Scribd Logo
Cargar

¡Te damos la bienvenida a Scribd!

  • 146 vistas

    FIJACIÓN

    Cargado por

    Karla Orozco
    El documento habla sobre la fijación de muestras citológicas. La fijación es importante para preservar la morfología celular y evitar la autolisis. Existen diferentes tipos de fijadores como los alcohólicos, formol y líquido de Bouin. Cada fijador tiene ventajas y desventajas por lo que a menudo se usan mezclas. La fijación debe realizarse de inmediato y seguir reglas como usar suficiente volumen de fijador y renovarlo periódicamente.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como DOCX, PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    FIJACIÓN

    Cargado por

    Karla Orozco
    146 vistas11 páginas
    El documento habla sobre la fijación de muestras citológicas. La fijación es importante para preservar la morfología celular y evitar la autolisis. Existen diferentes tipos de fijadores como los alcohólicos, formol y líquido de Bouin. Cada fijador tiene ventajas y desventajas por lo que a menudo se usan mezclas. La fijación debe realizarse de inmediato y seguir reglas como usar suficiente volumen de fijador y renovarlo periódicamente.

    Descripción original:

    FIJACIÓN

    Derechos de autor

    © © All Rights Reserved

    Formatos disponibles

    DOCX, PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    ¿Le pareció útil este documento?

    ¿Este contenido es inapropiado?

    El documento habla sobre la fijación de muestras citológicas. La fijación es importante para preservar la morfología celular y evitar la autolisis. Existen diferentes tipos de fijadores como los alcohólicos, formol y líquido de Bouin. Cada fijador tiene ventajas y desventajas por lo que a menudo se usan mezclas. La fijación debe realizarse de inmediato y seguir reglas como usar suficiente volumen de fijador y renovarlo periódicamente.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como DOCX, PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como docx, pdf o txt
    146 vistas11 páginas

    FIJACIÓN

    Cargado por

    Karla Orozco
    El documento habla sobre la fijación de muestras citológicas. La fijación es importante para preservar la morfología celular y evitar la autolisis. Existen diferentes tipos de fijadores como los alcohólicos, formol y líquido de Bouin. Cada fijador tiene ventajas y desventajas por lo que a menudo se usan mezclas. La fijación debe realizarse de inmediato y seguir reglas como usar suficiente volumen de fijador y renovarlo periódicamente.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como DOCX, PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como docx, pdf o txt
    Está en la página 1de 11

    FIJACIN.

    Su principal objetivo es conservar el detalle morfolgico de la clulas ene l estado lo


    ms parecido posible a la clula en el tejido vivo. Esto se consigue con fijadores que
    deshidratan las clulas, inactivan los enzimas autolticos, coagulan las protenas y
    penetran en la membrana celular.

    Es un paso indispensable si no queremos una extensin deteriorada u oxidada que no


    tome bien los colorantes y que no permita una correcta lectura cuando se estudia al
    microscopio.

    La fijacin debe realizarse de inmediato a la toma y la extensin del material citolgico


    cuando la preparacin est todava hmeda.

    No existe el fijador perfecto, todos causan contraccin celular y cada uno acta con una
    velocidad diferente.

    REGLAS GENERALES EN EL EMPLEO DEL LIQUIDO FIJADOR:

    Para evitar la autolisis, las piezas deben tallarse lo antes posible y no deben ser muy
    gruesas ya que en este caso el fijador tardara mucho en penetrar en el centro de la pieza
    por lo que es preferible que al tallarlo se hagan cortes con un grosor mximo de 5 mm.
    0.5cm.

    Si se va a fijar un rgano en bloque para preservar la arquitectura del rgano se deben


    realizar incisiones, cortes, sobre su superficie y apertura de sus cavidades internas con el
    fin de que el lquido fijador alcance lo ms rpidamente posible el interior del tejido.
    Para conseguir una buena fijacin de rganos huecos stos deben ser rellenados con
    lquido fijador y atados en sus extremos.

    El volumen del fijador respecto al de la pieza, es un punto muy importante para


    la fijacin, lo ideal es 1-20 como mnimo.
    En la fijacin con lquido que pierden eficacia al utilizarlos hay que ser mucho
    ms cuidadoso. Este es le caso del Formol que debe ser renovado cada cierto
    tiempo en una misma fijacin, ya que pierde eficacia tambin hay que ser
    precavidos en el resto de los fijadores porque generalmente todos los fijadores
    con voltiles, por lo que nunca ser empleado el mismo fijador mas de una vez.
    Para lograr una fijacin correcta el liquido tendr que estar en contacto con todas
    las paredes del tejido, es por eso que no es conveniente meter en un mismo
    frasco varias piezas porque podran pagarse unas a otras y evitar la penetracin
    del fijador.
    Cada fijador tiene un tiempo de fijacin que va a depender de su capacidad de
    penetracin y del tipo de tejido. Si este tiempo de fijacin se prolonga se
    produce en endurecimientos en distintas estructuras del tejido. Solo se permitir
    la permanencia de un tejido: en un fijador, si adems al tener esta propiedad es
    un liquido conservante porque sino se corre el peligro de que bacterias aerobias
    descompongan el tejido.
    Durante la fijacin se producen accidentes que modifican el estado de la pieza,
    los ms importantes son la Hinchazn y la retraccin de los tejidos as como la
    alteracin en el color. Si por ejemplo: el acido actico produce hinchazn debido
    a que deshace los enlaces formando molculas de agua que son absorbidas por la
    pieza. Otros como el acido crmico, alcohol y acetona, realizan el efecto
    contrario porque el fijador absorbe el agua del tejido por eso es importante que
    la presin osmtica del liquido fijador sea equivalente a la del tejido y que la de
    su pH se aproxime al pH fisiolgico salvo que nos interese que su composicin
    sea acida. Este ltimo caso nos interesa para descalcificar.
    Cada fijador tiene caractersticas negativas y positivas por tanto ninguno es el
    mejor y para cada tipo de tejido ser conveniente usas uno u otro. Los fijadores
    puros no suelen usarse porque sern buenos fijadores de algunas estructuras pero
    estropearan otras. Por ello lo que ms se usan sern las mezclas de varios
    fijadores que permiten un campo de trabajo ms amplio.

    TIPOS DE FIJADORES.

    Fijadores alcohlicos: son la mayora de los fijadores usados en citologa, actan


    deshidratando las clulas y coagulando las protenas, su mayor ventaja es que
    son fijadores rpidos y su desventaja es que son voltiles e inflamables.

    Los ms usados son:

    Etanol 96 %: es el fijador de eleccin cuando la tincin posterior es la de Papanicolau.


    Produce resultados muy satisfactorios.

    La extensin se pone en un bao de etanol al 96 % durante 15 - 20 minutos aunque


    puede conservarse indefinidamente siempre que el bao este tapado en el frigorfico.
    Se le puede aadir cido actico al 25 % con lo que se lisan los hemates, por ello en
    las preparaciones en que se sospecha existencia es una buena solucin para evitar la
    dificultad que representara una existencia masiva de hemates recubriendo a los
    elementos celulares motivo de estudio. Esta mezcla no debe realizarse en casos en que
    se desee realizar una valoracin citolgica hormonal ya que se produce una falsa
    eosinoflia que puede llevar a confusin al realizar el recuento para el ndice de
    eosinoflia.

    Metanol al 100 %.

    Propanol e isopropanol al 90 %.

    Mezcla de alcohol - ter a partes iguales: da unos excelentes resultados sobre todo tipo
    de materiales pero en la actualidad est en desuso por las peligrosas caractersticas
    fsico - qumicas del ter que es muy inflamable y voltil.

    Lquido de Carnoy: formado por etlico puro, cloroformo y cido actico.


    Citospray: es un fijador en forma de aerosol. Es un producto comercial que
    contiene una mezcla de alcohol isoproplico y una materia plstica, el
    polietilglicol, protectora de la desecacin.

    Con este spray se pulveriza toda la superficie del porta de forma rpida y sencilla, se
    debe aplicar a 25 - 30 cm. de distancia de la muestra. Se aplica al material citolgico
    inmediatamente despus de su extensin en el porta.

    Es muy usado por su simplicidad y buenos resultados, se recomienda sobre todo cuando
    las extensiones deben ser enviadas a otros laboratorios para su tincin (extensiones
    ginecolgicas, cepillados orofaringeos, esofgicos, bronquiales...). Por el contrario debe
    evitarse su uso en extendidos de materiales lquidos realizados en el propio laboratorio y
    en los hemticos para no provocar agrupamientos de los hemates.

    Antes de teir debe extraerse el citospray mediante pases sucesivos de 5 - 10 minutos


    cada uno por etanol al 96 %.

    Alternativamente y dado que el lquido del aerosol es soluble en agua, al extensin


    puede ser teida inmediatamente despus de rociarla, con lo que se acorta el tiempo
    total del proceso.
    El secado al aire sin fijar se emplea cuando se van a realizar ciertas tinciones como por
    ejemplo la de May Crundwald Giemnsa, con esta tincin no se ve bien la cromatina
    nuclear y se usa en citologas hematolgicas.

    Fijadores

    Para preservar muestras ginecolgicas :

    Alcohol al 95%- ter.

    Alcohol 95% en atomizador o citospray.

    Metanol al 100%

    Propanol 80%

    Isopropanol 80%

    Pre-fijador para muestras de lquidos corporales:

    alcohol 50%.

    Para las PAAF se pueden utilizar:

    Alcohol 95%

    Formalina buferada al 10%

    Secado al aire.

    Solucin de formalina buferada neutral:

    Formalina 37-40%100ml

    Agua 900ml

    Fosfato de sodio

    monobsico . 4 g

    Fosfato de sodio

    bibsico 6.5 g.
    Solucin de Bouin

    Solucin acuosa de

    cido pcrico 1.2 %50ml

    Formol 37-40% 250ml

    Acido actico glacial

    50ml

    Fijador de Carnoy

    -Etanol 95% 60 ml

    -Cloroformo 30 ml

    -Acido actico

    glacial 10 ml

    (en este fijador la muestra no debe permanecer ms de 15 min)

    Vapor de formalina: este fijador hemolisa los glbulo rojos y encoge las clulas

    Fijador cido Pcrico

    -Acido pcrico 1.3 g

    -Alcohol etlico 70% 1000ml

    MTODOS DE FIJACIN
    La fijacin inmediata de los frotis facilita su correcta interpretacin. Las dos formas ms
    comnmente usadas son:

    Lquidos fijadores (alcohol de 95) y en el mercado Carbowax (polietilenglicol)

    Spray
    1. Fijacin hmeda: Sumergir inmediatamente las muestras citolgicas en alcohol
    etlico, o equivalentes, por un tiempo mnimo de 15 minutos, otros autores
    consideran 30 minutos el adecuado previo al proceso de coloracin. Es el
    mtodo ms utilizado y recomendado, por su estabilidad y por no causar
    alteraciones fsicas ni qumicas en las clulas. Si se quiere re-usar el fijador, ste
    debe ser filtrado.
    2. Fijacin hmeda y posterior secado al aire: se colocan las placas en el fijador
    (alcohol etlico al 95% - 96%) y despus de 15 minutos se sacan y se dejan secar
    al aire para transportarlas al laboratorio donde se deben colocar nuevamente en
    el alcohol fijador para el proceso de coloracin.
    3. Atomizador (Cito-spray): contiene polmeros o plsticos solubles en agua, se
    debe utilizar dejando una distancia aproximada de 15 25 cm. entre la lmina y
    el atomizador, esparciendo en forma uniforme el fijador, evitando dejar una
    pelcula gruesa sobre la misma. Posteriormente, dejar secar al medio ambiente
    unos 10 minutos. Este tipo de fijador debe eliminarse totalmente con agua o
    alcohol al 95% antes de efectuar la coloracin, ya que reduce la capacidad de
    tincin de los ncleos
    4. Secado al aire: consiste en dejar secar al aire los extendidos; como consecuencia
    se produce la remocin de agua y oxidacin de las clulas; una vez coloreados
    los extendidos, se observa un aumento del ndice eosinfilo y lisis celular. La
    rehidratacin se realiza sumergindolo en solucin acuosa con glicerina por 3
    minutos seguida por dos lavados con alcohol etlico al 95% y siguiendo la
    coloracin de rutina. No es recomendable utilizar este mtodo.

    Comentarios:

    Un buen fijador, conserva la tensin superficial de las clulas, preserva fielmente


    los componentes celulares penetra al interior de las clulas e incrementa la
    capacidad de tincin, de tal especialmente los detalles cromatnicos. Su accin
    debe ser inmediata y causar mnima alteracin fsica y qumica.
    La fijacin debe ser inmediata con el fin de inactivar enzimas autolticas, evitar
    la oxidacin, alteraciones morfolgicas y cambios en la tincin celular.
    La fijacin como tal, ocurre en los primeros 2 3 minutos, el resto del tiempo
    aumenta la adhesin del material al portaobjeto.
    Las clulas en el proceso de fijacin obtienen la capacidad para teirse una vez
    que se ha realizado la desnaturalizacin y deshidratacin de la porcin gel del
    citoplasma. Por medio de la ruptura de enlaces hidrgeno, salinos y de otros
    tipos, se forma una malla que tiende a englobar los componentes de la clula. En
    el citoplasma fluido hay una mezcla de solucin verdadera y coloidal de sales,
    protenas, carbohidratos, lpidos, cidos orgnicos y enzimas.
    La concentracin de alcohol debe estar entre 80% - 100%; concentraciones
    inferiores producen lisis celular en los extendidos crvico-vaginales.
    Concentraciones menores del 80% se utilizan solamente en muestras de fluidos
    orgnicos con aumento de protenas
    La rehidratacin en solucin acuosa con glicerina puede ser usado en el caso de
    frotis mal fijados por otros mtodos. Las clulas escamosas aparecen
    restauradas, pero las de tipo secretoria frecuentemente sufren dao irreparable.
    Una fijacin prolongada de varios das o semanas, no altera el preparado.
    Procurar que el Spray sea de gotas suaves y parejas. El vehculo del spray puede
    congelar y daar las clulas. Es importante respetar la distancia: muy cerca se
    corre el riesgo de desalojar las clulas del portaobjeto, lejos no tenemos la
    seguridad de la fijacin.
    No hay evidencias de que los fijadores en spray sean dainos, pero tampoco lo
    contrario, de modo que se debe proteger a la paciente y al profesional usando
    campanas o capuchas.
    Secado al aire: produce lisis celular, no hay diferenciacin en la coloracin
    citoplasmtica, y los ncleos toman color plido.

    Fijadores especiales

    Solucin de formalina buferada neutral:

    Formalina 37-40%100ml

    Agua 900ml

    Fosfato de sodio

    monobsico . 4 g

    Fosfato de sodio

    bibsico 6.5 g.

    Solucin de Bouin
    Solucin acuosa de

    cido pcrico 1.2 %50ml

    Formol 37-40% 250ml

    Acido actico glacial

    50ml

    Fijador de Carnoy

    -Etanol 95% 60 ml

    -Cloroformo 30 ml

    -Acido actico

    glacial 10 ml

    (en este fijador la muestra no debe permanecer ms de 15 min)

    Vapor de formalina: este fijador hemolisa los glbulo rojos y encoge las clulas

    Fijador cido Pcrico

    -Acido pcrico 1.3 g

    -Alcohol etlico 70% 1000ml


    ANEXOS

    También podría gustarte