facilitaba la determinación de los cam- bles también a la urea, el glicerol y tático positivo que repele protones y

bios de permeabilidad inducidos por a otros solutos de tamaño reducido. otros cationes, mientras que admite
la expresión de proteínas exógenas. Excepto AQP6, tales acuaporinas se el paso de solutos neutros.
Hoy la técnica se emplea de forma muestran impermeables a solutos do- La obstrucción de AQP1 al paso de
rutinaria en la caracterización funcio- tados de carga eléctrica y iones. iones responde también al tamaño de
nal de todas las acuaporinas clonadas La selectividad de las acuaglice- los iones hidratados. En solución, los
para el estudio de las propiedades de roporinas no depende sólo de la es- iones se encuentran rodeados de una
permeabilidad al agua, selectividad trechez del poro. En algunas, como capa de agua que aumenta su diá-
a otros solutos, dependencia de la AQP3, la permeabilidad al glicerol metro. En la acuaporina-1 no existe
temperatura y del pH, amén de otros es mucho mayor que a la urea, una ninguna estructura que se encargue
aspectos funcionales. molécula de diámetro inferior. En de liberar al ion de esta capa de
La AQP1 presenta una permeabi- AQP1, los aminoácidos dotados de solvatación; por tanto, es imposible
lidad elevada. De las trece acuapori- carga eléctrica de los dos segmentos que pase a través de su diámetro. La
nas de mamífero que hoy conocemos, α-hélice que conforman el paso del estrechez del poro y la notable hi-
cuatro de ellas (AQP3, AQP7, AQP9 canal se orientan con sus polos po- drofobicidad de la superficie interna
y AQP10) forman el subgrupo de las sitivos hacia el centro del poro. Esto del canal explican la permeabilidad al
acuagliceroporinas, que son permea- genera un importante campo electros- agua de AQP1 y su selectividad.

ESTRUCTURA MOLECULAR DE LAS ACUAPORINAS

GLICOSILACION DOS TRIPLETES NPA
AQP1 se compone de dos grandes
DOMINIO-2 C189 dominios, imagen especular uno del
HgCl2
otro. Se organiza en seis segmen-
A
NP

C
tos de estructura α-hélice (1-6) que
EXTRACELULAR
A E atraviesan la membrana de lado a
lado; están unidos por cinco lazos
conectores (A-E). El lazo intracelular
1 2 3 4 5 6 MEMBRANA B y el extracelular E son portadores
de un triplete asparragina-prolina-ala-
B
D nina NPA. Esta duplicación del triple-
NPA

H2N
te NPA es característica de todas las
INTRACELULAR acuaporinas.
DOMINIO-1

HOOC

GLICOSILACION
H2O
EL RELOJ DE ARENA
El lazo B y E se pliegan hacia C EXTRACELULAR
la membrana para formar el poro A
o canal acuoso de la proteína.
La estructura resultante encierra
una zona central estrecha que N A
APN MEMBRANA
se ensancha abriéndose hacia
ambos lados de la membrana. Se
denominó “reloj de arena”, por su B D
semejanza con éste. En el sitio más H2N INTRACELULAR
estrecho del poro acuoso se ponen
en contacto los tripletes NPA. HOOC
MIRIAM ECHEVARRIA Y RAFAEL ZARDOYA

DE CUATRO EN CUATRO
H2O
EXTRACELULAR Aunque cada acuaporina forma por
3 4
sí sola un canal, en la membrana
celular estas proteínas se ensam-
blan en grupos de cuatro. Parece
1 2 que un arreglo tetramérico confiere
a la estructura una mayor estabi-
lidad en el entorno lipídico de la
INTRACELULAR membrana.

64 INVESTIGACIÓN Y CIENCIA, diciembre, 2006

 El transporte de agua OJO
RIÑON AQP0, 1, 3, 4, 5
paso a paso TUBULO PROXIMAL CEREBRO
Dentro del canal, las moléculas de AQP1 AQP1, 4, 9
agua tienden puentes de hidrógeno AQP6
entre sí y con las paredes del canal. AQP7 PULMON
Sin embargo, a medida que una molé- AQP1, 3, 4,
cula de agua se acerca a la parte más
estrecha del canal, proceda aquélla ASA DE HENLE
del interior o del exterior celulares, AQP1
la intensa carga electrostática positiva
de la zona, creada por los lazos que
forman el poro, provoca una reorien- TUBULO COLECTOR
tación de la molécula que obliga a su
átomo de oxígeno a tender puentes AQP2
de hidrógeno con las dos asparragi- AQP3
nas del poro. Primero la molécula de AQP4
agua se une sólo a uno de esos ami-
noácidos, permaneciendo unida por
el otro puente de hidrógeno a la mo- 4. LAS ACUAPORINAS SE HALLAN PRESENTES en la mayoría de las células de nuestro
lécula de agua vecina; luego se une cuerpo. Las células principales del túbulo colector renal expresan AQP2, AQP3 y AQP4.
a las dos asparraginas, rompiendo así Los astrocitos y células gliales de determinadas zonas cerebrales expresan sólo AQP4. Los
por completo la molécula de agua su órganos que, como el ojo, el riñón, el pulmón, el tracto gastrointestinal o las glándulas se-
conexión con las otras moléculas de cretoras, se caracterizan por su alto trasiego de agua, presentan varias de estas proteínas.
agua en el canal. La imposibilidad En el cerebro, donde escasea el flujo de agua a través de la membrana celular, hay una
de tender puentes de hidrógeno con presencia y distribución limitadas de AQP.
los aminoácidos hidrofóbicos que
forman la pared del canal favorece
la permeabilidad. Asimismo, en el función neuronal) hay una presencia a receptores específicos provoca un
sitio de mayor constricción del canal y distribución limitadas de AQP. aumento del AMP cíclico intracelu-
se rompe la concatenación de puen- Con excepción de AQP2 y AQP6, lar. Este mensajero molecular activa
tes de hidrógeno entre las moléculas las acuaporinas intervienen en la com- la proteína quinasa A (PKA), que
de agua que llenan el poro, lo que posición de la membrana celular. Tras se encarga de fosforilar a AQP2. La
impide el transporte de protones que su síntesis, AQP2 permanece como activación de AQP2 causa entonces
se establecería a través de AQP1. La una proteína de membrana en vesícu- la traslocación y fusión de vesículas
acuaporina-1 es permeable al CO2. las intracelulares; sólo bajo la acción que contienen AQP2: se funden con
De hecho, la proteína forma un ca- de la hormona antidiurética (arginina- la cara apical de la célula renal.
nal para el transporte del dióxido vasopresina), las vesículas se fusio- También AQP1, en el hígado,
de carbono. nan con la cara apical de las células AQP5, en las glándulas salivales, y
principales del túbulo colector renal; AQP8, en el páncreas, se transportan
Distribución de ese modo las células exponen en desde vesículas intracelulares hasta
La mayoría de las células de nuestro la membrana la proteína responsable la membrana celular. En estos ca-
cuerpo poseen acuaporinas. Las cé- del aumento de la permeabilidad al sos, sin embargo, no se conoce el
lulas principales del túbulo colector agua en dicho túbulo. mecanismo de regulación. AQP6,
renal, por ejemplo, expresan AQP2, La acuaporina-6 es también una presente en vesículas de las células
AQP3 y AQP4; los astrocitos y cé- proteína intracelular. Se aloja en ve- intercaladas del túbulo colector renal,
lulas gliales de determinadas zonas sículas que permanecen siempre en cambia su conformación a pH < 5,5:
cerebrales, en cambio, expresan sólo el interior de la célula. En la cara se hace permeable a agua y cloro. El
AQP4; se han hallado indicios de apical de otros epitelios encontramos pH regula también la actividad de
la presencia de acuaporinas en las también AQP5. Las acuaporinas 3 y AQP0 y AQP3. Algunas acuaporinas
neuronas. Desconocemos la razón de 4 son principalmente de membrana cuentan con secuencias conservadas
tal diversidad. basolateral. AQP1 presenta una dis- para la fosforilación por interacción
En coherencia con su función de tribución ubicua en toda la membra- con proteínas quinasas A (AQP2,
MIRIAM ECHEVARRIA Y RAFAEL ZARDOYA

canal hídrico, el ojo, el riñón, el na. AQP8 reside en vesículas intra- AQP5 y AQP9) o proteínas quinasas
pulmón, el tracto gastrointestinal o celulares así como en la cara apical C (AQP4, AQP5 y AQP7). En algu-
las glándulas secretoras, órganos que de las células acinares del páncreas. nos casos, la regulación se produce
se caracterizan por un alto trasiego AQP9 parece preferir la parte baso- por fosforilación directa del canal. La
de agua, presentan varias de estas lateral de la membrana. fosforilación de la acuaporina-2 en la
proteínas. En el cerebro, en cam- Ser-256 resulta fundamental para el
bio, donde escasea el flujo de agua a Regulación incremento de permeabilidad al agua
través de la membrana celular (para Veamos cómo opera la regulación de dependiente de vasopresina.
minimizar las variaciones del medio la acuaporina-2 en el túbulo renal. En fecha reciente se ha propuesto
extracelular que pudieran afectar a la La unión de la hormona vasopresina que la interacción directa entre las

INVESTIGACIÓN Y CIENCIA, diciembre, 2006 65

 SIP

Arabidopsis (BAB09487)
Arabidopsis (AAF26B04)
Zea (AAK26766) Zea (AAK26764)
Arabidopsis (CAB72165) Picea (CAA06335)
Nicotiana (CAA69353)
Oryza (P50156)
AQP8 Zea (AAC09245)
Arabidopsis (AAC62397)
Homo (BAA34223) Raphanus (BAA12711)
Mus (P56404) Brassica (AAD39372)
Caenorhabditis (CAA94903) Picea (CAB39758) TIP
Zea (AAC24569)
Solanum (AAB67881)
Lycopersicon (AAB53329)
Helianthus (CAA65186)
Vernicia (AAC39480)
Cicadella (CAA65799) Arabidopsis (AAC49992)
Haematobia (CAA65799) Brassica Arabidopsis (Q08733)
Bos (P47865) (AAB61378) Solanum (CAB46350)
Homo (P29972) Raphanus Nicotiana (CAA04750)
Brassica (AAD39374)
Mus (Q02013) (BAA32778) Glycine (AAA69490)
Rana (P50501) Oryza (AAC16545)
Homo (Q13520) Solanum (CAB46351) PIP
Rattus (AAD29856) Spinacia (AAA99274)
Mus (P56402) Arabidopsis (AAB65787)
Homo (P4L181) Nicotiana (AAL33586)
AQP Mus (ADD32491) Saccharomyces (AAD10058)
Homo (P55064) Saccharomyces (P53386)
Saccharomyces (AAC69713)
Bufo (AAC69694) Shigella (AAC12651)
Rana (Q06019) Escherichia (BAA35593)
Homo (P30301) Escherichia (BAA08441)
Mus (P51180) Plesiomonas (BAA85015)
Rattus (P09011) Brucella (AAL51252)
Bos (P06624) Brucella (AAF73105) AQP Bacterianas
Mus (AAC53155) Agrobacterium (AAK86288)
Homo (P55087) Agrobacterium (AAL46049)
Smorhizobium(NP_435575)
Methanothermobacter (AB055880) Pseudomonas (AAG07421)
Lactococcus (P22094) Pinus (AAL05942)
Clostridium (AAK78746) Oryza (S52003)
Thermus (BAB61772) Zea (AAK26750)
Bacillus (AAA22490) Medicago (AA132128) NIP
Thermotoga (AAD36499) Glycine (P08995)
Staphylococcus (BAB42394) Pisum (CAB45652)
Lotus (AAF82791)
Listeria (CAC99617) Arabidopsis (CAA16760)
Escherichia (P11244) Saccharomyces (BAA09187)
Homo (O14520) Toxocara (AAC32826)
Mus (BAA24537) Caenorhabditis (AAA83205)
Xenopus (CAA10517) Homo (O43315)
Mus (ADD20305) Rattus (AAC36020)
Homo (Q92482)

GLP
0,05 cambios
5. ARBOL DE LAS RELACIONES DE PARENTESCO DE LAS ACUAPORINAS: canales de agua
acuaporinas y otras proteínas celula- (verde), canales de glicerol y urea (azul) y nodulinas (rojo). Los puntos en las ramificaciones
res constituiría un mecanismo de se- indican la significación estadística.
ñalización. En el extremo C-terminal
de la acuaporina-4 se han identificado las acuaporinas en un órgano determi- es responsable de la reabsorción de
secuencias de reconocimiento para nado. También la alteración en la fun- casi el 80 por ciento del agua en
el anclaje en proteínas del citoes- ción o regulación de estas proteínas el túbulo renal. Así, los ratones en
queleto que podrían determinar la puede resultar patológica. Determina- los que se ha eliminado esta proteí-
distribución espacial de AQP4 en la das mutaciones en el gen de AQP2 na son incapaces de producir orina
membrana del astrocito. La regula- se han relacionado con nefropatías. concentrada. En el cerebro, AQP1
ción crónica se realiza por diversos En el laboratorio de Alan Verkman se participa en la producción del líquido
mecanismos que alteran la transcrip- obtuvieron ratones “knockout” en los cefalorraquídeo. En el pulmón, la ex-
ción de tales proteínas. que se había silenciado la expresión presión de AQP1 aumenta al nacer y
El número de moléculas de acua- de cada una de las acuaporinas. Los en presencia de corticosteroides; ello
porina-2 aumenta con la vasopresina. múridos transgénicos se utilizaron sugiere que la proteína interviene en
Tal regulación se debe a la presencia, para el estudio de las alteraciones el aclaramiento del agua pulmonar
en el promotor del gen de AQP2, funcionales que acarrea la ausencia que requiere el recién nacido para
de regiones que unen AMP cíclico de una de estas proteínas. Se obser- iniciar la respiración.
y, por tanto, activan la transcripción vó que dos mutaciones génicas de La disfunción de las cuatro acua-
MIRIAM ECHEVARRIA Y RAFAEL ZARDOYA

del gen. La deshidratación provoca AQP0 provocan en ratones cataratas porinas que se expresan en el tracto
el aumento de AQP3 en el riñón, congénitas. respiratorio (AQP1, AQP3, AQP4 y
la vejiga urinaria y los uréteres. Un Debido a su ubicuidad, la acuapori- AQP5) podría guardar relación con
estrés hiperosmótico estimula la na-1 se halla implicada en numerosos el asma, edemas pulmonares u otras
expresión de AQP4 y AQP9 en la trastornos. La presencia de AQP1 en patologías asociadas a la homeostasis
corteza cerebral. el endotelio de la córnea y de AQP5 del agua pulmonar.
en el cristalino sugiere una función La disfunción de la acuaporina-2
Patologías de estas proteínas en el mantenimien- provoca trastornos graves. En 1994,
Numerosos trastornos se han asocia- to de la transparencia de la córnea y el equipo que dirige Peter Deen, de
do con una distribución aberrante de el cristalino, respectivamente. AQP1 la Universidad y el Hospital Univer-

66 INVESTIGACIÓN Y CIENCIA, diciembre, 2006

 sitario de Nimega, publicó el primer lugar, de forma sucesiva, a AQP3, dio lugar a dos tipos básicos de PIP:
caso de diabetes insípida nefrogénica AQP7, AQP9 y AQP10. Curiosamen- el tipo 1 y el tipo 2. Las proteínas
(NDI) hereditaria asociada a muta- te, no hay miembros de esta subfa- intrínsecas del tonoplasto resultan de
ciones del gen de AQP2. Los indi- milia en plantas. al menos dos duplicaciones génicas
viduos que sufren esta enfermedad En vertebrados encontramos seis sucesivas.
eliminan grandes cantidades de orina canales de agua resultantes de du- De todas las acuaporinas vegetales,
diluida debido a una insuficiencia plicaciones génicas consecutivas: las que revisten mayor interés desde
renal que impide la reabsorción de AQP0, AQP1, AQP2, AQP4, AQP5 el punto de vista evolutivo son las
agua en respuesta a la vasopresi- y AQP6. El número de acuaporinas nodulinas. Se describieron en los nó-
na. Un aumento en la expresión de se desconoce en invertebrados; has- dulos simbióticos de las raíces de
AQP2 se relaciona con un incre- ta la fecha, se ha descrito sólo una leguminosas, pero se encuentran tam-
mento en la retención de líquido: AQP en tres especies de insectos. La bién en plantas sin nódulos simbióti-
así ocurre en la cirrosis hepática, acuaporina-8 se encuentra en todos cos. Según los análisis de parentesco,
la insuficiencia cardíaca congestiva los animales. todas las nodulinas descenderían de
y el embarazo. El mayor número de acuaporinas un mismo tipo de canales de agua
Las alteraciones en la expresión se encuentra en el reino vegetal. que fue adquirido por el ancestro
de las acuaporinas provocan tam- La caracterización de los canales común de todas las plantas a partir
bién trastornos cerebrales. Las AQP4 de agua en plantas se debe sobre de bacterias por transferencia géni-
aberrantes se asocian al desarrollo de todo a dos grupos de investigación, ca horizontal. Luego, puesto que las
patologías relacionadas con desequi- el de Maarten J. Chrispeels, de la plantas carecen de transportadores de
librios en la homeostasis iónica. Una Universidad de San Diego en Ca- glicerol-urea, estos canales de agua
disfunción de la acuaporina-4 podría lifornia, y el de Per Kjellbom, de habrían cambiado su función: una
provocar cambios en la concentración la Universidad de Lund. La primera fuerte presión selectiva los trans-
de iones potasio (K+) que lleven a acuaporina que se aisló en plantas se formó en los actuales canales de
un aumento de la excitabilidad neu- denominó ALFA-TIP. glicerol-urea.
ronal. La relación entre la AQP4 y De acuerdo con su origen evoluti- Dado que las nodulinas adquirieron
el edema cerebral se descubrió me- vo, se conocen cuatro grandes gru- su capacidad de transportar glicerol-
diante experimentos llevados a cabo pos de canales de agua en plantas. urea de forma distinta al resto de
con ratones en los que la expresión Cada grupo presenta una localización acuagliceroporinas (mediante conver-
de AQP4 se había silenciado. Se ha celular diferencial: las proteínas in- gencia funcional), los aminoácidos
observado también que el edema que trínsecas de membrana plasmática implicados en la selectividad por
se produce tras un período isquémi- (PIP), las proteínas intrínsecas del glicerol-urea son también distintos.
co puede reducirse de forma notable tonoplasto o membrana vacuolar La secuencia de las nodulinas guarda
mediante la eliminación de la AQP4 (TIP), las pequeñas proteínas bási- semejanza con la secuencia típica de
perivascular. cas intrínsecas (SIP) y las nodulinas los canales de agua, pero presenta
(NIP). Las proteínas intrínsecas de algunos cambios, necesarios para su
Evolución por duplicación génica membrana plasmática parecen derivar función, que recuerdan a las acua-
Como hemos mencionado, las acua- de una única duplicación génica que gliceroporinas.
porinas pertenecen a la familia de
proteínas integrales de membrana
(PIM). Esta familia agrupa a más
de 200 miembros. Su evolución Los autores
arranca de la duplicación de un gen Miriam Echevarría Irusta se doctoró en biología por la Universidad Simón Bolívar
originario, que supuso la aparición de Caracas. Es profesora de la Universidad de Sevilla. Se dedica al estudio funcional
de dos proteínas con funciones di- de las acuaporinas en el departamento de fisiología médica y biofísica del Laborato-
ferenciadas: los canales de agua y rio de Investigaciones Biomédicas del Hospital Virgen del Rocío. Rafael Zardoya San
los canales de glicerol y urea. Esta Sebastián se doctoró en biología por la Universidad Complutense de Madrid. Desarrolla
es la situación que se observa hoy su investigación sobre filogenia y evolución molecular en el Museo Nacional de Ciencias
Naturales del CSIC.
en bacterias y hongos, que cuentan
sólo con una copia de cada uno de
estos canales. Luego, ambos tipos Bibliografía complementaria
de canales se diversificaron mediante APPEARANCE OF WATER CHANNELS IN XENOPUS OOCYTES EXPRESSING RED CELL CHIP28 PROTEIN.
MIRIAM ECHEVARRIA Y RAFAEL ZARDOYA

duplicaciones génicas en animales G. M. Preston y otros en Science, vol. 256, págs. 385-387, 1992.
y plantas. En Arabidopsis se han CLONING AND EXPRESSION OF AQP3, A WATER CHANNEL FROM THE MEDULLARY COLLECTING DUCT
identificado hasta 35 proteínas; ello OF RAT KIDNEY. M. Echevarría y otros en Proceeding of National Academy of Sciences
resalta la importancia del control del USA. vol. 91, págs. 10997-11001, 1994.
flujo de agua en las plantas. STRUCTURAL DETERMINANTS OF WATER PERMEATION THROUGH AQUAPORIN-1. K. Murata y otros
Las proteínas transportadoras de en Nature. vol. 407, págs. 599-605, 2000.
glicerol han experimentado nume- ORIGIN OF PLANT GLYCEROL TRANSPORTERS BY HORIZONTAL GENE TRANSFER AND FUNCTIONAL
rosas duplicaciones en el nemátodo RECRUITMENT. R. Zardoya y otros en Proceeding National Academy of Sciences USA.
Caenorhabditis elegans. En mamí- vol. 99, págs. 14893-14896, 2002.
feros, tres duplicaciones han dado

INVESTIGACIÓN Y CIENCIA, diciembre, 2006 67