1 A 9. Prac Toxicologia Ufr 2019

FARMACIA Y BIOQUÍMICA
CARRERA PROFESIONAL DE FARMAIA Y

BIOQUIMICA.
GUIA DE PRÁCTICAS DE
TOXICOLOGÍA Y QUÍMICA LEGAL
LIMA - PERÚ
2018
TOXICOLOGIA Y QUIMICA LEGAL Dra. María Susana Roque Marroquín

1
INTRODUCCION
Hoy en día el mundo contemporáneo utiliza diversas sustancias químicas para la

satisfacción de sus necesidades. Por ejemplo, en la preparación de sus alimentos utiliza
los aditivos alimentarios.
Para la eliminación de los insectos nocivos de los cultivos, se hace uso de los
insecticidas.
Todas estas sustancias si bien es cierto de una parte cumplen un papel benéfico, de otra
ocasionan perjuicios. Tenemos el caso del DDT que siendo utilizado como medio para
combatir la Malaria, ocasiona a su vez efectos nocivos en el medio ambiente de una
magnitud mucho mayor; por lo que es importante el conocimiento de las intoxicaciones
a fin de utilizar el antídoto necesario para conseguir la salud.
En el presente MANUAL DE TOXICOLOGÍA Y QUÍMICA LEGAL, el objetivo ha surgido

como una necesidad de que los estudiantes y toda aquella persona interesada, posea
una herramienta para la realización de las experiencias de laboratorio y sean aplicadas
al área clínica, al área forense a fin de contribuir al tratamiento de una enfermedad, o al
esclarecimiento de un hecho delictuoso ante un cuadro de intoxicación.
Se detalla experiencias de Laboratorio tanto en la investigación de sustancias volátiles,

drogas, venenos metálicos, dosaje etílico y otras más para una mejor comprensión.

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PRÁCTICA N° 1
MANEJO DE MUESTRAS PARA EXAMEN TOXICOLÓGICO
1) OBJETIVO
Explicar al alumno las implicancias del Análisis Químico Toxicológico, así como los diferentes
tipos de muestra problema y su procesamiento. Se emplea el método descriptivo de asesoría
permanente.
MARCO TEÓRICO
El Peritaje Toxicológico de vísceras y tejidos es de gran interés criminalístico, requiere de un
adecuado procedimiento en la toma de la muestra, su fijación, preservación, embalaje y envió
con la solicitud específica de lo que se desea determinar en el examen a informar, porque sus
resultados servirán para una buena administración de justicia.
COMPETENCIAS
- Toma de muestras para el análisis toxicológico
- Identificar el tipo de intoxicación
- Enviar y recepcionar las muestras. Preparar los protocolos de envío y recepción de las muestras
- Actitud del profesional especializado
- Procesamiento de los diferentes tipos de muestra para el análisis toxicológico, adquiriendo los
conocimientos para diferenciar los tipos de agentes tóxicos que pueden causar intoxicaciones.
- Cumplir y hacer cumplir las medidas de bioseguridad.
CONSIDERACIONES EN LA TOMA DE MUESTRA

a. Toda muestra de pieza atómica, vísceras, fragmentos de tejido, órganos, coágulos
sanguíneos, deben tener un tamaño significativo y remitirse al Laboratorio
b. En el caso de Exámenes anatomopatológicos, todas las muestras como vísceras, restos
placentarios, embriones, fetos, órganos completos, deben ser fijados en Formol al 1%, el
volumen del fijador debe ser mayor que el de la muestra cubriéndola con exceso.
c. Cuando se solicita Examen Toxicológico debe remitirse por separado muestras de vísceras,
estómago, con tenido gástrico, sin agregarle ninguna sustancia como preservador o fijador,
ya que estas sustancias tienen poder de interferencia en los análisis toxicológico
d. El recipiente para cualquier muestra debe ser de vidrio o plástico inerte de boca ancha y con
tapa esmerilada o de rosca cerrado y sellado con cinta adhesiva o esparadrapo, lacrado y/
sellado. No utilizar recipientes metálicos.
Las muestras de sangre donde se determina el Dosaje Etílico y Sustancias Estupefacientes
y/o drogas afines, se enviarán en frasco vial lleno, con tapa a presión y rotuladas con cinta
adhesiva
e. En el oficio de remisión debe consignarse, nombre, edad, sexo de la persona o del cadáver;
naturaleza y tamaño aproximado de la muestra y región del cuerpo humano, de donde procede
la muestra. Señalar necesariamente en forma sumaria datos referenciales o antecedentes del
hecho.
Si se ha practicado necropsia es indispensable el Protocolo de Necropsia o en su defecto los
diagnósticos macroscópicos y conclusiones finales. Si el paciente hubiera estado en algún
centro de Salud se envía la Hoja Clínica.
f. Para el embalaje, el recipiente debe colocarse en una caja de madera o cartón grueso rodeado
de viruta, telas o papeles para evitar el movimiento y la consiguiente ruptura o derrame de la
muestra.

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g. Las muestras deberán ser transportadas por Agencia o por un Efectivo Policial o el Perito
Toxicólogo debidamente acreditado, por ningún motivo enviar con personal civil, ya que se
pondrá en duda la identidad de las muestras.
1. TOMA DE MUESTRA, ENVIO Y RECEPCION: El Peritaje Toxicológico de vísceras y tejidos

de interés criminalístico, requiere de un adecuado procedimiento en la toma de la muestra, su
fijación, preservación, embalaje y envío con la solicitud específica de lo que se desea
determinar en el examen a informar.
Materiales: Campana extractora, frascos de vidrio boca ancha, cinta adhesiva, envases de
tamaño diferente, equipos de conservación en frío portátiles
Reactivos: a) Soluciones conservadoras b) H2O D
Muestras de estudio: muestras biológicas, sangre, orina, alimentos, prenda de vestir,
soportes fijos, móviles, armas etc
2. MUESTRAS
Los alumnos deberán traer en la siguiente práctica una muestra correctamente embalada de
acuerdo a las características de la muestra, del análisis solicitado y de las normas legales
para uhn análisis toxicológico.
CUESTIONARIO:
1. ¿Qué Normas legales rigen el Análisis Toxicológico?
2. Procedimiento en caso de la Exhumación de un cadáver
3. Responsabilidad legal del profesional Químico-Farmacéutico en el análisis toxicológico.
PRACTICA Nº 2
EXTRACCION DE VENENOS FIJOS

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MARCO TEORICO
En los análisis toxicológicos son muchas las sustancias que pueden ser identificadas por
lo que se hace necesario la participación de métodos que permitan determinar la
presencia de sustancias no volátiles como alcaloides, barbitúricos, pirazolonas, etc., no
sólo para su identificación sino también para su cuantificación.
La presente experiencia se basa en la solubilidad del principio activo así como de su pH,
por se utiliza una marcha analítica para separar los xenobióticos acidicos y también los
de carácter básico.
COMPETENCIAS
Esta experiencia permitirá a los estudiantes conocer el tratamiento químico para extraer
el tóxico que podría encontrase en una muestra biológica como la sangre, orina etc. Un
vez extraído se procederá a su identificación, a fin de determinar si se trata de una
sustancia toxica.
MATERIALES Y REACTIVOS
1) Vaso de 250 ml. 7) Aro

2) Trípode 8) Soporte Universal
3) Rejilla de asbesto. 9) Pera de bromo
4) Mechero de Bunsen. 10) Viales rotulados.
5) Baño María. 11) Bagueta.
6) Embudo.
REACTIVOS
1) Papel de pH. 6) Sulfato de amonio.
2) Papel de filtro. 7) H2SO4 (20 %).
3) Éter etílico. 8) Amoniaco conc.
4) Cloruro de metileno. 9) Agua destilada.
5) Sol. Saturada de 10) NaOH (1.8%)
11) Bicarbonato de sodio

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PROCEDIMIENTO
1) Tomar el pH de la muestra.
2) Fraccionar la muestra biológica y colocarla en el vaso.
3) Adicionar agua destilada y calentar hasta cerca del punto de ebullición.
4) Agregar sulfato de amonio, seguir calentando y agregar gota a gota ácido
sulfúrico 10%.
5) Filtrar.
6) Llevar a pH de 3 a 4 si fuera necesario con el H 2SO4, y trasvasar a una pera de
bromo.
7) Extraer con éter etílico (10 ml).
8) A la fracción acuosa adicionar gota a gota amoniaco 10% hasta pH 8-9
9) Extraer con cloroformo (05 ml), y desechar la fase acuosa
10) Concentrar el extracto clorofórmico al baño maría, a este extracto se le
denomina: "fracción básica"
11) A la fase etérea, adicionar gota a gota solución de bicarbonato de sodio,
obteniéndose dos nuevas fases, una acuosa constituyendo la fracción ácida
fuerte (A), y una nueva fase etérea.
12) A esta última fase extraer con solución de NaOH (1.8%), obteniéndose una fase
acuosa, que constituye la fracción ácida débil (a) y una fase etérea, que
constituye la fracción neutra (N).
En todas las fracciones indicadas, están presentes los diversos tóxicos orgánicos.
1.1 RESULTADOS
1) Indique las sustancias extraídas a pH ácido.
2) Indique las sustancias extraídas a pH alcalino.
3) Indique las sustancias extraídas a pH neutro
1.2 CUESTIONARIO
1) Fundamente el proceso de extracción realizado.
2) Escriba el procedimiento de cada método de extracción, para tóxicos gaseoso,
volátil, inorgánico, orgánico.
3) Escriba una marcha analítica que involucre los xenobióticos a pH ácido, otra
marcha analítica a pH neutro y otra a pH básico.
PRACTICA Nº 3

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IDENTIFICACION DE VENENOS FIJOS POR CROMATOGRAFIA
MARCO TEORICO
La cromatografía es una técnica de separación de una mezcla de solutos contenidos en un mismo
disolvente, que se basa en la distinta movilidad de cada uno de los solutos en la fase estacionaria,
cuando la mezcla es arrastrada por un fluido (un líquido, un fluido supercrítico o un gas), o fase
móvil, que se mueve en el seno de la fase estacionaria.
Las sustancias incoloras, pueden ponerse de manifiesto mediante diversos métodos, como
puede ser la luz ultravioleta en algunos casos, o formando un compuesto coloreado mediante un
reactivo químico en otros; a este proceso se lo denomina revelado.
De acuerdo con el estado de la fase móvil podemos distinguir los siguientes tipos de
cromatografía (fase móvil - fase estacionaria):
● Cromatografía de gases: Gas-Líquido o Gas-Sólido
● Cromatografía de líquidos: Líquido-Sólido o Líquido-Líquido
● Cromatografía con fluido supercrítico: Fluido supercrítico – Líquido
Rf
Cada componente de la mezcla se mueve siguiendo una línea vertical. La distancia que recorre
es proporcional a la distancia recorrida por el disolvente en el papel, a la constante de
proporcionalidad se le llama Rf (del inglés, "retention factor"):
Así el Rf varía entre 0 y 1 y es 0,5 para aquellas sustancias que han llegado a la mitad del
frente. El Rf es una característica de cada sustancia, y no depende de la longitud del papel ni
de la distancia recorrida por el disolvente. Lógicamente, varía con la temperatura, al cambiar el
tipo de papel y el disolvente.
Cuando se quieren averiguar los componentes de una mezcla por cromatografía, lo que suele
hacerse es sembrar también muestras de cada una de las sustancias que se supone forman la
mezcla. La comparación del aspecto de cada mancha y el valor de Rf con los correspondientes
a las manchas de las sustancias conocidas, permite identificar los constituyentes de la mezcla
Cromatografía sobre capa fina

Se lleva a cabo sobre unas placas de vidrio, aluminio o poliéster, en las que se ha extendido el
medio sobre el que debe moverse la fase móvil, en forma de una capa fina de 0,25 mm
aproximadamente. Este medio ha de escogerse según las sustancias que se desee separar,
frecuentemente se utiliza alúmina o gel de sílice. La muestra se coloca en un extremo.

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El desarrollo del cromatograma se lleva a cabo en una cubeta adecuada donde se ha colocado
la fase móvil. Se revela e identifica la manchas con reactivos específicos..
MÉTODO EXPERIMENTAL
SEPARACION E IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
● Fase móvil : CETONA
● Revelador de color : Cloruro de Paladio
● Estándar : Muestra pura de insecticida
Preparación de la placa de cromatografía

Con un lápiz marcar en la placa los puntos en donde se van a depositar ambas muestras.
Con un capilar, tomar un poco de la disolución orgánica conteniendo la muestra problema 1 y 2,
standares y picar cada uno en la placa de cromatografía varias veces, dejando secar y evitando
que la mancha llegue a alcanzar un diámetro superior a los 5 mm. Para evitar que la mezcla
difunda, vaciar el contenido del capilar lentamente sobre el punto y soplar suavemente cada vez,
para secar el disolvente.
Preparación de la cámara y desarrollo
Colocar 5 mL de fase móvil en la cámara y ambientarlas.
Corrida Cromatografica
Luego de sembar las muestras problema y el estándar se colocar la lámina en la cámara.o cuba
cromatográfica. Retirar la lámina al llegar al frente de solvente y evaporar dicho solvente (fase
móvil).
Observación luz UV
Colocar las placas que han corrido en la cuba, bajo la luz UV, observar
Revelado de Cromatoplacas
Pulverizar cromatoplacas con el revelador cloruro de paladio y secar la lámina. Medir el Rf del
standard y del compuesto correspondiente
CUESTIONARIO
1. Dibujar en cada caso la placa con los resultados observados.

2. Calcular el Rf de cada uno de los puntos obtenidos.
3. Indicar cuál sería la mezcla de disolventes más adecuada para realizar la separación.
4. ¿Qué mecanismos de separación cromatográfica existen?
5. ¿Qué diferencias existen entre Cromatografía de Gases y Cromatografía por HPLC?
6. En que pH se desenvolvió mejor la muestra problema.
PRACTICA Nº 4
ANALISIS TOXICOLOGICO DE BENZODIAZEPINAS EN ORINA
1 MARCO TEORICO

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Las benzodiacepinas, fármacos tranquilizantes menores del sistema nervioso central y que
son indicados en los casos de ansiedad, Calman la tensión y alivian el insomnio. A dosis
algo elevadas provoca somnolencia y aún ataxia. Por vía I.M. produce sueño sin llegar a la
anestesia. Es anticonvulsivante en especial el Diazepam.
Para investigar la presencia de las benzodiacepinas en esta sesión es con la finalidad de

conocer la posibilidad de intoxicación par abuso de estas sustancias y cuyo resultado
contribuye a determinar una situación de índole Criminalístico, es decir especialmente en el
caso de los denominados "pepazos".
2 COMPETENCIAS
Al realizar el examen toxicológico se deberá separar y luego identificar estas sustancias en
las muestras de orina y en sangre con la finalidad de conocer el estado de toxicidad de una
persona cuando se ha consumido un compuesto benzodiazepínico.
3 MATERIALES
1) Vaso de 250 ml 9) Viales
2) Bagueta 10) Capilares
3) Pera de bromo 11) Láminas de vidrio
4) Cámara fotográfica 12) Baño maría.
5) Pipeta de 5 ml 13) Mechero
6) Tubos de ensayo 14) Balon
7) Varilla de vidrio 15) Tapón de jebe
8) Gradilla 16) Probeta de 25 ml
REACTIVOS
1) HCl concentrado 5) Sulfanilato Na al 0.1%
2) HCI (6N) 6) Fuente de luz U.V.
3) NaNO2 (0.1%) 7) H2SO4 (2N)
4) Sulfato de amonio (0.5%) 8) Éter etílico
4 PROCEDIMIENTO
En un balón adicionar 20 ml de orina, luego 4 ml de HCl concentrado y calentar par 30
minutos. Enfriar y alcalinizar. Luego extraer con 5 ml de éter etílico. Concentrar.
Identificación por cromatografía de capa fina.-
a) Fase estacionaria : Silicagel G
b) Fase móvil : Metanol: NH3 (100: 1.5)
c) Reveladores : lodoplatinato
Luz U.V. a 254 nm.
Formación de un colorante azoico.
Sembrar el standard y la muestra problema, colocar en la cámara de solventes, hasta llegar

al frente de solvente y retirar de la cámara. Pulverizar con la solución de HCI (6N) y secar.
Luego pulverizar con NaNO2 y secar. Pulverizar con la solución de sulfato de amonio y secar,

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luego pulverizar con la solución de sulfanilato de sodio, observándose la coloración

correspondiente según el tipo de benzodiazepina.
5. RESULTADOS
1) Indique el color observado en su placa cromatográfica.
2) Indique el Rf de la sustancia inalterada y del metabolito
3) Indique el Rf de la sustancia patrón utilizado
6. CUESTIONARIO
1) Escriba la reacción química de acuerdo al método.
2) Indicar otros métodos operatorios de examen toxicológico de una benzodiazepina.
3) Escriba una técnica por Cromatografía de gas para compuestos benzodiacepinicos.
4) Reacción química de las benzodiacepinas con el lodoplatinato acidificado
5) Escriba el nombre de diversas especialidades farmacéuticas que presentan un solo
principio activo, y de otras cuando estén asociadas
PRACTICA Nº 5
DETERMINACION DE LAS FENOTIACINAS EN ORINA.
1. MARCO TEORICO
Los fármacos fenotiazínicos fundamentalmente como tranquilizantes mayores y que son indicados en
el tratamiento de enfermedades nerviosas.
Se analizará la muestra biológica, orina o sangre para lo cual se procede a la extracción líquido y luego
de separar se concentra y estar apto para su identificación por cromatografía de capa fina.
2. COMPETENCIAS

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Al realizar el examen toxicológico se deberá separar y luego identificar estas sustancias en las muestras
de orina y en sangre con la finalidad de conocer el estado de toxicidad de una persona cuando ha
consumido estos fármacos.
3. MATERIALES
- Vaso 250 mL - Baqueta - Pera de Bromo - Frasco de vidrio con tapa - Mechero
- Probeta 25 mL - Capilares - Papel de filtro - Atomizador - Cuba cromatografica
Equipos: - Lámpara UV - Cocinilla
REACTIVOS
- HCl 10% - Papel indador - Eter - Cloroformo - Placas cromatograficas
- NH4OH 10% - Reactivo FPN (FeCI3,HClO4,HNO3) - CHCI3: EtOH (70:30)
Estándares: Clorpromacina: Largactil en amp. - Levopromacina: Sinogan en amp.
- Tioproperacina: Magepfil en amp
4. PROCEDIMIENTO
EXTRACCION:
En un vaso agregar 20 ml de orina y ajustar a pH alcalino con amoniaco a pH de 8 a 9.
Colocar en la pera de bromo y extraer con 05 ml de éter etílico, separando la fase etérea.
Concentrar el extracto al vacío o en atmósfera de nitrógeno.
IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA.-
a) Fase estacionaria : Silicagel "G".
b) Fase móvil CHCI3 Etanol (7:3) o CHCl3 Metanol (7:3).
c) Revelador de color : Reactivo FPN
Procedimiento.-
En la lámina sembrar el Standard respectivo y el extracto etéreo. Colocar la lámina en la cámara.
Retirar la lámina al llegar al frente de solvente y evaporar dicho solvente (fase móvil).
Pulverizar con el revelador FPN y secar la lámina.
Medir el Rf del Standard y del compuesto correspondiente.
5. RESULTADOS
1) Indique el color observado en el proceso de revelado.
2) Indique el Rf del Standard y del metabolito.
6. CUESTIONARIO
1) Escriba la reacción química de este proceso.
2) Escriba otras técnicas de revelado, así como la técnica por HPLC.
3) Escriba la reacción química con una pirazolona.
4) Dar 04 ejemplos de Especialidades farmacéuticas con un sólo principio activo y 04 con
Especialidades asociadas.
PRACTICA Nº 6
ANALISIS y DETERMINACIÓN DE BARBITÚRICOS EN ORINA.
MARCO TEORICO
Los barbitúricos fármacos que actúan como sedantes del S.N.C.

Sus efectos en el organismo pueden ir desde la sedación hasta la anestesia dependiendo
de la dosis y del tipo de barbitúrico.

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5.2. COMPETENCIAS
Se identificará el barbitúrico en una muestra biológica, orina o sangre iniciando desde la

extracción liquido - líquido para luego separar el principio activo y concentrar.
Seguidamente se procede a la identificación por cromatografía de capa fina.
5.3. MATERIALES
2) Vaso de 250 ml 10) Mortero

3) Bagueta 11) Viales
4) Pera de bromo 12) Pulverizador
5) Frasco de vidrio con tapa 13) Baño María
6) Probeta de 25 ml 14) Mechero
7) Tubos de ensayo 15) Pinzar, aro.
8) Gradilla 16) Soporte universal
9) Capilares
REACTIVOS
1) HCl (10%) 6) Estándares:
2) Acetona-Benceno (1:1) - Fenobarbital
3) Benzina de petróleo - Pentobarbital
4) Silicagel G - Tiopental
5) Reactivo de Zwicker 7) Amoniaco

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5.4 PROCEDIMIENTO
EXTRACCION:
En un vaso adicionar 40 ml de orina y acidificar con una solución de HCI (10%) a pH 3.

Trasvasar a una pera de bromo y extraer con 05 ml de éter etílico. Separar la capa etérea.
Y concentrar casi a sequedad.
IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA

b) Fase móvil : Acetona - Benceno (1:1) o
CHCI3 - acetona (9:1)
c) Revelador : Reactivo de Zwicker
METODO OPERATORIO.-
Sembrar en la lámina el standard respectivo y la muestra (extracto etéreo). Colocar la

lámina en la cámara. Retirar lamina al llegar al frente de solvente y evaporar dicho
solvente. Pulverizar con el reactivo de Zwicker y secar la lámina. Se puede someter a
vapores de amoniaco para visualizar mejor las manchas.
Medir el Rf del standard y del compuesto correspondiente (muestra).
5.5. RESULTADOS
1) Que significa el color observado al revelarse la lámina ?

2) Indique el Rf del standard y del metabolito y/o sustancia inalterada.
5.6. CUESTIONARIO
1) Indique que otros reveladores se pueden utilizar en este proceso cromatográfico.

2) Escriba el procedimiento y la reacción de Parri.

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PRACTICA Nº 7
ANALISIS TOXICOLOGICO DE CANNABINOIDES EN ORINA
MARCO TEORICO
Los Cannabinoides son los principios activos de la especie vegetal cannabis sativa cuya
estructura química es de naturaleza terpenica.
COMPETENCIAS.
En el examen toxicológico de una persona dependiendo del consumo y del análisis

toxicológico permitirá determinar la presencia de estas sustancias en las muestras
biológicas sea sangre orina u otros tejidos.
Para ello se deberá separar el principio activo de los otros componentes biológicos para
recién identificar estos Cannabinoides.
MATERIALES
1) Vaso de 250 ml. 8) Capilares

2) Pera de bromo 9) Láminas de Silicagel
3) Cámara de solventes 10) Pulverizador
4) Probeta de 25 ml 11) Viales
5) Gradilla 12) Baño María
6) Tubos de ensayo 13) Lámina de vidrio
7) Pipeta de 5 ml 14) Cocinilla.
REACTIVOS
1) HCI al 10% 7) Sol. de MgNO2 (10%)
2) Sulfanilato Na 8) HCI concentrado
3) Benceno-Hexano (1:1) 9) Muestra: orina.
4) Éter etílico 10) Papel de pH.
5) KOH [10N] 11) Bencidina
6) St. Cannabinoide 12) Fast-blue

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PROCEDIMIENTO
1) Extracción previa hidrólisis:
En un vaso colocar 15 ml de orina y agregar 3 ml KOH [10N] y calentar por 20 minutos a

50°C con agitación ocasional. Acidificar con solución de HCI (10%) y extraer con 05 ml
de éter etílico.
2) Identificación por cromatografía de capa fina :
● Fase estacionaria: papel de filtro.

● Fase móvil: Benceno-hexano (1:1)
● Revelador: colorante azoico.
Preparación del revelador:

Disolver 50 mg de sulfanilato de sodio, agregar 20 ml de solución NaNO2 (10%) en bario
de hielo, y 1 ml de HCI concentrado.
Procedimiento:
En la lámina, sembrar el standard de Cannabinoide, y el extracto etéreo. Colocar la
lámina en la cámara, y retirarla al llegar al frente de solvente. Evaporar y secar. Pulverizar
con el revelador y secar la lámina.
Medir el Rf del standard y la sustancia correspondiente del extracto.
RESULTADOS
1. Indique el Rf del Cannabinoide st. Y de la muestra

2. Identifique el Cannabinoide.
CUESTIONARIO
1. Escriba las reacciones químicas en la preparación del revelador azoico.

2. Escriba la reacción química en el proceso del revelado.
3. Escriba otras técnicas de revelado.
4. Escriba las fórmulas químicas de los otros constituyentes de la especie de Cannabis
(diferentes al THC, CBD, CBN).

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PRACTICA Nº 8
ANALISIS TOXICOLOGICO DE LA METILBENZOILECGONINA
MARCO TEORICO
La cocaína o metilbenzoílecgonina es uno de los alcaloides de la hoja de la coca que se

detecta al consumir las hojas de la coca o cuando se consume por otras vías como por
la vía inhalatoria, al fumar o por vía endovenosa.
Se detecta principalmente como metabolito a metilecgonina éster, la benzoilecgonina y

en menor cantidad la ecgonina, la norcocaína entre otros.
Para identificar la cocaína inalterada o sus metabolitos se deberá aislar estas sustancias
en relación a los otros componentes biológicos (orina, sangre) entre otros.
COMPETENCIAS
Al realizar el examen toxicológico se deberá separar y luego identificar estas sustancias

en las muestras de orina y en sangre con la finalidad de conocer el estado de toxicidad
de una persona cuando ha consumido la cocaína.
MATERIALES
1) Vaso de 250 ml 8) Pulverizador

2) Bagueta 9) Baño María
3) Pera de bromo 10) Soporte Universal
4) Cámara cromatográfica. 11) Pinza, aro.
6) Capilares 13) Viales.
7) Láminas para TLC
REACTIVOS
1) Amoniaco. 6) R. de Draggendorff
2) Cloroformo 7) Estándares:
3) Silicagel G - Cocaina
4) Metanol: NH3 (100:1.5) - Benzoilecgonina
5) Papel pH cromático
PROCEDIMIENTO
Extracción líquida-líquida

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En un vaso adicionar 20 ml de orina y ajustar a pH 8 a 9 con amoníaco. Colocar en una

pera de bromo y extraer 2 veces en igual cantidad de cloroformo (5 ml c/vez). Juntar los
extractos y evaporar el solvente al vacío o en atmósfera de nitrógeno.
Identificación por Cromatografía de Capa fina
a) Fase estacionaria: Silicagel G

b) Fase móvil : Metanol NH3 (100:15)
c) Revelador : Reactivo de Draggendorff
d) Método Operatorio.-
Sembrar en la lámina cromatográfica los standards y el extracto redisuelto en metanol.

Retirar la lámina al llegar al frente de solvente.
Las placas deben ser secadas antes del revelado a la temperatura del medio ambiente
o al aire caliente o en una estufa a 120°C por 10 minutos.
Luego del revelado con el R. de Draggendorff, enfriar y pulverizar con una solución de
H2SO4 aI 10%.
RESULTADOS
1) Indique el color de las manchas de la lámina cromatográfica en el revelado.

2) Indique el Rf de las manchas de la lámina.
CUESTIONARIO
1) Escriba la reacción química de la cocaína entera y de sus metabolitos con el reactivo

de Draggendorff.
2) Escriba la reacción química con el reactivo de lodoplatinato.
3) Indique los constituyentes del reactivo de Draggendorf modificado por Vágujfalvi y la
modificación por Munier.
4) Indique las variedades de hoja de coca, sus constituyentes químicos y las fórmulas
químicas correspondiente.
6) Qué es el cocatileno?.
PRACTICA Nº 9
ANALISIS TOXICOLOGICO EN OPIACEOS

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MARCO TEORICO
Aislar la sustancia inalterada y los metabolitos de la muestra de orina a fin de identificar

las sustancias tóxicas que pudiera haber sido administrados a una persona.
COMPETENCIAS
Al realizar el examen toxicológico se deberá separar y luego identificar estas sustancias

en las muestras de orina y en sangre con la finalidad de conocer el estado de toxicidad
de una persona cuando se ha consumido un compuesto opiáceo.
MATERIALES
1) Vaso de 250 ml 7) Gradilla

2) Bagueta 8) Capilares
3) Pera de bromo 9) Láminas de vidrio
4) Cámara cromatográfica 10) Baño María
6) Tubos de ensayo
REACTIVOS.-
1) HCI concentrado 6) Silicagel G
2) Papel pH cromático 7) St. Morfina
3) Amoníaco 8) St. Codeína
4) CHCl3-isopropanol(9:1) 9) Codipront (cápsulas)
5) Acetona, etanol, NH3 (22: 22:3)
PROCEDIMIENTO
Extracción:
En un vaso agregar 20 ml de orinaa y adicionar 1 ml de HCI concentrado y calentar al

Baño María por aproximadamente una hora.
Ajustar a pH 8 a 9 con amoniaco y extraer con 05 ml del sistema de extracción (CHCI 3-
isopropanol).
Separar la capa orgánica y concentrar casi a sequedad en ambiente de nitrógeno o al

vacío.
Redisolver el residuo en metanol (0.1 ml).

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Identificación por Cromatografía de capa fina

b) Fase móvil : Tolueno: Acetona: Etanol: NH3 22ml 03 ml 01ml
c) Revelador : Reactivo de Draggendorf
d) Método Operatorio:
Sembrar en la lámina el St. respectivo y el extracto de la muestra. Colocar la lámina en

la cámara cromatográfica. Retirarla al llegar al frente de solvente y evaporar. Pulverizar
con el revelador y secar a lámina.
Medir el Rf del St. y de la mancha correspondiente del extracto.
RESULTADOS
1) Indicar el color observado.

2) Indique el Rf del standard y de sus metabolitos.
CUESTIONARIO
1) Escriba la reacción química en el revelado.

2) Indicar que otros reveladores se utilizan.
3) Reacción química de la morfina con el reactivo de Marquis.
4) Escriba 04 ejemplos de Especialidades farmacéuticas conteniendo alcaloides
opiáceos sintéticos, y sus fórmulas químicas correspondientes.

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FARMACIA Y BIOQUÍMICA

CARRERA PROFESIONAL DE FARMAIA Y

TOXICOLOGIA Y QUIMICA LEGAL Dra. María Susana Roque Marroquín

Hoy en día el mundo contemporáneo utiliza diversas sustancias químicas para la

En el presente MANUAL DE TOXICOLOGÍA Y QUÍMICA LEGAL, el objetivo ha surgido

Se detalla experiencias de Laboratorio tanto en la investigación de sustancias volátiles,

TOXICOLOGIA Y QUIMICA LEGAL Dra. María Susana Roque Marroquín

TOXICOLOGÍA Y QUÍMICA LEGAL

CONSIDERACIONES EN LA TOMA DE MUESTRA

TOXICOLOGIA Y QUIMICA LEGAL Dra. María Susana Roque Marroquín

1. TOMA DE MUESTRA, ENVIO Y RECEPCION: El Peritaje Toxicológico de vísceras y tejidos

EXTRACCION DE VENENOS FIJOS

TOXICOLOGIA Y QUIMICA LEGAL Dra. María Susana Roque Marroquín

1) Vaso de 250 ml. 7) Aro

TOXICOLOGIA Y QUIMICA LEGAL Dra. María Susana Roque Marroquín

TOXICOLOGIA Y QUIMICA LEGAL Dra. María Susana Roque Marroquín

IDENTIFICACION DE VENENOS FIJOS POR CROMATOGRAFIA

Cromatografía sobre capa fina

TOXICOLOGIA Y QUIMICA LEGAL Dra. María Susana Roque Marroquín

Preparación de la placa de cromatografía

1. Dibujar en cada caso la placa con los resultados observados.

ANALISIS TOXICOLOGICO DE BENZODIAZEPINAS EN ORINA

TOXICOLOGIA Y QUIMICA LEGAL Dra. María Susana Roque Marroquín

Para investigar la presencia de las benzodiacepinas en esta sesión es con la finalidad de

Sembrar el standard y la muestra problema, colocar en la cámara de solventes, hasta llegar

TOXICOLOGIA Y QUIMICA LEGAL Dra. María Susana Roque Marroquín

luego pulverizar con la solución de sulfanilato de sodio, observándose la coloración

TOXICOLOGIA Y QUIMICA LEGAL Dra. María Susana Roque Marroquín

ANALISIS y DETERMINACIÓN DE BARBITÚRICOS EN ORINA.

Los barbitúricos fármacos que actúan como sedantes del S.N.C.

TOXICOLOGIA Y QUIMICA LEGAL Dra. María Susana Roque Marroquín

Se identificará el barbitúrico en una muestra biológica, orina o sangre iniciando desde la

2) Vaso de 250 ml 10) Mortero

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En un vaso adicionar 40 ml de orina y acidificar con una solución de HCI (10%) a pH 3.

IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA

a) Fase estacionaria : Silicagel G

Sembrar en la lámina el standard respectivo y la muestra (extracto etéreo). Colocar la

1) Que significa el color observado al revelarse la lámina ?

1) Indique que otros reveladores se pueden utilizar en este proceso cromatográfico.

TOXICOLOGIA Y QUIMICA LEGAL Dra. María Susana Roque Marroquín

ANALISIS TOXICOLOGICO DE CANNABINOIDES EN ORINA

En el examen toxicológico de una persona dependiendo del consumo y del análisis

1) Vaso de 250 ml. 8) Capilares

TOXICOLOGIA Y QUIMICA LEGAL Dra. María Susana Roque Marroquín

1) Extracción previa hidrólisis:

En un vaso colocar 15 ml de orina y agregar 3 ml KOH [10N] y calentar por 20 minutos a

2) Identificación por cromatografía de capa fina :

● Fase estacionaria: papel de filtro.

Preparación del revelador:

1. Indique el Rf del Cannabinoide st. Y de la muestra

1. Escriba las reacciones químicas en la preparación del revelador azoico.

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ANALISIS TOXICOLOGICO DE LA METILBENZOILECGONINA

La cocaína o metilbenzoílecgonina es uno de los alcaloides de la hoja de la coca que se

Se detecta principalmente como metabolito a metilecgonina éster, la benzoilecgonina y

Al realizar el examen toxicológico se deberá separar y luego identificar estas sustancias

1) Vaso de 250 ml 8) Pulverizador

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En un vaso adicionar 20 ml de orina y ajustar a pH 8 a 9 con amoníaco. Colocar en una

Identificación por Cromatografía de Capa fina

a) Fase estacionaria: Silicagel G