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Asesor:
AREQUIPA- PERÚ
JURADO
________________________________________
Mg. María Elena Sandra Solis Ferrel
PRESIDENTA
_____________________________________
Mg. Paúl Castro Benavente
MIEMBRO
___________________________________
Mg. Socrates Becerra Castillo
SECRETARIO
AGRADECIMIENTOS
Gracias a todas las personas que aunque no sean mencionadas fueron parte
fundamental directa o indirectamente para realizar nuestro trabajo de
investigación.
DEDICATORIA
5
ABSTRAC
6
CAPITULO I:
GENERALIDADES
7
1.1 INTRODUCCION
En 2014, el 8,5% de los adultos (18 años o mayores) tenía diabetes. En 2015
fallecieron 1,6 millones de personas como consecuencia directa de la diabetes
8
y los niveles altos de glucemia fueron la causa de otros 2,2 millones de muertes
en 2012.
9
1.2 JUSTIFICACION
Los edulcorantes son un aditivo para los alimentos que tienen un sabor dulce
pero que proporcionan menos o ninguna caloría que el azúcar común, por lo
que se les llama “sustitutos del azúcar”. Existen edulcorantes naturales y
artificiales cada uno de ellos tiene sus propias características y ventajas (5).
10
diferencia de otros órganoclorados, la sucralosa tampoco se degrada ni pierde
sus moléculas de cloro. (12)
Hoy en día los edulcorantes forman parte de nuestra vida diaria ya sea en
productos procesados o vendidos para sustituir al azúcar, por ellos se ha vuelto
tan conocidos en la actualidad, es por tal motivo que se procede a realizar el
siguiente trabajo de investigación en donde se determinara el efecto del
consumo de sacarina y sucralosa sobre los valores de glucosa en ratas sanas
e inducidas a diabetes mellitus tipo 2. En investigaciones anteriores a esta se
demuestra la producción de insulina posterior al consumo del edulcorante,
sabiendo que la insulina tiene efecto sobre los valores de glucosa en sangre,
Teniendo como objetivo identificar la relación entre la ingesta de edulcorantes
no calóricos y la alteración de la glucosa. Por otro lado los resultados obtenidos
en esta investigación permitirán comprobar si el consumo de edulcorantes
tiene un efecto sobre los valores de glucosa basales y dar a conocer a la
población los resultados.
11
1.3 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
1.4 HIPÓTESIS
1.5 OBJETIVOS
12
1.6 OPERACIONALIZACION DE VARIABLES
Normal 70 –
100 mg/dl Exámenes de
Es la medida Pre- diabetes laboratorio
de 100- 125
Glucemia concentración Es el nivel de mg/dl
de glucosa libre Glucosa en sangre glucosa en sangre mg/dl Diabetes
en en ayunas Mayor 125
la sangre, suer mg/dl
o o plasma
sanguíneo.
Durante el
ayuno
13
CAPÍTULO II:
MARCO TEÓRICO
14
2.1 ANTECEDENTES
16
de hiperinsulinemia, su posible impacto en la reserva pancreática o
niveles de GLP continúa en estudio.
17
2.2 DIABETES MELLITUS
2.2.1 DEFINICIÓN
18
2.3 EPIDEMIOLOGÍA
19
alta prevalencia en Lima, 4.6%, seguida de la región de la costa 3.4%, la selva
2.5% y de la región andina, 2.0%(20).
2.4 CLASIFICACIÓN
20
2.5 FISIOPATOLOGÍA
Existen distintas causas por las cuales puede ocurrir la destrucción de los
islotes: virus, agentes químicos, autoinmunidad cruzada o, incluso, una
predisposición génica (23). Durante la etapa previa al inicio de la diabetes tipo
1, en el 80% de los individuos se detectan anticuerpos contra antígenos
citoplasmáticos o membranales de las células β pancreáticas como la
descarboxilasa del ácido glutámico 65 y 67 (GAD65 y 67), la proteína de
choque térmico 65 (Hsp-65), y contra insulina (24). Sin embargo, la mayor
susceptibilidad para desarrollar DMT 1 se encuentra en los genes del antígeno
leucocitario humano (HLA clase II) del cromosoma 6, que contribuyen con el
50% del riesgo, y son asociados algunos polimorfismos genéticos en los sitios
de unión del péptido (24). Mediante la identificación de estos anticuerpos en
personas sanas, se establece el riesgo de desarrollar la enfermedad; por
ejemplo, la presencia de anticuerpos contra insulina confiere un riesgo
pequeño, mientras que la combinación de anticuerpos contra células de los
islotes y contra GAD o contra insulina representa un riesgo alto para desarrollar
DMT 1(24).
21
2.5.2 DIABETES MELLITUS TIPO 2
22
2.6 CRITERIOS DE DIAGNÓSTICO PARA LA DIABETES MELLITUS EN
HUMANOS
23
2.7 CRITERIOS DE DIAGNÓSTICO PARA LA DIABETES MELLITUS EN
RATAS
24
2.9 TRATAMIENTO DIETÉTICO Y SU IMPORTANCIA
25
situación en la que pasamos la mayoría del tiempo, dada las continuas ingestas
durante el día, estimulados por los actuales patrones de alimentación(32).
2.11.1 CONCEPTO
26
comprobados en la hemoglobina glicosilada, algunos ensayos clínicos, si han
mostrado disminución significativa en la proteína C reactiva (39).
2.12 GLUCOSA
2.12.1 DEFINICION
27
2.12.2 FACTORES QUE INFLUYEN EN VARIACIÓN DEL NIVEL DE
GLUCOSA
28
2.12.3 MÉTODOS DE MEDICIÓN DE GLUCOSA
29
2.13.1 JUSTIFICACIÓN DEL USO DE ADITIVOS
30
2.14 EDULCORANTES
Como seres humanos, tenemos una preferencia natural por lo dulce y nos
disgustan los sabores amargos. (45) Los edulcorantes bajos en calorías han
sido utilizados y disfrutados de manera segura durante más de 100 años. El
primer edulcorante bajo en calorías utilizado comúnmente, la sacarina, fue
descubierta en 1879 y otros varios han sido descubiertos desde entonces,
como el acesulfamo (Ace-K), el aspartamo, el ciclamato y la sucralosa. (46) El
edulcorante más reciente bajo en calorías, que fue aprobado en Europa en
noviembre de 2011, es el glicósido de esteviol o extracto de Stevia. El Stevia
procede de las hojas de la planta Stevia (Stevia Rebaudiana Bertoni) que es
nativa de Centroamérica y Sudamérica y pertenece a la familia de los
crisantemos. (47)
2.14.2 CLASIFICACIÓN
31
Algunos edulcorantes no nutritivos tienen límite máximo de uso en
determinados alimentos, como por ejemplo en alimentos con valor
energético reducido o en bebidas reducidas en calorías.
2.14.2.1.1 SACARINA
2.14.2.1.2 CICLAMATO
32
ciclamato combinado con sacarina arrojando riesgo potencial de cáncer de
vejiga. Sin embargo, la EFSA ha revisado el tema de su seguridad sin
encontrar carcinogenicidad ni efectos adversos en parámetros reproductivos,
tema que fue de particular interés por sospechas de afectación en la fertilidad
en animales machos. La Organización Mundial de la Salud (OMS) la considera
libre de perjuicios para la salud. Debido a la variabilidad encontrada en
humanos en la tasa de la conversión de ciclamato a su metabolito
ciclohexamina, su ingesta diaria admisible (IDA) se redujo de 0 a 7 mg/kg de
peso corporal al día.(53)
2.14.2.1.3 ASPARTAME
33
2.14.2.1.4 ACESULFAME K
2.14.2.1.5 NEOTAMO
34
2.14.2.1.6 ADVANTAME
Advantame es 20.000 veces más dulce, gramo por gramo, que el azúcar de
mesa, es un edulcorante cristalino blanco que fluye libremente y se disuelve en
agua. Advantame no se descompone con el calor, por lo tanto se espera que
sea utilizado para endulzar los productos horneados, refrescos y otras bebidas
no alcohólicas, goma de mascar, caramelos, glaseados, postres congelados,
gelatinas y pudines, mermeladas y jaleas, frutas y jugos de frutas, coberturas y
jarabes. A diferencia del azúcar, miel o melaza, Advantame no aumentan los
niveles de azúcar en la sangre en los seres humanos. Al igual que el
aspartamo, Advantame contiene fenilalanina, que se metaboliza con dificultad
por personas con una enfermedad genética rara, la fenilcetonuria. Pero debido
a su intenso dulzor, Advantame se utilizaría en volúmenes mucho menores que
el aspartamo. Como resultado de ello, la FDA ha declarado que se puede
consumir de forma segura por las personas con fenilcetonuria.
2.14.2.2.1 TAUMATINA
35
La taumatina tiene un cierto parecido al regaliz, y, mezclada con glutamato,
puede utilizarse como potenciador del sabor. Se conocen cinco tipos de
taumatinas, En el listado de la Unión Europea tiene el código de aditivo E-957 y
figura en el listado GRAS de EE.UU. desde 1984 (principalmente para ser
usadas en gomas de mascar). Las taumatinas son proteínas con un peso
molecular alrededor de 22.000, estando conformadas por 207 aminoácidos. De
su estructura molecular se desprende la ausencia del aminoácido histidina y la
presencia de una gran cantidad de puentes disulfuro que la sostienen,
estabilizan y le brindan una gran termoresistencia. Asimismo, conviene
destacar que el mantenimiento de su estructura tridimensional es fundamental
para mantener su sabor dulce. Basta la simple ruptura del puente disulfuro
entre las cisteínas 145 y 158, para que el sabor dulce se pierda. La obtención
industrial de taumatina en la actualidad es realizada por programación genética
de microorganismos, lo cual implica un alto costo.Tampoco resultó ser
mutagénica ni teratogénica. Los ensayos de toxicidad de 90 días de duración
en ratas y perros, demostró su inocuidad en concentraciones altas (30 y 10
gramos por kg de peso), respectivamente. Tras 13 semanas de tratamiento en
humanos, no fueron detectados cambios o efectos colaterales en dosis de 280
mg diarios. La ingesta diaria prevista para la taumatina es de 2 mg/día
(Mandrile E. et al., 1988). Dado que dicha dosis representa un aporte
insignificante en una dieta proteínica normal, y siendo considerados estos
polipéptidos como “no extraños” para el organismo, no ha podido establecerse
una IDA específica. (58)
2.14.2.2.2 MONELINA
2.14.2.2.3 MIRACULINA
2.14.2.2.4 ESTEVIOSIDO
37
22% P/P. En Japón se considera como endulzante alternativo desde 1984.
Tanto el rebaudiósido como el esteviósido son degradados por la flora intestinal
de las ratas siendo completamente absorbidos. El esteviósido presenta sabor
amargo, dejando un resabio dulce en altas concentraciones. Los estudios de
toxicidad tanto en animales como en humanos revelan que el producto es muy
seguro. Asimismo, los esteviósidos presentan efecto hipoglucemiante suave y
mejoran la curva de tolerancia a la glucosa en ayunas. (58)
2.14.2.2.5 OSLADINO
Aislado del rizoma de Polypodium vulgare, 500 veces más dulce que la
sacarosa, es una saponina esteroidal aún en investigación. (58)
2.14.2.2.7 XILITOL
38
tiene uso sustituyente del azúcar en obesidad. No es fermentado en ácidos por
las bacterias presentes en la boca y por tanto, a diferencia de la sacarosa, no
es cariogénico. De ahí su extenso empleo en productos tales como cremas
dentales y chicles. El xilitol se utiliza también como un sustituto de la sacarosa
en los alimentos para diabéticos debido a que no se requiere de insulina para
su metabolismo. Su consumo en exceso puede generar efectos laxantes. En
los humanos no se conoce toxicidad aún en dosis de 400 g diarios durante
largos períodos de tiempo. En cambio, se han observado cuadros de
hipoglucemia, pérdida de la coordinación, depresión y colapso, en perros que
ingirieron productos endulzados con xilitol. (58)
39
actualidad, en la Unión Europea (UE) están autorizados los siguientes
edulcorantes bajos en calorías: Acesulfamo-K (E950), Aspartamo (E951), sal
de Aspartamo-Acesulfamo (E962), Ciclamato (E952), Neohesperidina
dihidrocalcona (E959), sacarina (E954), Sucralosa (E955), Taumatina (E957) y
Neotamo (E-961)
40
2.16 INGESTA DIARIA ADMISIBLE (IDA)
2.17 DOSIFICACIÓN
SUCRALOSA 0 -15
ASPARTAMO 0 - 40
CICLAMATO 0- 7
SACARINA 0 -5
ACESULFAMO 0 - 15
ESTEVIA 0-4
41
CAPÍTULO III:
METODOLOGÍA
42
3.1 DISEÑO METODOLÓGICO
3.1.1 DISEÑO
43
3.1.5 CRITERIOS DE INCLUSIÓN
De los animales (ratas machos) que cumplan con los criterios de inclusión y
criterios de exclusión se seleccionaron 36 ratas distribuyéndolas en 6 grupos y
se alimentaron a voluntad durante 4 semanas que dura el experimento y una
semana de aclimatación.
44
3.1.9 ADMINISTRACIÓN DEL EDULCORANTE
CANTIDAD
RATA PESO GR EDULCORANTE
ADMINISTRADA
rata 1 288 sacarina 1,44 mg
rata 2 273 sacarina 1,37 mg
rata 3 275 sacarina 1,38 mg
rata 4 276 sacarina 1,38 mg
rata 5 264 sacarina 1,32 mg
rata 6 255 sacarina 1,28 mg
CANTIDAD
RATA PESO GR EDULCORANTE
ADMINISTRADA
rata 1 282 sucralosa 4,23 mg
rata 2 271 sucralosa 4,10 mg
rata 3 286 sucralosa 4,29 mg
rata 4 288 sucralosa 4,32 mg
rata 5 290 sucralosa 4,35 mg
rata 6 268 sucralosa 4,02 mg
45
3.1.9.3 GRUPO EXPERIMENTAL III
CANTIDAD
RATA PESO GR EDULCORANTE
ADMINISTRADA
rata 1 279 sacarina 1,40 mg
rata 2 256 sacarina 1,28 mg
rata 3 279 sacarina 1,40 mg
rata 4 260 sacarina 1,3 mg
rata 5 288 sacarina 1,44 mg
rata 6 264 sacarina 1,32 mg
CANTIDAD
RATA PESO GR EDULCORANTE
ADMINISTRADA
rata 1 254 sucralosa 3,81 mg
rata 2 259 sucralosa 3,89 mg
rata 3 264 sucralosa 3,96 mg
rata 4 266 sucralosa 3,99 mg
rata 5 274 sucralosa 4,11 mg
rata 6 262 sucralosa 3,93 mg
46
3.1.10.1 GRUPO CONTROL
47
3.2 DISEÑO EXPERIMENTAL
Unidades experimentales
(36 RATAS)
Adaptación de ratas
1 semana
Toma de muestra de
glucosa en sangre inicial
Toma de muestra de
glucosa en sangre a
grupos inducidos
Alimentación normal
1 día
Distribución aleatoria de
tratamientos
48
3.3 METODOS Y TECNICAS
COMPOSICION QUIMICA
PROTEINA (%) 35.00 %
GRASA (%) 5.00 %
HUMEDAD (%) 12.00 %
CENIZA (%) 15.00 %
FIBRA (%) 5.00 %
49
3.3.3 INDUCCIÓN DE DIABETES MELLITUS TIPO 2
Este modelo utiliza la protección parcial que ejerce la nicotinamida (NAD 225
mg) contra el efecto beta-citotóxico de la estreptozotocina (STZ, 55 mg / kg,
dosis única) para crear un nuevo síndrome diabético experimental en ratas
adultas que es semejante a la DM del humano.44 La Estreptozotocina (SZT)
produce insulinismo pancreático por la destrucción progresiva de las células ß
en la rata. Este efecto citotóxico puede ser amortiguado mediante la
administración simultánea de Nicotinamida (NIC) que protege parcialmente a
las células ß del efecto citotóxico de la SZT lográndose así, el desarrollo de un
síndrome similar al de la diabetes tipo II. Para la inducción de diabetes tipo II,
se administró la Estreptozotocina 55 mg/kg de peso, más 225 mg/kg de
Nicotinamida por la misma vía disueltos en 2 ml de suero fisiológico (NaCl
0.9%), por vía intraperitoneal, en una dosis única. Produciéndose así
hiperglicemia experimental extrapolable a la diabetes tipo II.
50
3.3.5 TÉCNICA PARA LA TOMA DE LA MUESTRA DE GLUCOSA
3.4 RECURSOS
Útiles de escritorio
Una computadora
Material de laboratorio
Material de Bioterio.
Alimento para roedores.
Estreptozotocina
Nicotinamida
Suero fisiológico (NaCl 0.9%)
Edulcorantes: sucralosa y sacarosa
51
3.4.3 Recursos biológicos
36 Unidades experimentales
52
CAPÍTULO IV:
RESULTADOS
53
TABLA 1
MEDICIÓN INICIAL
(BASAL)
GRUPOS DE ESTUDIO GLUCOSA
Media D.E.
0.156
P (Anova) (P ≥ 0.05)
N.S.
54
TABLA 2
GRUPO EXPERIMENTAL 1
(SACARINA)
MEDICIÓN
GLUCOSA
Media D.E.
55
TABLA 3
GRUPO EXPERIMENTAL 2
(SACARINA)
MEDICIÓN
GLUCOSA
Media D.E.
56
TABLA 4
GRUPO EXPERIMENTAL 1
(SUCRALOSA)
MEDICIÓN
GLUCOSA
Media D.E.
0.000
P (Anova) (P < 0.05)
S.S.
Tukey I > 30 Días
57
TABLA 5
GRUPO
EXPERIMENTAL 2
(SUCRALOSA)
GRUPOS DE ESTUDIO
GLUCOSA
Media D.E.
58
CAPÍTULO V:
DISCUSIÓN
59
Por lo que respecta a los resultados hallados en el presente estudio confirman
que el valor de glucosa se vio incrementado de manera muy leve en ratas
sanas y diabéticas, posterior al consumo de los edulcorantes seleccionados en
relación con el producto de referencia, ya que los valores obtenidos de glucosa
al finalizar los 15 y 20 días de consumo se observa un incremento entre el 7 –
10 % en comparación a los valores iniciales en los grupos experimentales de
ratas no diabéticas, a los cuales se les administro los edulcorantes sacarina (E
9548) y sucralosa (E 955), en los grupos experimentales de ratas diabéticas se
observa un incremente entre el 4 – 6% en comparación a los valores iniciales
durante los 15 días de la administración los edulcorantes sacarina (E 9548) y
sucralosa (E 955).
Los resultados obtenidos contrastan con los resultados hallados por Flores L,
Romero C (2014): En cuya investigación, se utilizó aspartame, sucralosa,
sacarosa, sacarina y esteviósido porque son los edulcorantes más
ampliamente comercializados, son los más conocidos y los de más fácil
acceso. Sus hallazgos demuestran que sí hay liberación de insulina; como
parte de la estimulación de la fase cefálica de esta hormona. Esto se evidenció
en los valores de insulina que se elevaron significativamente para el
aspartame, esteviósido y sacarosa al minuto 1 post ingesta de la solución
endulzada.
60
iniciales de glucosa en sangre. El efecto obtenido sobre el grupo de ratas
inducidas a diabetes mellitus muestra un incremente entre el 18 – 40% en
comparación a los valores iniciales de glucosa en sangre.
61
edulcorantes presentaron sus valores máximos, mientras que la sacarina
presentó sus valores mínimos. Esta puede ser la razón por la cual la sacarina
presenta aumento en los valores de glucosa en sangre,
También tener en cuenta que los compuesto de los alimentos puede influir en
la absorción y efecto del edulcorante.
62
CAPITULO VI:
CONCLUSIONES Y
RECOMENDACIONES
63
6.1 CONCLUSIONES
64
6.2 RECOMENDACIONES
4.- También sería importante realizar un estudio del mismo tipo pero con un
número de muestra mucho mayor para poder determinar el efecto sobre la
glucosa post ingesta de edulcorantes.
65
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73
ANEXOS
74
ANEXOS I
FICHAS DE CONTROL DE VALORES DE GLUCOSA
DIA INICIAL, DIA 15 Y DIA 20
30 Gr/dia de comida
Grupo 1: agua
Grupo 2: azúcar
Grupo 3 y 5: sucralosa
Grupo 4 y 6: sacarina
Días DIA 1
G. G. G.E
GRUPOS Blanco control G.E sucralosa sacarina G.E.D sucralosa G.E.D sacarina
RATA 1 99 101 98 97 322 355
RATA 2 101 102 97 96 343 253
RATA 3 97 106 93 105 304 287
RATA 4 96 95 100 101 337 247
RATA 5 99 95 105 92 352 262
RATA 6 96 102 102 94 355 342
Días DIA 15
G. G. G.E
GRUPOS Blanco control G.E sucralosa sacarina G.E.D sucralosa G.E.D sacarina
RATA 1 101 115 108 107 344 325
RATA 2 98 110 105 113 338 299
RATA 3 100 109 110 104 353 316
RATA 4 103 112 108 103 353 348
RATA 5 103 109 112 101 324 324
RATA 6 101 115 113 103 354 341
Días DIA 20
G. G. G.E
GRUPOS Blanco control G.E sucralosa sacarina G.E.D sucralosa G.E.D sacarina
RATA 1 96 113 110 105 333 316
RATA 2 100 108 103 115 329 305
RATA 3 98 111 105 108 348 348
RATA 4 101 109 103 105 341 364
RATA 5 101 113 107 109 327 325
RATA 6 96 111 110 105 349 333
75
ANEXO 2
76