Hematología

Comunicación breve

Resistencia osmótica eritrocitaria

en el diagnóstico de anemias hereditarias
en Tucumán, Argentina*
Red cell osmotic resistance in the hereditary anemias
diagnosis in Tucumán, Argentina
Resistência osmótica eritrocitária no diagnóstico de
anemias hereditárias em Tucumán, Argentina
`` Sandra Stella Lazarte1, Mónica Leri de Nofal2, Cecilia Jiménez3,
Ana Cecilia Haro4, Mariana Burgos5, Blanca Issé6

1 Doctora en Bioquímica. Bioquímica Especia- Resumen

lista en Hematología.
2 Las anemias hereditarias más frecuentes en Tucumán (Argentina) son el
Bioquímica. Especialista en Hematología.
rasgo beta talasémico (RBT), las hemoglobinopatías estructurales (HBP) y
UNT.
3 Bioquímica. Especialista en Bioquímica Clíni- la esferocitosis hereditaria (EH). La resistencia osmótica eritrocitaria inme-
ca-Modalidad Residencia. UNT. diata y 24 horas post-incubación constituye el método diagnóstico de la EH,
4 Doctora en Bioquímica. y como tubo único (ROETU) es usada para cribado de RBT. El propósito del
5 Estudiante de la Carrera de Bioquímica. UNT. trabajo fue determinar el comportamiento de ROETU (4,0 y 5,5 g/L de NaCl)
6 Doctora en Bioquímica. Bioquímica Especia- en el diagnóstico de anemias hereditarias. Se estudiaron 125 pacientes: 34
lista en Hematología. normales (GN), 59 con RBT (GRBT), 21 con HBP (GHBP) y 11 con EH (GEH),
que fueron agrupados en niños (≤12 años), mujeres y hombres (>12 años). Se
* Instituto de Bioquímica Aplicada. Facultad de realizaron hemograma (Coulter AcT10 y Sysmex KX-21N), índices de Mentzer
Bioquímica, Química y Farmacia. Universidad y de Shine&Lal, ROETU, hierro, transferrina y saturación de transferrina (Wie-
Nacional de Tucumán. Balcarce 747. San Mi- ner Lab), reticulocitos (azul brillante de cresilo), prueba de falciformación y
guel de Tucumán. CP 4000. electroforesis de hemoglobina a pH alcalino y ácido. GRBT presentó anemia
microcítica hipocrómica, y GEH y GHBP, anemia normocítica normocrómica. El
hierro fue normal. GRBT y GHBP fueron resistentes en ROETU 4,0 g/L, aunque
GRBT mostró mayor resistencia (p<0,05). GEH fue menos resistente que GN
en ROETU 5,5 g/L (p<0,05). ROETU 4,0 y 5,5 g/L serían recomendables en el
diagnóstico presuntivo de RBT y EH, respectivamente.
Palabras clave: resistencia osmótica eritrocitaria * anemias hereditarias * beta
talasemia * esferocitosis hereditaria * hemoglobinopatías estructurales
Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana
Incorporada al Chemical Abstract Service.
Código bibliográfico: ABCLDL.
Summary
ISSN 0325-2957 Beta thalassaemia trait (BTT), structural hemoglobinopathies (SHB) and heredi-
tary spherocytosis (HS) are the most frequent hereditary anaemias in Tucumán
ISSN 1851-6114 en línea (Argentina). Immediately and 24 hours post-incubation red cell osmotic resist-
ISSN 1852-396X (CD-ROM) ance is the diagnosis method of HS, and as a single tube (RORST), it is used for

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BTT screening. The purpose of this study was to determine the RORST (NaCl 4.0 and 5.5 g/L) behaviour
in the diagnosis of hereditary anemia. The study encompassed 125 patients : 34 normal patients (NG),
59 with BTT (BTTG), 21 with SHB (SHBG) and 11 with HS (HSG), who were divided into children
(≤12 years), women and men (> 12 years). Blood count (Coulter AcT10 and Sysmex KX-21N), Mentzer
and Shine&Lal indexes, RORST, iron, transferrin and transferrin saturation (Wiener Lab), reticulocytes
(brilliant cresyl blue), sickling and hemoglobin electrophoresis at alkaline and acid pH were performed.
BTTG showed hypochromic microcytic anemia, and SHBG and HSG, normochromic normocytic anemia.
Iron was normal. BTTG and SHBG were resistant in RORST 4.0 g/L, but BTTG showed more resistance
(p<0.05). SHG was less resistant than NG at RORST 5.5 g/L (p<0.05). RORST at values of 4.0 and 5.5
g/L would be recommended for the presumptive diagnosis of BTT and SH, respectively.
Key words: red cell osmotic resistance * hereditary anemia * beta thalassaemia *hereditary spherocyto-
sis * structural hemoglobinopathies

Resumo
As anemias hereditárias mais comuns em Tucumán (Argentina) são o traço beta talassemia minor
(BTM), as hemoglobinopatias estruturais (HBP) e esferocitose hereditária (EH). A resistência osmó-
tica dos eritrócitos imediata e 24 horas pós-incubação é o método de diagnóstico da EH, e como
um único tubo (ROETU) é usado para a detecção de BTM. O objectivo deste estudo foi determinar
o comportamento de ROETU (4,0 e 5,5 g/L de NaCl) para o diagnóstico de anemias hereditárias.
Foram estudados 125 pacientes: 34 normais (GN), 59 com BTM (GBTM), 21 com HBP (GHBP) e
11 com EH (GEH), que foram reunidos em crianças (≤12 anos), mulheres e homens (>12 anos). Foi
realizado hemograma (Coulter AcT10 e Sysmex KX-21N), índices de Mentzer e Shine&Lal, ROETU,
ferro, transferrina e saturação de transferrina (Wiener Lab), reticulócitos (azul de cresil brilhante),
teste de falcização e eletroforese de hemoglobina em pH alcalino e ácido. GBTM mostrou anemia
microcítica hipocrômica, e GEH e GHBP, anemia normocítica normocrômica. O ferro foi normal.
GRBT e GHBP foram resistentes em ROETU 4,0 g/L, mas GBTM mostrou maior resistência
(p<0,05). GEH foi menos resistente que GN em ROETU 5,5 g/L (p<0,05). ROETU 4,0 e 5,5 g/L
seria recomendado para o diagnóstico presuntivo da BTM e EH, respectivamente.
Palavras-chave: resistência osmótica dos eritrócitos * anemias hereditárias * beta talassemia * esfero-
citose hereditária * hemoglobinopatias estruturais

Introducción Los defectos en estas interacciones provocan la pérdida

de área de superficie y la forma esférica del eritrocito,
con una particular pérdida de la estabilidad mecánica y
La prueba de resistencia osmótica eritrocitaria (ROE) elasticidad de la membrana. La herencia de la EH es au-
proporciona una indicación de la razón volumen/su- tosómica dominante en la mayoría de los casos (75%)
perficie de los eritrocitos y refleja su capacidad para in- (4). Los esferocitos presentan una relación volumen/
corporar una cierta cantidad de agua antes de lisarse. superficie aumentada, por lo que incorporan menos
La habilidad de los glóbulos rojos normales para resis- agua que los glóbulos rojos normales en una solución
tir la hipotonicidad proviene de su forma bicóncava, lo hipotónica antes de romperse (1).
cual permite que la célula aumente su volumen hasta La β-talasemia constituye un grupo de desórdenes
un 70% antes de que la membrana se estire; una vez sanguíneos hereditarios, caracterizados por anoma-
superado este límite ocurre la lisis (1). La prueba de lías en la síntesis de las cadenas beta de la hemoglobi-
ROE ha sido ampliamente usada en el diagnóstico de na (Hb), lo que resulta en fenotipos variados que van
esferocitosis hereditaria (EH) (2) y en su modalidad desde una anemia severa hasta individuos clínicamente
tubo único (ROETU) como prueba de cribado para ta- asintomáticos. Se han descripto tres formas principales:
lasemia (3). talasemia mayor, talasemia intermedia y talasemia me-
La EH es una anemia hereditaria común en el norte nor o rasgo beta talasémico (RBT). La β-talasemia es
de Europa, caracterizada por la presencia de eritroci- causada por mutaciones puntuales o, más raramente,
tos esféricos. El defecto molecular primario reside en por deleciones en el gen de la globina beta situado en
la membrana del glóbulo rojo, particularmente en las el cromosoma 11, llevando a una síntesis reducida o au-
proteínas involucradas en las interacciones verticales sente de las cadenas beta de la Hb. La transmisión es
entre el esqueleto de la membrana y la bicapa lipídica. usualmente autosómica recesiva. El RBT es clínicamen-

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 Anemias hereditarias y resistencia osmótica 647

te asintomático, pero algunos sujetos podrían presentar POBLACIÓN, MUESTRA Y CRITERIOS DIAGNÓSTICOS
una anemia moderada (5). En la talasemia los glóbu- Se estudiaron 91 pacientes que asistieron al Institu-
los rojos microcíticos hipocrómicos son inusualmente to de Bioquímica Aplicada para diagnóstico etiológico
resistentes a la lisis osmótica, debido a que presentan de anemia, y 34 sujetos normales, en el período com-
una razón volumen/superficie disminuida (1). Se han prendido entre noviembre de 2007 y junio de 2011. Se
propuesto varias fórmulas basadas en el recuento san- obtuvo un consentimiento informado para el uso de los
guíneo para diferenciar la β-talasemia heterocigota de resultados obtenidos, donde se garantizó el anonimato
la anemia ferropénica (AF) (6)(7). Dichos índices de y confidencialidad. En el caso de los niños el consenti-
discriminación son calculados a partir del recuento de miento fue firmado por el padre o la madre.
glóbulos rojos (RGR) y de los índices hematimétricos, De cada individuo se obtuvo una muestra de sangre.
volumen corpuscular medio (VCM) y hemoglobina cor- La muestra fue recolectada en EDTA tripotásico para la
puscular media (HCM). Se ha demostrado que los índi- realización del hemograma, en heparina para la realiza-
ces de Shine&Lal y de Mentzer son los más eficientes en ción de la prueba de resistencia osmótica eritrocitaria
el diagnóstico diferencial de RBT y AF en Tucumán (8). (ROE) y otra alícuota sin anticoagulante para las deter-
Las hemoglobinopatías estructurales (HBP) cons- minaciones bioquímicas en suero.
tituyen un grupo heterogéneo de desórdenes rece- La EH se diagnosticó mediante la observación de
sivos, caracterizados por la síntesis de una cadena esferocitos en el frotis sanguíneo y el aumento de fra-
de globina estructuralmente anormal. Las variantes gilidad de los glóbulos rojos en la prueba de resisten-
estructurales de Hb se basan típicamente en una mu- cia osmótica eritrocitaria inmediata y post-incubación
tación puntual en el gen de globina, que produce la durante 24 horas a 37 ºC. El diagnóstico de β-talasemia
sustitución de un aminoácido en una de las cadenas menor incluyó la presencia de microcitosis e hipocro-
de globina. Aunque la mayoría son de un significa- mía, y un aumento ≥ 4% de la fracción de hemoglobina
do clínico limitado, unos pocos subtipos importantes A2 (HbA2) en la corrida electroforética de hemoglobi-
han sido identificados con cierta frecuencia. Las he- na. El diagnóstico de hemoglobinopatías se realizó a
moglobinopatías S o C homocigotas producen mani- través del reconocimiento de bandas de hemoglobina
festaciones clínicas significativas, mientras que la D y con movilidad anormal en la electroforesis a pH alcali-
E homocigotas podrían ser ligeramente sintomáticas no, prueba de falciformación ante la sospecha de Hb S,
(6). La Hb S tiene poca solubilidad en su estado des- y electroforesis a pH ácido para identificar las hemoglo-
oxigenado y puede polimerizar dentro del eritrocito. binas anormales.
El glóbulo rojo muestra un cambio de forma caracte- Una vez diagnosticados, los individuos se dividieron
rístico debido a la formación del polímero y se vuelve en 4 grupos: grupo con rasgo β-talasémico (GRBT),
rígido transformándose en drepanocito. Además se grupo con hemoglobinopatía (GHBP), grupo con es-
producen cambios en la membrana y generación de ferocitosis hereditaria (GEH) y grupo normal (GN), los
sustancias oxidantes. La Hb C es una molécula con que a su vez fueron clasificados según la edad en muje-
una carga altamente positiva, solubilidad disminuida res y hombres (> 12 años) y niños (≤ 12 años).
y tendencia a cristalizar. En un extendido de sangre
periférica de hemoglobinopatía C se observan células ESTUDIOS HEMATOLÓGICOS
en diana y células contraídas irregularmente (9).
En trabajos previos se ha demostrado que la β-talasemia Hemograma e índices hematimétricos: Se realizó en
menor, las hemoglobinopatías S y C y la EH son las ane- contador hematológico marca Coulter AcT10 (Miami,
mias hereditarias más frecuentes en Tucumán (10). Estados Unidos) en el período 2007-2008 y en Sysmex
Aunque los estados heterocigotos de las variantes de Hb KX-21N (Kobe, Japón) durante el período 2009-2011.
son típicamente asintomáticos, el diagnóstico es impor- Para determinar la presencia de anemia se recurrió
tante para el consejo genético, debido a la gravedad de a los niveles de Hb. Se consideró anemia en mujeres
los estados homocigotos. En el presente estudio se eva- cuando la Hb fue menor de 120 g/L; en hombres si la
luó el uso de la prueba de ROE tubo único (ROETU) Hb era menor de 130 g/L; y en niños niveles inferiores
como método de cribado para la detección de dichas a 110 g/L. Los índices hematimétricos volumen corpus-
anemias hereditarias. cular medio (VCM) y hemoglobina corpuscular media
(HCM) se utilizaron en la tipificación morfológica de la
anemia. Con ellos la anemia se clasificó en microcítica
Materiales y Métodos (VCM<80 fL), normocítica (VCM 80-95 fL) o macro-
cítica (VCM>95 fL), de acuerdo al volumen; y en nor-
DISEÑO
mocrómica (HCM=27-32 pg) o hipocrómica (HCM<27
pg), de acuerdo al contenido de Hb.
Se realizó un estudio observacional descriptivo, de Índices eritrocitarios de discriminación: Con los resulta-
corte transversal. dos de VCM, HCM y recuento de glóbulos rojos (RGR)

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se calcularon los índices de Mentzer (IM=VCM/RGR) y Se realizó la curva en forma paralela con un control
de Shine&Lal(S&L=VCM2xHCMx0,01) (6). El valor dis- normal.
criminante fue un resultado igual o menor de 13 para el También se realizó la ROE tubo único inmediata
IM, y menor o igual a 1530 para el de S&L (8). y post incubación a 37 ºC durante 24 h usando una
Recuento de reticulocitos e índice de producción reti- concentración de NaCl de 5,5 g/L en buffer fosfato
culocitaria (IPR): Se efectuó mediante método manual (ROETUi-5,5 y ROETU24-5,5) de manera similar al an-
con azul brillante de cresilo. El resultado se corrigió de terior. En las pruebas de ROETUi y ROETU24 con 5,5
acuerdo al hematocrito del paciente, y el IPR se calcu- g/L de NaCl se usó como valor de corte un porcentaje
ló como: reticulocitos corregidos/2. Un IPR>2 indicó de hemólisis menor al 5 y 50%, respectivamente.
anemia regenerativa, mientras que un IPR≤2, anemia En los pacientes en los que se demostró la presencia
arregenerativa. de una hemoglobina con movilidad anormal en la elec-
Ferremia (Fe) y Capacidad Total de Unión de Hierro a troforesis a pH alcalino se realizó electroforesis a pH
Transferrina (CTUT): Se usó un equipo de Wiener Lab. ácido con un equipo comercial (SEBIA). Se siguieron
Los valores de referencia (VR) de Fe son de 50-170 μg/ las instrucciones del fabricante para su uso. Se corrie-
dL en la mujer, y de 65-175 μg/dL en el hombre. El VR ron en forma paralela un control normal, un control
de CTUT es de 250-400 μg/dL. con HbS y un control con hemoglobina C (HbC).
Saturación de transferrina: Es el resultado del cociente Para la prueba de falciformación, la sangre recién
entre ferremia y CTUT, multiplicado por 100. El VR es extraída con anticoagulante EDTA, se mezcló en par-
de 20-50%. tes iguales con una solución de reciente preparación de
Electroforesis de Hemoglobina: La corrida se realizó en metabisulfito de sodio al 2% en H2O destilada. Se agre-
tiras de acetato de celulosa, en una cuba de electrofo- gó un aceite mineral para evitar el contacto de la sangre
resis con fuente de poder (CHEMAR, Buenos Aires, Ar- con el aire, y se tapó el tubo. Se incubó a 37 ºC durante
gentina). Se usó el buffer tris-EDTA-bórico pH 8,5. 1 hora, y luego se realizó la observación en fresco de la
ROE tubo único inmediato (ROETUi): Se realizó con una sangre tratada, en búsqueda de drepanocitos.
solución salina hipotónica de 4,0 g/L de NaCl en buffer
fosfato. A 5 mL de esta solución se agregaron 50 μL de
sangre heparinizada del paciente. Además, se agregaron ANÁLISIS ESTADÍSTICO
50 μL de dicha sangre a 2 tubos más: uno con 5 mL de
Para el estudio estadístico de los datos se usó el pro-
solución salina de 9,0 g/L de NaCl en buffer fosfato (0%
grama Statistical Package for Social Sciences (SPSS) 9.0.
hemólisis), y otro con 5 mL de agua destilada (100% de
Los resultados fueron expresados como la media ± des-
hemólisis). Luego de mezclar, los tubos se incubaron
viación estándar, luego de ser sometidos a la prueba de
durante 30 minutos a temperatura ambiente, se centri-
Normalidad de Kolmogorov-Smirnov. Para las compara-
fugaron, y los sobrenadantes se leyeron a 540 nm en
ciones se usó el t-Test de Student. El nivel de significación
espectrofotómetro (Metrolab 1600 plus, Buenos Aires,
fue de 0,05.
Argentina), usando como blanco el tubo 0% de hemó-
lisis (9,0 g/L de NaCl). El porcentaje de hemólisis se
calculó con la siguiente fórmula:
DO tubo 4g/L x 100 Resultados
% hemólisis tubo 4g/L de NaCl = --------------------------------------------------
DO tubo 100% hemólisis El grupo GN estuvo integrado por 11 niños, con un
rango de edad de 1 a 12 años, y 23 adultos con edades
ROE tubo único post incubación a 37 ºC durante 24 h comprendidas entre 14 y 64 años. En las tablas I, II, y
(ROETU24): La muestra de sangre heparinizada se incu- III se pueden observar los resultados de los parámetros
bó a 37 ºC durante 24 h. Luego se empleó la misma téc- hematológicos estudiados en los distintos grupos de pa-
nica de ROETUi. Las pruebas de ROETUi y ROETU24 cientes.
(4,0 g/L de NaCl) se consideraron normales con por- El grupo GEH comprendió 8 niños de 1 a 11 años y 3
centajes de hemólisis superiores al 50 y 85%, respecti- pacientes de 13, 15 y 31 años. Dicho grupo presentó ane-
vamente (1). mia normocítica normocrómica, tanto en niños como
En los pacientes con sospecha de EH se efectuó la en adultos, y aumento del IPR (p<0,05) con respecto
prueba de ROE completa inmediata (ROEi) y ROE al GN, reafirmando la característica regenerativa de la
post-incubación a 37 ºC durante 24 h (ROE24) me- misma. La ROETUi 4,0 g/L mostró glóbulos rojos más
diante la técnica descripta por Roper y Layton (1). Los frágiles que los normales, aunque sólo se pudo compa-
resultados se graficaron con Microsoft Excell. Por ex- rar el grupo infantil con el normal, encontrándose dife-
trapolación de la curva se obtuvo la concentración de rencia significativa entre ambos (p<0,05). La ROETU24
NaCl correspondiente al 50% de hemólisis. El VR para 4,0 g/L no mostró diferencias con el grupo GN. El exa-
ROEi es de 4,0-4,5 g/L, y para ROE24 es de 4,6-5,9 g/L. men de la hemólisis 50% inmediata y pos-incubación

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Tabla I. Parámetros hematológicos evaluados en los grupos de mujeres mayores de 12 años

PARÁMETROS GRBT GHPB GEH‡ GN

GRUPO (n=30) (n=8) (n=1) (n=18)
EDAD [años] 40±20 34±20 15 34±11
RGR [x1012/L] 5,35±0,56* 4,41±1,33 3,70 4,41±0,30
RGB [x109/L] 8,2±2,7 8,7±2,7 18,7 7,2±1,4
HEMOGLOBINA [g/L] 106±11* 116±25* 107 130±8
HEMATOCRITO [L/L] 0,35±0,04* 0,36±0,08 0,31 0,40±0,02
VCM [fL] 64,7±3,3* 83,5±7,8* 84,5 90,3±5,0
HCM [pg] 19,8±1,3* 27,0±3,6 28,9 29,6±1,8
CHCM [g/L] 307±13* 323±20 342 328±11
ÍNDICE DE MENTZER 12,3±1,7* 21,3±9,6 22,8 20,6±2,4
ÍNDICE DE SHINE & LAL 837±128* 1931±528* 2064 2438±382
RP [x109/L] 283±62 232±42 338 258±46
HIERRO [μg/dL] 86±28 91±55 62 94±22
TRANSFERRINA [μg/dL] 283±51 300±55 252 311±47
SATURACIÓN [%] 30±8 31±20 25 31±8
IPR 0,8±0,5 0,7±0,4 3,4 0,6±0,4
ROETUI [%] 26,3±15,8* 47,9±24,9*† 100 74,9±11,5
ROETU24 [%] 48,0±24,0* 66,4±26,2*† 100 93,5±5,6

RGR: Recuento de glóbulos rojos; RGB: Recuento de glóbulos blancos; VCM: Volumen corpuscular medio; HCM: Hemoglobina
corpuscular media; CHCM: Concentración de hemoglobina corpuscular media; RP: Recuento de plaquetas; IPR: Índice de producción
reticulocitaria.
*p<0,05 con respecto al grupo GN
‡ No se efectuaron comparaciones por escaso número de pacientes
† p<0,05 con respecto al grupo GRBT

Tabla II. Parámetros hematológicos evaluados en los grupos de hombres mayores de 12 años

PARÁMETROS GRBT GHPB GEH‡ GN

GRUPO† (n=15) (n=5) (n=2) (n=5)
EDAD [años] 33±12 34±14 22±13 45±19
RGR [x1012/L] 6,36±0,42* 5,23±0,18 3,81±0,26 5,13±0,10
RGB [x109/L] 8,5±2,5 9,0±2,2 9,6±5,8 6,8±1,4
HEMOGLOBINA [g/L] 125±10* 143±5* 118±23 155±7
HEMATOCRITO [L/L] 0,41±0,02* 0,44±0,01* 0,32±0,05 0,46±0,02
VCM [fL] 64,1±4,6* 84,4±3,5* 84,2±6,3 90,0±2,9
HCM [pg] 19,8±2,0* 27,4±0,9* 30,7±4,0 30,2±1,3
CHCM [g/L] 308±15* 325±7* 364±21 336±6
ÍNDICE DE MENTZER 10,1±1,3* 16,1±1,2 22,1±0,1 17,6±0,7
ÍNDICE DE SHINE & LAL 826±224* 1953±223* 2206±607 2454±253
RP [x109/L] 279±91 248±33 241±24 189±46
HIERRO [μg/dL] 100±50 91±31 137±91 108±22
TRANSFERRINA [μg/dL] 276±44 314±114 254±81 308±60
SATURACIÓN [%] 35±14 33±7 51±19 36±9
IPR 0,7±0,4 0,7±0,2 8,0±6,4 0,7±0,4
ROETUI [%] 35,7±24,6* 44,6±34,5 97,0±2,8 68,0±21,7
ROETU24 [%] 49,5±26,5* 82,0±15,6 97,0±4,2 95,2±3,2

*p<0,05 con respecto al grupo GN

† Referirse a la Tabla I para explicación de las abreviaturas
‡ No se efectuaron comparaciones por escaso número de pacientes

Acta Bioquím Clín Latinoam 2012; 46 (4): 645-53

650 Lazarte SS et al.

Tabla III. Parámetros hematológicos evaluados en los grupos infantiles

PARÁMETROS GRBT GHPB GEH GN

GRUPO† (n=14) (n=8) (n=8) (n=11)
EDAD [años] 7±4 5±3 6±3 5±3
RGR [x1012/L] 5,63±0,50* 4,42±1,00 3,46±0,42* 4,59±0,13
RGB [x109/L] 10,0±3,8 11,2±3,5 11,2±4,6 9,6±2,6
HEMOGLOBINA [g/L] 107±10* 110±19 93±12* 120±6
HEMATOCRITO [L/L] 0,35±0,02 0,35±0,07 0,27±0,03* 0,36±0,02
VCM [fL] 61,8±6,3* 79,9±7,3 78,9±5,7 79,3±2,1
HCM [pg] 19,1±2,5* 25,2±3,5 27,0±2,2 26,2±1,2
CHCM [g/L] 308±14* 315±18* 343±13 331±13
ÍNDICE DE MENTZER 11,1±2,1* 19,4±6,7 23,2±4,1* 17,3±0,4
ÍNDICE DE SHINE & LAL 757±293* 1670±566 1705±362 1651±145
RP [x109/L] 358±75 330±88 343±97 343±117
HIERRO [μg/dL] 77±42 73±19 77±19 78±9
TRANSFERRINA [μg/dL] 279±55 277±62 239±42 276±33
SATURACIÓN [%] 27±13 28±10 33±9 28±3
IPR 0,8±0,6 2,9±3,8 5,2±1,6* 0,5±0,2
ROETUI [%] 18,8±17,2* 34,2±24,5* 90,2±4,7* 62.3±22,1
ROETU24 [%] 43,1±26,2* 75,4±16,2 85,6±5,7 88,8±10,7

*p<0,05 con respecto al grupo GN

† Referirse a la Tabla I para explicación de las abreviaturas

demostró que el grupo GEH presentaba una resistencia vas con respecto a GN, y permitieron diagnosticar el 80 y
disminuida con respecto al GN (Fig. 1) (Tabla IV). La el 98% de los casos de RBT, respectivamente.
prueba ROETU-5,5 inmediata y pos-incubación indicó El grupo GHBP estuvo compuesto por 11 pacien-
un porcentaje de hemólisis mayor que el GN (p<0,05). tes con hemoglobinopatía S heterocigota (rasgo falci-
De acuerdo a los valores de corte propuestos, esta última forme), 2 con hemoglobinopatía S homocigota, 7 con
prueba permitió detectar la presencia de EH en el 82% hemoglobinopatía C heterocigota y 1 con hemoglobi-
(8 individuos) y 100% de los pacientes en su modalidad nopatía S-C. Dicho grupo consistió en 8 niños de 1 a 9
inmediata y post-incubación, respectivamente. El análisis años y 13 mayores de 12 años, con edades entre 14 y 74
morfológico de los eritrocitos en extendidos sanguíneos años. Al momento del diagnóstico sólo el 33% (7 casos)
reveló la presencia de esferocitos en el 100% del GEH. presentaba anemia. Ninguno de los hombres adultos
En el grupo GRBT se observó anemia microcítica hi- tuvo niveles de Hb por debajo del valor de referencia.
pocrómica en el 100% de los casos y no dependió de la Con respecto a la ROETU 4,0 g/L inmediata y posin-
edad ni del sexo. Dicho grupo estuvo integrado por 14 cubación, se encontraron glóbulos rojos resistentes a la
individuos de 1 a 12 años y 42 con edades comprendi- hemólisis (Tablas I y III), en especial en el grupo feme-
das entre 17 y 82 años. Tanto la ROETUi y la ROETU24 nino mayor de 12 años.
4,0 g/L demostraron que los glóbulos rojos talasémicos Si bien los grupos GRBT y GHBP fueron resistentes a
fueron resistentes a concentraciones bajas de NaCl. El bajas concentraciones de NaCl, el estudio comparativo
90 y 91% de los individuos con RBT presentaron un por- entre ambos arrojó diferencias significativas (p<0,05) y
centaje de hemólisis menor al 50 y 85% en la ROETUi y demostró que los pacientes con rasgo beta talasémico
ROETU24 4,0 g/L de NaCl, respectivamente. Asimismo, son más resistentes en las pruebas ROETUi y ROETU24
los índices IM y S&L presentaron diferencias significati- (Fig. 2).

Tabla IV. Resultados de la prueba de ROE completa y ROETU 5,5 g/L de NaCl en los grupos GEH y GN

Prueba GEH GN
ROEI Hemólisis 50% 5,3±0,7 g/L* 4,2±0,2 g/L
ROEPI Hemólisis 50% 6,8±0,6 g/L* 5,2±0,3 g/L
ROETU 5,5 g/L NaCl 31,2±32,9%* 0,6±0,8%
ROETUPI 5,5 g/L NaCl 76,2±13,0%* 25,3±17,7%

*p<0,05 con respecto al grupo GN

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ROEI50: Hemólisis 50% inmediata; ROEPI50: Hemólisis 50% ROEITU: ROE inmediata tubo único; ROETU24: ROE tubo único
postincubación 24 horas postincubación

Figura 1. Hemólisis 50% inmediata y post incubación en los grupos Figura 2. Prueba de ROETU y ROETU24 en los grupos estudiados
GEH y GN

Discusión y Conclusiones cia osmótica de un solo tubo sirve para la orientación

diagnóstica de las β-talasemias y de algunas hemoglobi-
nopatías en aquellos países donde hay una incidencia
El diagnóstico de las anemias hereditarias se basa en elevada de estas anomalías (12-14).
la combinación de la historia clínica y familiar, el exa- Con la excepción del trasplante de médula ósea,
men físico y datos de laboratorio (hemograma, índices que sólo está disponible para un número limitado de
hematimétricos, morfología, recuento de reticulocitos pacientes con un donante familiar o voluntario compa-
y otros). La medición de la resistencia osmótica eritroci- tible, no existe una cura definitiva para cualquiera de
taria da una información valiosa sobre la normalidad de los trastornos genéticos de la hemoglobina. Mucho tra-
los hematíes del paciente, ya que un resultado anormal bajo está dirigido a un tratamiento genético correctivo,
indica invariablemente la presencia de una patología. pero pasará un tiempo considerable hasta que llegue
Tradicionalmente ha sido usada en el diagnóstico de a la práctica clínica (15). Así pues, se deberían tratar
EH (2)(11). Además, una simple prueba de resisten- de desarrollar programas de control y un enfoque más

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652 Lazarte SS et al.

económico para el diagnóstico y manejo de los casos. entre ellos. Tampoco se encontró un VCM menor en el
Para la detección de la β-talasemia se puede usar un GEH, pero la observación de esferocitos en el frotis de
método, como la ROETU, que además de sensible, es sangre periférica fue un hecho constante en todos los
barato (16). El presente trabajo permitió revelar alre- pacientes con EH. La variación del VCM en la EH de-
dedor del 90% de los casos de RBT. También se probó pende del grado de reticulocitosis, del nivel de hierro
que tiene valor en la detección de hemoglobinopatías S en sangre y del compromiso megaloblástico, entre otras
y C, ya que se observaron glóbulos resistentes al medio causas (22). En el grupo GEH todos los sujetos presen-
hipotónico en estas patologías. Otros autores también taron un IPR>3, lo que probablemente determinó el
han demostrado que la prueba de ROETU es bastan- hallazgo de un VCM normal.
te eficaz en el cribado de RBT (17). Sin embargo, la El diagnóstico de talasemias, esferocitosis heredita-
prueba es de uso limitado en poblaciones con una alta ria y hemoglobinopatías no es fácil en los laboratorios
prevalencia de anemia por deficiencia de hierro (18), de bajos recursos, los cuales son frecuentes en países
ya que al presentar eritrocitos microcíticos e hipocró- con problemas socioeconómicos como la Argentina. La
micos puede dar resultados falsos positivos. En estu- implementación de la prueba de ROETU sería ventajo-
dios anteriores ROETUi y ROETU24 demostraron ser sa, ya que es sumamente económica, y suficientemen-
métodos altamente sensibles y poco específicos (19), te sensible y específica para ser usada en el cribado de
pero con un valor predictivo negativo del 92 y 100%, anemias hereditarias en regiones con recursos técnicos
respectivamente, para el diagnóstico diferencial entre y financieros limitados. De manera ideal, un contador
RBT y anemia ferropénica (9). En las talasemias mayor hematológico cuidadosamente estandarizado, debería
y menor, la resistencia osmótica está frecuentemente orientar el diagnóstico de estas patologías. Pero cuando
muy aumentada tras la incubación, debido a una nota- el medio no lo permite, la ROETU podría ser útil en la
ble pérdida de potasio (1). evaluación de muestras sospechosas, lo que reduciría el
Debido a que tanto en el grupo GRBT como en el número de pacientes que deben ser derivados a centros
GHBP los glóbulos rojos fueron resistentes, fue indis- de mayor complejidad.
pensable contar con otros métodos de laboratorio que
ayudaran a realizar un rápido diagnóstico diferencial.
CORRESPONDENCIA
Así los índices hematimétricos VCM y HCM, como el
cálculo de los índices de Mentzer y de Shine&Lal, fue- DRA. SANDRA LAZARTE.
ron útiles para distinguir ambas patologías. Estos últi- Laprida 653, 7º D.
mos se han recomendado para distinguir el RBT de la 4000 SAN MIGUEL DE TUCUMÁN, Tucumán, Argentina
Tel.: 0381-4310994.
anemia ferropénica (18)(20).
E-mail: slazarte@fbqf.unt.edu.ar
El GEH fue el único frágil en la prueba de ROETU
inmediata, mientras que tras la incubación no presentó
diferencia significativa con el GN. En cambio, el análi-
sis de los resultados con la ROETU-5,5 mostró que la Referencias bibliográficas
misma es útil para sustentar un probable diagnóstico de
EH, cuando no se puede realizar la prueba completa. 1. Roper D, Layton M. Investigation of the hereditary
Similarmente, en un estudio llevado a cabo por Strei- haemolytic a�����������������������������������
naemias: membrane and enzyme abnor-
chtman y Gescheidt, ROETUi-5,5 y ROETU24-5,5 per- malities. En: Lewis SM, Bain BJ, Bates I. Dacie and
mitieron reconocer 16 de 24 y 17 de 22 pacientes con Lewis Practical Haematology. Tenth Ed, Philadelphia:
EH, respectivamente (21). Churchill Livingstone Elsevier; 2006. p. 205-37.
2. Iolascon A, Avvisati R. Genotype/phenotype correlation
La presencia de una anemia microcítica hipocró-
in hereditary spherocytosis. Haematologica 2008; 93
mica fue un hallazgo característico del RBT, lo que es
(9): 1283-8.
reconocido por diversos autores (5), mientras que las
3. Chow J, Phelan L, Bain B. Evaluation of single-tube os-
HBP y la EH se presentaron como anemias normocí-
motic fragility as a screening test for thalassaemia. Am
ticas normocrómicas, aunque el GHBP tuvo diferen- J Hematol 2005; 79: 198-201.
cias significativas en el VCM con respecto al grupo GN 4. Boguslawska DM, Heger E, Sikorski AF. Molecular me-
(p<0,05). La EH se ha descripto como una patología canism of hereditary spherocytosis. Pol Merkur Lekalski
donde se encuentra disminuida la Hb y el VCM, mien- 2006; 20 (115): 112-6.
tras que están aumentadas la concentración de Hb cor- 5. Galanello R, Origa R. Beta-thalassemia. Orphanet J
puscular media (CHCM) y la amplitud de distribución Rare Dis 2010; 21: 5-11.
eritrocitaria (ADE) (10). Otros autores consideran que 6. Clarke GN, Higgins TN. Laboratory investigation of he-
el VCM y HCM pueden estar dentro del rango normal, moglobinopathies and thalassemias: review and update.
pero con un ADE usualmente aumentado (2). Si bien Clin Chem 2000; 46 (8 Pt 2): 1284-90.
se observó que la media de la CHCM en el GEH era 7. Okan B, Cigiloglu A, Cifci S, Yilmaz M, Pehlivan M.
mayor que en el GN, no hubo diferencias significativas Red cell indices and functions differentiating with the

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