Metodos de Siembra y Aislamiento de Microorganismos

METODOS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
I. INTRODUCCION
El proceso de colocar bacterias u otros organismos cultivables en medios de

cultivos recibe el nombre de siembra; esta actividad lo podemos hacer de un
cultivo microbiano a otro se denomina subcultivos repique.
Para el estudio de bacteria y microorganismos cultivables es además necesario

conocer y reconocer la morfología microscópica y macroscópica a partir de su
crecimiento en medios de cultivo y así es posible evaluar el comportamiento de
ellas frente a los diferentes compuestos nutritivos adecuados para favorecer su
desarrollo.
Existen técnicas adecuadas para realizar estos cultivos mediante algunos

elementos importantes para realizar la siembra: el mechero, asa de siembra,
jeringa hipodérmica, hisopo y pipeta.
Con estos materiales es posible iniciar adecuadamente el proceso de cultivo de

las muestras previamente obtenidas.
II. OBJETIVOS
 Practicar las diferentes técnicas de siembra para el desarrollo de cultivos

y subcultivos de hongos y bacterias, en medio de cultivo dispensados en
tubos y cajas Petri, así como en medios de diferente estado y
composición.
 Desarrollar la capacidad de selección de una metodología específica para

la aplicación de las técnicas de siembra de acuerdo al microorganismo.
III. MARCO TEORICO
SIEMBRA
Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo)

en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su
desarrollo y multiplicación. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a
una temperatura adecuada para el crecimiento.
TÉCNICAS DE SIEMBRA
La técnica más usada en el laboratorio de microbiología es la transferencia de

microorganismos de un ambiente hacia un medio de cultivo.
Existen varios métodos para aislar en cultivo puro con el fin de evaluar sus
características en medios de cultivo.
EN CAJA PETRI
Es un buen método para el aislamiento de colonias, mediante esta técnica
buscamos obtener colonias separadas a partir de un inoculo.
Para su realización:
i) Se toma la caja Petri en la palma de la mano y ligeramente inclinada; con la

mano contraria, se manipula el asa previamente esterilizada por flameado directo
a la llama y con ella se recoge el material de cultivo para colocar en un área
periférica de la caja haciendo movimientos circulares para homogenizar el
inoculo.
ii) El asa debe ser flameada nuevamente y enfriada en un lateral del agar, a
continuación, se realiza una estría partiendo de la primera y arrastrando los
microorganismos hacia el extremo contrario de la superficie del agar.
iii) Repetir el paso uno por tres veces, con el objeto de ir reduciendo la carga
microbiana arrastrada por la argolla.
SIEMBRA EN CAJA PETRI POR LA TÉCNICA DE SIEMBRA EN CUADRANTE.
El objetivo de esta técnica, es diluir a medida que se realizan las estrías en el

agar.
Para realizar la siembra la caja se divide en 4 cuadrantes imaginarios; se procede

a esterilizar el asa en el mechero, se toma el inoculo y se empieza a realizar el
rayado en la superficie del agra, en los 4 cuadrantes consecutivos (sin esterilizar
el asa). Las cajas así sembradas se incuban a la temperatura adecuada a la
bacteria.
Con esta técnica se espera que al menos un cuadrante se encuentre colonias de

bacterias aisladas.
TÉCNICA DE SIEMBRA MASIVA.
Es un método para obtener un gran número de microorganismos, en la superficie

del agar. En esta técnica de siembra se utiliza un hisopo, el cual pasa por toda
la superficie de la placa en distintas direcciones y finalmente pasa por el borde
para que el crecimiento de los microorganismos sea totalmente uniforme.
TECNICA DE PUNCION
Método de siembra para observar el crecimiento de hongos y así más adelante

establecer su morfología, así como por la transferencia o subcultivos de cepas
previamente almacenadas conservadas. Consiste en tomar parte del micelio con
un asa micológica, (asa recta), y por punción suave en el centro de la caja
inocular el microorganismo a inocular.
TECNICA DE SIEMBRA EN MEDIOS DE CONTENIDOS EN TUBOS

La siembra en tubos requiere de mayor cuidado, puesto que un solo organismos
contaminantes del aire puede superar en crecimiento al microorganismo de
interés.
POR ESTRIA SIMPLE
Se realiza en un tubo con medio solido inclinado y deslizando el asa sobre la

superficie expuesta del agar de manera que marquen surcos o estrías.
POR SIEMBRA MIXTA
Se realiza en medios inclinados o bisel, haciendo una picadura hasta el fondo

del tubo con asa recta y luego haciendo una siembra en estrías sobre la
superficie expuesta del agar, deslizando el asa por la superficie en bisel
marcando las estrías, de tal manera que; con el asa cargada se realizan los dos
tipos de siembra y sin retirarla del tubo.
POR PICADURA
Se designa con este nombre a este tipo de siembra que se realiza con un asa
recta en tubos con medio sólido y semisólido generalmente sin inclinar. Se
realiza introduciendo el asa cargada con el microrganismo al medio de cultivo
por el centro de la superficie y llegando con el extremo del asa hasta el fondo
del tubo.
EN MEDIO LIQUIDO
Para transferir el material a partir de un medio liquido o solido a otro líquido, se
puede usar un asa bacteriológica, pipetas estériles e hisopos. inocule el
microorganismo en el medio liquido haciéndola rotar del mango.
MATERIALES
 Hazas de siembra.
 Hazas calibradas.
 Pipeta pauster.
 Hisopo.
 Jeringa hipodérmica.
¿PARA QUE SE SIEMBRA?
 Cosechar.
 Conservar.
 Identificar.
 Aislar.
TECNICAS DE AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
AGAR SAL MANITOL (AISLAMIENTO DE STAPHYLOCOCCUS)
Inhibe el crecimiento de otras bacterias al soportar una alta concentración de sal.

En este medio, las peptonas y el extracto de carne proporcionan la fuente de C,
N, vitaminas y minerales.
El D. manitol es el carbohidrato fermentable.
VENTAJA
Capaz de distinguir los microrganismos patogénicos en un corto periodo de

tiempo.
DESVENTAJA
Algunas especies pueden no desarrollarse.
AGAR MAC CONKEY

Selectivo y diferencial para entero bacterias y fermentadoras de lactosa, debido
a los indicadores de pH que contiene el medio. Contiene cristal violeta y sales
biliares como inhibidores de organismos Gram positivos.
Las colonias que no fermentan lactosa permanecen incoloras. Y las que si

fermentan son rosadas y pueden estar rodeadas de una zona de precipitado de
sales.
VENTAJA
Contiene sustancias inhibidoras del crecimiento bacteriano y un indicador que

colorea específicamente determinadas colonias.
DESVENTAJA
Solo para aislamiento de enterobacterias.
UTILIZACIÓN DE CITRATO (AISLAMIENTO DE ENTOROBACTERIAS)
Se detecta con el crecimiento y la alcalinización del medio. Este aumento de pH

se visualiza con el indicador azul de bromo timol que vira al alcalino a pH 7.6.
DESVENTAJA
No sirve para bacterias que no puedan metabolizar el citrato.
SIM
El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas, que puede

ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. Intervienen un conjunto de
enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehído
del reactivo de Kovac’s o de Erlich para originar un compuesto de color rojo.
DESVENTAJA
Sólo para aislamiento de enterobacterias.
EMB: EOSINA AZUL DE METILENO AGAR
La sacarosa está incluida en el medio para detectar a los miembros del grupo
coliformes que fermentan más rápidamente la sacarosa que la lactosa.
VENTAJA
Permite la diferenciación de colonias fermentadoras de lactosa de las no
fermentadoras.
DESVENTAJA
Solo sirve para bacterias que pueden fermentar lactosa.
IV. CONCLUSIONES
 Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra

(inóculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano,
para su desarrollo y multiplicación.
 La técnica más usada en el laboratorio de microbiología es la

transferencia de microorganismos de un ambiente hacia un medio de
cultivo.
 Existen técnicas adecuadas para realizar estos cultivos mediante algunos

elementos importantes para realizar la siembra: el mechero, asa de
siembra, jeringa hipodérmica, hisopo y pipeta.
V.BIBLIOGRAFIA
 Microbiología. Pelczar / Reid / Chan. Cuarta Edición. Editorial Mc Graw –

Hill. México, 1993.http://www.scribd.com/doc/14173487/6.
 AISLAMIENTO-DE-
MICROORGANISMOShttp://www.slideshare.net/fer2895/cultivo-de-
bacterias-hipotesis
 http://www.danival.org/notasmicro/medioscult/_madre_medios.html

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METODOS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

El proceso de colocar bacterias u otros organismos cultivables en medios de

Para el estudio de bacteria y microorganismos cultivables es además necesario

Existen técnicas adecuadas para realizar estos cultivos mediante algunos

Con estos materiales es posible iniciar adecuadamente el proceso de cultivo de

 Practicar las diferentes técnicas de siembra para el desarrollo de cultivos

 Desarrollar la capacidad de selección de una metodología específica para

III. MARCO TEORICO

Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo)

La técnica más usada en el laboratorio de microbiología es la transferencia de

i) Se toma la caja Petri en la palma de la mano y ligeramente inclinada; con la

El objetivo de esta técnica, es diluir a medida que se realizan las estrías en el

Para realizar la siembra la caja se divide en 4 cuadrantes imaginarios; se procede

Con esta técnica se espera que al menos un cuadrante se encuentre colonias de

TÉCNICA DE SIEMBRA MASIVA.

Es un método para obtener un gran número de microorganismos, en la superficie

Método de siembra para observar el crecimiento de hongos y así más adelante

TECNICA DE SIEMBRA EN MEDIOS DE CONTENIDOS EN TUBOS

POR ESTRIA SIMPLE

Se realiza en un tubo con medio solido inclinado y deslizando el asa sobre la

POR SIEMBRA MIXTA

Se realiza en medios inclinados o bisel, haciendo una picadura hasta el fondo

microorganismo en el medio liquido haciéndola rotar del mango.

¿PARA QUE SE SIEMBRA?

AGAR SAL MANITOL (AISLAMIENTO DE STAPHYLOCOCCUS)

Inhibe el crecimiento de otras bacterias al soportar una alta concentración de sal.

El D. manitol es el carbohidrato fermentable.

Capaz de distinguir los microrganismos patogénicos en un corto periodo de

Algunas especies pueden no desarrollarse.

AGAR MAC CONKEY

Las colonias que no fermentan lactosa permanecen incoloras. Y las que si

Contiene sustancias inhibidoras del crecimiento bacteriano y un indicador que

Solo para aislamiento de enterobacterias.

UTILIZACIÓN DE CITRATO (AISLAMIENTO DE ENTOROBACTERIAS)

Se detecta con el crecimiento y la alcalinización del medio. Este aumento de pH

No sirve para bacterias que no puedan metabolizar el citrato.

El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas, que puede

Sólo para aislamiento de enterobacterias.

EMB: EOSINA AZUL DE METILENO AGAR

Solo sirve para bacterias que pueden fermentar lactosa.

 Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra

 La técnica más usada en el laboratorio de microbiología es la

 Existen técnicas adecuadas para realizar estos cultivos mediante algunos

 Microbiología. Pelczar / Reid / Chan. Cuarta Edición. Editorial Mc Graw –

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