Informe - Determinación de La Caseina en La Leche 2 PDF
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LECHE
INFORME DE INVESTIGACIÓN
La caseína es un conjunto heterogéneo de proteínas por lo que es difícil fijar una definición, sin embargo, todas las proteínas
englobadas en lo que se denomina caseína tienen una característica común que precipitan cuando se acidifica la leche a pH 4.6
por ello a la caseína también se le suele denominar proteína insoluble de la leche. A este pH (4,6), la caseína precipita, debido a la
reducción de repulsiones intermoleculares.
A diferencia de muchas otras proteínas, la caseína no precipita al calor. Precipita bajo la acción de la renina (enzima proteolítica
presente en el estómago de terneros) para formar la paracaseína. Al precipitar por acción de ácidos se le llama caseína ácida. Este
precipitado blanco forma la base para la elaboración de todo tipo de quesos. La secuencia peptídica de la caseína contiene un
número inusual de residuos de prolina (Ca. 15%). Como resultado, es relativamente hidrofóbica (poco soluble en agua) y carece de
estructura secundaria o terciaria definidas. En la leche se encuentra como suspensión de partículas que asemeja a las micelas de
surfactantes (pequeñas esferas hidrofílicas en el exterior e hidrofóbicas en el interior). Estas micelas de caseína se estabilizan por
iones de calcio e interacciones hidrofóbicas.
Así que tomando en consideración la situación descrita, se propone en este estudio, evaluar la leche en cuanto a su contenido
proteico, con énfasis en la caseína, indicando el método a utilizar será el de “Titulación con formalina”, este método se basa en que,
una solución acuosa neutra de aminoácidos en presencia de formalina neutra es capaz de aumentar su acidez con la formación de
compuestos, en los cuales ambos átomos de hidrógeno de grupo amino son reemplazados por un grupo metílico. Se utiliza para la
determinación rápida de proteínas en leche fresca. El método depende del hecho de que, al agregar formaldehido a la leche
neutralizada, se produce un ácido libre (que puede titularse con álcali) en proporción a la cantidad de proteínas presentes.
OBJETIVOS
1. LECHE
La leche se define como la secreción nutritiva que se obtiene de las glándulas mamarias de vacas saludables (Revilla, 1996), es
uno de los alimentos más nutritivos puesto que tiene un alto contenido de proteínas de alta calidad que proporcionan los diez
aminoácidos esenciales. Muchos factores, por ejemplo, climáticos, estacionales, raza y edad del animal entre otros, producen
importantes variaciones en los componentes de la leche. En la tabla 1 se muestra la composición de la leche:
TABLA 1. COMPOSICIÓN DE LA LECHE.
Complejidad
La leche es un líquido, secretado por las glándulas mamarias de las hembras de los mamíferos, tras el nacimiento de la cría.
La función natural de la leche es la de alimentar durante el periodo crítico de los recién nacidos, no puede ser sustituida por otros
alimentos.
La gran complejidad de la composición de la leche responde a esta necesaria. La mama constituye igualmente un emuntorio, por
ello se puede encontrar también en la leche sustancias de eliminación, sin valor nutritivo.
Heterogeneidad
La leche es una emulsión de materia grasa, en forma globular, en un líquido de muestra analógicas con el plasma sanguíneo. Este
líquido es asimismo una suspensión de materia proteicas en un suero constituido por una solución neutra que contiene,
principalmente, lactosa y sales minerales
Hay por lo tanto en la leche cuatro tipos de componentes importantes:
Alterabilidad
La leche es un producto que se altera fácilmente. El calor lo modifica. Numerosos microorganismos pueden proliferar en ella, en
especial aquellos que degradan la lactosa con producción de ácido, ocasionando, como consecuencia, la floculación de una parte
de las proteínas.
La leche no posee más que débil y efímera protección natural. Su uso para el consumo y para las transformaciones industriales
exige.
Productos lácteos
Antes de la moderna era industrial existía pocos productos lácteos, esencialmente estaban constituidos por la leche entera y
desnatada, la nata, la mantequilla y los quesos.
Se desconocía los métodos para conservar la totalidad de los componentes de la leche, y solamente los elementos insolubles
(caseína y grasas) podían conservarse durante bastante tiempo, pero la parte soluble se desperdiciaba o se utilizaba mal.
Los tres principales productos lácteos, nata, mantequilla y queso tienen una composición característica que se presenta
estomáticamente en la figura1. Las trasformaciones a que se somete la leche tienden, en general, a la reducción de contenido en
agua, lo que da productos de mejor conservación y más fáciles de transportar.
Olor o aroma, de la leche fresca es ligeramente perceptible, sin embargo, la leche está ácida o contienen bacterias
coniformes, adquiere el olor característico de un establo o a estiércol de las vacas, por lo cual se le da el nombre de
“olor a vaca”
Sabor, la leche fresca tiene un sabor medio dulce, neutro debido a la lactosa que contiene.
Densidad de la leche, está relacionada con la combinación de sus diferentes componentes: el agua (1.000 g/ml); la
grasa (0.931g/ml); proteína (1.346g/ml); lactosa (1.666 g/ml) minerales (5.500 g/ml) y Sólidos no grasos (S.N.G. =1.616
g/ml).
Acidez, la leche cruda presenta una acidez titulable resultante de cuatro reacciones, de las cuales las tres primeras
corresponden a la acidez natural de la leche cruda y la cuarta reacción corresponde a la acidez que se va formando en
la leche por acción de las bacterias contaminantes.
Viscosidad, de la leche indica la resistencia que se opone al fluido. La viscosidad es inversamente proporcional a la
temperatura y depende de la composición del líquido, del estado físico de las sustancias coloidales dispersas, y del
contenido de materia grasa.
TABLA 3. CARACTERISTICAS DE LA LECHE.
3.3. LÍPIDOS
Se clasifican en sustancias saponificables y no saponificables. Las sustancias saponificables comprenden principalmente los
triglicéridos y los fosfolípidos. Las sustancias insaponificables comprenden las vitaminas y carotenoides. Su proporción en la leche
se presenta en la siguiente tabla:
3.4. PROTEINAS
Las principales proteínas de la leche son: La caseína, la albumina y la globulina. Estas se diferencian por sus propiedades
fisiológicas y por su valor biológico. La caseína es el 80% de todas las proteínas, o el 2,7 – 2,8% de la masa total de la
leche. Son conocidas algunas fracciones de la caseína: α, β y θ, que se diferencian por su contenido en nitrógeno,
fosforo y azufre.
3.4.1. CASEINAS
El grupo de las caseínas conforman del 78 al 80% de las proteínas de la leche. Las proteínas del suero que contienen fracciones
de globulina y albúmina no pueden obtenerse en forma de queso sino como su nombre lo indican se encuentra en el suero y
constituyen el otro 20% del contenido de la leche.
Las caseínas α, β y γ, reaccionan con el calcio formando compuestos que precipitan produciéndose la coagulación de la leche, pero
como la leche en forma natural contiene calcio, ocurriría en cualquier momento la coagulación, sin embargo para que esta
precipitación no suceda la caseína K que es insensible al calcio, forma un especie de revestimiento protector en torno de las caseínas
α, β y γ, e impiden que reaccionen con el calcio, manteniendo de esta manera la estabilidad de la proteína de la leche.
CASEÍNA ENTERA
La caseína entera es el complejo proteico que precipita en la leche a PH 4,6. Se la designa igualmente con los términos caseína
isoeléctrica y caseína de hammarsten. La preparación de la caseína es muy simple, tanto en el laboratorio como en la industria. Se
precipita, la leche desnatada mediante un ácido (acético, clorhídrico, sulfúrico, etc.) que se añade lentamente, bajo agitación fuerte
se separa la caseína pulverulenta, se la lava y se seca. La industria produce también caseína láctica, por acidificación espontanea
de la leche.
La composición de la caseina varia de una especie a otra. En particular, la caseina humana es más rica en azufre, en cistina y en
glúcidos que la caseína de vaca. Este hecho se considera como una de las causas de la superioridad de la leche materna en la
alimentación de los recién nacidos.
4.1.1. Pasteurizada
Es el producto obtenido al someter la leche cruda, termizada o recombinada a una adecuada relación de temperatura y tiempo para
destruir su flora patógena y la casi totalidad de flora banal, sin alterar de manera esencial ni su valor nutritivo ni sus características
fisicoquímicas y organolépticas. Las condiciones mínimas de pasteurización son aquellas que tiene efectos bactericidas
equivalentes al calentamiento de cada partícula a 72°C - 76°C por 15 segundos (pasteurización de flujo continuo) o 61 °C a 63° C
por 30 minutos (pasteurización discontinua) seguido de enfriamiento inmediato hasta temperatura de refrigeración.
CASEINA:
La caseína es una proteína conjugada de la leche del tipo fosfoproteína que se separa de la leche por acidificación y forma una
masa blanca. Las fosfoproteínas son un grupo de proteínas que están químicamente unidas a una sustancia que contiene ácido
fosfórico. En la caseína la mayoría de los grupos fosfato están unidos por los grupos hidroxilo de los aminoácidos serina y treonina.
La caseína en la leche se encuentra en forma de sal cálcica (caseinato cálcico). La caseína representa cerca del 77% al 82% de las
proteínas presentes en la leche y el 2,7% en composición de la leche líquida.
La caseína está formada por Alpha(s1), Alpha(s2)-caseína, ß-caseína, y kappa-caseína formando una micela o unidad soluble. Ni
la alfa ni la beta caseína son solubles en la leche, solas o combinadas. Si se añade la kappa caseína a las dos anteriores o a cada
una de ellas por separado se forma un complejo de caseína que es solubilizado en forma de micela. Esta micela está estabilizada
por la kappa caseína mientras que las alfa y beta son fosfoproteínas que precipitan en presencia de iones calcio.
La kappa caseína, sin embargo, tiene pocos grupos fosfato y un alto contenido de carbohidratos unidos a ella. También tiene todos
sus residuos de serina y treonina con sus correspondientes grupos hidroxilo, así como los carbohidratos dispuestos en una sola
cara de su superficie por lo que esta parte exterior es fácilmente soluble en agua gracias a los grupos polares que posee. La otra
parte de su superficie se une fácilmente a las alfa y beta caseína insoluble, lo que da lugar a la formación de la micela.
La propiedad característica de la caseína es su baja solubilidad a pH 4,6. El pH de la leche es 6,6 aproximadamente, estando a ese
pH la caseína cargada negativamente y solubilizada como sal cálcica. Si se añade ácido a la leche, la carga negativa de la superficie
de la micela se neutraliza (los grupos fosfato se protonan) y la proteína neutra precipita.
Las proteínas que aparecerán en el sobrenadante cuando precipitemos la caseína en medio ácido son proteínas globulares,
hidrofílicas y fácilmente solubles en agua, así como susceptibles de desnaturalización por calor. Las principales son ß -lacto
globulina, alphalactalbumina, bovine serum albumin (BSA), y inmunoglobulinas (Ig).
La calidad de la leche depende de su composición química, física y bacteriológica. En la composición química de la leche de vaca,
los nutrimentos que forman parte del extracto seco (12,5%) y que se encuentran en abundancia son los carbohidratos, (4,7%), las
proteínas (3,5%) y los lípidos (3,5%) y en menor cuantía los minerales, las vitaminas y las enzimas. Una medida rápida para detectar
adulteración de los sólidos de la leche es la determinación de su densidad. La densidad de la leche entera oscila entre 1,028-1,032
g/mL. La fracción de los carbohidratos está representada básicamente por el disacárido lactosa, la fracción proteica está compuesta
por las caseínas y las proteínas del lactosuero, las cuales tienen elevado valor biológico, y en la fracción lipídica, el máximo
representante son los triacilglicéridos. La leche constituye una fuente importante de satisfacción de los requerimientos de calcio,
fósforo y riboflavina del organismo humano.
La composición de la leche está determinada por varios factores: la raza, los factores genéticos, la alimentación del ganado, la salud
del animal, el período de lactancia, las estaciones del año y el stress, siendo la raza el factor que más influye. Este alimento natural
es tal vez el más complejo y original, no sólo por su composición sino también por la presencia de sus componentes en diferentes
estados fisicoquímicos. La leche es una materia prima muy versátil, de la cual se elaboran un gran número de productos,
fermentados o no, entre los que se encuentran los quesos, la mantequilla, los helados y las leches fermentadas, entre otros. El
componente principal del valor nutricional de la leche son las proteínas, no sólo por su buena asimilación sino también por su
composición aminoacídica, ya que las proteínas lácteas contienen todos los aminoácidos indispensables para el organismo animal.
Aproximadamente el 80% de las proteínas totales de la leche está constituido por caseínas. Es el único alimento que contiene este
tipo de proteína. El 20% restante está representado por las proteínas del lactosuero. En la fracción caseínica se encuentran un
conjunto de glicoproteínas fosforadas heterogéneas. Su contenido en leche oscila entre 3,0-3,5% y determina el rendimiento en la
elaboración de quesos, ya que el coagulo que se forma durante el proceso de coagulación constituye la fracción sólida y está
conformado por caseínas asociadas al calcio, de ahí la importancia de su determinación en la leche fresca destinada a la elaboración
de quesos.
3.2.1. MÉTODO TITULACIÓN CON FORMALINA
El método que se utilizará para determinar la cantidad total de proteína en la leche será el de “Titulación con formalina”, este método
se basa en que, una solución acuosa neutra de aminoácidos en presencia de formalina neutra es capaz de aumentar su acidez con
la formación de compuestos, en los cuales ambos átomos de hidrógeno de grupo amino son reemplazados por un grupo metílico.
Muestra de leche
Bureta de 10 ml
Soporte universal
Dos matraces Erlenmeyer 100 ml
Solución de hidróxido de Na 0,1 N
Fenolftaleína al 1% (solución alcohólica)
Formalina neutra
Cocinilla eléctrica
Vaso de precipitado
Pipeta
3.2.3. PROCEDIMIENTO:
A 5 ml. de formaldehído (C= 35 – 40%) se agrega 0.1 ml de fenolftaleína y se titula con NaOH 1N hasta rosado claro bajo
(no debe desaparecer).
Usando una pipeta se tomó 10ml leche, más 12 gotas de fenolftaleína y se neutralizó con NaOH 0,1N.
Luego se midió 2 ml de la primera titulación que es formalina neutra, y se agregó al segundo titulado.
El color rosado desapareció debido a que el grupo amino reaccionó con la formalina.
Luego se volvió a titular hasta rosado claro tomando nota del gasto deseado utilizado.
Después se determina la cantidad de solución de NaOH 0,1 N que pasó en la segunda titulación después de haber
agregado la formalina.
Este valor se multiplica por el coeficiente 1.92 y se determina el contenido total de proteínas en la leche en % y para hallar
el % de caseína se multiplica por 1.51.
Descripción del proceso (Diagrama de flujo)
BIBLIOGRAFÍA:
Ionel Rosenthal; Uzi Merin, Gita Popel, Solange Bernstein and Amnon Kadman (1985). «An Analytical Assay for the Determination
of Oil Content in Macadamia». Agricultural Research Organizatio
Verificación de los métodos para el analisis proximal en leche entera en el laboratorio de análisis de aguas y alimentos de la
Universidad Tecnológica De Pereira.
Escuela de ciencias Universidad Basicas, Tecnologia E Ingenieria lectura u1_ presaberes_ curso: 301105 – tecnologia de lacteos
Ciencia de la leche, principios de técnica lechera, Don Antonio Lacasa Godina, capitulo 1.
Análisis químico en los alimentos, capitulo 8. Aplicaciones experimentales de métodos clásicos.
Extracción de la caseína y determinación del punto isoeléctrico, Licenciatura en Biotecnología
Charles Alais, Ciencia de la leche, Editorial reverte S.A, México 1988.
ALAN H. VARMANN, JANE P. SUTHERLAND, leche y productos lácteos. Tecnología Química y Microbiológica, Editorial ACRIBIA
S.A, España, 1955.