Informe 4. Observacion Microscopica de Bacterias

Microbiologa Industrial
Informe de Laboratorio
Prctica No. 4., 05/10/2016
OBSERVACIN MICROSCOPICA DE BACTERIAS

Alexa Roa, Jhon Armenta, Leidy Cuyares
Programa de Biologia, Departamento de Biologia y Qumica,
Universidad de los Llanos
Vereda Barcelona, Km 12 va a Puerto Lpez, Villavicencio 500017, Meta, Colombia.
gisell.roa@Unillanos.edu.co, jhon.armenta@unillanos.edu.co,
leidy.cuyares@unillanos.edu.co.
Resumen- Para la observacin detallada de bacterias, se observaron microorganismos del gnero, Bacillus
sp, poblacin microbiana de Escherichia coli, y de Klebsiella sp. Para la apreciacin de algunas caractersticas
fsicas y morfolgicas como tincin de Gram y movimiento bacteriano para los Bacillus sp. y la Escherichia coli,
identificacin del, observacin de capsula de la Klebsiella sp., y contraste cromtico de las endosporas para los
Bacillus sp. Se dedujo de la observacin de tincin de Gram que los bacilos presentan coloracin de Gram +
movimiento perimtrico y formacin de endosporas importante, la Escherichia coli presento tincin de Gram -,
movimiento polar definido, la Klebsiella sp. Presenta una capsula que recubre y forja una estructura visible en
tincin negativa.
Palabras Clave: Bacteria, tincin, colores, microscopia, clasificacin
Metodologa lactobacilos con un asa y se coloc

respectivamente en el portaobjetos, la cual se
Movilidad
fij con calor, despus se le coloco papel
Se utilizaron dos bacterias patgenas (E. coli, absorbente y se le adiciono el colorante verde
lactobacilos), para esto se tomaron dos malaquita. Durante 5 minutos se le aplico
portaobjetos a los cuales se les aplico una constantemente colorante y calor, evitando
solucin salina, posteriormente se tomaron que el papel se pegara a la superficie,
las bacterias con un asa extendindolas en el posteriormente se enjuago con agua
lquido del portaobjetos y se colocaron destilada y se procedi al secado, luego de
respectivamente en cada uno de los unos minutos se llev al microscopio en el
portaobjetos, los cuales se fijaron con calor, cual se observ con aceite de inmersin a
se los coloco un cubre objetos y se colocaron 100x
el microscopio a 100x con aceite de
Tincin Negativa
inmersin.
Se coloc tinta china en una esquina del
Tincin de endosporas
portaobjeto y despus una muestra de
Para esta tincin se tom un portaobjetos al Klebsiella encima, con un cubreobjetos se
cual se le aplic una solucin salina, extiende por el resto del portaobjetos para
posteriormente se tom la bacteria distribuir bien la muestra (solo se pas una
vez), se dej secar a temperatura ambiente, en todo el permetro de la clula, adems este
se le adiciono aceite de inmersin y se gnero tambin presenta coloracin de Gram
observ en el microscopio. morada (imagen 1.) y permite afirmar que se
clasifica como bacteria Gram +.
Tincin de Gram
Adicionalmente tambin se pudo evidenciar
Se utilizaron dos bacterias patgenas (E. coli, por contraste cromtico la presencia de
lactobacilos), para esto se tomaron dos endosporas en los individuos de los Bacillus.
portaobjetos a los cuales se les aplico una
solucin salina, posteriormente se tomaron Para la Escherichia coli la coloracin de Gram
las bacterias con un asa extendindolas en el fue rosa violeta brillante (imagen 2.) por su
lquido del portaobjetos (frotis) y se colocaron naturaleza se clasifica en bacteria Gram -,
respectivamente en cada uno de los adicionalmente se not que esta bacteria
portaobjetos, los cuales se fijaron con calor, presenta un movimiento polar definido,
se les adiciono cristal violeta durante 1min el debido a que posee una estructura montrica
cual se le retiro con abundante agua, despus (un solo flagelo alargado en uno de los
se le aadi Lugol y se dej actuar durante 1 extremos).
min y se le retiro con abundante agua,
posteriormente se le adiciono Alcohol Tambin se evidencio por medio de una
durante 20 s y se lav, finalmente se le tincin simple con tinta china, la capsula
adiciono el colorante fucsina durante 20 s y bacteriana de individuos de Klebsiella sp al
se lav la lmina, la cual se dej secar y se le microscopio en 100 x (imagen 3.) Por un
coloco una gota de aceite de inmersin y se contraste evidente que permite ver la
observ en el microscopio 100X. morfologa de la bacteria.
Resultados
Por lo observado en el laboratorio y gracias a

que se contaba con un cultivo bacteriano
bastante puro, se estableci que la movilidad
de las bacterias vistas al microscopio del
genero Bacillus sp. Es de pertrical, es decir
que existencia de un movimiento catico y
aleatorio por la presencia de pils establecidos
2 Tincin de Gram de Bacillus sp. 2 Tincin de Gram de la Escherichia 3 Tincin negativa de Klebsiella sp. Con
coli tinta china
Anlisis debido que se dejo 30 segundo con el
indicador de fucsina y segn la literatura es 1
La determinacin de la movilidad bacteriana
minuto (Rodriguez, 2005).
es uno de los parmetros que se utiliza en la
identificacin de bacterias (Rodrguez Por medio de la tincin de GRAM, elaborada
Cavallini, & et al). La cepa de Bacillus y E. coli por Hans Christian Gram en 1804, se
analizada present movilidad, esta capacidad determin que la cepa de Bacillus sp. es gram
usualmente se debe a la presencia de flagelos positiva y la cepa de E. coli es gram negativa.
(Rodrguez Cavallini, & et al). La movilidad del Estas tien de colores distintos debido a las
Bacillus sp. se observ de manera peritrical diferencias constitutivas en la estructura de
indicando la presencia de flagelos pertricos sus paredes celulares. La pared de la clula
en estas bacterias, y la del E. coli present un gram positiva es gruesa y consiste en varias
movimiento polar definido indicando la capas interconectadas de peptidoglicano as
presencia de un flagelo (estructura como algo de cido teicoico. La pared de la
montrica). clula gram negativa, por otro lado, contiene
una capa mucho ms delagada, unicamente
Las capsulas bacterianas no tienen la misma
de petidoglicano y est rodeada por una
afinidad por los colorantes que otros
membrana exterior compuesta de
componentes celulares, por este motivo se
fosfolipidos, lipopolisacaridos y lipoprotenas
hace uso del mtodo de tincin negativa para
(Universidad Tecnologica Nacional, 2009). El
su observacin. La tinta china consiste en una
iodo del lugol (iodo + ioduro potsico) forma
suspencin helicoidal que no puede penetrar
con el cistal violeta un complejo insoluble en
a travs de la cpsula, sino que precipita
agua, pero soluble en alcohol o acetona. Al
alrededor de ella (Negroni, 2009 ). El gnero
tratar la muestra de Bacillus sp., esta no se
Klebsiella es un bcilo no flagelado, y por lo
decolora porque su pared de peptidoglicano
tanto es inmvil, pero posee una gran cpsula
es gruesa y contiene pocos lpidos que
que los carateriza (Romero, 2007).
dificultan la penetracin del alcohol que
La tincin de esporas permite poner en pudiera extraer el colorante (Macarulla &
manifiesto la endospora bacteriana, una Goi, 1994). Por el contrario la muestra de E.
forma de resistencia producida por algunos coli si se decolora y para observar en
generos de bacterias Gram positivas. Los microscopio se aade fucsina que la va a tenir
bacilos son capaces de producir estas de rojo.
estructuras (Vzquez, Martn, & et al, s.f). Las
Conclusiones
endosporas son muy resistentes a los
procedimientos tintoriales usuales. Para Mediantes tcnicas simples de tincin se
lograr introducir el colorante dentro de la puede observar en un cultivo de bacterias
espora es necesario aplicar calor (Rodrguez simples caractersticas morfolgicas
CavallinI, & et al). El calor modifica la microscpicas en individuos de lactobacilos,
permeabilidad de la endospora permitiendo E. coli y Klebsiella sp.
la entrada del colorante a travs de las capas
externas y el lavado con abundante agua
produce la decoloracion de las formas
vegetativas. Igualmente se observo que no se
podia distinguir correctamente ya que el
rosado que cubria la espora es muy suave
Bibliografa
Macarulla, J. M., & Goi, F. M. (1994).

Bioqumica humana (segunda ed.). Barcelona:
Revert S.A.
Negroni, M. (2009 ). Microbiologa

Estomatolgica: fundamentos y gua prctica
. Buenos Aires: Mdica Panamericana .
Rodrguez Cavallini , E., Gamboa Colorado , M.

d., & et al. (s.f.). Bacteriologa General . Costa
Rica: Editorial Universidad de Costa Rica.
Rodriguez, E. (2005). Bacteriologa General:

Principios Y Prcticas de Laboratorio.
Romero, R. (2007). Microbiologa y

Parasitologa Humana (Tercera ed.). Mxico :
Mdica Panamericana.
Universidad Tecnologica Nacional. (2009).

Tincin y observacin de microorganismos .
Vzquez, C., Martn, A., & et al. (s.f). Tcnicas

bsicas de microbiologa: observacin de
bacterias. Madrid: REDUCA.

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Palabras Clave: Bacteria, tincin, colores, microscopia, clasificacin

Metodologa lactobacilos con un asa y se coloc

Por lo observado en el laboratorio y gracias a

Macarulla, J. M., & Goi, F. M. (1994).

Negroni, M. (2009 ). Microbiologa

Rodrguez Cavallini , E., Gamboa Colorado , M.

Rodriguez, E. (2005). Bacteriologa General:

Romero, R. (2007). Microbiologa y

Universidad Tecnologica Nacional. (2009).

Vzquez, C., Martn, A., & et al. (s.f). Tcnicas

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