Identificación de Azúcares y Curva de Calibración

TP1: Identificación de azúcares y curva
de calibración
Materia: Química Biológica
Docente:
Alumnos: Vañecek, Soledad

Villarino, Wanda
Peppe, Tatiana
Ramos, Sandra
Fecha: (no me la acuerdo)

Introducción
Los hidratos de carbono, carbohidratos o glúcidos, representan la principal fuente de

energía para la célula y son constituyentes estructurales importantes de las membranas
celulares y de la matriz extracelular.
Los glúcidos son polihidroxialdehídos o polihidroxicetonas; y existen tres clases principales:
monosacáridos, oligosacáridos y polisacáridos.
En medio ácido fuerte, los monosacáridos se deshidratan formando anillos furfurales, si se
trata de pentosas; e hidroxi-metil-furfurales, si son hexosas. Estos derivados furfurales,
pueden reaccionar con diferentes compuestos, como fenoles y aminas, para dar complejos
coloreados.
En la primera parte de este trabajo práctico, se lleva a cabo la identificación de
carbohidratos, por medio de tres reacciones; la reacción de Molisch, en la que se determina
la presencia de azúcares, por la reacción de los anillos furfurales con el α-naftol
produciendo un complejo de color púrpura que se visualiza en el seno de la muestra; la
reacción de Fehling, que se utiliza para detectar azúcares reductores y se realiza en medio
básico siendo positivo al producir un precipitado de color rojizo en la solución; la reacción de
Seliwanoff, que se emplea para distinguir aldosas de cetosas, y en este caso los anillos
furfurales reaccionan con resorcinol, generando un producto de color rosa en la muestra, las
cetosas reaccionan rápidamente mientras que las aldosas lo hacen más lentamente.
En la segunda parte del trabajo práctico, se realiza una curva de calibración a partir de los
datos de absorbancia obtenidos, de distintas concentraciones para una solución de
sulforodamida B (SRB) y agua.
Materiales y métodos
● 12 tubos de ensayo con 3 series de 4 azúcares diferentes

● Reactivo de Molisch
● Reactivo de Fehling
● Reactivo de Seliwanoff
● H2O4 concentrado
● 6 tubos Eppendorf de 1.5 mL
● Sulforodamina B (SRB)
Primera parte
En primer lugar, para el reactivo de Molisch, se toman 4 de 12 tubos de ensayo

previamente rotulados, los cuales contienen 3 series de 4 azúcares diferentes (muestras
incógnita), con 1 mL de solución cada uno. En segundo lugar, se agregan dos gotas del
reactivo de Molisch a cada uno de los 4 tubos de ensayo. Finalmente, se agrega 1 mL de
H2SO4 concentrado a cada muestra, dejándolo resbalar suavemente por la pared del tubo, y
se esperó a que reaccione.
Para el reactivo de Fehling, nuevamente se toma una serie de 4 tubos con muestras
incógnita. A continuación se agregan 2 gotas de reactivo en cada tubo. Por último, se
incuba la muestra en un baño termostatizado por cinco minutos hasta que se produzca la
reacción.
Para el reactivo de Seliwanoff, se toman los 4 tubos de ensayo restantes y se agrega 1 mL
de reactivo en cada uno. Finalmente se calienta a ebullición por cinco minutos y se espera
que se produzca la reacción.
Segunda parte
En 6 tubos Eppendorf previamente rotulados, se adicionan 975 μL, 950 μL, 925 μL, 850 μL
y 750 μL de H2O respectivamente, dejando uno con 1000 μL para el blanco (patrón). A
continuación, se agregaron 25 μL, 50 μL, 75 μL, 150 μL y 250 μL de SBR (sulforodamina B)
concluyendo el armado de las soluciones de concentración conocida para posteriormente
medir la concentración de 3 muestras incógnita (X, Y, Z).
Se mide la absorbancia de todas las soluciones en un espectrofotómetro a λ = 565 nm,
para finalmente proceder al armado de una curva de calibración.
Resultados.
Primera Parte.
A B C D
Molisch - + + +
Fehling - + + -
Seliwanoff - + - -
Tabla 1. Resultados de las muestras para los diferentes reactivos.
Sabiendo que las muestras incógnitas se tratan de glucosa, fructosa, manitol y

sacarosa en distinto orden, y teniendo en cuenta los resultados obtenidos (Tabla 1.):
La muestra A concluyó negativa en las tres reacciones (Molisch, Fehling y
Seliwnoff), por lo que no se trata de un azúcar, si no del alcohol de azúcar manosa,
manitol.
La muestra B se trata de un azúcar con poder reductor y de clasificación cetosa; se
identificó como fructosa.
La muestra C es una azúcar aldosa, con poder reductor, por lo que se definió como
glucosa.
Por último, la muestra C resulta una azúcar cetosa que no posee poder reductor,
identificándola como sacarosa.
Segunda Parte.
Para calcular la concentración de SRB a partir de la Absorbancia medida en un
espectrómetro empleamos la ley de Lambert y Beer: C=A/(ε*b) donde:
ε=565nm y b= 1cm.
A(nm) C(SRB)
1 0 0
2 0,049 8,7Ε-5
3 0,1 1,7Ε-4
4 0,163 2,9Ε-4
5 0,320 5,7Ε-4
6 0,496 8,8Ε-4
x 0,022 3,8Ε-5
y 0,221 3,9Ε-4
z 1,012 1,8Ε-3
Tabla 2. Resultados de la medición de Absorbancia y Concentración.
A partir de la tabla 2 se pudo construir una curva de calibración de la absorbancia de SRB

en función de su concentración de los tubos 1-6.

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Fecha: (no me la acuerdo)

Los hidratos de carbono, carbohidratos o glúcidos, representan la principal fuente de

● 12 tubos de ensayo con 3 series de 4 azúcares diferentes

En primer lugar, para el reactivo de Molisch, se toman 4 de 12 tubos de ensayo

Tabla 1. Resultados de las muestras para los diferentes reactivos.

Sabiendo que las muestras incógnitas se tratan de glucosa, fructosa, manitol y

Tabla 2. Resultados de la medición de Absorbancia y Concentración.

A partir de la tabla 2 se pudo construir una curva de calibración de la absorbancia de SRB

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