Universidad Autónoma de Coahuila

Facultad de Ciencias Químicas

Inmunología I

Práctica 1: “Toma de muestra sanguínea y células

que participan en la respuesta inmunológica”

Integrantes:
Alyssa Rodríguez Méndez
Ana Karen Rodríguez Tovar
Brian Andres Saldaña Carral
Alondra Yamileth Suárez Velázquez
Vanessa Esmeralda Valdez Muñoz
Luis Francisco Valle Tapia
Brenda Guadalupe Vazquez Alvarado
Ayline Victoria Zavala Abad
Sebastián Alejandro Pesina Dávalos

Dra. Crystel Aleyvick Sierra Rivera

08/03/2023
INTRODUCCIÓN

La extracción de sangre mediante punción directa de una vena

superficial para su posterior análisis clínico, es un procedimiento muy
habitual realizado en el área clínica. Los resultados que se obtienen del
análisis son de suma importancia para el diagnóstico y tratamiento
médico de diversas enfermedades como diabetes, anemia y otras
enfermedades metabólicas, por lo tanto la persona encargada de
realizar dicha extracción debe conocer el conjunto de cuidados
relacionados.( Sainz N.A. 2018).

Una vez obtenida la muestra sanguínea del paciente se debe realizar un

frotis sanguíneo, que es la extensión de sangre realizada sobre un
portaobjeto y a partir de la cual se observarán, al microscopio, las
características de las células sanguíneas. (Diaz M.X., 2013) y se llevará
a cabo el siguiente paso que es la tinción de dicho frotis. Las tinciones
hematológicas son un conjunto de procesos que conducen a la
coloración de las estructuras que componen las células sanguíneas.
Esto tiene por objeto aumentar el contraste entre esas estructuras y el
medio que las rodea, y permite por tanto que las células sean
visualizadas microscópicamente con mayor facilidad. (Diaz M.X., 2013)
Los colorantes más utilizados son los derivados de la anilina, también
llamados colorantes de Romanowsky. La tinción de tipo Romanowsky es
muy importante en el laboratorio de hematología porque con ella puede
obtenerse una cantidad significativa de información a partir de un frotis
sanguíneo bien teñido. La coloración consiste en azul de metileno y sus
productos de oxidación (azul B), y eosina Y (McDonald G.A., 2001).

Hay varios tipos de glóbulos blancos o leucocitos, estos se clasifican

según la presencia o ausencia de gránulos y las características de su
citoplasma. Los granulocitos presentan grandes gránulos en su
citoplasma y el núcleo segmentado en varios lóbulos, por ello reciben el
nombre de polimorfonucleares. Se subdividen en neutrófilos, eosinófilos
y basófilos. Existen dos tipos de agranulocitos (leucocitos carentes de
gránulos en el citoplasma): linfocitos y monocitos. (Gal I.B.,2007)
OBJETIVO
a) El estudiante aprenderá y practicará la técnica para la obtención
de sangre venosa en humanos
b) El estudiante realizará la tinción de Romanowsky con la finalidad
de identificar y contabilizar los leucocitos
c) El estudiante analizará los resultados obtenidos comparando
contra los valores de referencia encontrados en literatura
METODOLOGÍA
Para realizar la toma, primeramente, se localiza una vena apropiada, en
general se utilizan venas situadas en la flexura del codo. la persona
encargada de tomar la muestra utilizará guantes de su medida.
1. Revisar los antebrazos derecho e izquierdo del voluntario
(paciente) para identificar en qué sitio se observan mejor las
venas candidatas a extracción sanguínea.
2. Una vez identificado el brazo a seleccionar, colocar el torniquete
aproximadamente a 15 cm del área de toma de muestra.
3. Palpar la vena a puncionar (parte interior del codo).
4. Limpiar con torundas de algodón embebidas con alcohol al 70% el
área que se va a puncionar.
5. Introducir en la vena la aguja del equipo Vacutainer o de la jeringa,
con el bisel hacia arriba.
6. En el caso de utilizar jeringa, cuando la sangre fluya por la aguja
se realizará lentamente una aspiración, sin embargo, si se
requieren varias muestras para diferentes tipos de análisis se le
extraerá la sangre que se requiera por el sistema Vacutainer,
utilizando tubos Vacutainer con anticoagulante EDTA. En caso de
que se utilicen jeringas para realizar la extracción sanguínea, la
sangre obtenida será transferida a los tubos con EDTA.
7. Posteriormente, se retira el torniquete.
8. Luego, se retira la aguja lentamente y se presiona la zona con una
torunda de algodón y se le indicará al paciente que flexione el
brazo por espacio de 2 ó 3 minutos, y se le colocará una banda
adhesiva para favorecer la coagulación.
9. Desechar cuidadosamente la aguja en el contenedor según las
normas de bioseguridad para residuos peligrosos biológico
infecciosos (RPBI).
NOTA: Los tubos que contienen las muestras sanguíneas deberán estar
rotulados correctamente con el nombre del voluntario o paciente.
TINCIÓN DE ROMANOWSKY
Para la preparación del frotis, se añade una gota de sangre total y con
ayuda de otro portaobjetos extienda y deslice en un ángulo de 45º hasta
tocar la gota de sangre. Deje que corra por capilaridad hasta antes de
llegar a los bordes y extienda con un movimiento rápido y uniforme.
Compruebe contra un fondo blanco que su frotis tenga un color
amarillento y deje secar antes de teñirlo.
Tinción
1. El portaobjetos con la extensión de sangre seca se introduce en el
contenedor con el fijador, se incuba durante 1 minuto, luego se
retira y se deja escurrir para eliminar el excedente.
Posteriormente, se introduce nuevamente en el fijador durante 30
segundos.
2. El portaobjetos se coloca en el contenedor con el colorante de
eosina durante 1 minuto y 30 segundos, luego se retira y se
escurre el excedente, se repite este paso.
3. El portaobjetos se introduce en el contenedor con el colorante
azul-azul de metileno, se incuba durante 5-7 segundos.
4. Finalmente, el portaobjetos se enjuaga con agua destilada y se
deja secar de manera vertical, para luego visualizarlo en el
microscopio.
5. Observar al microscopio, primeramente, en objetivo 10x,
posteriormente añadir una gota de aceite de inmersión en la parte
lateral del portaobjetos y llevarlo al objetivo 100x. Realizar un
análisis diferencias, contabilizando el número y tipo de células
leucociticas presentes en un campo de 100 células contabilizadas
en zic-zac.
DIAGRAMA DE FLUJO
RESULTADOS
Tabla 1.Recuento total de células sanguíneas en 20μl de muestra.
Población celular % celular % valor de
referencia
Neutrófilo 51 50 - 70
Neutrófilo en banda 6 0-5
Eosinófilo 5 1-3
Basófilo 0 0-1
Linfocito 22 20 - 40
Monocito 16 1-6
Total 100%

Se realizó un conteo sanguíneo de 100 células en una muestra de 20μl,

a partir de dicho conteo se realizó la tabla para comparar los parámetros
de referencia con los obtenidos.

Imagen 1. Muestra al microscopio con el objetivo 10x.

Muestra en el microscopio con el objetivo 10x, se

observan las células sanguíneas, tales como
eritrocitos, pero no se logra localizar con claridad
las células del sistema inmune.

Imagen 2. Muestra al microscopio con el objetivo

40x.

Muestra en el microscopio con el objetivo 40x, se

observan las células sanguíneas, tales como
eritrocitos y así mismo se logra visualizar
algunas células del sistema inmune.
 Imagen 3. Muestra al microscopio con el objetivo 100x.

Muestra en el microscopio con el objetivo 100x, se

observan las células sanguíneas, tales como
eritrocitos y así mismo se logra distinguir algunas
células del sistema inmune, tales como neutrófilos
y monocitos.

DISCUSIÓN
CUESTIONARIO
1. En qué consiste una biometría hemática y que relación tiene
con lo que realizaste en esta práctica de laboratorio
Una biometría hemática es un estudio que analiza tres líneas celulares
diferentes; glóbulos rojos: cumplen la importante función de transportar
oxígeno. Glóbulos blancos: son parte del sistema inmunitario del cuerpo,
estos ayudan a combatir infecciones y otras enfermedades. Plaquetas:
Su función es formar coágulos de sangre que ayudan a sanar las
heridas y a prevenir el sangrado. Este estudio ofrece información
detallada del estado general de salud del paciente y puede revelar la
presencia de enfermedades, desde anemias, infecciones por virus,
bacterias o parásitos hasta trastornos de la coagulación. La biometría
hemática tiene relación con la práctica realizada en el laboratorio,
porque se puede predecir el estado de salud de la persona a la que se
le realizó la extracción sanguínea, por medio de la presencia de
leucocitos que se pueden observar en el frotis realizado, por medio del
microscopio.
2. Describa las etapas de maduración de los linajes linfoide,
mieloide y monoditocoide
Los linfocitos se desarrollan a partir de la médula ósea, empezando por
las células madre hematopoyéticas y progresando hacia los
progenitores linfoides comunes. De este linaje surgen los linfocitos B y T
y las células asesinas naturales. Los linfocitos B y T desempeñan un
papel en la inmunidad adaptativa, y las células asesinas naturales
proporcionan la defensa del huésped contra las proteínas atípicas, como
las células tumorales. Aunque todas las etapas de desarrollo comienzan
en la médula ósea, la maduración de los linfocitos es diferente. Los
linfocitos B y las células asesinas naturales se diferencian en la médula
ósea antes de migrar a los órganos linfoides secundarios (como los
ganglios linfáticos). Sin embargo, los linfocitos T pasan al timo para
seguir madurando.
Una célula mieloide pasa por diferentes etapas de maduración. Esta
recibe un nombre diferente para cada una de esas etapas:
proeritroblasto, eritroblasto basófilo, eritroblasto policromatófilo,
eritroblasto ortocromatófilo (normoblasto), reticulocito y finalmente,
eritrocito, también denominado glóbulo rojo o hematíe.
Los proeritroblastos son células relativamente grandes, que presentan
un citoplasma basófilo y un único núcleo celular que contiene mucha
cromatina no condensada, además de un nucléolo visible. Bajo
influencia de la eritropoyetina, los proeritroblastos se diferencian en
eritroblastos basófilos, cuyo citoplasma es intensamente basófilo, como
el propio nombre lo dice. Estas células poseen más polisomas (sitios de
síntesis de hemoglobina) y no poseen nucléolos visibles. Conforme los
eritroblastos basófilos se diferencian, el tamaño de las células
disminuye, así como el número de polisomas. El resultado son los
eritroblastos policromatófilos, cuyo citoplasma posee áreas basófilas
(polisomas restantes) y áreas acidófilas (áreas de deposición de
hemoglobina). Durante el proceso de diferenciación, ocurre una nueva
reducción del volumen celular, dando origen a los eritroblastos
ortocromatófilos, también conocidos como normoblastos. Esas células
no poseen polisomas y por lo tanto son completamente acidófilas.
Eventualmente, los normoblastos expulsan su núcleo y las nuevas
células anucleadas pasan a ser llamadas reticulocitos. Los reticulocitos
llegan a la corriente sanguínea y cuando expulsan sus polirribosomas se
les llama eritrocitos.
3. Investiga la importancia clínica tanto de la disminución, así
como del incremento en los valores de cada población celular
La disminución celular es un evento importante en el desarrollo
embrionario, la renovación de los tejidos y el mantenimiento de la
homeostasis del organismo. Errores en los mecanismos que regulan
ese proceso están implicados en patologías como el cáncer, desórdenes
neurodegenerativos, enfermedades autoinmunes, entre otras. La
apoptosis es el tipo de muerte celular más estudiado debido a su
importancia para el funcionamiento del organismo.
El incremento celular es un proceso finamente coordinado, regulado en
tiempo y espacio. Cuando las células están en presencia de nutrientes,
estimulan su metabolismo para producir más moléculas e incrementar
su tamaño y masa. Inversamente, responden a la limitación de
nutrientes u otros tipos de estrés, disminuyendo la síntesis de
moléculas, lo que resulta en una disminución en su crecimiento.
4. En un diferencial hematológico ¿es posible distinguir los
linfocitos de los linfocitos T de los linfocitos B? Explique su
respuesta
Si, porque el diferencial hematológico mide el porcentaje de cada tipo de
glóbulo blanco qué hay en la sangre y también revela si hay algunas
células anormales o inmaduras.
También muestra si la cantidad de glóbulos está en la proporción
apropiada entre sí, y si hay más o menos cantidad de un tipo de glóbulo.
5. ¿Cómo es posible diferenciar e identificar estas poblaciones?
Hay dos tipos principales de linfocitos: las células B y las células T. Las
células B elaboran los anticuerpos para luchar contra bacterias, virus y
toxinas invasoras. Las células T destruyen las propias células del
cuerpo que han sido infectadas por virus o que se han vuelto
cancerosas. (National Human Genome Research Institute, 2018).
Morfológicamente son indistinguibles entre ellos, pueden ser
reconocidos desde el punto de vista inmunocitoquímico por las
diferencias en sus marcadores de superficie. Aproximadamente el 80%
de los linfocitos circulantes son linfocitos T, en torno al 15% son
linfocitos B y los restantes son células nulas. (Connect, 2018). Para
tener una detección más específica de estas células se recomienda
realizar una prueba de detección de células B y T que es una prueba de
laboratorio para determinar la cantidad de células T y B en la sangre.
6. ¿Cuáles son las dificultades a las que te enfrentaste al
realizar el proceso de extracción sanguínea?
Una de las principales dificultades fue localizar la vena ya que algunos
de los voluntarios en la práctica sus venas no eran tan notorias y con el
torniquete se resaltaron un poco más pero a la hora de realizar la
punción no se obtuvo la muestra de sangre deseada, otra dificultad fue
a la hora de ya tener la aguja dentro de la vena con el adaptador se
debía colocar el tubo morado para la recolección de sangre pero a la
hora de introducir este con la fuerza que lo hacíamos también se iba
introduciendo más la aguja.
7. ¿Cuáles son los riesgos de realizar una mala punción
sanguínea?
Los riesgos pueden ir desde provocarle dolor al paciente, un
hematoma,un sangrado excesivo, un nervio lesionado, un desmayo,
puede haber infecciones e inflamaciones en el acceso venoso (flebitis),
con aparición de enrojecimiento, dolor y edema en la zona. (MAPFRE,
2019). También puede existir alteraciones en la muestra.

CONCLUSIÓN

Podemos concluir diciendo que una correcta toma de muestras

sanguínea es un paso clave para la obtención de óptimos datos de
laboratorio, siguiendo las indicaciones dadas al inicio de la práctica se
pretende disminuir el número de punciones y técnicas mal ejecutadas,
evitando las molestias ocasionadas a los pacientes por la repetición de
la extracción. En este paso todo sucedió como lo previsto. De igual
forma se vio involucrada la práctica anterior, de RPBI, para el desecho
adecuado del material utilizado en la práctica de venopunción. En la
parte del frotis sanguíneo aprendimos que no es fácil, siempre hay que
seguir los pasos para poder realizarlo de la forma correcta, hubo
muchos frotis mal hechos, pero lo logramos, esto dependía mucho
porque a la hora de realizar la tinción de Romanowsky ya que una
buena extensión nos daría unos mejores resultados a la hora de teñir y
por supuesto observar mejor todas las células del sistema inmune.

BIBLIOGRAFÍA

Diaz M.X., Magzul T.W., Pérez L.W. (2013) Colección de Referencia en

Hematología. Universidad de San Carlos de Guatemala. Facultad de
ciencias químicas y farmacia. Pg 3-5-6.

Gal I.B. (2007). Bases de la fisiología (2nda ed.). Editorial Tebar. Pg.109

McDonald GA, P. J. (2001). Atlas de Hematología (5ta ed.). México:

Panamericana.
Sainz N.A., Alonso B., Leuce M., Achútegui M., Ruiz R., Sainz A. (2018)
Revisión bibliográfica sobre el procedimiento de extracción de muestra
sanguínea venosa periférica. Fundación de enfermería de Cantabria.
Nuberos Científica. Pg.28

Connect, E. (2018, December 26). Definición y tipos de linfocitos, y sus

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