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    Fundamentos Microscopia Electronica 2023

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    Técnicas de Microscopia Electrónica

    Farm. Bioq. Luciano José Martínez


    Responsable Técnico CIME (Centro Integral de Microscopía Electrónica)
    CONICET-UNT
    2023
    ¿PARA QUÉ SE UTILIZAN LOS
    MICROSCOPIOS?
    Los microscopios permiten observar objetos que son demasiado pequeños para ser visualizados en
    forma directa por el ojo humano. ( estructuras biológicas y no biológicas).
    Distintos tipos de microscopios

    • Lupa estereoscópica
    • Microscopios ópticos
    • Microscopios electrónicos
    • Microscopios de fuerza atómica
    • Microscopios de efecto túnel
    • Microscopios de superresolucion
    Utilidades de los
    microscopios electrónicos
    • La microscopía electrónica de barrido (SEM) y de transmisión (TEM) es
    utilizada como una de las técnicas más versátiles en el estudio y análisis de
    las características microestructurales de objetos sólidos
    • Estas técnicas nos permiten observar muestras relacionadas con el campo
    de la ciencia de materiales y de materiales biológicos.
    • SEM es una herramienta que se utiliza para estudiar la superficie de
    diversos tipos de muestras, sus estructuras tridimensionales,
    ornamentaciones, así como sus dimensiones, para el estudio de la
    morfología y taxonomía
    • TEM por el pequeño espesor nos da información en dos dimensiones de la
    ultraestructura de la muestra.
    • TEM Y SEM nos dan información complementaria
    Espectro electromagnético
    Se denomina espectro electromagnético a la distribución energética del conjunto de las ondas
    electromagnéticas
    Poder y Limite de resolución
    Capacidad de un sistema óptico para separar dos puntos o bordes de
    partículas y verlos como individuales (PR)

    Distancia en la que dos puntos pueden considerarse separados (LR)

    El limite de resolución es inverso al poder de resolución

    Depende de la longitud de onda de la radiación y apertura numérica


    Limite de resolución

    Ojo humano 0,1 mm 1X


    Microscopio Óptico 0,2 µm=200 nm 1.000-2.000 X
    Microscopio de 1 a 4 nm 1.000.000 X
    barrido
    Microscopio de 0,1 nm =1 A 10.000.000 X
    transmisión

    Microscopio de 10 nm a 40 nm 100.000 X
    superresolucion
    Magnificación
    • Medida de la ampliación de la imagen
    • Cantidad o grado de ampliación de un objeto
    Comparación de microscopios
    Columna de un SEM
    Partes de un Microscopio
    Funcionamiento de un SEM
    Funcionamiento de un SEM
    Vacío de la columna

    ⮚Para proteger a la fuente (filamento)


    Si no hay alto vacío
    ⮚El potencial al que están sometidos los electrones puede ionizar al gas
    ⮚Los electrones pueden interactuar con moléculas del gas, degradando el
    desempeño de la columna
    ⮚El detector está polarizado (12-15 kV) y puede haber descargas
    Interacción de los electrones
    con la materia
    El estado de movimiento de una partícula se caracteriza por su energía E y por su impulso P
    Tipos de interacción de los electrones con la materia
    Los electrones que se desplazan pueden interactuar con:
    1. Núcleos atómicos
    2. Electrones atómicos
    1.- Fenómenos de dispersión elástica que afectan las trayectorias del haz de electrones
    dentro del espécimen sin alterar la energía cinética de los electrones. La dispersión elástica es
    responsable del fenómeno de retrodispersión electrónica que es la responsable de la
    formación de algunas técnicas de observación en SEM.
    2.- Eventos de dispersión inelástica, dan como origen a diferentes tipos de señales como
    resultado de la pérdida de energía o transferencia de energía a los átomos del espécimen que
    conducen a la generación de electrones secundarios, electrones Auger, rayos X
    característicos, radiación electromagnética de longitud de onda larga en el visible,
    radiaciones ultravioleta e infrarroja del espectro, vibraciones de la red (fonones) y
    oscilaciones colectivas de los electrones en los metales (plasmones).
    Pasos para preparar una
    muestra
    MEB TEM

    Fijación Fijación
    Deshidratación Posfijación (Osmio acetato de
    Punto critico de secado Uranilo)

    Montaje Deshidratación

    Recubrimiento con oro ( Sputtering) Inclusión

    Observación en el microscopio Corte fino (Azul de Toluidina)


    Corte ultrafino
    Observación en el microscopio
    PROTOCOLO GENERAL PARA MUESTRA
    TRATAMIENTO DE MUESTRAS
    BIOLÓGICA NO BIOLÓGICA

    HIDRATADA SECA

    FIJACIÓN NO
    FRESCO SECAR AL AIRE CONDUCTORA
    QUÍMICA CONDUCTORA

    DESHIDRATACIO MONTAJE Y
    BAJO VACÍO o MONTAJE MONTAJE
    N Y PUNTO METALIZADO
    P. VARIABLE
    CRÍTICO
    MONTAJE Y
    METALIZADO
    METALIZADO

    Observación
    Fijación
    Deshidratación
    Punto critico de secado
    Punto Critico de secado
    Porta Cintas de carbón
    especimen de adhesivas Porta muestras de vidrio
    aluminio conductivas Numerados para la toma
    de GSR

    Pinza de aluminio para manipular muestras y evitar contaminación


    Montaje de la muestra
    Recubrimiento con oro
    Sputtering
    Metalizador por sputtering y
    evaporación
    Montaje en el microscopio
    ZEISS SUPRA 55VP
    FILAMENTO FIELD EMISSION (vida media 10.000 hs)
    ALTO VACIO Y PRESION VARIABLE
    TENSION DE ACELERACION 0,5 A 30KV
    MAGNIFICACION 20X a 1,000,000 X
    RESOLUCION: 1 A 4 nm
    DETECTOR SE
    DETECTOR BSD
    DETECTOR INLENS
    DETECTOR PRESION VARIABLE
    DETECTOR DE EDS
    ZEISS LIBRA 120

    FILAMENTO TUNSGTENO
    FILAMENTO LaB6.
    FILTRO DE ENERGIA OMEGA
    TENSION DE ACELERACION: 80 kV y 120 kV.
    RESOLUCION: 3 A.
    MAGNIFICACION: 80x a 630.000x.
    MODO EELS
    Áreas donde se aplica la Microscopia
    Electrónica
    • Industria Farmacéutica
    • Arqueología
    • Agronomía
    • Odontología
    • Control pericial y ambiental
    • Ciencias de la Tierra e Industria Minera
    • Ciencias de los Materiales
    • Industria Metal-mecánica
    • Industria Alimenticia
    • Ciencias Biológicas y de la Salud
    • Industria Textil
    SEM

    Industria Farmacéutica

    Celulosa microcristalina

    Celulosa microcristalina
    SEM

    Arqueología

    Carbones arqueológicos

    Carbones arqueológicos
    SEM

    Agronomía

    Hoja de caña de azúcar

    Conidios
    SEM

    Agronomía

    Interacción entre hongos (control de plagas)


    SEM

    Odontología

    Tratamiento de conducto
    SEM

    Forense

    Tinta de bolígrafo

    Filamento
    SEM

    Forense

    Residuos de disparo

    Diatomeas
    SEM

    Forense

    Polen

    Polen
    SEM

    Industria petrolera

    Roca madre, Vaca muerta


    SEM

    Nanotecnología

    Nano hilos
    SEM

    Minería
    SEM

    Metal mecánica

    Aleación

    Soldadura
    Soldadura
    SEM

    Industria alimenticia

    Almidón

    Queso
    SEM

    Diatomeas
    SEM

    Cabellos
    SEM

    TELA
    SEM

    Biología
    SEM

    Estudio de interacciones bacterianas


    en cultivos primarios
    SEM
    TEM

    Biopsias renales
    TEM

    Fibras de colágeno
    TEM

    Bacterias
    TEM

    Bacterias
    Muchas gracias

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