Guia Nº5 Metabolismo Nueva Version

Universidad de
UNIVERSIDAD DE CORDOBA Córdoba,

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD comprometida
FACULTAD DE CIENCIAS
PROGRAMA TECNOLOGÍA DE LA SALUD
EN REGENCIA DE FARMACIA con el desarrollo
PROGRAMA DE BACTERIOLOGÍA regional
NIT 891080031-3
ASIGNATURA: Fundamentos de microbiología

CÓDIGO: 502127
COMPONENTE: Práctico
UBICACIÓN: II Semestre
REQUISITOS: Fundamentos de biología
CRÉDITOS: 3
TOTAL DE HORAS SEMANALES: 2
DOCENTES: Yira Reyes – Gloria Vergara
GUÍA Nº5
METABOLISMOS BACTERIANO
INTRODUCCIÓN
El metabolismo bacteriano se define como el conjunto de reacciones químicas que desarrolla la

célula. Estas reacciones pueden ser catabólicas cuando descomponen un sustrato y anabólicas
cuando forman algunos compuestos a partir de elementos más simples. Estas reacciones se
realizan gracias a la presencia de enzimas que pueden ser intracelulares o extracelulares. El
número y la clase de enzimas bacterianas son diferentes, debido a que cada enzima está
fabricada bajo un control genético, por lo cual se dan variaciones en la utilización de los
sustratos. Estas variaciones se utilizan a su vez para ayudar a determinar los diferentes grupos
y especies bacterianas.
OBJETIVOS:
● Adquirir los conocimientos necesarios sobre el metabolismo microbiano, por medio de

las diferentes pruebas bioquímicas.
● Conocer y aplicar la utilidad de las pruebas bioquímicas
● Comprender el fundamento de las pruebas bioquímicas
● Interpretar los resultados arrojados por las pruebas bioquímicas
● Analizar los resultados obtenidos y elaborar un informe escrito
COMPETENCIAS
⮚ Adquirir conocimientos microbiológicos básicos sobre el crecimiento y metabolismo de

las bacterias
⮚ Conocer y aplicar los fundamentos bioquímicos de las bacterias para su identificación
en el laboratorio.
MATERIALES
⮚ Bata
⮚ Guantes
⮚ Tapabocas
⮚ Gorros
⮚ Marcador de vidrio (por grupo de trabajo)
⮚ Encendedor
⮚ Cinta de enmascarar
⮚ Cepas de bacilos Gram negativos
⮚ Cepas de bacterias Gram positiva
⮚ Pruebas bioquímicas: SIM, Urea, Citrato, TSI, MR/VP, LIA.
⮚ Tirillas de Oxidasa
⮚ Colorantes para Gram
⮚ Asas bacteriológicas
⮚ Incubadora
⮚ Laminas porta objetos
⮚ Microscopios
⮚ Reactivos: Kovacs, Rojo de Metilo
⮚ Papel kraf
⮚ Descartadores
PROCEDIMIENTO
⮚ Preparación del material: limpiar el área de trabajo con hipoclorito, marcar los tubos
con la fecha, nombre del paciente, tipo de muestra o cultivo.
⮚ Realizar las pruebas bioquímicas a partir de las colonias sospechosas:

Usted dispone de un cultivo bacteriano, a este cultivo le va a realizar la batería de
pruebas bioquímicas. A partir del cultivo, elija las colonias aisladas y siembre en todos
los medios para pruebas bioquímicas como se le indica a continuación.
Medio de SIM (Sulfuro, Indol, Motilidad) en tubo (color beige):A partir de una
colonia aislada siembre un tubo por picadura en el centro, sin tocar el fondo (figura 3)
(cuidando que no le tiemble la mano) e incube 24 h a 37°C.
Figura 3. Siembra vertical por picadura con asa recta en agar semisólido
-La producción de sulfuros toma lugar a partir de aminoácidos con azufre y es indicada
por la aparición de un color negro
- La movilidad positiva es demostrada al crecer la bacteria homogéneamente en todo
el medio, observándose una turbidez
La producción de metabolito indol es indicada por un anillo de color rojo que se forma
después de adicionar unas 2 o 3 gotas del reactivo de Kovacs.
TSI (Triple azúcar hierro): Medio empleado para la diferenciación de la fermentación

de glucosa, lactosa, sacarosa y la producción de ácido sulfhídrico (figura 4).
El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el
sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el
ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. Rojo de fenol es el
indicador de pH, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. Por fermentación de
azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el
cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de
hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro
de hierro de color negro.
Figura 4. Medio TSI

Procedimiento: A partir de una colonia aislada, inocular los tubos de TSI con asa
recta. Para ello debe introducir la punta hasta 3 a 5 mm del fondo del tubo (ver figura
3).
Tras retirar el asa del fondo, estriar el pico o bisel con un movimiento en zigzag (ver
figura 5). Incubar a 37º C durante 24 horas.
Figura 5. Siembra en estría con asa recta en agar inclinado
Citrato: Citrato como única fuente de carbono (color verde) en tubo inclinado: Siembre
una colonia por estría en la superficie del agar. El crecimiento y el cambio de color del
indicador de Ph azúl de bromotimol, a azul en condiciones alcalinas, indica la
utilización del citrato positiva.
Procedimiento: A partir de una colonia aislada, inocular los tubos de Citrato con asa
recta. Para ello debe estriar el pico o bisel con un movimiento en zigzag (ver figura 5).
Incubar a 37º C durante 24 horas.
Urea (color beige) en tubo inclinado : Determina la capacidad de un organismo de

desdoblar (hidrolizar) la urea formando dos moléculas de amoniaco por la acción de la
enzima ureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio, por acción del
indicador rojo de fenol. La ureasa es una importante enzima microbiana vinculada con
la descomposición de los compuestos orgánicos.
Procedimiento: A partir de una colonia aislada, inocular los tubos de Urea con asa
recta. Para ello debe introducir la punta hasta 3 a 5 mm del fondo del tubo (ver figura
3). Tras retirar el asa del fondo, estriar el pico o bisel con un movimiento en zigzag (ver
figura 5). Incubar a 37º C durante 24 horas.
LIA (Agar Lisina-Hierro): En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura

aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono
fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas
descarboxilasa y desaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son
los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. El purpura de bromocresol, es el
indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5.2, y de color violeta
a pH igual o mayor a 6.8.
Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son
fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al
amarillo, pero a las 24 hs de incubación se observa el pico de color violeta debido al
consumo de las peptonas, y el fondo amarillo. La producción de sulfuro de hidrógeno,
se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formación de sulfuro de
hierro.
Procedimiento: A partir de una colonia aislada, inocular el tubo con asa recta. Para
ello debe introducir la punta hasta 3 a 5 mm del fondo del tubo. Tras retirar el asa del
fondo, estriar el pico de flauta o bisel con un movimiento en forma de zigzag. Incubar a
37º C durante 24 horas, en atmósfera de aerobiosis.
Prueba de Rojo de Metilo (MR): Los fermentadores mixtos de ácidos producen

suficiente ácido para disminuir el pH por debajo de 4.3. El Rojo de Metilo es un
indicador de pH con un intervalo entre 6.0 (amarillo) y 4.4 (rojo), que se utiliza para
visualizar la producción de ácidos por la vía de fermentación ácido mixta.
Procedimiento: A partir de una colonia aislada, inocular los tubos de caldo MR
agitando suavemente el asa calibrada (ver figura 6). Incubar a 37º C durante 24 horas.
Al finalizar el tiempo de incubación agregar cinco gotas del reactivo Rojo de Metilo.
Figura 6. Inoculación en caldo MR
Prueba de Vogues Proskauer (VP): La acetoína es producida a partir de la

fermentación de azucares. El acetil-metil-carbonil o acetoína es el producto intermedio
en la producción de butanodiol. En medio alcalino y en presencia de oxígeno la
acetoína es oxidada a diacetilo. Este se revela por la presencia de alfa-naftol dando un
color rojo-fucsia. Esta prueba se se utiliza para visualizar la utilización de azucares por
la vía de butilenglicólica.
Procedimiento: A partir de una colonia aislada, inocular los tubos de caldo MR

agitando suavemente el asa calibrada (ver figura 6). Incubar a 37º C durante 24 horas.
Al finalizar el tiempo de incubación adicionar 0.6 ml de la solución de alfa-naftol
(solución 1) y posteriormente adicione 0.2 ml de NaOH al 40%, agite bien y efectue la
lectura después de 10 minutos.
RESULTADOS
⮚ Interpretar los resultados de las pruebas bioquímicas

⮚ Realizar un análisis de los resultados obtenidos
⮚ PRE-LABORATORIO
1. Mencione 2 ejemplos de microorganismos positivos para las reacciones Bioqímicas:

Urea, Citrato, LIA, TSI.
2. Investigue otras pruebas bioquímicas que no se describieron en la guía, utilizadas para

la identificación bacteriana
3. Existen sistemas comerciales automatizados para la identificación bacteriana,
mencione 3 sistemas.
POST-LABORATORIO
1. Por medio de un diagrama de flujo, realice el procedimiento completo para la

identificación bioquímica bacteriana.
BIBLIOGRAFÍA
● Murray Patric. 2da Edición. 1993. Harcourt Brace. Microbiología Médica.

● T Stuart Walter. Mac Graw Hill. Mexico, 2000. Editores S.A Microbiología
● María Piedad Sánchez. Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica. Biobacter
Ltda. 5ª Edición, 1998.
● B.A Freeman. Microbiología Burrows. Interamericana Mac Graw Hill. Mexico 1997.

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ASIGNATURA: Fundamentos de microbiología

El metabolismo bacteriano se define como el conjunto de reacciones químicas que desarrolla la

● Adquirir los conocimientos necesarios sobre el metabolismo microbiano, por medio de

⮚ Adquirir conocimientos microbiológicos básicos sobre el crecimiento y metabolismo de

⮚ Realizar las pruebas bioquímicas a partir de las colonias sospechosas:

TSI (Triple azúcar hierro): Medio empleado para la diferenciación de la fermentación

Figura 4. Medio TSI

Figura 5. Siembra en estría con asa recta en agar inclinado

Urea (color beige) en tubo inclinado : Determina la capacidad de un organismo de

LIA (Agar Lisina-Hierro): En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura

Prueba de Rojo de Metilo (MR): Los fermentadores mixtos de ácidos producen

Figura 6. Inoculación en caldo MR

Prueba de Vogues Proskauer (VP): La acetoína es producida a partir de la

Procedimiento: A partir de una colonia aislada, inocular los tubos de caldo MR

⮚ Interpretar los resultados de las pruebas bioquímicas

1. Mencione 2 ejemplos de microorganismos positivos para las reacciones Bioqímicas:

2. Investigue otras pruebas bioquímicas que no se describieron en la guía, utilizadas para

1. Por medio de un diagrama de flujo, realice el procedimiento completo para la

● Murray Patric. 2da Edición. 1993. Harcourt Brace. Microbiología Médica.

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