Las imágenes que forman este CD han sido cedidas por investigadores

que han utilizado el Servicio de Microscopía Electrónica del CCMA

hasta 2010. Actualmente, este Servicio depende del Instituto de Ciencias
Agrarias (ICA) que también pertenece al Consejo Superior de
Investigaciones Científicas (CSIC) .

Cada imagen lleva la información del artículo científico en inglés donde

se presentaron los resultados obtenidos o una etiqueta con el nombre
del investigador que nos cedió las imágenes.

Las siglas indican el microscopio utilizado.

En el Servicio de Microscopía Electrónica tenemos dos microscopios
electrónicos: un microscopio electrónico de transmisión (MET) y un
microscopio electrónico de barrido (MEB). Este último está equipado
con un sistema para observar muestras congeladas (CrioMEB) y otro de
detección de rayos X para hacer microanálisis.

Autores: Servicio de Microscopía Electrónica

Carmen Ascaso
Fernando Pinto
Virginia Souza-Egipsy
CSIC 2012
Agradecimientos : Mª Teresa Carnota
En las siguientes diapositivas vamos a mostrar un mundo microscópico. Para ello se
deben usar equipamientos sofisticados como son los microscopios electrónicos.

La lupa binocular o el microscopio óptico nos permiten dar los primeros pasos en el
mundo microscópico pero estructuras tales como los virus, nunca podrían haber sido
descubiertas con los microscopios ópticos.

Es interesante ver el grado de definición con que pueden observarse los virus gracias
a los microscopios electrónicos y es también interesante ver cómo estos
instrumentos arrancan sus secretos a estructuras mas grandes que los virus, como
son las bacterias, las algas microscópicas, los protozoos y los hongos así como las
células animales y vegetales.

Todo ello constituye el mundo de lo pequeño pero, no por pequeño, desdeñable

para el hombre. Los virus son capaces de producirnos las molestas gripes invernales
y las bacterias nos producen infecciones, algunas de la gravedad de la neumonía en
el caso de ser contraída por ancianos o niños. Así como los virus no pueden ser
combatidos con antibióticos, las bacterias, aunque con algunas excepciones, suelen
sucumbir ante tan poderosas armas. En el mundo de los pequeño se encuentran
también las levaduras del pan y del cava y muchos hongos que atacan nuestras
cosechas.
Microscopio electrónico de
transmisión (MET)

Microscopio electrónico de barrido

(MEB)
Además de los microscopios, necesitamos otros
instrumentos para preparar las muestras para microscopía
electrónica. En el caso de la microscopia electrónica de
transmisión se requiere un aparato para hacer cortes
ultrafinos de entre 70 y 100 nm de grosor. El equipamiento
que nos permite hacer cortes tan pequeños del material se
llama ultramicrotomo y tiene este aspecto.

Para la microscopía electrónica de barrido necesitamos

hacer a la muestra conductora a los electrones y lo hacemos
de dos formas diferentes :

1) con una aparato que deposita una fina capa de carbón o

2) con otro que deposita una fina capa de oro sobre la
muestra.
Ejemplos de microscopía electrónica de barrido
por detección de electrones secundarios
 Microscopía de barrido MEB- 1
Haz de
electrones Detector de electrones secundarios
Imagen de electrones secundarios

La imagen que se
obtiene sería como
En la microscopía electrónica de barrido mediante
observar este grupo de
electrones secundarios, únicamente podemos frutas y verduras
observar la parte superficial de los materiales que recubiertas por papel
están recubiertos de oro o carbón. Algunos de aluminio. Podemos
materiales metálicos con números atómicos altos adivinar por las
pueden observarse directamente sin necesidad de formas qué son, pero
no vemos el interior.
recubrirlos.
 Dra. A. Pinilla
ALGAS Diatomeas CCMA-CSIC. Madrid
con frústula silícea

Pinnularia maior Cymbella lacustris

ALGAS Diatomeas
con frústula silícea

Cocconeis pediculus

Dra. A. Pinilla
Diploneis elliptica
CCMA- CSIC. Madrid
 Foto hormiga Fernando

Para obtener esta imagen de MEB por electrones secundarios hemos recubierto a una típica hormiga de
jardín con oro. La capa de oro es muy fina y permite que los electrones choquen y podamos observar la
estructura que hay debajo. Sin esta protección el material orgánico se quemaría por el haz de electrones y,
además, se colapsaría por el vacío de la cámara. El color marrón se añade artificialmente.

F. Pinto
ICA-CSIC. Madrid
Cristales de Tenardita (Na2SO4)
obtenidos en el laboratorio
mediante evaporación capilar de
una salmuera de 5 cm de
epipedón.

Ambas muestras (salmuera y

epipedón fueron tomadas de
suelos de Callén (Huesca). El
experimento se realizó en una
cámara climática a 35°C y 40%
de humedad relativa, simulando
las condiciones de temperatura y
humedad de la zona.

Prof. Mª T. García González

ICA-CSIC. Madrid
Ejemplos de microscopía electrónica de barrido
por detección de electrones retrodispersados
 Microscopía de barrido MEB- 2
Haz de
electrones
Detector electrones retrodispersados
Imagen de electrones retrodispersados

1 μm

10 μm

En la microscopía electrónica de barrido

mediante electrones retrodispersados
necesitamos pulir la superficie de la
muestra para tener una superficie lisa. Es
como hacer un corte transversal y así
podemos ver el interior de las estructuras.
 Microscopía de barrido MEB combinada con microanálisis
Haz de electrones
Detector de rayos X

Espectro de energía dispersiva de

rayos X en un punto determinado
de la muestra

Mapas de los diferentes elementos analizados por

espectroscopía de rayos X. Los diferentes colores
seleccionados indican qué elementos están
presentes en los granos de arena y en su
entorno, de la zona estudiada en la imagen en
blanco y negro. Los materiales tienen diferente
brillo dependiendo de su número atómico.
 CRIPTOENDOLÍTICOS
EPILÍTICOS CASMOENDOLÍTICOS

EUENDOLÍTICOS

ENDOLÍTICOS

Este método ha sido ampliamente utilizado para estudiar los

HIPOLÍTICOS microorganismos que viven asociados a las rocas. Según la
zona donde viven reciben diferentes nombres.
 Criptoendolíticos
Ejemplos de microorganismos criptoendolíticos (que viven
en las cavidades de las rocas) y casmoendolíticos (que viven
en las grietas de las mismas). Éstos utilizan las cavidades
naturales pero, a su vez, con el crecimiento, pueden
favorecer la separación de las láminas de mineral como en
la figura inferior derecha. Los euendolíticos son los que van
perforando la superficie para penetrar en el interior. Y los
hipolíticos son los que viven en la parte inferior de las rocas
para protegerse de la radiación solar.

Euendolíticos

Hipolíticos Casmoendolíticos
 Talo liquénico epilítico sobre roca
Antártica de la zona de Granite
Harbour.
Flecha blanca: algas
Flechas amarillas : hifas de hongo

Detalle de algas (flecha blanca) y

hongos (flecha naranja)
de talo liquénico

Prof- C. Ascaso, Dra. de los Ríos y Dr. Wierzchos

MNCN-CSIC. Madrid
Talo liquénico: obsérvense las algas
(flechas blanca) y la zona de fijación
al sustrato rocoso (asteriscos).
Interfase talo liquénico-sustrato rocoso

talo

sustrato
********

Dra. De los Ríos y Prof. C. Ascaso

MNCN-CSIC. Madrid
 Antártida

Este método también sirve para ver

los restos fosilizados de los
organismos dentro de las rocas. Algas
y hongos totalmente mineralizados
(fosilizados) en el interior de un poro
de arenisca de Mount Fleming
(Antártida).

Las algas se mineralizan siendo el

silicio el componente principal en el
centro de la célula (flecha azul).
En la periferia de la célula se sitúa el
aluminio (flecha roja) y, más
exteriormente, el hierro (flecha
blanca).

Prof. C. Ascaso y Dr. Wierzchos

MNCN-CSIC. Madrid
 Antártida

Diatomeas mineralizadas
en un poro de arenisca de
Mount Fleming (Antártida).

La imagen de arriba a la
izquierda muestra las
diatomeas (flechas blancas).
El resto de las fotos
corresponden a mapas
de distribución de diferentes
elementos. Como se ve en la
última imagen, el silicio propio
de la frústula de las diatomeas
ha sido sustituido por hierro.

Dr. Wierzchos y Prof. C. Ascaso

MNCN-CSIC. Madrid
 ESTUDIO DE LAS CANTERAS DE REDUEÑA. GEOMATERIALES.
Uso de láser y biocidas para eliminar microorganismos de rocas.
Talo liquénico tratado con biocidas

Talo liquénico intacto Alga tratada con biocidas

LÁSER LACONA‐BLAS1

Roca tratada con láser

y talo liquénico
afectado por láser *
(asteriscos)

*
Prof. C. Ascaso, Dra. M. Speranza, Dra. A. de los Ríos
MNCN- CSIC Madrid
ESTUDIOS SOBRE MACHU PICCHU: COOPERACIÓN CULTURAL Y CIENTÍFICA PERÚ‐ESPAÑA PARA SU 
CONSERVACIÓN Y PRESERVACIÓN COMO RECURSO AL DESARROLLO 

EXTERIOR

Talos liquénicos

Superficie de la 
piedra muy 
Minerales laminares
alterada alterados

ROCA
GRANITO

Dra. Asunción de los Ríos, Dr. Sergio Pérez-Ortega y Prof. Carmen Ascaso
MNCN- CSIC Madrid
Ejemplos de microscopía electrónica de barrido
a bajas temperaturas
Microscopía de barrido a bajas temperaturas
Crio MEB
- En esta imagen mostramos el equipamiento acoplado a la
cámara del MEB y los equipamientos externos necesarios para
preparar las muestras congeladas. En el esquema se explica el
proceso. Esta técnica permite:

- Observación de la ultraestructura congelada sin fijación

química, sólo recubierta de oro
- ¡¡¡Observación de la presencia de agua!!!
- Observación de la ultraestructura celular en las muestras
cortadas transversalmente.
 Antártida
Imagen por CrioMEB de los líquenes que viven en el interior de las rocas de los valles secos antárticos.

10 μm

Algas

Hongos

Prof. C. Ascaso, Dr. J. Wierzchos

MNCN- CSIC. Madrid
 Aspecto de la zona de Yungay Atacama (Chile)
(Atacama) y estación microclimática
(flecha)

*
*

*
Muestras de cianobacterias colonizando las
halitas de Yungay. Cianobacterias (Flechas
blancas), cristal de sal (asteriscos azules)
salmuera (asteriscos rojos)
Prof. C. Ascaso, S. Valea y Dr. Wierzchos
MNCN- CSIC. Madrid
 algas
Alga

hongos
Hongos

Microorganismos
colonizando yesos de la
zona de Monturaqui
(imagen de arriba) en
Atacama (Chile).

Algas
Microbiota
colonizando
otros yesos
Hongos

Dra. A. de los Ríos, B. Cámara, Dr. J. Wierzchos, Prof. C. Ascaso

MNCN- CSIC. Madrid
Atacama (Chile)
 TIERRA DE FUEGO
Hongos

Hipotalo, zona del liquen con

hongos en contacto con
particulas minerales del suelo.
Minerales

Imágenes de Placopsis pycnotheca, liquen

identificado como primer colonizador de Agua
suelos tras el retroceso glaciar en Tierra de
Fuego (Chile). Tiene un grueso hipotalo donde
se quedan atrapadas numerosas partículas de
minerales y que facilita la acumulación de
agua y la estabilización del suelo.

Cefalodio , grupo de cianobacterias,

dentro del hipotalo del liquen. Son
Cianobacterias
diferentes a las algas que forman la
simbiosis con el hongo.

Dra. A. de los Ríos, Dr. S. Pérez-Ortega

MNCN- CSIC. Madrid
 Cianobacterias filamentosas
Imagen de las cianobacterias filamentosas que colonizan las rocas de sílex del Desierto del Negev. La
imagen de la izquierda es de MEB a bajas temperaturas y, la de la derecha, de MET. En la de MEB
podemos ver la zona donde están inmersas rodeadas de minerales y sustancias extracelulares poliméricas y,
en la de MET, se observa con más detalle el interior celular con los tilacoides donde estas bacterias realizan
la fotosíntesis.

Prof. C. Ascaso, Dra. A. de los Ríos y Dr. Wierzchos Desierto de Negev

MNCN- CSIC. Madrid
 Atacama (Chile)

Imágenes de comunidades de cianobacterias que viven en las

cavidades de un tipo de roca volcánica llamada ignimbrita.
Estas rocas colonizadas se recogieron en las Lomas de
Tilocalar (Chile), que se observan en la imagen de arriba.

Dr. J. Wierzchos, Prof. C. Ascaso

MNCN- CSIC. Madrid
 Tierra de Fuego (Chile)

Este método también sirve

para estudiar simbiosis entre
las células de la raíz de la
planta Gunnera y bacterias
fotosintéticas, cianobacterias
del género Nostoc (flechas).

Dra. A. de los Ríos, Dr. S. Pérez-Ortega

y M. A. Fernández-Martínez
MNCN-CSIC, Madrid
 En esta foto hemos coloreado
artificialmente algunas partes de
la imagen. En rojo están
coloreados los estomas de la hoja
de tomate sobre la que hay una
larva de mosca blanca Bemisia
tabaci.

Las patas están pintadas en

amarillo y, en naranja, hemos
destacado algunos tricomas que
se observan en el envés de la hoja.

Dra. E. Garzo, F. Pinto

ICA-CSIC. Madrid
Experimentos de
fitorremediación con
Lolium (Vallico).

Corte transversal de hoja

de Lolium. Imagen de
MEB trabajando con
muestra congelada.

Dr. J. Pastor
MNCN-CSIC. Madrid
 En esta composición se ve un imagen de
MEB con la muestra congelada y
observada con electrones secundarios y
la misma hoja embebida en una resina y
observada con el detector de electrones
retrodispersados. En las muestras
preparadas no se puede ver la
distribución del agua dentro de las
células. La imagen a pocos aumentos se
parece mucho a otra obtenida por
microscopía óptica.

Dr. J. Pastor
MNCN-CSIC. Madrid
Levaduras implicadas en la elaboración
del cava.

Saccharomyces cerevisiae IFI473

Dr. A. V. Carrascosa
ICTAN-CSIC. Madrid
Imágenes de un alga unicelular (Cyanidium) y de un
protozoo (Euglena) de las aguas ácidas de Río Tinto
(Huelva). Aspecto de un biofilm donde se mezclan las algas
y la precipitación de minerales.

Dra. A. Aguilera
CAB-INTA-CSIC. Madrid
Ejemplos de microscopía electrónica de transmisión
 Microscopía electrónica de transmisión MET
Haz de electrones

Muestra depositada

Cámara CCD

Corte ultrafino

En la microscopía electrónica de transmisión el material que se

Pantalla fosforescente observa está depositado en una rejilla metálica. El material es
atravesado por el haz de electrones y la sombra que se forma en la
pantalla fosforescente es la imagen recogida por la cámara digital.
Las muestras para microscopía electrónica de transmisión deben depositarse sobre una rejilla metálica.
Si las muestras están disueltas y son de pequeño tamaño se pueden depositar directamente sobre las rejillas

Acetato de uranilo
Citrato de plomo
Muestra líquida Ácido fosfotúngstico
3,05 mm
Dejar secar Dejar secar

Los materiales densos a los electrones son los que tienen un número atómico alto y se pueden ver
directamente. Los materiales orgánicos están formados por elementos de bajo número atómico y, por
tanto, hay que cubrirlos con un material que les haga densos a los electrones. Está técnica se llama tinción
negativa y permite observar directamente la forma y superficie de bacterias y virus.

En caso de que queramos observar el interior de los tejidos tenemos que fijar el material para que
mantenga sus características, hacerlo denso a los electrones, quitarle el agua e incluirlo en un plástico que
nos permita hacer cortes muy finos (de nanómetros de grosor; 10–9 m) para poder observarlo al MET.
Aspecto de los tejidos dentro de las cápsulas de plástico que nos sirven para hacer los cortes

Muestra

Tamaño relativo de los tejidos a preparar en el contenedor blanco

 Añadir glutaraldehído, Añadir OsO4 30% 70% 100%
formaldehído
Añadir etanol

2. Fijación 3. Postfijación 4. Deshidratar

Preservar la estructura Hacer denso a los electrones Eliminar el agua

1. Cortar fragmentos

Añadir plástico Endurecer plástico

líquido 65°C–70°C

5. Incluir en plástico 6. Rellenar moldes 7. Realizar ultracortes 8. Recoger cortes y

ponerlos en la rejilla

Los cortes se realizan con un ultramicrotomo equipado con una cuchilla de diamante y quedan flotando
en una balsa con agua de donde se recogen y depositan en las rejillas para su observación. El grosor de
los cortes es de 70–100 nm. El haz de electrones debe ser capaz de atravesarlo para poder observar los
detalles del material.
 Estos virus se componen generalmente
de cabeza (flechas amarillas) y cola
(flechas azules) y necesitan para
multiplicarse de una célula animal,
vegetal o bacteriana. Los virus de esta
imagen son virus de bacterias y, por ello,
se denominan bacteriófagos. Estos virus
son de la bacteria llamada neumococo
(que se verá en la próxima diapositiva).
El diámetro de su cabeza es de unos 60
nanómetros. En estas imágenes hemos
usado microscopía electrónica de
transmisión y tinción negativa para el
contraste.
60 nanómetros

Prof. E. García
CIB- CSIC. Madrid
 En estas imágenes hemos usado microscopía
electrónica de transmisión. En la foto del
bacteriófago hemos usado una técnica que se llama
sombreado metálico para dar contraste al material.
La imagen muestra el bacteriófago de neumococo en
el que se observa la cabeza (flecha amarilla) y la cola
(flecha azul) de la que sale el ADN (flechas rojas).
La longitud del ADN es de 16 μm.

Streptococcus pneumoniae

Cada cabeza de este virus tiene unos 60

nanómetros de diámetro. Una de las
bacterias causantes de la neumonía
(Streptococcus pneumoniae) tiene un
micrómetro de largo. Colocando uno
tras otro los virus a lo largo de una
bacteria, cabrían unos 17 virus.

Prof. E. García
Se observan zonas de división (señaladas con flechas),
CIB –CSIC, Madrid en las que se está sintetizando nueva pared celular.
 Prof. C. Ascaso
MNCN- CSIC. Madrid

Ésta es la imagen, al microscopio electrónico de transmisión, de una célula procariótica (que

carece de núcleo, mitocondrias, etc.), pero que tiene tilacoides (flechas). Corresponde a una
cianobacteria. una bacteria capaz de realizar la fotosíntesis.
Esta imagen muestra un alga
unicelular con un cloroplasto
central lleno de membranas
tilacoidales (flechas rosas).
Esta especie de alga se llama
Trebouxia y es típico que
esta especie tenga una
estructura llamada pirenoide
en el centro de su
cloroplasto. Esta estructura
está formada por glóbulos
densos llamados
pirenoglóbulos (flechas
amarillas).

Dra. De los Ríos

MNCN-CSIC. Madrid
Ésta es una imagen detallada
de una célula de Trebouxia.
El centro de la célula está
ocupado por un cloroplasto
lleno de membranas
tilacoidales (flechas rosas).
En el centro del cloroplasto
los tilacoides dejan una zona
libre donde se agrupan los
pirenoglóbulos (flechas
amarillas) que forman el
pirenoide. Se observa
también la doble membrana
que delimita el núcleo
(flechas rojas). Las flechas
verdes muestran la membrana
del cloroplasto.

Prof. C. Ascaso
MNCN-CSIC. Madrid
Células de una alga verde
en división (estrellas
verdes) rodeadas de hifas de
hongos (flechas rojas).
Cuando viven juntas forman
una simbiosis llamada
liquen.

Dra. A. De los Ríos

MNCN-CSIC. Madrid
Éste es el aspecto de otro
tipo de cloroplasto (flechas
verdes), el de un protista
fotosintético llamado
Euglena glacilis. Las finas
líneas que se observan en el
interior del cloroplasto son
los tilacoides (flechas rosas).

Junto al cloroplasto, en el
citoplasma, se encuentran las
mitocondrias delimitadas por
una doble membrana
(flechas amarillas). Las
estructuras laminares que se
observan dentro se
denominan crestas
mitocondriales (flechas
azules).

Dra. De los Ríos

MNCN- CSIC. Madrid
Las hifas de los hongos están
formadas también por células
eucarióticas. En esta imagen se
distinguen el núcleo (flecha roja)
con su doble membrana, una
gran mitocondria (flecha
amarilla), varias vacuolas
(estrellas azules) y el aparato de
Golgi (flecha naranja)

Prof. C. Ascaso
MNCN- CSIC. Madrid
 HONGOS

En este caso, hongos que

forman talos liquénicos
con algas.

La flecha amarilla indica

una mitocondria, las flechas
rojas, cuerpos concéntricos
Y, las azules, la pared de la
hifa del hongo.

Dra. De los Ríos

MNCN-CSIC. Madrid
Ésta es la estructura de una
hoja de rosal.

En esta imagen, se ven las

células del parénquima en
empalizada de la hoja . En
las células se aprecian los
cloroplastos (flechas
verdes) con almidón
(flechas amarillas), el
núcleo (flechas rojas) y
algunas vacuolas (estrellas
azules).

Prof. C. Ascaso
MNCN-CSIC. Madrid
Células de hojas de trigo. Los
cloroplastos se sitúan a lo largo de la
periferia de la célula (flechas verdes),
también aparecen las mitocondrias
(flechas amarillas). Dentro de los
cloroplastos se distinguen los
tilacoides y los acúmulos de almidón
(flechas azules). El centro de la célula
está ocupado por una gran vacuola
(estrella azul).

Dra. De los Ríos

MNCN-CSIC. Madrid
Células del ápice de la raíz de Lupinus. Las flechas rojas señalan los núcleos, las flechas amarillas
señalan grupos de mitocondrias.

Dra. M. Lucas
ICA- CSIC. Madrid
Retículo endoplasmático rugoso (flecha roja), mitocondrias (flecha amarilla), aparato de Golgi
(flecha naranja) y pared celular (flecha azul).

Dra. M. Lucas
ICA- CSIC. Madrid
Célula de raíz de Lupinus, la flecha roja señala la doble membrana nuclear, la amarilla señala a la
membrana plasmática y la azul, los ribosomas en el citoplasma.

Prof R. De Felipe
CCMA- CSIC. Madrid
Célula de raíz de Lupinus, las flechas azules muestran el borde de una vacuola, las flechas amarillas
mitocondrias presentes en el citoplasma de la célula.

Pfr.a R. De Felipe
CCMA- CSIC. Madrid
 Bacteroides de Bradyrhizobium japonicum procedentes de nódulos de soja. Las forma de las
bacterias cambia cuando se introducen en las células de las raíces de las plantas y viven en
simbiosis.

Dra. M. Fernández Pascual

ICA- CSIC. Madrid
Imagen de microscopía electrónica de transmisión utilizando inmunolocalización. Los puntos
negros son bolitas de oro unidas a anticuerpos que reconocen los antígenos presentes en las
cubiertas de las células de Azospirillum brasilensis.

Dra. M. Fernández Pascual

ICA- CSIC. Madrid