RECUENTO DE GLOBULOS BLANCOS POR MILIMETRO CUBICO UTILIZANDO

LA CAMARA DE NEUBAUER Y LA IMPORTANCIA DEL REACTIVO DE TURK

1. OBJETIVOS:

 Obtener muestra de sangre humano en tubo vacutainer tapa lila.

 Conocer y manejar la cámara de Neubauer para conteo de
glóbulos blancos.
 Determinar el conteo de glóbulos blancos en la cámara de
Neubauer.

2. MATERIALES:

MATERIAL BIOLÓGICO:
 Sangre de humano

MATERIAL NO BIOLÓGICO:
 Tubos Vacutainer
 Micropipetas de 200 ul
 Tubo de ensayo estériles
 Gradilla
 Microscopio
 Cámara de Neubauer y Laminillas
 Alcohol y Algodón
 Liga
 Reactivo de Turk
 3. PROCEDIMIENTO:

1. Para el recuento de leucocitos, contar las células de los cuatro

cuadrados y dividir por cuatro.
2. Se realiza una dilución 1/20 (380 ul de la solución de Turk + 20 ul de
sangre) en un vial estéril.

C C

3. De ahí se coloca 10 ul a la cámara de Neubauer con la laminilla,

dejar reposar durante 3 minutos y se realiza el conteo de los glóbulos
blancos, primero observar con el objetivo de 10x, y luego enfocar con
el de 40x.

CUESTIONARIO:
1. ¿Fundamente cómo se obtiene el factor volumen (0,4 mm3 ) del conteo
celular de glóbulos blancos?

Para la obtención del Factor de volumen para recuento de

Leucocitos:
(1mm x 1mm)= 1 𝑚𝑚2 de cada cuadro en azul
(1 𝑚𝑚2 x 4 cuadros)= 4 𝑚𝑚2
(4𝑚𝑚2 de área total de recuento) (0.1 mm profundidad)= 0.4
𝑚𝑚3 de volumen total
2. ¿Porqué se coloca a la muestra de sangre el reactivo de Turk,
Fundamente?

Porque en su composición tiene ácido acético, lo cual provoca la lisis de

los eritrocitos, pero, no de los leucocitos, el reactivo contiene además
unas gotas de violeta de genciana o azul de metileno, el cual permite
reconocer fácilmente a los leucocitos, ya que tiñen ligeramente su
núcleo, permitiendo observarlos más fácilmente.

3. ¿Señala cuales son los valores normales del conteo de leucocitos/mm3 ?

4. ¿Explicar cómo se realiza un Hemograma y su interpretación?

Para realizar este análisis, se comienza por tomar una muestra de
sangre, usualmente en la vena del antebrazo, desinfectando la zona de punción
con ayuda de un antiséptico y colocando un torniquete en la parte superior del
brazo para frenar el flujo sanguíneo de la vena. Así, la vena se llena de sangre
en la parte inferior y puede insertarse la aguja para extraer la sangre que será
almacenada en un tubo de ensayo. Por último, se deben retirar la aguja y el
torniquete y ejercer presión sobre la zona de punción para reducir el sangrado.
Es fundamental practicarse un hemograma completo cada cierto tiempo para
garantizar que los niveles de glóbulos blancos, glóbulos rojos y plaquetas en la
sangre estén bajo control, así como para diagnosticar el padecimiento de
trastornos sanguíneos y otras patologías.

INTERPRETACIÓN:
Glóbulos rojos:
Valores normales: 4.500.000-5.900.000 /ml en varones
4.000.000-5.200.000/ml en mujeres
Disminución: Anemia
Aumento: Poliglobulia
GLÓBULOS BLANCOS:
Valores Normales: 4.500 – 11.000 ul
Exceso: Leucocitosis
Disminución: Leucopenia.
PLAQUETAS:
Valores Normales: 150.000-400.000/ mm3.
Exceso: Trombocitosis
Disminución: Trombocitopenia
5. ¿Explicar que diferencias morfológicas presentan la Serie Leucocitaria?
Dibujar.
PROCESO DE AGLUTINACIÓN CON SUEROS ANTI-A Y ANTI-B DE PERSONAS
CON GRUPOS SANGUINEOS b Y A CON FACTOR Rh POSITIVOS Y NEGATIVOS

1. OBJETIVOS:

 Obtener y reconocer los Grupos Sanguíneos A, B, O y AB con

factor Eh positivo.
 Conocer y reconocer el proceso de Aglutinación en los grupos
Sanguíneos ABO.
 Reconocer la importancia de las aglutinaciones en las
transfusiones sanguíneas.

2. MATERIALES:

MATERIAL BIOLÓGICO:
 Sangre Total de grupos sanguíneos: A, B, O positivos.
 Suero sanguíneo: A, B, O Positivo y B negativo
 Sangre Total del grupo sanguíneo B Negativo

MATERIAL NO BIOLÓGICO:
 Laminas portaobjetos
 Alcohol y Algodón
 Gradillas y Crioviales
 Tubos Vacutainer tapa lila con anticoagulante
 Tubos Vacutainer tapa toja sin anticoagulante
 0020Agujas de 21 y ligas
 Pipeta Pasteur
 Micropipetas de 100 ul
 Reactivo Grupos Sanguíneos ABO: contiene anticuerpos
monoclonales
3. PROCEDIMIENTO:

1. Obtener la sangre venosa en los tubos tapa lila y roja

2. Luego determinar el grupo sanguíneo ABO de cada muestra obtenida
3. Centrifugar la muestra de sangre venosa del tubo tapa roja hasta
obtener el suero.

4. Colocar el suero con una micropipeta en crioviales estériles

5. En una lámina portaobjeto colocar 100 ul de sangre venosa del grupo
sanguíneo A y mezclarlo con 100 ul de suero del grupo sanguíneo B
y observar. Realizar el mismo procedimiento, pero con diferentes
sangre y suero.

Suero del grupo sanguíneo A+ + Sangre del grupo Sanguíneo B+

RESULTADO: AGLUTINO
Sangre del grupo sanguíneo A+ + Suero del grupo sanguíneo B+
RESULTADO: AGLUTINO

Sangre del grupo sanguíneo O+ + Suero del grupo sanguíneo A+

RESULTADO: NO AGLUTINO

Suero del grupo sanguíneo O+ + Sangre del grupo sanguíneo A+

RESULTADO: AGLUTINO
Sangre del grupo sanguíneo O+ + Suero del grupo sanguíneo B+
RESULTADO: NO AGLUTINO

Suero del grupo sanguíneo O+ + Sangre del grupo sanguíneo B+

RESULTADO: NO AGLUTINO
CUESTIONARIO:
1. ¿Fundamenta en que consiste la aglutinación Activa y Pasiva?
Son útiles para la detección de antígenos y anticuerpos. Su fundamento es
inducir una agrupación microscópicamente visible de partículas, causada por
interacciones antígeno anticuerpo que forman puentes entre ellas.
AGLUTINACION ACTIVA: anticuerpos dirigidos contra componentes de las
partículas (eritrocitos, bacterias). Un ejemplo de este caso es la determinación
de grupos sanguíneos.

AGLUTINACION PASIVA: los anticuerpos se dirigen contra moléculas que se

han adherido intencionalmente a una partícula que actúa como medio de soporte
pasivo (látex).
Una variante es la aglutinación pasiva reversa, en donde lo que se detecta es el
antígeno y las partículas están recubiertas por el anticuerpo.

2. ¿Dónde encontramos la sustancia precursora Fucosa?

Es el azúcar que se añade a algunos tipos de glicoproteínas, en el aparato de

Golgi, cuando tiene lugar el proceso de glucosilación.
Este tipo de monosacáridos forma parte de cadenas de polisacáridos junto con
otras moléculas, formando las llamadas cadenas mixtas. En este caso suelen
estar presente sobre los tejidos humanos y animales. También pueden ser
hallados sobre ciertas plantas y algas. De allí proviene su nombre, de un
determinado grupo de algas. Este tipo de monosacáridos se encuentra presente
en la formación de los glucósidos y lípidos y actúan asimismo en la comunicación
intercelular

3. ¿Si un hombre de grupo sanguíneo AB se casa con una mujer de grupo A,

cuyo padre de la mujer era de grupo sanguíneo O? Qué grupos sanguíneos
se puede esperar entre sus hijos y con qué frecuencia en porcentajes

Considerando que el tipo sanguíneo O es recesivo, y los grupos A y B son

codominantes entre sí, si es así, el grupo sanguíneo O no se va a manifestar por
ser recesivo, el abuelo tenía recesividad O, entonces la abuela era dominante B,
y el hijo es dominante B y la mama es también dominante AB, hay un 50 % de
que el pequeño sea dominante B, 25% AB y 25% A, no será O porque no se
manifiesta.
Definimos los siguientes cuadros con las posibilidades de grupos sanguíneos de
los hijos de esta pareja:
4. ¿Explica mediante un esquema como se puede obtener anticuerpos
policlonales, utilizando animales de experimentación?

El método usual para producir ANTICUERPOS POLICLONALES

experimentalmente consiste en: La inoculación de animales de experimentación
con preparaciones del Antígeno (inmunógeno) purificado total o parcialmente La
administración de un inmunógeno in vivo estimula diferentes células del sistema
inmune, dando origen a una población mixta de anticuerpos derivados de un
número variado de clones de linfocitos B (policlonal).
El suero de un animal inmunizado contiene estos anticuerpos y es referido como
antisuero policlonal. La producción de anticuerpos policlonales depende en gran
medida de la calidad, cantidad y pureza del inmunógeno así como la
especificidad y sensibilidad del ensayo donde se desee utilizar el anticuerpo.
Muchos Anticuerpos usados en Técnicas Inmunoquímicas son producidos por
inmunización repetida de un animal, por ejemplo: conejo, cabra, oveja, gallina,
ratón, cobayo.
5. ¿Explica en que técnicas inmunoserologicas se realiza lavados de glóbulos
rojos?
Pruebas utilizadas:
NEUTRALIZACIÓN
La neutralización es una prueba que se utiliza para detectar anticuerpos que
neutralizan la toxicidad de algunas moléculas o la inefectividad de los virus o las
bacterias. Estos anticuerpos se fijan a la molécula tóxica e impiden que se
produzca el daño. Como prueba para evaluar la presencia de anticuerpos
neutralizantes se toma un modelo biológico, como es el caso del ratón, al que se
le administra un suero para estudiar y posteriormente se le inocula la toxina. Si
se observa daño por la toxina, indica que el suero inoculado inicialmente no
contenía anticuerpos neutralizantes; si no se observa daño, indica que el suero
inoculado contenía anticuerpos neutralizantes, los cuales se combinaron con la
toxina (reacción antígeno-anticuerpo) y la neutralizaron.

FIJACIÓN DEL COMPLEMENTO

La prueba de fijación del complemento se usa para demostrar la presencia o no
de anticuerpos en el suero sanguíneo de un paciente y depende de dos
reacciones distintas. Esencialmente el suero del paciente se pone en un tubo de
ensayo y se agrega el antígeno correspondiente (para el que se quiere buscar el
anticuerpo). Se agrega entonces el complemento (suero fresco de cobayo). Si el
antígeno y el anticuerpo son específicos, ocurre la reacción y se fija el
complemento (se gasta todo). Posteriormente, se agregan glóbulos rojos de
carnero y antisuero con anticuerpos para los mismos glóbulos rojos (hemolisina),
lo cual se llama sistema indicador. Si se consumió todo el complemento en la
primera reacción antígeno-anticuerpo, no quedará nada para la segunda
reacción, que se efectuará, pero sin lisis de los glóbulos rojos por la acción del
complemento. Si el antígeno y el anticuerpo no son específicos, no hay reacción
y el complemento queda libre para fijarse al complejo glóbulos rojos-hemolisina,
ocurriendo la lisis.

OPSONIZACIÓN
La opsonización es una prueba mediante la cual se intenta determinar o
identificar si hay anticuerpos que facilitan la fagocitosis; o sea, si en una muestra
de suero sanguíneo están o no presentes opsoninas. Para esto se mezclan en
un tubo de ensayo bacterias y células fagocíticas polimorfo-nucleares y después
de un tiempo se valora el nivel de fagocitosis. El porcentaje de fagocitosis celular
es lo que se denomina índice opsonicocitofágico. Cuando se desea determinar
la presencia de opsoninas en un suero en estudio, se realiza primero sin el suero
y después con él y en ambos casos se cuantifica el índice opsofagocítico. Si en
el modelo con el suero la fagocitosis fue mucho más rápida y eficiente, nos indica
que en ese suero hay la presencia de opsoninas.

RADIOINMUNOENSAYO (RIA)
Este método cuantifica antígenos o haptenos que pueden ser marcados con
radiactividad. Se fundamenta en la competencia por el anticuerpo específico
entre una concentración(conocida) de material marcado y una concentración
(desconocida) de material no marcado. Los complejos que se forman entre
antígeno y anticuerpo pueden separarse, y la cantidad de radiactividad se mide.
La concentración del antígeno desconocido (no marcado) determina mediante la
comparación de los resultados con aquellos que se obtienen con el uso de varias
concentraciones de un antígeno estándar predeterminado. El RIA es un método
muy sensible que se aplica al análisis de hormonas o medicamentos en el suero.
6. ¿Menciona los genotipos y fenotipos de los grupos sanguíneos?
 MANEJO DEL MICROSCOPIO Y RECONOCIMIENTO DE LA SERIE
LEUCOCITARIA: NEUTRÓFILOS, LINFOCITOS, EOSINOFILOS, BASÓFILOS,
MONOCITOS, ABASTONADOS, GLOBULOS ROJOS NUCLEADOS

1. OBJETIVOS:

 Manejar y reconocer los objetivos para la observación de la serie

leucocitaria.
 Reconocer los glóbulos blancos en frotis sanguíneo.
 Reconocer los glóbulos rojos nucleados en lámina fijada
(Leucemia).

2. MATERIALES:

 Láminas fijadas: Serie leucocitaria

 Láminas fijadas: Glóbulos Rojos nucleados
 Aceite de cedro para las láminas fijadas
 Microscopios

CUESTIONARIO:
1. ¿Esquematizar las células blancas observadas al microscopio?

NEUTROFILOS

40x
 LINFOCITO

ABASTONADO - NEUTROFILO
ABASTONADO

EOSINOFILO
EOSINOFILOS
LINFOCITO ENFERMO

2. ¿Esquematizar los glóbulos rojos nucleados?

3. ¿Explicar que colorante se utiliza para realizar estos procedimientos,
fundamente?

La tinción de Wright es un tipo de tinción usada en histología para facilitar la

diferenciación de los tipos de células de la sangre. Se usa principalmente para
teñir frotis de sangre y punciones medulares, para ser examinadas al
microscopio. En citogenética se usa para teñir cromosomas, para facilitar el
diagnóstico de síndromes y enfermedades.
La tinción de Wright es una tinción de tipo Romanowsky.
Una tinción de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de
oxidación, así como eosina Y o eosina B.
La acción combinada de estos colorantes produce el efecto Romanowsky que
da una coloración púrpura a los núcleos de los leucocitos y a los gránulos
neutrofílicos y da color rosado a los eritrocitos. Los componentes de este efecto
son el azul B y la eosina Y.

4. ¿Con qué objetivo del microscopio se observan leucocitos en muestra de

orina?

Con el objetivo de 40x, ya que para realizar una observación correcta en muestra
de orina hay que buscar contraste. Para ello, la intensidad de la luz debe estar
reducida y el diafragma prácticamente cerrado.

5. ¿Qué leucocitos se elevan en pacientes con dengue y malaria?

Los Leucocitos que se elevan en pacientes con dengue o malaria son los del tipo
Linfocitos debido a que:
- Producen anticuerpos capaces de unir, bloquear, y promover la destrucción
de patógenos, así como de activar complemento.
- Llevan a cabo otras funciones que ayudan a coordinar una respuesta inmune
adecuada.

6. ¿En qué tipo de infecciones se elevan los abastonados?

Los abastonados o neutrófilos se encuentran en la primera línea de defensa en

contra de patógenos y son capaces de destruir invasores como bacterias y
parásitos que pudieron haber ingresado a nuestro organismo.
Las infecciones bacterianas son algunas de las infecciones que comúnmente
pueden causar neutrofilia, las infecciones por virus y por hongos también se
incluyen en esta lista de agentes.

7. ¿Define que es una Célula LE, Eritrofagocito y Células en Tart?

CÉLULA LE: Son polimorfonucleares que fagocitaron restos nucleares alterado,

proveniente de la destrucción del núcleo de otros leucocitos, por el llamado
Factor LE (factor nuclear). Este es Ig G-anti ADN que se fija a la superficie del
núcleo y determina alteraciones en la cromatina; y entonces al ser recubierto por
anticuerpos, es fagocitado por los neutrófilos. El objetivo es hallar neutrófilos que
tengan adherido a su superficie restos nucleares, o bien que los restos estén en
su interior
.
El observar este tipo de células en un extendido de médula ósea o incluso a
veces en uno de sangre periférica es característico del lupus eritematoso
sistémico, aunque no patognomónico del mismo, pues también pueden ser
observadas en otras patologías autoinmunes del tejido conectivo.

ERITROFAGOCITO
Célula del sistema mononuclear fagocítico que ha fagocitado eritrocitos.

CÉLULA EN TART: Llamada así porque se describió por primera vez en un

paciente llamado Tart, generalmente se produce por la fagocitosis de un núcleo
por un monocito. En una célula Tart el núcleo ingerido conserva algunas
estructuras nucleares características, como los grumos de cromatina, nucléolos
y membrana nuclear. Se han logrado producir células Tart de manera
experimental mezclando Leucocitos con suero antileucocitario.