos copias se
separan de manera sencilla y precisa por el desarrollo de una membrana
celular entre las dos. La mayor parte de los procariotas corresponde a
organismos asexuados, ya que solo contienen una copia de su nico
cromosoma y carecen de procesos comparables a la meiosis, formacin
de gametos o fecundacin verdadera. Aunque en los procariotas no hay
una reproduccin sexual verdadera, algunos algunos son capaces de
tener conjugacin en la cual un fragmento de DNA se transfiere a otra.
La cubierta de la membrana plasmtica se encuentra muy diferenciada y se
denomina pared celular bacteriana, esta le da rigidez y forma a la bacteria;
su estructura molecular bsica es el peptidoglicano. La pared puede contener
algunos otros componentes, adems del peptidoglicano, como los
lipopolisacridos en las bacterias gram-negativas y los cidos teitoicos en las
bacterias gram-positivas.
Las bacterias comprenden, por una parte, especies de importancia mdica
puesto que producen una serie de infecciones y padecimientos en el hombre y
en los animales pero, por otra parte, una gran mayora representa beneficios
para la agricultura, la industria y la salud humana y animal.
Las bacterias, se clasifican de acuerdo ha como retiene el colorante cristal
violeta, en su pared celular, segn la tcnica diseada por el mdico dans
Hans Christian Gram, es la siguiente:

Gram positivas: Pared celular contiene mureina y cido teitoico.

Ejemplos: Listeria, Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus,
Clostridium.

Gram negativas: La composicin de su pared celular es ms compleja.

Adems del peptidoglucano, contiene una asociacin de protenas lpidos
y lipopolisacridos.
Ejemplos: gonorrea: Neisseria gonorrhoeae, meningitis: Neisseria
meningitidis
y
sntomas
respiratorios
Moraxella
catarrhalis,
enfermedades
respiratorias:
Haemophilus
influenzae,
Klebsiella
pneumoniae , Legionella pneumophila, Pseudomonas aeruginosa,
enfermedades urinarias: Escherichia coli, Proteus mirabilis, Enterobacter
cloacae, Serratia marcescens y enfermedades gastrointestinales
Helicobacter pylori, Salmonella enteritidis, Salmonella typhi.

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CLULAS EPITELIALES:
Las clulas epiteliales son un componente especializado de muchos rganos.
Presentan unas caractersticas estructurales comunes, en especial una
disposicin en capas cohesivas, pero desempean funciones diversas gracias a
sus adaptaciones especializadas, estas capas forman epitelios y funcionan
principalmente como:

Cobertura o revestimiento de las superficies corporales, por ejemplo la

piel, el intestino y diferentes conductos.
Unidades funcionales de las glndulas de secrecin como la saliva y el
hgado.

Diferencias entre Clulas Procariotas y Eucariotas.

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II)

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OBJETIVOS
Reconocer las estructuras celulares de clulas procariticas y eucaritica.
Diferenciar bacterias Gram positivas y Gram negativas
Reconocer el compartimiento nuclear de una clula eucaritica.

III) MATERIALES
Los alumnos deben traer:
1.
4 hisopos largos por mesa de trabajo.
2.
Material indispensable u obligatorio.
3.
Papel toalla.
El laboratorio proporciona:
1.
Microscopios compuestos de campo claro
2.
Lmina de referencia coloreadas.
3.
Colorante azul de metileno.
4.
Aceite de inmersin.
5.
Algodn.
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6.
Fsforos.
7.
Mecheros de alcohol.
8.
Papel lente.
9.
Pinzas de madera.
10. Puentes de coloracin.

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Coloracin Gram:
1.
Solucin de cristal violeta.
2.
Solucin de lugol.
3.
Solucin alcohol-acetona.
4.
Solucin de safranina.
IV) PROCEDIMIENTO
Observacin de clulas procariticas (bacterias): Coloracin Gram.
1.
Tener listo un portaobjeto limpio y desengrasado.
2.
Extraer con el hisopo una muestra de sarro dentario y extenderlo (frotis)
en la parte central del portaobjeto.
3.
Fijar el frotis a la llama del mechero.
4.
Cubrir con Cristal Violeta por 1 min.
5.
Lavar con agua corriente.
6.
Cubrir la preparacin con lugol por 1 min.
7.
Lavar con agua corriente.
8.
Agregar alcohol-acetona hasta que ya no arrastre colorante.
9.
Lavar con agua corriente
10. Agregar el colorante safranina por 30 seg.
11. Lavar con agua corriente.
12.
Secar con ayuda del mechero.
11. Observar al microscopio (al ser una muestra seca no requiere de
cubreobjetos) primero a 10, luego agregar a la lmina 01 gota de aceite
de inmersin y pasar al objetivo de 100.
12. Esquematice sus observaciones realizadas con el objetivo 100.
Observacin de clulas eucariticas (clulas epiteliales) coloracin de
azul de metileno.
1.
Extraer con el hisopo una muestra de raspado bucal (cara interna de las
mejillas) y extenderlo sobre la parte central de un portaobjeto limpio y
desengrasado.
2.
Dejar secar a temperatura ambiente.
3.
Cubrir la lmina con azul de metileno por 10 min.
4.
Enjuagar con agua corriente.
5.
Dejar secar a temperatura ambiente
6.
Observar al microscopio a 10 y luego a 40. Esquematice sus
observaciones con el objetivo de 40.
V) CUESTIONARIO
1.
2.

En que se bas Christian Gram para clasificar las bacterias. Explique.

Defina Cpsula.

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3.
Haga una relacin de 10 bacterias patgenas completando la
siguiente tabla:

Nombre de la
bacteria

3.
4.
5.
6.

Gram positiva
o negativa

Muestra en
la que la Enfermedad que
encontramo causa
s

Por qu no puede observar la estructura y medir el espesor de la

membrana plasmtica en el microscopio compuesto de campo claro.
Por que una bacteria Gram + se tie de azul?
Mencione la clasificacin de clulas epiteliales en base a su forma y su
manera de apilarse.
Mencione las uniones que se encuentran entre las clulas epiteliales.

VI) REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Darnell J., Lodish H & Baltimore D. 1990. Molecular Cell Biology. 2da.
Edicin. Scientific American Books. New York
Stevens A. 2000 Histologia Humana 2da. Edicin Ed. Harcourt Brace. Espaa.
Jan Koolman - 2005 -. Bioqumica: texto y atlas. 3ra. Edicin. Editorial medica
Panamericana. Espaa.

Hoja de resultados

Muestra: ....
Clula que seala el puntero: .
Coloracin: ..
Clasificacin por coloracin:
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Clasificacin por forma: ..

Muestra: .
Clula que seala el puntero: .
Colorante:
Estructura que identifica: ..

---------------------------------------------------------------------------------VB Dra. Carola Chambers

Fecha

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