PRÁCTICA

ESTUDIO DE PROTOZOOS. GEERALIDADES

I.- Teoría

Definición: Los protozoos son seres vivos unicelulares, desprovistos de clorofila y

heterótrofos. Se multiplican por mitosis y algunos tienen también reproducción sexual. Al
menos en un estadio de su ciclo biológico son móviles, utilizando distintos sistemas de
locomoción.

Caracteres morfológicos y estructurales

Tamaño: Los protozoos son generalmente microscópicos (desde unas micras a

varios cientos).

Estructura:

En los protozoos se distingue una forma activa que se conoce en la mayoría de

ellos con el nombre de forma vegetativa o trofozoito. En muchos casos, el trofozoito
tiene la capacidad de transformarse en una forma de resistencia, conocida como quiste.

El componente fundamental del cuerpo del protozoo es el protoplasma, el cual

está diferenciado en núcleo y citoplasma.

a)
úcleo: los núcleos de los protozoos tienen formas, tamaños y estructuras

variadas. La mayoría de los protozoos contienen un solo núcleo, pero hay
muchos que tienen dos o más núcleos. El núcleo aparece como una vesícula
constituida por una membrana perfectamente definida que envuelve el
nucleoplasma en el que se encuentran el o los nucleolos (=cariosomas,
=endosomas) y la cromatina nuclear. Estructuralmente, los núcleos pueden
clasificarse en dos tipos principales: vesicular (en el que casi siempre se
pueden observar uno o varios cariosomas que destacan sobre el resto del
material cromatínico) y compacto (en el que el material cromático aparece de

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 un tamaño uniforme, llenando casi todo el núcleo, por lo que éste toma un
aspecto denso y compacto).

b) Citoplasma: La parte extranuclear del cuerpo del protozoo es el citoplasma.

Está compuesto de un sistema coloidal que a menudo está formado por una
parte periférica, densa, denominada ectoplasma, y otra parte medular fluida
llamada endoplasma. En el citoplasma se encuentran distintos orgánulos
como mitocondrias, aparato de Golgi, vacuolas (pulsátiles o digestivas),
retículo endoplasmático, etc. que participan en las distintas funciones
inherentes a la vida del protozoo. La superficie del cuerpo esta cubierta por
una membrana cuya estructura se corresponde, en principio, con la membrana
unidad de cualquier célula. Este sería el caso de la plasma-membrana o
plasmalema de muchos protozoos (amebas y algunos flagelados). En otros
protozoos, como en los ciliados, la membrana limitante del cuerpo presenta
una estructura mas complicada y recibe el nombre de película.

Fisiología

En los seres unicelulares existen ciertas partes de la célula especializadas en

llevar a cabo funciones vitales como alimentación, respiración, reproducción y
locomoción.

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 La alimentación se realiza mediante diferentes mecanismos. El mas simple se
denomina osmotrofia y consiste en la incorporación de sustancias orgánicas disueltas en
el medio donde viven, a través de su membrana. Otro procedimiento es la fagocitosis, que
consiste en la incorporación de partículas sólidas de tamaño considerable. Por último,
algunos protozoos se alimentan por pinocitosis, que es un proceso similar a la fagocitosis,
del que se diferencia porque el tamaño de las partículas ingeridas en este caso es mucho
menor.

La respiración en algunos protozoos es aerobia y en otros anaerobia. En la primera

toman el oxígeno de su medio ambiente y expulsan el dióxido de carbono a través de la
membrana celular. En la segunda necesitan metabolizar ciertas sustancias de las cuales
obtienen el oxígeno.

Los protozoos presentan diversos mecanismos de locomoción, que se tienen en

cuenta como uno de los caracteres para su clasificación. Así, muchos se mueven gracias a
que poseen órganos locomotores permanentes: cilios o flagelos. En otros el movimiento
se produce como consecuencia de la formación de pseudópodos, que son proyecciones
citoplasmáticas temporales y retráctiles que, fijándose al sustrato, ejercen tracción sobre
el resto del cuerpo del protozoo. Por último, hay bastantes protozoos que carecen de
órganos específicos de locomoción en casi todas las etapas de su ciclo biológico.

Los protozoos se multiplican por reproducción asexual (binaria o múltiple) y solo

algunos tienen reproducción sexual.

El enquistamiento en los protozoos

Los ciclos biológicos de los protozoos son mas o menos complejos dependiendo
de las especies o grupos que se consideren. Entre los protozoos parásitos, cuando
abandonan el hospedador en el que se encuentran para pasar a colonizar otro, es frecuente
que adopten una forma de resistencia llamada quiste, a fin de superar las condiciones
adversas del medio externo. Estos quistes están formados por una masa citoplasmática en
la que se observan un número de núcleos igual o superior al que tenía el trofozoito del
que derivan. Todo ello está rodeado por una cubierta resistente llamada pared quística
que lo protege de los agentes externos, lo que permite que estos quistes actúen como
medios de transmisión del parásito de un hospedador a otro. Para algunas especies estos

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quistes sirven además como reorganizadores de la división nuclear e incluso en otras
actúan como fijadores al hospedador.

Clasificación

Tradicionalmente los protozoos se han clasificado teniendo en cuenta,

fundamentalmente, los distintos tipos de orgánulos de locomoción que presentan. A
continuación se citan cuatro de los grupos en los que se incluyen las especies parásitas
con más trascendencia en sanidad humana y animal.

Phylum SARCOMASTIGOPHORA
Poseen pseudópodos, flagelos o ambos tipos de organelos locomotores. Protozoos
con núcleo de un solo tipo. La reproducción es asexual por fisión binaria. Incluye los
subphylum sarcodina (AMEBAS) y mastigophora (FLAGELADOS)

Phylum CILIOPHORA
Presentan cilios como organelos de locomoción (CILIADOS). General-
mente con dos tipos de núcleos. Fisión binaria transversal. Vacuola contractil típicamente
presente.

Phylum APICOMPLEXA
Son protozoos que presentan en alguno de sus estadios, una estructura
denominada complejo apical (solo visible al microscopio electrónico) y que generalmente
está formado por anillos polares, roptrias, micronemas, conoide y microtúbulos
subpeliculares. El movimiento tiene lugar por deslizamiento. Reproducción sexual por
singamia. En este grupo se incluye el orden Eucoccidida (COCCIDIOS).

Phylum MICROSPORA
Son parásitos intracelulares diminutos con esporas de origen unicelular en
una cápsula membranosa indivisa, que contiene un solo germen ameboide, que sale a su
vez a través de un filamento polar tubular. Un poroplasto llena la porción apical de la
espora y un posterosoma, la basal.

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II.- Trabajo práctico

Material:

- Con la muestra de que dispone, confeccione una preparación donde debe localizar
trofozoitos de:

Amebas

a) Observe la forma indefinida y cambiante de este estadio.

b) Mantenga la atención en un trofozoito y observe la emisión de pseudópodos,

intentando distinguir ecto y endoplasma en los mismos.

c) Observe la posible presencia de vacuolas, tanto digestivas como pulsátiles.

d) Haga un dibujo esquemático y señale y comente sobre el mismo, todo lo que haya
observado.

Flagelados

a) Observe la forma mas o menos constante de estos organismos.

b) Cuente el número de flagelos y observe la disposición de los mismos en el cuerpo del

protozoo. Estudie la forma en que se mueven los flagelos y como se desplaza el
protozoo.

c) Intente observar alguna estructura intracitoplasmática y refleje todo lo visto en un

esquema sencillo.

Ciliados

a) Estudie la forma de estos protozoos.

b) Observe la disposición y longitud de los cilios en relación a lo visto para los

flagelados.

c) Describa el movimiento de estos trofozoitos en relación a los otros protozoos

estudiados y haga un esquema de uno de ellos señalando las estructuras que haya
podido observar.

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 PRÁCTICA

ESTUDIO DE TROFOZOITOS Y QUISTES DE

AMEBAS, FLAGELADOS Y CILIADOS PARÁSITOS

Como ya se ha mencionado en la práctica anterior, dentro del phylum

Sarcomastigophora se incluyen aquellos protozoos que se mueven por pseudópodos
(AMEBAS) y aquellos que se mueven con ayuda de unos organelos de locomoción
denominados flagelos (FLAGELADOS).
En esta práctica se estudiarán, en primer lugar, trofozoitos y quistes de algunas
especies de amebas parásitas del intestino del hombre

Subphylum Sarcodina

Las amebas se incluyen en el subphylum Sarcodina y de forma resumida este

grupo se caracteriza por:

Los trofozoitos presentan forma inconstante

El movimiento se realiza por pseudópodos

La multiplicación tiene lugar por fisión binaria

Presentan un ciclo biológico directo

QUISTES Quiste maduros

Entamoeba coli Aspecto de pequeña esferita de 10-30 micras de diámetro.

En su interior se pueden observar 8 núcleos flotando en
una masa protoplasmática nítida, donde las barras
cromatoidales están muy reducidas e incluso
desaparecidas.
Los núcleos presentan un cariosoma pequeño y excéntrico.
El interior de la membrana plasmática está revestido por
numerosos gránulos de cromatina

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Endolimax nana
Quiste maduro

Esféricos o rectangulares con bordes

redondeados. Contiene 4 núcleos pequeños, con
cariosoma grande, irregular, central o excéntrico
muy visible.

Iodamoeba butschlii

Quiste maduro

Forma muy variable. Contiene un núcleo típico, con gran

cariosoma central o ligeramente excéntrico, poco visible
en las muestras fecales frescas. Tamaño variable (6-15
micras). Lo más característico de estos quistes es la
presencia de una gran vacuola de glucógeno que se tiñe de
color rojo ladrillo con el yodo.

Quistes de amebas:

a) Observe la forma del quiste en relación a la del trofozoito que observó “in vivo”.

b) Cuente el número de núcleos del quiste y, en la medida de lo posible, estudie su

estructura. Haga un esquema de lo observado.

c) Trate de identificar los quistes de cada especie con ayuda de las láminas,
descripciones y bibliografía.

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 Subphylum Mastigophora FLAGELADOS

Los flagelados se incluyen en el subphylum mastigophora cuyo carácter más

relevante, como ya se ha mencionado, es la presencia de uno o varios flagelos como
organelos de locomoción. Por otra parte los ciliados constituyen un grupo independiente,
Phylum Ciliophora, que se caracteriza por la presencia de cilios como organelos
quinéticos.

Ambos grupos, flagelados y ciliados, presentan especies parásitas del hombre

algunas de las cuales se identificarán en esta práctica.

De forma resumida otras características significativas de este grupo son:

Presencia de uno o varios flagelos

Los trofozoitos presentan forma constante

La multiplicación tiene lugar por fisión binaria

Pueden presentar un ciclo biológico directo o indirecto
Dentro de este grupo se procederá a la localización e
identificación trofozoitos y quistes de Giardia intestinalis así
como a la localización de trofozoitos vivos de una especie del
género Trichomonas que se describen brevemente a
continuación.

Giardia intestinalis

TROFOZOITO

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Típicamente piriforme, con simetría bilateral. Dorsalmente es convexo y ventralmente presenta
una concavidad casi circular denominada disco suctor que funciona a modo de ventosa. Tiene 4
pares de flagelos y 2 núcleos, cada uno de los cuales lleva un cariosoma bien patente. Cerca del
margen posterior del disco suctor presenta un par de estructuras en forma de barra denominadas
cuerpos medios. Miden 15 x 8 micras.

QUISTE

Ovoide, rodeado por una pared quística

homogénea y delgada. Presenta hasta 4 núcleos y
un conjunto de estructuras correspondientes al
axonema de los flagelos, restos del disco suctor,
etc. Que destacan en el interior por su refrigencia.
Miden 7-10 micras de largo.

Trichomonas spp,

Membrana ondulante Los representantes de este género se

incluyen en el orden Trichomonadida el
cual se caracteriza porque los trofozoitos
Cuerpo parabasal
tienen entre 4 y 6 flagelos, uno de ellos
Costa formando el borde de una membrana
ondulante lateral. Además presenta un
órgano de sostén (Axostilo) bien
Axostilo
desarrollado.

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Trichomonas vaginalis

Los trofozoitos miden unas 15-20 µm de largo. Poseen 4 flagelos

libres anteriores y uno recurrente que recorre el borde de una
membrana ondulante a lo largo de todo el organismo sin dejar
porción libre. El fino axostilo aflora por el extremo posterior. La
identificación cuando se observan trofozoitos vivos se facilita por su
rápida motilidad, así como la visualización de la membrana ondulante
mientras gira el cuerpo además de trasladarse.

Trofozoitos y quistes de flagelados:

a) Observe la forma del quiste en relación a la del trofozoíto

b) Cuente el número de núcleos del quiste y, en la medida de lo posible, estudie su

estructura. Haga un esquema de lo observado.

c) Trate de identificar los trofozoitos y quistes de cada especie con ayuda de las
láminas, descripciones y bibliografía.

d) Confeccione una preparación con la muestra que se ha proporcionado. Intente

localizar tricomonádidos. Localice las estructuras quinéticas y de sostén. Describa
el movimiento que observa.

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 Phylum Ciliophora CILIADOS

De forma breve podemos caracterizar a los representantes de este grupo por las
siguientes características:

Presencia de cilios como orgánulos de locomoción

Localización de un citostoma o boca celular

Presencia de 2 núcleos heteromorfos: uno de mayor
tamaño o macronúcleo y otro menor o micronúcleo

Reproducción asexual por fisión binaria y sexual por

conjugación

A continuación se describe de forma breve la morfología de Balantidium coli, único

ciliado parásito del intestino humano. De esta especie trataremos de localizar e identificar
tanto trofozoitos como quistes

Balantidium coli

TROFOZOITO QUISTE

Ovalado, mide de 50 a 200 micras. Todo el cuerpo Esférico, mide 50-60 micras. Presenta
se encuentra cubierto de cilios, siendo estos más pared quística y por debajo una membrana
fuertes alrededor de la boca celular o citostoma ciliada. Citoplasma con macro y
situada en la parte anterior. En el interior se observa micronúcleo y vacuolas alimenticias.
un macro y micronúcleo y vacuolas alimenticias.
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Trofozoito y Quiste de ciliado

a) Compare la forma y el tamaño de estos quistes con los de amebas y flagelados que ya
ha visto.

b) Enfocando con el objetivo fuerte seco (40), y moviendo levemente arriba y abajo el
tornillo micrométrico, intente observar bajo la cubierta quística, las hileras de cilios
del protozoo. Haga un esquema señalando todo lo observado.

c) Trate de identificar el trofozoito y el quiste de este ciliado con ayuda de las láminas,
descripciones y bibliografía.