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DOCUMENTOS TÉCNICOS PARA EL LABORATORIO CLÍNICO

RECOMENDACIONES PARA LA REALIZACIÓN

DEL EXAMEN PARASITOLÓGICO SERIADO DE
DEPOSICIONES
RECOMENDACIONES PARA LA REALIZACIÓN
DEL EXAMEN PARASITOLÓGICO SERIADO DE DEPOSICIONES

AUTORES
TM. María Isabel Jercic Lara.
Jefe Sección Parasitología.
Subdepartamento de Enfermedades Infecciosas.
Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.
Instituto de Salud Pública de Chile.
TM. Alan Oyarce Fierro.
Encargado de Calidad.
Sección Parasitología.
Subdepartamento de Enfermedades Infecciosas.
Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.
Instituto de Salud Pública de Chile.

REVISORES INSTITUTO DE SALUD PÚBLICA

TM. Mitzy Celis Morales.
Jefe Sección Coordinación de Redes de Laboratorios.
Subdepto Coordinación Externa.
Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.
Instituto de Salud Pública de Chile.
Dra. Paola Pidal Méndez.
Jefe Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.
Instituto de Salud Pública de Chile.
Dra. Verónica Ramírez.
Jefe Subdepto. Coordinación Externa.
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Instituto de Salud Pública de Chile.

REVISORES EXTERNOS
Comité de Expertos PEEC Parasitología

TM. José Luis Cerva Cortés.

Laboratorio de Parasitología. Hospital Calvo Mackenna.
TM. Rubén Mercado Pedraza, PhD.
Profesor Asistente, Departamento de Parasitología, Facultad de Medicina Occidente.
Universidad de Chile.
Sociedad Chilena de Parasitología.
TM. Hernán Sagua Franco.
Director Departamento Tecnología Médica.
Facultad Ciencias de la Salud.
Universidad de Antofagasta.
TM. Patricio Torres Hevia, PhD.
Profesor Instituto de Parasitología,Facultad de Medicina.
Universidad Austral de Chile.
TM. Sylvia Vidal Flores.
Directora Escuela de Tecnología Médica.
Universidad de Talca.
Sociedad Chilena de Parasitología.
RECOMENDACIONES PARA LA REALIZACIÓN DEL EXAMEN
PARASITOLÓGICO SERIADO DE DEPOSICIONES

RESUMEN • Adecuada obtención, transporte y procesamiento

de la muestra.
Este documento, entrega las recomendaciones para
la realización del Examen Parasitológico Seriado de De- • Equipamiento disponible en óptimas condiciones.
posiciones (EPSD), desde la correcta obtención de las • Diseño físico del laboratorio, el cual debe cumplir
muestras, procesamiento de las mismas, informe de re- con los requerimientos de cada equipo que intervie-
sultados hasta el control de calidad de la metodología ne en el procesamiento de las muestras, así como
empleada. La aplicabilidad de estas recomendaciones ajustarse a normas ergonómicas y de bioseguridad.
permitirá uniformar la realización del EPSD en institu-
ciones educativas y en los laboratorios clínicos del país • Tiempo dedicado por el profesional al análisis de
que realicen exámenes de Parasitología. las muestras.
• Sólida formación y experiencia del profesional que
realiza el examen.
ALCANCE
Estas recomendaciones aplican a los laboratorios clí- En este contexto, es importante la selección del mé-
nicos del país que ofrezcan este examen entre sus presta- todo que el laboratorio realice y la competencia técnica
ciones e instituciones educativas que impartan carreras que del observador, esto último respaldado por a lo menos
incluyan en sus mallas curriculares de asignaturas, conte- un semestre de formación en la identificación microscó-
nidos y competencias en Parasitología general y humana. pica de los principales elementos parasitarios reconoci-
bles en el EPSD, condiciones fundamentales a la hora de
El EPSD es el procedimiento de diagnóstico de labo- implementar correctamente la metodología.
ratorio de mayor demanda en el área de la Parasitología
en los laboratorios clínicos del país. Se estima, que al Es importante destacar, que se requiere de un labo-
menos 360 laboratorios clínicos lo ofrecen como una ratorio con un buen diseño de su planta física, más una
más de sus prestaciones, según el Anuario PEEC 2011. correcta instalación y mantenimiento de su equipamien-
to, lo que permite un adecuado desarrollo de las buenas
Para realizarlo, se describen métodos basados prin- prácticas de laboratorio.
cipalmente en la concentración de los elementos parasi-
tarios mediante sedimentación por fuerza de gravedad, Para asegurar la calidad de los resultados emitidos,
centrifugación o flotación, entre los más empleados, que el laboratorio debe implementar un correcto control in-
permiten concentrar los distintos estadios microscópi- terno tanto de la etapa técnica, ya sea del método em-
cos o elementos de desarrollo de protozoos y helmintos pleado, como también de la observación microscópica,
parásitos presentes en una muestra de deposiciones. La evaluando continuamente la competencia del observador
sensibilidad de los métodos, dependerá entre otros de: en la identificación de los principales elementos parasi-
tarios, lo que se complementa con la participación en un
• La adecuada selección del procedimiento y su co- Programa de Evaluación Externa de la Calidad.
rrecta aplicación.
Por lo anterior, el objetivo de este documento es en-
• Biología de cada parásito.
tregar las recomendaciones para la correcta selección y
• Intensidad de la infección. realización del método a emplear asegurando así la cali-
dad de la prestación realizada.

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DEL EXAMEN PARASITOLÓGICO SERIADO DE DEPOSICIONES

DEFINICIONES Y ABREVIACIONES zonas alejadas de centros de salud) o para optimizar

recursos. En estas circunstancias, es importante mini-
Método de concentración: procedimiento de labora- mizar los riesgos de infección por el transporte de las
torio, basado en principios de sedimentación o flotación, muestras garantizando al mismo tiempo la calidad de
mediante el cual se concentra o se aumenta la densidad, las mismas.
por unidad de muestra, de los estadios o elementos pre- De lo anterior, se desprende la recomendación de
sentes. que las muestras empleadas sean colectadas en so-
luciones fijadoras. De no ser posible su uso, en casos
MIF: Solución colorante y preservante que contiene en- excepcionales y de preferencia en recintos cerrados se
tre sus componentes: Merthiolate, Lugol y formalina. podrán procesar muestras sin fijación debiendo garan-
PVA: Alcohol Polivinílico utilizado como preservante en tizar el transporte de las muestras al laboratorio en con-
muestras biológicas. diciones de tiempo menor de 24 horas, a temperatura
entre 2 y 28 °C y asegurando la integridad adecuada de
Solución CVS: Solución que es la mezcla alcohólica de
las muestra.
dos colorantes: Safranina y Cristal Violeta.
Solución Fijadora: Suspensión homogénea de reacti- Solicitud de examen
vos de rápida acción, cuyo objetivo es inactivar y preser-
var la morfología de los elementos presentes en la mues- La orden o formulario de solicitud de examen debe
tra por largo tiempo, y a través de su acción, disminuir incluir al menos:
los riesgos de contaminación con las diferentes formas • Nombre y apellidos del paciente.
infectantes que podría contener la muestra para quien la
transporte o manipule. • Fecha de Nacimiento.
• RUN.

DESARROLLO • Sexo.
• Procedencia indicando:
En relación al EPSD se pueden mencionar las carac-
- Dirección completa de paciente.
terísticas indicadas en la tabla nº 1.
- Establecimiento que deriva la muestra y su dirección.
• Nombre del profesional solicitante.
OBTENCIÓN Y CALIDAD DE LAS MUESTRAS • Diagnóstico clínico o hipótesis diagnóstica.
En Chile, en algunos casos, se ha decidido centra- • Fecha de toma de muestra (cuando corresponda).
lizar en un laboratorio la realización del EPSD, ya sea
por las características geográficas (porque aún existen

Tabla nº 1

VENTAJAS DESVENTAJAS

No invasivo. Número de muestra (3 seriadas).

Permite diagnosticar la mayoría de los parásitos del
Los tiempo que van desde la toma de muestra hasta la
tracto digestivo y vías biliares, como Fasciola hepatica,
entrega de resultado son largos.
prevalentes en Chile.
Bajo costo. Altamente dependiente del operador.

Ejecución simple. Extenuante observación microscópica.

La especificidad dependerá de la competencia del
Específica y de buena sensibilidad.
observador.

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Preparación del paciente Número de muestras

Antes de la toma de muestra, el paciente no debe haber El procesamiento debe ser de un número de tres
recibido antibióticos, quimioterápicos, purgantes oleosos, muestras recogidas en días alternados. El es-
antiparasitarios o compuestos que contengan carbón, bario quema propuesto obedece a la variación temporal en la
o bismutos, ya que podrían generar resultados falsos negati- eliminación de los distintos estados de desarrollo de los
vos. Si por razones médicas no pudiera suspenderse el uso parásitos con las deposiciones.
de algunas de las sustancias antes señaladas, se recomienda El periodo de recolección total comprende 5 días. Lo
indicarlo como observación en la solicitud de examen. anterior, no excluye que en pacientes con cuadros graves
El paciente o su acompañante SIEMPRE deben re- se pueda emplear una sola muestra para realizar el
cibir información verbal y por escrito sobre el procedi- examen, sin perjuicio de continuar posteriormente con la
miento correcto para la obtención de la muestra y riesgo recolección y análisis de las demás muestras.
de la ingesta accidental del fijador. Anexo 1.
Frascos para recolección de muestra

Materiales para la obtención de la muestra Deben ser tres frascos, uno para cada muestra, lo
que facilita la recolección de las muestras y garantiza la
• 3 frascos plásticos limpios, no necesariamente es- correcta relación entre muestra y fijador. El frasco debe ser
tériles, con cierre hermético, de tapa rosca, boca hermético, de material plástico resistente, de preferencia
ancha, con etiquetas y que contengan 15 mL de de boca ancha, lo suficiente como para permitir fácilmente
solución fijadora c/u para frascos de 30 mL. la introducción de la muestra sin ensuciar los bordes. Los
• Se recomienda el uso de frascos con cucharilla in- frascos pueden tener adosada a su tapa una cucharilla, que
corporada. reemplaza a las paletas de madera, para facilitar la reco-
lección de la muestra y homogenización con el fijador. En
• Si no poseen cucharillas, se requerirá de 3 paletas
caso de no tenerla, el laboratorio debe proporcionar algún
de madera auxiliares.
elemento desechable que permita hacerlo. Lo más utiliza-
• Hoja impresa con las instrucciones para la reco- dos son las paletas de madera, que deben ser tres.
lección de las muestras. La hoja debe basarse en Estos frascos deben ser entregados en un envase
los aspectos generales detallados en los requisitos secundario, que puede ser una bolsa plástica o caja de
de la muestra, en lenguaje sencillo y comprensible. material impermeable. Deben cerrarse lo más hermética-
Anexo 2 mente posible para evitar posibles derrames. Los frascos
Nota: Las etiquetas deben tener suficiente espacio para deben tener una etiqueta que permita identificar al pa-
los siguientes datos: ciente y fecha de la obtención de la muestra.
- Nombre y apellido del paciente.
- Fecha de obtención de la muestra.
Relación fijador/muestra

Tipo y forma de obtención de la muestra Debe utilizarse una parte de muestra por tres de
fijador, los cuales deben homogenizarse para permitir
Las muestras requeridas deben provenir de deposi- una mejor acción de este último. El tiempo de fijación
ciones recién emitidas, no mezcladas con orina, cremas requerido dependerá del fijador utilizado. Se recomienda
o talco. Estas pueden ser colectadas desde un recipiente al menos de 30 minutos antes del procesamiento, asegu-
limpio y seco, del pañal en el caso de lactantes o recu- rándose de mezclar bien muestra y fijador.
rriendo a la ayuda de una bolsa plástica limpia, sobre-
puesta en la taza del baño para facilitar su recolección.
En el mercado, se encuentran disponibles sistemas Cantidad de la muestra por frasco
concentradores desechables, los cuales no deben ser in-
corporados a la realización de ninguno de los métodos Por ser éste un examen cualitativo, la cantidad de
mencionados en estas recomendaciones, ya que corres- muestra es aproximada, recomendándose que en caso
ponden a una forma diferente de realización de búsqueda de deposiciones formadas alrededor de 5 g (tamaño de
de elementos parasitarios en deposiciones, por lo que una nuez) para una cantidad de 15 mL de solución
deben seguir las instrucciones específicas indicadas por fijadora. Cuando las deposiciones son líquidas, la can-
cada fabricante. tidad de muestra aproximada a recolectar será de 5 mL

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para 15 mL de solución fijadora, lo cual correspondería a de los métodos de este tipo, se propone el uso del Mé-
la cantidad equivalente a una cuchara sopera. todo de Burrows Modificado, como el recomendado
por la Sección Parasitología del ISP.
Soluciones fijadoras El uso de métodos de flotación es alternativo al Mé-
todo de Burrows Modificado para la búsqueda dirigida
Debe ser empleada aquella que se haya utilizado en de huevos de algunos coccidios intestinales y el método
la estandarización del método elegido por el laboratorio. de sedimentación por fuerza de gravedad se recomienda
La mayoría de las soluciones descritas, contienen para la detección de huevos de Fasciola hepatica.
sustancias reconocidamente peligrosas por lo que se hace
indispensable que el personal conozca sus componen-
tes, sus riesgos, medidas preventivas y primeros auxilios Método de Burrows Modificado
frente a accidentes de laboratorio, por ello debe existir in-
formación escrita como ficha de seguridad de cada uno Este método fue descrito por Burrows en 1967 con
de sus componentes en los manuales de procedimientos el nombre de Método de PAFS (Fenol Alcohol Formali-
internos. Como uno de los reactivos más empleados en la na) y modificado posteriormente por Torres y Navarrete
elaboración de soluciones fijadoras es el Formaldehído, en 1972. Más tarde, fue evaluado respecto al méto-
se mencionan en este documento consideraciones espe- do del PVA y al método de Telemann Modificado por
ciales para su manipulación en el Anexo 1. Sagua y col, además de Apt y col. Estas evaluaciones
demostraron una mayor eficiencia diagnóstica, espe-
cialmente en el hallazgo de protozoos, respecto a los
Instrucciones para la obtención de muestra métodos utilizados de rutina en esa época. En Chile, se
le conoce mayoritariamente como Método de Burrows
El laboratorio, además de entregar las indicaciones Modificado.
escritas, debe proporcionar instrucciones verbales a los Este es un método de concentración por sedimenta-
pacientes o familiares responsables de la obtención de la ción mediante centrifugación que se caracteriza por su
muestra. Se recomienda que la persona del laboratorio buen rendimiento en el diagnóstico de huevos de hel-
responsable de hacerlo solicite repetir las instrucciones mintos, quistes y trofozoítos de protozoos, especialmen-
para asegurar su comprensión. Las instrucciones es- te en el diagnóstico de elementos del género Entamoeba.
critas deben ser entregadas junto a los frascos y deben La ventaja radica en la calidad de la solución empleada
indicar los riesgos asociados al contacto con la solución como fijador, que penetra rápidamente en el elemento
fijadora y de qué hacer en caso de accidente. Anexo 2. parasitario permitiendo que las características morfoló-
gicas no se alteren e inactiva las formas infectantes que
pudieran estar presentes en la muestra.
Conservación de las muestras
Como en la mayoría de los casos la recolección de las
muestras toma 5 días, la solución fijadora seleccionada Recomendaciones para la observación
debe permitir la correcta preservación de las muestras en microscópica de las muestras
un rango amplio de temperatura, sin necesidad de refri- Estas recomendaciones se aplican a todos los métodos.
geración. Las muestras fijadas pueden ser conservadas El número de preparaciones a observar es una por
durante varias semanas en un lugar fresco y alejadas de fase, que es lo indicado en la literatura por los au-
los niños. Pueden además ser trasportadas a otras loca- tores de las diferentes publicaciones al respecto. Sin
lidades sin necesidad de refrigeración, manteniéndose embargo, si el laboratorio posee más de una tinción, se
herméticamente cerradas y sin exposición al sol. recomienda que se observen dos preparaciones por
fase, una por cada colorante. Esto facilita, en la mayo-
ría de los casos, la identificación de algunos elementos
SELECCIÓN DEL MÉTODO que pudieran presentar dificultad y es el procedimiento
Este documento recomienda el uso de un método utilizado de rutina por el Laboratorio de Referencia de
de concentración por sedimentación mediante Parasitología del ISP.
centrifugación, ya que permite la pesquisa de la ma- Observación microscópica de láminas preparadas:
yoría de los elementos diagnosticables en infecciones
intestinales causadas por protozoos o helmintos. Dentro • Utilizar un microscopio binocular con lentes objetivos

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de 10x, 40x y 100x (inmersión). Los lentes oculares • Solución MIF recomendada para el método de Tele-
deben tener un mínimo de 10x y estar dotados de una mann modificado.
escala micrométrica para efectuar diagnósticos dife-
• Solución de yodo o Lugol.
renciales que requieren mediciones de los elementos
parasitarios o sus estructuras (por ejemplo, huevos de • Solución Cristal Violeta Safranina (CVS).
Fasciola hepatica respecto a los de Diphyllobothrium
sp., larvas de nematodos, huevos de Ancylostoma/
Necator respecto a los de Trichostrongylidae, etc.) INFORME DE RESULTADOS
• Observar las preparaciones con objetivos de 10x Se recomienda emitir el informe de acuerdo a la nor-
para la búsqueda de huevos y larvas de helmintos mativa vigente para los laboratorios clínicos. Además, se
y de 40x para la búsqueda de trofozoítos, quistes, debe indicar el número de muestras examinadas.
ooquistes o esporoquistes de protozoos, Si el resultado es negativo, es decir no se observan
• Utilizar el objetivo de 100x para confirmar la iden- elementos parasitarios, se informa de la siguiente manera:
tificación de trofozoítos o quistes en especial aque-
llos de amebas. Examen Parasitológico Seriado de Deposiciones. (EPSD)

• Recorrer la preparación completamente, teniendo espe- - Método de Burrows Modificado.

cial cuidado en permitir que los límites de los recorri- - (x) Número de muestras procesadas.
dos se superpongan, para no dejar áreas sin examinar.
- Resultado: No se observan elementos parasitarios.
- Observaciones:
TINCIONES
Si el resultado es positivo, es decir presenta estados
Los colorantes recomendados para la observación de evolutivos de protozoos o helmintos, se informa de la
preparaciones húmedas en muestras de deposición deben siguiente manera:
ser capaces de teñir selectivamente las estructuras y per-
mitir identificación de los distintos elementos parasitarios, Examen Parasitológico Seriado de Deposiciones. (EPSD)
con especial interés en la observación de los núcleos, en - Método de Burrows Modificado.
el caso de los protozoos.
Si no se dispone de colorantes y solo en casos de - (x) Número de muestras procesadas.
urgencia, la muestra puede ser observada al fresco y sin - Resultado: Se deben informar la presencia de
teñir, sin embargo esto podría disminuir la sensibilidad y todos los elementos observados en la muestra.
especificidad del método cuando el observador no posee
- Observaciones:
la experiencia adecuada.
Es importante considerar que todos los colorantes
Consideraciones adicionales:
requieren un tiempo de acción para la correcta tinción
de los elementos. No existen referencias que indiquen • Siempre deberá indicarse el estado de desarrollo
estos tiempos, sin embargo la experiencia, a juicio de del elemento observado, tales como: huevo, lar-
expertos, recomienda un rango que va entre 5 y 15 min., va, quiste, ooquiste, etc. y el nombre científico del
dependiendo del tipo de colorante, de la dilución, del parasito, correctamente escrito y ciñéndose al
parásito presente en la muestra y de las estructuras es- código internacional de nomenclatura Zoológica.
pecificas por teñir.
• No utilizar abreviaciones.
Los colorantes reseñados, en este documento, han
sido utilizados por distintos laboratorios en Chile, sin em- • No clasificar las especies encontradas en parásitos
bargo, la Tionina es el colorante de elección y el recomen- y comensales.
dado por Burrows. • Cuando se observen cristales de Charcot Leyden,
se debe informar su presencia.
Entre los colorantes disponibles se encuentran:
• No se debe estimar la carga parasitaria de los ele-
• Solución Tionina, recomendado para el método de mentos presentes en la muestra, dado que el EPSD
Burrows modificado. no corresponde a un método cuantitativo.

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REGISTROS Evaluación Externa de la Calidad con al menos dos

envíos al año y dos muestras cada vez. Esto permi-
Se recomienda utilizar hoja de trabajo y libro de re- te evaluar y mantener actualizado al personal en el
gistro, ya sea en formato papel o digital de las activi- reconocimiento de los principales elementos parasi-
dades realizadas que debe incluir al menos la siguiente tarios. Es necesario, que estas muestras sean anali-
información: zadas como una muestra más dentro de la rutina
de trabajo.
- Nombre del paciente.
- N° de registro.
BIOSEGURIDAD
- Fecha del examen.
- Edad del paciente. Durante la obtención y el procesamiento de las
muestras, al igual que para los otros exámenes de
- Procedencia. fluidos corporales, se deben guardar las precauciones
- Técnica empleada. contenidas en el Manual de Bioseguridad de cada la-
boratorio y seguir las buenas prácticas necesarias para
- Resultado obtenido.
proteger al paciente, al operador, al observador y al
- Nombre Responsable de la ejecución de la técnica. medio ambiente.
Según, el reglamento sobre Manejo de Residuos de
- Nombre del Observador
Establecimientos de Atención de Salud (REAS, 2009)
y decreto N° 594 sobre condiciones sanitarias y am-
bientales básicas en los lugares de trabajo (DECRETO
CONTROL DE LA CALIDAD DE SALUD Nº 594/1999) que norman las condiciones
mínimas de contaminantes en las áreas de trabajo.
Control Interno
Los frascos con deposición y mezclados con fija-
Se sugiere contar con un control interno para esta dor que contengan Formaldehído no pueden ser des-
metodología que incluya todos los aspectos relevantes. echados en la basura común. Se debe disponer de un
Algunos de los indicadores posibles de evaluar, extraí- recipiente especial para residuos peligrosos, así como
dos del Manual de Control de Calidad en el Laboratorio también se debe colocar en bidones los líquidos resul-
Clínico publicado por el Instituto de Salud Pública, se tantes de los centrifugados, sobrenadantes y solucio-
indican en la tabla nº 2. nes que contengan Formaldehído.
Cobran atención las recomendaciones relacionadas
Control Externo con el uso de reactivos tales como Fenol y Formalde-
hído Anexo 1.
Los laboratorios que ofrezcan la realización de
este examen deben participar en algún Programa de

Tabla nº 2

Indicador
Se evalúa Frecuencia
Expresado como porcentaje de muestras

% de muestras escasas.
Relación fijador/muestra Mensual
% de muestras excesivas.

Instrucciones al paciente Trimestral % de paciente que comprenden las instrucciones.

% de muestras positivas por profesional

Observación microscópica
Trimestral calculando promedio, desviación estándar y
variación entre observadores
coeficiente de variación.

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RECONOCIMIENTO: REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Se reconoce en forma especial el trabajo reali- 1. Asenjo, S. y Teuber, C. Tinción CVS. Una nueva técnica de
zado por el Sr. Víctor Muñoz Flores Q.E.P.D. tinción para el diagnóstico de trofozoítos y quistes de proto-
Tecnólogo Médico, Profesor de la Escuela de Tec- zoos y huevos de helmintos intestinales. Rev. Chil. Tecnol.
nología Médica de la Universidad de Chile, el im- Méd. 1990, 13(2): 655-658.
pulsor de la iniciativa de normalizar acerca de este
2. Apt, W., C. Perez, G. Doren, J. Azocar. Evaluación del ren-
tema y quien habría sido, sin duda, revisor de esta
dimiento del método de PAFS en el diagnóstico de las
recomendación.
enteroparasitosis. Revista Médica de Chile. 1977; 105:
388-389.
3. Atías A.. Parasitología Médica. Editorial Publicaciones
Técnicas Mediterránea Ltda. 1999. ISBN: 956-220-155-4.
4. Burrows, R. A. New fixative and technics for the diagnosis
of intestinal parasites. Am J Clin Pathol. 1967; 48: 342-
346.
5. International Commission on Zoological Nomenclature.
International Code of Zoological Nomenclature. Fourth
edition. Published by The International Trust for Zoologi-
cal Nomenclature c/o The Natural History Museum, Lon-
don, UK. 1999.
6. Instituto de Salud Pública de Chile. Manual de control de
Calidad en el Laboratorio Clínico. Ministerio de Salud.
1998.
7. Mercado R., Reyes V., Atías A. Rendimiento comparativo
de las técnicas de Telemann modificado y PAF adaptado
en el diagnóstico coproparasitológico. Parasitología al
Día.1983; 7: 104-107.
8. Ministerio de Salud. Decreto N° 594 sobre Condiciones
Sanitarias y Ambientales Básicas en los lugares de traba-
jo. 1999. Publicado en el Diario Oficial de 29 de abril de
2000.
9. Ministerio de Salud. DTO. N º 6: Reglamento sobre Mane-
jo de Residuos de Establecimientos de Atención de Salud
(REAS). 2009.
10. Sagua H, Subiabre V, Galdames M, Arias B. Comparación
del rendimiento de tres métodos en el diagnóstico copro-
parasitológico. Rev. Med. Chile. 1975; 103: 175-177.
11. Sagua H, Subiabre V, Torres P, Puga S, Arias B. Análisis
comparativo del rendimiento del método del Fijador PAFS
con referencia al método con Fijador PVA en el diagnósti-
co de protozoos y helmintos intestinales. Bol Chil Parasi-
tol. 1973; 28: 58-60.
12. Torres, P. & Navarrete, N. Comparación entre los métodos
del fijador PAFS y del Telemann modificado en el diag-
nóstico de protozoos intestinales del hombre. Bol Chil.
Parasitol. 1972; 27, 90–95.

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ANEXO 1
RECOMENDACIONES PARA LABORATORIOS DE PARASITOLOGÍA QUE EMPLEEN FORMALDEHÍ-
DO O FENOL EN SUS SOLUCIONES FIJADORAS.

Todos los laboratorios que empleen Formaldehído entre sus reactivos, deben ocupar campana de extracción de
gases con capacidad suficiente para asegurar concentraciones inferiores al límite ambiental de 0,3 ppm (0,37 mg/
m3) para exposiciones cortas.
En caso de no poseer este equipamiento los operadores deberán emplear elementos de protección personal para
protección por vía aérea, piel o salpicaduras, tales como guantes, delantal, gafas y máscara facial. Si se pretende
evitar completamente la inhalación de vapores, debe recurrirse a la utilización de equipos de protección respiratoria
incluyendo filtros químicos del tipo BP3 y asegurar recambios de aire de la habitación.
Para el caso del uso de Fenol, se recomienda utilizar ventilación por extracción localizada en el lugar de las
emisiones químicas y aislar del resto del personal el proceso de manipulación. De lo contrario, se puede utilizar
respiradores apropiados junto con el uso de elementos de protección personal.
Es importante mantener al personal continuamente informado de los riesgos a los que se encuentra expuesto,
cómo minimizar estos riesgos y cómo actuar en caso de accidente.
El laboratorio puede evaluar el remplazo del Formaldehído y otros reactivos nocivos para la salud en algunas
metodologías. Sin embargo, debe mantenerse su eficiencia original, incluyendo la inactivación efectiva de los pará-
sitos, preservación y facilitación del proceso de tinción. Si bien, en algunos métodos como PVA se ha efectuado el
reemplazo de reactivos por otros menos nocivos, los resultados no han sido tan buenos como con el fijador original.

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ANEXO 2
INSTRUCCIONES PARA LA TOMA DE MUESTRA DE DEPOSICIÓN PARA ESTUDIO DE
ENTEROPARASITOSIS
1. Completar la etiqueta del frasco con el nombre completo y fecha de obtención de la muestra.
2. Defecar en un recipiente limpio y seco, en el pañal o recurriendo a la ayuda de una bolsa plástica limpia, sobre-
puesta en la taza del baño para facilitar su recolección
3. No debe mezclar las deposiciones con orina, cremas o talco.
4. No debe haber ingerido en días anteriores antibióticos, quimioterápicos, purgantes oleosos, fármacos a base de
bismuto, bario o carbono, ni medicamentos específicos, contra la o las parasitosis que se investigan.
5. Debe colocar un trozo de deposición del tamaño de una nuez dentro del frasco. En el caso de deposiciones
líquidas colocar lo equivalente a una cuchara sopera (5 mL).
6. Revolver con la cucharilla o el agitador adjunto hasta que el excremento se disuelva completamente en el líquido
que contenga el frasco.
7. Repetir día por medio hasta completar los 3 frascos.

NOTA: EL CONTENIDO LÍQUIDO DE LOS FRASCOS ES TÓXICO Y DEBE PERMANECER FUERA DEL
ALCANCE DE LOS NIÑOS. EN CASO DE INGESTA ACCIDENTAL DEBE ACUDIR DE INMEDIATO
A UN SERVICIO DE URGENCIA PARA RECIBIR ATENCIÓN.

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ANEXO 3
MÉTODO DE BURROWS MODIFICADO
Materiales y Equipos
• Vasos de vidrio.
• Pisetas.
• Mallas de tamizaje de bronce fosfórico, cobre o acero inoxidable. Abertura 425 µm de diámetro. Hilo 250 µm.
• Paleta de madera o baquetas de vidrio.
• Tubos de centrifuga graduados con 15 mL de capacidad, cónicos, de plástico desechable y con tapa.
• Portaobjetos.
• Cubreobjetos de 22 x 22 mm.
• Máscara de seguridad de uso individual con filtro para formaldehído tipo BP3.
• Centrifuga no refrigerada.
• Cámara de extracción de gases.
• Suero fisiológico de 0,85 %
• Fijador PAF.
• Acetato de etilo, que reemplaza al éter etílico por razones de seguridad.

Tinción
El método de Burrows modificado fue descrito empleando solución de Tionina como colorante, sin embargo en
su ausencia, se podrían utilizar como alternativa las siguientes soluciones:

• MIF
• Solución de yodo o Lugol
• CVS
De los colorantes mencionados esta normativa recomienda el uso de CVS. Sin embargo, el laboratorio debe
seleccionar la o las tinciones para la cual el observador se sienta más cómodo y le permita una mejor diferenciación
de los elementos presentes en la muestra.

Preparación de soluciones
a.- Fijador PAF:
• Cristales de Fenol 20 g
• Suero fisiológico (0,85%) 825 mL
• Etanol al 95% 125 mL
• Formaldehído en solución (37 o 40%) 50 mL

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 RECOMENDACIONES PARA LA REALIZACIÓN
DEL EXAMEN PARASITOLÓGICO SERIADO DE DEPOSICIONES

Disolver los cristales de Fenol y Formaldehído en el suero fisiológico 0.85%. Mezclar bien y guardar el frasco en
un lugar fresco. El fenol líquido (23 ml) puede reemplazar a los 20 g de fenol en cristales.

b.- Suero fisiológico 0.85%:

• Na Cl 8.5 g
• Agua destilada 1000 mL

Preparación de la Tinción
a) Solución MIF:
Solución de yodo o Lugol 0,10 mL
Formaldehído sol. (37 o 40 %) 0,15 mL
Timerosal 1/1000 0,75 mL
Debe prepararse diariamente.

b) Solución de yodo o Lugol:

Yodo 1 g.
Yoduro de Potasio 2 g.
Agua destilada 30 mL
Guardar en frasco ámbar por no más de 1 mes.

c) Solución de Tionina 0,1 %:

Tionina en polvo 10 mg
Agua destilada 100 mL
Filtrar con papel filtro varias veces hasta que no se produzca precipitación de los cristales al teñir las prepara-
ciones.

d) Solución CVS:
Solución A:
Cristal violeta 1g
Etanol 6 mL
Suero fisiológico 0.85% 494 mL
Mezclar y filtrar, Guardar en frasco ámbar.

Solución B:
Safranina 0,25 g
Etanol 10 mL
Suero fisiológico 0,85% 490 mL
Mezclar y filtrar. Guardar en frasco ámbar

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 RECOMENDACIONES PARA LA REALIZACIÓN
DEL EXAMEN PARASITOLÓGICO SERIADO DE DEPOSICIONES

Las soluciones A y B se mantienen indefinidamente a 14. Colocar una gota de tinción, en el portaobjeto mar-
temperatura ambiente. cado con la letra T (fase trofozoítica).
15. Colocar una gota del sedimento, una junto a cada
Preparación solución de trabajo:
gota de tinción.
Colocar 4 partes de solución A y 10 partes de solu-
16. Con un ángulo del cubreobjetos mezclar el sedi-
ción B. Mezclar. Guardar en frasco ámbar. Etiquetar.
mento y la tinción; luego cubrir.
La solución de trabajo de la tinción CVS
mantiene sus propiedades por lo menos hasta 17. Guardar en cámara húmeda.
3 meses desde el momento de su preparación. 18. Resuspender el contenido del tubo de sedimento
con suero fisiológico 0,85% hasta 10 mL

Desarrollo del Método 19. Agregar 2 mL de acetato de etilo.

20. Tapar el tubo y agitar enérgicamente por 30 segun-
1. Durante el procesamiento de las muestras, al igual
dos. Destapar lentamente.
que para los otros métodos aplicados a fluidos cor-
porales, se deben guardar las precauciones conte- 21. Centrifugar por 3 minutos a 2.000 r.p.m.
nidas en los manuales de bioseguridad. 22. Vaciar todo el sobrenadante de una sola vez, en for-
2. Numerar los tres frascos del paciente con el mismo ma rápida, invirtiendo el tubo.
número. 23. Resuspender el sedimento en 1 mL de suero fisio-
3. Numerar 2 portaobjetos diferenciando la Fase T de lógico 0,85 % y homogenizar.
la Fase Q, 2 vasos y 1 tubo de centrífuga con el 24. Proceder como en el punto 14 y marcar el portaob-
mismo número de los frascos. jetos con una letra Q (fase quística).
4. Homogenizar el contenido de los frascos mediante 25. Proceder igual que en el punto 15 y 16.
ayuda de una paleta de madera.
26. Colocar en cámara húmeda hasta su lectura. Estas
5. Vaciar todo el contenido de cada frasco en un vaso preparaciones se pueden conservar hasta 24 horas
y agregar suero fisiológico 0,85% con la precaución en la cámara húmeda en un lugar fresco o refrigerar
de efectuar una buena dilución y homogenización. entre 2 y 8°C.
6. Tamizar la emulsión a través de la malla colocada 27. Observar las muestras recorriendo totalmente la pre-
en un vaso limpio. paración e informar. Siguiendo el esquema de orien-
7. Observar el material retenido en la malla en busca tación de lectura de las preparaciones
de parásitos macroscópicos.
8. Colocar aproximadamente 12 mL de tamizado en el
tubo de centrífuga.
9. Centrifugar por 3 minutos a 1.800 r.p.m.
10. Eliminar el sobrenadante invirtiendo el tubo. Si el
sedimento es menor de 0,5 mL agregar del tami-
zado hasta lograr un sedimento de 0,5 a 0,6 mL.
Resuspender con suero fisiológico 0,85 % y centri-
fugar nuevamente.
11. Resuspender el sedimento hasta 2 mL con suero fi-
siológico 0,85 % y agitar para soltar el sedimento.
12. Completar a 12 mL con suero fisiológico 0,85% y
centrifugar por 3 minutos a 1.800 r.p.m. aprox.
13. Repetir los pasos 11 y 12 entre dos y cuatro veces
hasta obtener un sobrenadante limpio o transparen-
te.

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