Purificación Con Programa Protein Purification

Enzimología
Purificación de la proteína #10

Apellidos y Nombres: Vasquez Santiago, Gabriel Omar
Código: 20180128 Profesor: Chávez Pérez, Jorge Antonio Grupo: B
Resumen
Los procedimientos de purificación de proteínas tienen como objetivo el poder realizar con la
proteína purificada estudios de sus funciones, realización de análisis estructurales y conocimiento
de su codificación. Es la producción y el aislamiento comerciales de proteínas específicas, de
fuentes animales, vegetales o microbianas, y/o su utilización ulterior para producir un evento
biológico predefinido.
Cada procedimiento de purificación subdivide la mezcla de proteínas en un número de tubos
(fracciones), donde una o más de estas va a contener la proteína de interés y otras fracciones
contendrán proteínas que no se necesitan y serán descartadas. Para determinar que fracciones
guardar, se necesita ser capaz de detectar y cuantificar la proteína de interés. Si esta proteína es
una enzima, se debe disponer de un ensayo enzimático. Si la proteína es una hormona, se debe
tener un ensayo de enlace de hormona, radioinmunoensayo o un bioensayo.
Procedimiento y resultados
Para empezar, tenemos las propiedades de la proteína que se desea purificas, estas propiedades
pueden ser las de tamaño de la muestra, propiedades iónicas de esta, su solubilidad, la estabilidad
a una determinada temperatura o pH y su afinidad por el ligando.
Proteína 10: La actividad enzimática de la proteína 10 es estable por varias horas a una
temperatura de hasta 50°C y a valores de pH entre 3.5 y 11.5.
Se verifica a través del método de “gel de poliacrilamida de dos dimensiones” las diferentes clases
proteicas que hay en la muestra, observando también con la técnica de “Western Blot” la proteína
especifica de la muestra, obteniendo valores como los kilo dalton y el rango de pH.
Imagen #1 Imagen #2
Enzimología
Tenemos de esta manera que vemos que nuestra proteína tiene de entre 22-25 K y está en un rango
de pH de 5.6-5.8.
La proteína soporta una temperatura de 50°C durante un periodo largo de tiempo. Así que se le
realizara un tratamiento con calor de con unos 50°C durante 1 hora completa, para realizar una
precipitación usando la temperatura.
Se puede verificar que la cantidad de proteína disminuye después de este proceso, dándose a
entender que se eliminó una buena cantidad de proteína contaminante. Además, la purificación
toma un valor de 2.1.
Teniendo en cuenta el valor obtenido anteriormente de el rango de pH en el que esta proteína tiene
afinidad, se aplicara una cromatografía de intercambio iónico.
Usaremos como medio de intercambio iónico la CM-cellulose (que se utiliza para proteínas de
pH ácido) usando a nuestro favor el gradiente de pH. Se usará además un buffer de 5.6 de pH con
limites de gradiente de pH desde 6.0 a 7.0. La mayor parte de las proteínas poseen un pico de
absorción máxima a 280 nm. Los grupos responsables de tal característica son los aminoácidos
aromáticos como la Tirosina y el Triptófano, es por eso que se usara esta longitud de onda para
la medición de las absorbancias.
Enzimología
Ya obtenida nuestra gráfica, realizaremos un ensayo de la actividad enzimática para así ver las
fracciones de todas estas proteínas que catalizan la reacción adecuada para la enzima que se busca
purificar. Se combinarán a continuación las fracciones de proteínas que presentan actividad
enzimática, desde las 39 a las 47 fracciones de proteína.
Realizado el procedimiento se comprobará a través del método de “gel de poliacrilamida de dos

dimensiones” las diferentes clases proteicas que hay en la muestra. Con esto comprobamos que
solamente nos quedara la proteína deseada ya purificada.
Así obtenemos el cuadro de purificación de la proteína #10. Como se puede observar la

disminución de las unidades enzimáticas es casi innotable, un rendimiento del 100% para nuestra
enzima y la cantidad de veces purificada que esta nuestra proteína deseada que será de 14.3; estos
valores nos afirman que procedimiento a sido correcto para la purificación de la proteína.

Purificación Con Programa Protein Purification

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Purificación Con Programa Protein Purification

Cargado por

Información del documento

Descripción original:

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Purificación Con Programa Protein Purification

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Enzimología

Purificación de la proteína #10

Realizado el procedimiento se comprobará a través del método de “gel de poliacrilamida de dos

Así obtenemos el cuadro de purificación de la proteína #10. Como se puede observar la

También podría gustarte