Unipaz Laboratorio

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PARA EL MANEJO DE EQUIPOS

EN EL LABORATORIO.
AGUA Y SUELO.
INGENIERIA AMBIENTAL Y
SANITARIA
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA EL MANEJO DE
EQUIPOS EN EL LABORATORIO.
INTRODUCCION
La creciente preocupación por el medio ambiente y la necesidad de eliminar o

minimizar los impactos de la contaminación hacen necesario que el profesional
en la disciplina conozca como analizar, evaluar e interpretar la calidad del
entorno que nos rodea en aras de una mejor gestión ambiental.
El presente manual busca orientar y auxiliar tanto a los alumnos de ingeniería
ambiental y de saneamiento de la UNIPAZ como a los docentes, de
herramientas y elementos básicos para hacer un análisis en forma
responsable, de los monitoreos de la calidad de agua y calidad del suelo a
partir de los diferentes equipos que nos brinda los laboratorios de la
universidad. Se describen detalladamente tanto los procedimientos a seguir en
el laboratorio como las principales técnicas analíticas utilizadas y el material
básico empleado.
En él, está la descripción de los procedimientos más comunes que se llevan a
cabo cotidianamente en el laboratorio para determinar si la calidad de agua y la
calidad de suelo cumplen con la normatividad vigente en las normas
colombianas.
1
CONTENIDO
COMPONENTE SUELO
Determinación de la densidad aparente y real del suelo…………………...…….
4
Determinación potenciométrica del PH del suelo………………………………... 9
Cuantificación de fosforo (P) en el suelo…………………………………………. 14
Elementos menores Cu, Mn, Zn, Fe por el método DTPA…………………….. 20
Cationes intercambiables del suelo (Ca, Na, Mg, K)……………………………. 26
COMPONENTE AGUA
Determinación de solidos suspendidos totales, volátiles y fijos…………………
30
Test de
jarras………………………………………………………………………….35
Determinación de arsénico total por el método de espectrofotometría de
absorción atómica……………………………………………………………………
38
Determinación de nitrato por espectrofotometría ultravioleta…………………...
44
Análisis de contaminantes fenólicos en agua por cromatografía de líquidos de
alta resolución (HPLC)
……………………………………………………………….50
Determinación de grasas y aceites en aguas por el método Soxhlet……………
54
Determinación del porcentaje de agua y sedimentos en petróleo y sus
derivados
………………………………………………………………………………………….60
Determinación de hidrocarburos disueltos y dispersos en el agua………………
63
Determinación de hidrocarburos totales por espectroscopia
infrarroja………….71
Determinación de agua por método volumétrico Karl Fischer……………………
78
2
Determinación de metales en agua por espectroscopia de absorción

atómica………………………………………………………………………………..82
MANUAL DE PROCEDIMIENTO
PARA EL MANEJO DE
EQUIPOS.
RECURSO SUELO
3
PRACTICA N°1
1. DETERMINACION DE LA DENSIDAD APARENTE Y REAL DEL SUELO.
1.1. INTRODUCCION DE LA PRACTICA
La densidad aparente (DA) es una propiedad del suelo ampliamente utilizada

en la agricultura, relacionada principalmente con las prácticas de manejo de
los suelos y de las aguas. Recientemente ha aumentado la preocupación
respecto a la determinación y exactitud en su medición, debido al incremento
de uso de irrigación, de tierras cultivadas sin labranza y a la compactación del
suelo.
La densidad aparente depende de la materia orgánica, la textura del suelo, la
densidad de las partículas minerales del suelo (arena, limo y arcilla) y su
disposición. Los valores de densidad aparente altos expresan un ambiente
pobre para el crecimiento de raíces, aireación reducida y cambios indeseables
en la función hidrológica como reducción de velocidad de infiltración de agua.
La densidad aparente es la relación existente entre el peso de un volumen
dado del suelo seco a la estufa a 105°C incluyendo su arreglo estructural, y el
volumen de agua desalojado por el mismo. La densidad aparente varía entre
1,0 y 1,8 g/cc
Peso de la muestra seca (gr)

Da=
Volumen (cc)
Ecuación 1.
4
2.3 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Fuente: Guide for educators USDA
1.2. MATERIALES Y EQUIPOS

RELACIÓN ENTRE LA DENSIDAD APARENTE Y LA TEXTURA DEL SUELO Y SU
INFLUENCIA EN EL DESARROLLO RADICULAR DE LA PLANTA.
TEXTURA Densidad Densidad Densidad aparente

aparente para el aparente que que restringe el
crecimiento de afecta el crecimiento de la
la planta. crecimiento de planta.
la planta.
Arenoso- Arenoso franco <1.60 1.69 >1.80
Franco arenoso- Franco <1.40 1.63 >1.80

Franco arcilloso arenoso- <1.40 1.60 >1.75
franco arcilloso
Limo- franco limoso <1.40 1.60 >1.75

Franco arcillo limoso <1.40 1.55 >1.65
Arcillo limoso- Arcillo <1.10 1.49 >1.58
arenoso
Arcilla <1.10 1.39 >1.47
MATERIALES EQUIPOS
Terrones de suelo seco Balanza analítica.

Parafina Plancha de calentamiento
Probeta de 100 mL
Agua destilada
Picnómetro
Termómetro
1.3. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1.3.1. DENSIDAD APARENTE
5
1 Caliente la parafina (nombre común de un grupo de hidrocarburos)

hasta que llegue a su fase liquida.
Tome un terrón de suelo indisturbado, haga un nudo con un hilo y

2
pese (aplicar corrección de acuerdo a la humedad utilizando la regla
de 3).
3 Sumergir el terrón en la parafina ya calentada, sacar y dejar enfriar,

repetir el procedimiento hasta que el terrón quede totalmente
cubierto.
4 Pese de nuevo el terrón de suelo ahora parafinado y tome el dato en

la tabla de datos.
5 Mida un volumen exacto de agua en una probeta cuidando de no

cometer el error del paralaje (es un error que se comete al introducir
algún instrumento o reactivo dentro de un equipo).
6 Sumerja el terrón en el contenido de la probeta y tome el dato del

volumen desplazado. Realice cada medición por triplicado para
obtener el promedio de cada muestra.
7 Se realizan los cálculos.
PSS 105°C
Da=
PSSP-PSS
Vd -
0.9
.9
Ecuación 2.
Dónde:
Da= Densidad aparente
PSS 105°C= Peso del terrón de suelo corregido
6
Vd= Volumen desplazado

PSSP= Peso del terrón de suelo parafinado
PSS= Peso terrón de suelo sin parafina.
0.9= Densidad de la parafina
1.3.2. DENSIDAD REAL
1 Pesar un picnómetro limpio y seco con tapa en la balanza analítica.

Introduzca al menos 10 gr de suelo secado al aire (si se va a realizar en un
2 frasco volumétrico de 100 mL pesar 50 gr de suelo.
3 Pesar nuevamente el picnómetro pero esta vez ya con el suelo y la tapa.

Adicionar agua destilada al picnómetro hasta la mitad de su volumen.
4
Remueva el aire calentado suavemente hasta ebullición. Luego de remover el
5 aire se agrega agua destilada hasta llenar el picnómetro.
Coloque la tapa seque el picnómetro y pese de nuevo.
6
Remover todo el contenido del picnómetro y llenarlo completamente con agua
7 destilada.
Secar el picnómetro en la parte exterior, mida la temperatura del agua y pese el
8
picnómetro.
Factores para la corrección de la densidad del agua

Temperatura °C Densidad del agua g/ml
18 0.99897
20 0.99862
22 0.99823
24 0.99780
26 0.99732
28 0.99681
dw (Ws – Wa)
Dr=
(Ws-Wa) – (Ws- Ww)
7
Ecuación 3.
Donde:
Dr= Densidad real
Dw= Densidad del agua a la temperatura observada
Ws= Peso del picnómetro más el suelo
Wa= Peso del picnómetro vacío
Wsw= Peso del picnómetro más suelo más agua
Ww= Peso del picnómetro más agua
3.4. BIBLIOGRAFIA
FAO, 1970, Boletin n°10. Metodos físicos y quimics de análisis de suelos y de

aguas. Roma.
Lopez Ritas, J. y Lopez, M.J. 1985. El diagnostico de suelos y parámetros que
la definen. Universidad de la Rioja. Logroño.
PRACTICA N°2
2. DETERMINACIÓN POTENCIOMÉTRICA DEL PH DEL SUELO.
8
En el año de 1909, el químico danés Sorense propuso o definió la utilización de

la escala del pH en lugar de la concentración (actividad, en realidad) de
hidrogeno. Propuso la expresión del potencial de hidrogeno (pH), como el
logaritmo negativo de la concentración Molar (más exactamente de la actividad
molar) de los iones de hidrogeno. Esto es potencial de hidrogeno que se
debería expresar en:
PH= -Log H+
Fuerza de los ácidos Fuerza de las Bases
H+ (CH3COOH) Acidez débil Alcalinidad débil (NH4OH)
0—1—2—3—4—5—6 7 8—9—10—11—12—13—14
N
Acidez fuerte HCL Neutro Alcalinidad fuerte KOH
La concentración de iones de Hidrogeno es una propiedad importante cuando

se estudia un suelo. La escala de pH se utiliza como un indicador de la
concentración de los iones de hidrogeno en el suelo. El pH se mide en una
escala logarítmica y representa el logaritmo negativo de la concentración de los
iones de hidrogeno en la solución suelo, expresado en moles/L (pH = - log
[H+]). Por ejemplo, un pH de 2 representa una concentración de 1 x 10 -2
moles/L de iones H+, y un pH 8 representa una concentración de 1 x 10 -
8
moles /L de iones H+. Cuando el suelo presenta una alta concentración de
iones hidrógeno, se considera ácido y cuando presenta una baja concentración
se considera básico. Un pH 7 se considera neutro. La escala de pH se
encuentra en un rango de 1 a 14, siendo 1 extremadamente ácido y 14
extremadamente básico.
PARÁMETRO DE PH CARACTERÍSTICAS
<5.0 MUY ÁCIDO -Necesidad de encalar para la mayoría de los cultivos.
-Posible toxicidad de Al y Mn.
-Deficiencia de P, Ca, Mg, Mo, y N.
9
5.1- 6.0 MODERADAMENTE ÁCIDO -Baja solubilidad del P y regular disponibilidad de Ca y

Mg.
-Algunos cultivos como las leguminosas (hierbas,
matas, arbustos y árboles) requieren encalamiento.
6.1- 6.5 LIGERAMENTE ÁCIDO -Condición adecuada para el crecimiento de la mayoría

de cultivos.
6.6- 7.3 NEUTRO - Buena disponibilidad de Ca y Mg.

-Moderada disponibilidad de P.
-Baja disponibilidad de los micro-elementos con
excepciones del Mo.
7.4 – 7.8 LLIGERAMENTE -Posible exceso de Ca y Mg y carbonatos.

-Baja solubilidad del P y micro elementos con excepción
ALCALINO
del Mo.
-Posible necesidad de tratar el suelo con enmiendas
como por ejemplo el yeso.
-Se inhibe el desarrollo de varios cultivos.
>7.8 MEDIANAMENTE ALCALINO -Posible exceso de sodio intercambiable.

-Se inhibe el crecimiento de la mayoría de los cultivos.
A FUERTEMENTE ALCALINO
-Hay necesidad de tratar el suelo con enmiendas.
RANGO DE PH EN LOS SUELOS
2.2. CALIBRACIÓN GENERAL DEL POTENCIÓMETRO O PH-METRO.
Es importante una correcta calibración del equipo para que la toma de datos
sea exactos. Todos los PH-metros digitales son similares. Es importante revisar
la carta de vida útil del electrodo, la cual no debe ser mayora un año o 1.500
lecturas, mantener inmerso y tapado el orificio del electrodo en agua destilada
o (KC 3.0 N), para su protección.
2.3. MATERIALES Y REACTIVOS.
10
Reactivos Formula Soluciones

H2O
Agua destilada o des ionizada Agua destilada hervida y fresca,
taparla, que no entre el CO2.
PH=4.0
Buffer o solución reguladora Solución Buffer o tampón Acida;
para medio acido.
PH=7.0
Buffer o solución reguladora Solución Buffer o tampón neutro.
Iso punto.
PH=10
Buffer o solución reguladora Solución Buffer o tampón básica;
para medio básico.
KCI
Cloruro de potasio Solución de KCI 3.0 Normal.
MATERIALES EQUIPOS INSUMOS
Vidrio reloj Balanza analítica Agua potable

Espátula PH-metro Limpiador L.O.C
Vaso precipitado de 100ml Cronometro Muestra de suelo
Vaso de precipitado de 100 ml Agitador magnético Muestra patrón
plástico. Varilla de agitación Energía eléctrica
Agitador, policía o (magnetos) Destilador de agua Papel de arroz
Probeta de 50 ml Des mineralizador de Marcadores
Frasco lavador agua. Lanilla
Llenador pico KCI 3.0N
electrodo.
1.
11
Pesar la muestra del suelo tamizado en malla #10 hasta llegar a los 30 gr en la
balanza.
Medir 30ml de agua H20 destilada en una probeta, recuerde que hay que
2. controlar el exceso de CO 2 tapando el vaso de reacción, (medición de
volumen).Una vez medido los 30 ml de agua destilada se adicionan al suelo y
se agita con una varilla de vidrio para homogenizar, agitar durante 10 minutos,
mezclar en relación 1:1 AGUA=SUELO, dejar en reposo 1 hora, tiempo para
liberar los hidrogeniones: H+.
Encender el PH-metro y calibrarlo con las soluciones Buffer, se deja el equipo

3.
encendido durante 10 minutos para permitir su calentamiento, sacar el
electrodo que debe estar tapado el orificio de llenado, inmerso en H 20 en agua
destilada y séquelo cuidadosamente con papel de arroz.
4. Destape el orificio de llenado del electrodo y complete con KCI al 3.0N, si está
bajo el nivel.
CALIBRACIÓN CON LAS SOLUCIONES DE BUFFER O TAMPÓN EN MEDIO

ACIDO O BÁSICO.
 Introduzca el electrodo primero en un vaso precipitado plástico con

Buffer de PH 7.0 y agite suavemente para evitar entrada de CO 2 y hacer
lectura de PH.
 Mida la temperatura de la solución y ajuste el equipo a ese valor.
 Ajuste la lectura del PH si el equipo no marca 7.0 antes de 5 minutos de
contacto del electrodo con la solución.
 Saque el electrodo de la solución, lávelo rápidamente con agua destilada
y séquelo bien suave.
 Sumerja el electrodo en la solución reguladora con PH: 4.0 si las
mediciones van a ser en medio acido o PH: 10 si van a ser en medio
alcalino. Deje en contacto durante 5 minutos, accione el selector de PH y
compruebe la lectura, esta no debe presentar una desviación superior a
+/-0,1 unidad de PH.
 Lave nuevamente muy bien el electrodo con abundante agua destilada,
séquelo con papel suave e introduzca la muestra problema.
6.
12
Una vez tengamos el PH-metro calibrado, se procede a hacer la medición,

agite la suspensión e introduzca el electrodo y espere hasta que la lectura se
estabilice.
Tome el dato que arroja el PH-metro y anótelo en su hoja de cálculos, si va a

7. hacer varias mediciones lave bien el electrodo con agua destilada después de
cada medición.
NOTA Los valores de referencia: entre PH: 4,8 a 8, 2 definidos por

la sociedad colombiana de la ciencia del suelo, el PH se mide en unidades de
PH y los reactivos deben ser analíticos y de marcas registradas.
3.4. BIBLIOGRAFIA
Bornemisza, E., M. Constenla, A. Alvarado, E.J. Ortega, y A.J. Vásquez. 1979.

Organic carbon determination by the Walkley-Black and Dry Combustion
Methods in surface soils and Andept Profiles from Costa Rica. Soil Sci. Soc.
Am. J. 43.78.83.
PRACTICA N°3
13
3. CUANTIFICACION DE FOSFORO (P) EN EL SUELO
El fosforo es un no metal perteneciente al grupo 15, es decir al grupo del

nitrógeno. Existen al menos 4 formas alotrópicas: blanca, amarilla, roja y negra.
Comúnmente el fosforo es blanco, sólido y de textura cerosa, mientras que en
estado puro es transparente e incoloro. El fosforo se encuentra en los suelos
tanto en forma orgánica como inorgánica y su solubilidad en el suelo es baja.
Existe un equilibrio entre el fosforo en la fase solida del suelo y el fosforo en la
solución del suelo.
Los tipos de compuesto de fosforo que existen en el suelo son principalmente
determinados por el pH del suelo, por el tipo y la cantidad de los minerales en
el suelo. Por lo general, los compuestos minerales que forma el fosforo son
compuestos de aluminio, hierro, manganeso y calcio. En suelos ácidos el
fosforo tiende a reaccionar con aluminio, hierro y manganeso, mientras que en
suelos alcalinos la fijación dominante es con el calcio. El rango de pH óptimo
para la disponibilidad máxima del fosforo es de 6 a 7.
3.1.1. METODO DE BRAY Y KURTZ
Este método es muy utilizado para cuantificar fosfatos en suelos, utilizando una
solución extractora, donde el ácido clorhídrico disuelve principalmente los
fosfatos del calcio y algunos de hierro y aluminio, mientras que los fluoruros
promueven la desorción de los fosfatos ligados al hierro y al aluminio. El ion
fluoruro al disminuir la actividad de Al 3+, Ca2+ y Fe3+ por la formación de
complejos, evita la adsorción de los fosfatos solubilizados.
Luego se prepara un reactivo mixto para la determinación por
espectrofotometría, donde el molibdato de amonio y el tartrato de antimonio y
potasio, en medio acido, reaccionan con el ortofosfato para formar ácido
fosfomolibdico, el cual es reducido por el ácido ascórbico a un complejo de
molibdeno de color azul intenso, la intensidad del color azul es proporcional a la
concentración de fosforo que se mide en un espectrofotómetro a 885 nm. La
concentración determina a partir de una curva de calibración.
3.1.2. COLORIMETRIA
14
Van Holde, K (1971) detalla a la colorimetría como la técnica más usada para
determinar la concentración de compuestos. El fundamento de la técnica
consiste en que si pasa luz blanca a través de una solución coloreada, algunas
longitudes de onda se absorben con preferencias sobre las otras. Muchos
compuestos no son coloreados, pero pueden absorber luz en la región visible,
si se someten a la acción de un reactivo apropiado. Estas reacciones son a
menudo específicas muy sensibles, hasta el punto de poder medir cantidades
de un material en concentraciones de mili-mol por litro. La colorimetría es la
ciencia que estudia la medida de los colores y que desarrolla método para la
cuantificación del color, es decir la obtención de valores numéricos del color.
Se denomina equipos de colorímetro a aquellos aparatos en los que la longitud
de onda con la que vamos a trabajar se selecciona por medio de filtros ópticos.
3.1.3. ESPECTROFOTOMETRIA
La espectrofotometría es la medida de la cantidad de energía radiante

absorbida por las moléculas de una muestra e función de las longitudes de
onda específicas. Van Holde, K (1971) afirma que un espectrofotómetro es un
colorímetro más sofisticado en el cual la luz monocromática se obtiene
mediante una rejilla o prisma. La banda de longitudes de onda de la luz que se
pasa a través de un filtro es bastante ancha y por lo tanto, puede ser difícil
distinguir entre 2 compuestos que poseen absorción parecida usando un
colorímetro. En estos casos se necesita un espectrofotómetro, ya que este
permite separar los 2 picos de absorción usando el monocromador.
MATERIALES REACTIVOS EQUIPOS

 Matraz  Ácido clorhídrico (HCL)  Centrifuga
Erlenmeyer  Ácido Sulfúrico (H2SO4)  Mufla
 Matraz aforado  Fluoruro de Sodio  Balanza analítica
 Pipeta pasteur (NaF)  Espectrofotómetro
 Vaso Bohemia  Molibdato de
 Pipeta aforada amonio((NH4)6MO7O24))
 Pipeta graduada  Tartrato de antimonio y
 Capsula potasio
15
 Mortero (C8H4K2012Sb23H2O)
 Embudo Buchner  Ácido Ascórbico
 Matraz kitasato (C6H8O6)
 Embudo  Fosfato de sodio Patrón
 Tubo centrifuga (NaH2PO4H2O)
 Tubo falcon  Agua destilada
 Varilla de vidrio
 Papel secante
 Papel de
aluminio
 Papel de filtro
 Pera de goma
 Espátula
 Indicador de pH
3.3.1. SOLUCION EXTRACTORA
1.
Frotar 1,1000 gr de fluoruro de sodio en matraz aforado de 500 mL.
2. Agregar agua destilada con la pipeta y arrastrar todo rastro de fluoruro de sodio
que quede en el cuello del matraz aforado.
Colocar agua destilada en vaso de bohemia y verter agua destilada hasta ¼
3. aproximadamente del volumen total del matraz, agitar hasta que el fluoruro de
sodio se disuelva por completo.
4. Agregar agua destilada y enrasar en el aforo con ayuda de una pipeta de

Pasteur.
5. Tapar con el tapón y agitar. Transvasar la solución a un matraz aforado de 1 L.
Pipetear con pipeta aforada 25 mL de ácido clorhídrico y agregarlo al matraz
6. aforado con solución de fluoruro de sodio.
Agregar agua destilada hasta 0,5 cm antes del aforo, con ayuda de una varilla
7. de vidrio y papel secante, secar el cuello del matraz, sin tocar la solución.
8. Agregar agua destilada y enrasar en el aforo, con ayuda de una pipeta de

Pasteur.
9. Tapar e invertir el matraz 3 veces, rotular con un marcador indeleble.
16
NOTA: Comprobar que el pH de la solución sea entre 2,6 y 0,5.
3.3.2. REACTIVO MIXTO
Molibdato de amonio: Disolver 3,75 gr de molibdato de amonio en 125 mL de

agua destilada.
Ácido sulfúrico: Pipetear 35 mL de ácido sulfúrico concentrado en 225 mL de
agua destilada.
Ácido ascórbico: Disolver 2,7 gr de ácido ascórbico en 50 mL de agua
destilada.
Tartrato de antimonio y potasio: Disolver 0,17 gr en 125 mL de agua
destilada.
Mezclar en el siguiente orden
1. Molibdato de amonio.
2. Ácido sulfúrico.
3. Ácido ascórbico.
4. Tartrato de antimonio y potasio.
3.3.3. CURVA DE CALIBRACION
1. Frotar aproximadamente exacto 0,2227gr de fosfato de sodio en matraz

aforado de 1L en balanza analítica, con ayuda de una espátula.
2. Agregar agua destilada con pipeta y arrastrar todo rastro de fosfato de

sodio que quede en el cuello del matraz aforado.
3. Colocar agua destilada en un vaso de bohemia y luego verterla hasta

aproximadamente del volumen total del matraz, agitar hasta que el
fosfato de sodio monohidratado se disuelva por completo.
4. Agregar agua destilada hasta antes del aforo, con ayuda de una varilla
de vidrio y papel secante, secar el cuello del matraz, sin tocar la
solución.
5. Agregar agua destilada y enrasar en el aforo, con ayuda de una pipeta

de Pasteur, tapar e invertir el matraz 3 veces.
6. Rotular con un marcador indeleble, pipetear con pipeta aforada de 20 ml

de solución patrón y transvasar a matraz aforado de 100 ml.
17
7. Pipetear con pipeta aforada de 20 ml de solución extractora y 5 ml de

reactivo mixto.
8. Aforar con agua destilada, tapar e invertir el matraz 3 veces.
9. Realizar a partir de esta dilución de 10 ppm, diluciones de

concentraciones: 2ppm, 4ppm, 6ppm y 8 ppm.
10. Realizar un blanco en matraz aforado de 100 ml, pipetear con pipeta
aforada de 20 ml de solución extractora y 5 ml de reactivo mixto y aforar
con agua destilada.
11. Colocar con ayuda de pipetas Pasteur, alícuotas de cada dilución en

distintas cubetas para medir su absorbancia.
12. Preparar el espectrofotómetro para longitudes de onda de 885nm,

marcar 0 en el espectrofotómetro.
13. Medir la absorbancia de la solución del blanco y de las soluciones de

fosforo.
14. Graficar en Excel, absorbancia en función de la concentración y obtener

la ecuación de la recta.
3.3.4. ANALISIS DE LA MUESTRA
1. Masar 50 gr de muestra de suelo sin trabajar en una capsula.
2. Colocar la capsula en la mufla a 900°C hasta masa constante, luego

masar 2,5 gr de muestra de suelo previamente molida y seca y colocar
la muestra en un tubo falcón.
3. Masar 25 gr de solución extractora y agregar al tubo falcón y agitar

durante 15 minutos, para trasvasar la solución a un tubo centrifuga.
4. Colocar el tubo en la centrifuga durante 10 minutos a 2000rpm.
5. Filtrar al vacío una pequeña alícuota del sobrenadante y enjuagar el

recipiente donde se recibe el filtrado, descartar la alícuota.
18
6. Filtrar el resto de sobrenadante y transferir 2 ml de sobrenadante filtrado

al vaso de bohemia.
7. Agregar 8 ml de agua destilada y 2 ml del reactivo mixto.
8. Medir la absorbancia luego de 30 minutos, en espectrofotómetro a 885

nm.
3.4. BIBLIOGRAFIA
BUDUBA, CARLOS, 2004. Muestreo de suelos; criterios Básicos. Revista

Patagonia Forestal Año X No 1. Laboratorio de suelos CIEFAP-UNPSJB. Abril
HODGSON, J.M. 1987, Muestreo y descripción de suelos. Oxford University
Press. Editorial Revertee S.A
PRACTICA N°4
19
4. ELEMENTOS MENORES Cu, Mn, Zn, Fe POR EL METODO DTPA
Las cantidades disponibles de micro elementos como Cu y Zn en un suelo

constituyen una parte de su contenido total. La fracción realmente soluble
generalmente se considera biodisponible y diversos reactivos químicos se
utilizan para su extracción. El método usado para la extracción de los
micronutrientes Fe, Mn, Cu y Zn utiliza el ácido dietilentriaminopenta- acético
(DTPA) como agente quelante. Este agente presenta la combinación más
favorable de constantes de estabilidad de los complejos metálicos con los
cationes mencionados anteriormente. El método fue publicado por Lindsay y
Norvell en 1978 y se desarrolló para la extracción de micronutrientes en suelos
calizos y cercanos a la neutralidad.
La extracción de elementos menores se realiza con el reactivo DTPA (ácido

Dietilen Triaminno penta- Acético) ene l cual los metales polivalentes se
quelatan con el DTPA y son capturados para pasar a la solución, en la cual se
determinaran posteriormente por el método de absorción atómica.
Los análisis de suelo no se han desarrollado lo suficiente para determinar
cantidades de elementos menores que existen en suelos de uso agrícola y sus
formas aprovechables. Otras características de suelos que pueden dar indicios
de deficiencia de EM, son el pH, la materia orgánica y la textura. A medida que
el pH aumenta especialmente por encima de 6,0 la aprovechabilidad varía de
acuerdo con el elemento y sus proporciones en suelos. El molibdeno es más
aprovechable a pH alto, lo contrario sucede con el Cu, Mn, Zn, Fe y B. La
deficiencia del cobre puede observarse en cosechas que crecen entre suelos
orgánicos con pH bajos.
20
Reactivos Formula Uso

Acido- C14H23N3O10 Agente extractor, para
Dietilentriaminopenta- quelatar los metales
acetic. polivalentes.
Trietanolamina TEA C6H15NO3
Cloruro de calcio CaCl2
Ácido clorhídrico HCL Para ajustar el pH a 7,3
unidades.
Estándares puros de Cu, Mn, Zn, Fe. Estándares calibrar el

espectrofotómetro, EEA.
4.3.1. PROCEDIMIENTO GENERAL

Cantidades PASOS Y REACCIONES Proceso
5 gr de las muestras Todas las muestras para Pesada

analizar en tamiz malla #10.
5 gr del patrón Muestra de control o referencia. Pesada
20 ml de solución Extractora: DTPA a pH = 7,3 Extracción
30 Minutos de Agitación constante, en este Agitación

Filtrar. filtrado concentrado, se leen: Filtración
Cu, Mn y Zn.
2 ml de filtrado + 18 ml de la solución extractora de Dilución

DTPA para poder diluir y poder leer el hierro: Fe
Calibrar el equipo Se debe calibrar el equipo EAA Lecturas

con cada uno de los estándares
para poder hacer las lecturas
21
4.3.2. PREPARACION DE SOLUCIONES DE TRABAJO
SOLUCIONES PREPARACION
En 600 ml de agua, agregar 16,5 ml de trietanolamina,

Solución extractora de TEA, agitar y adicionar 1,97 gr del ácido
D.T.P.A dietilentriaminopentaacetico, DTPA, C 14H23N3O10, agitar
y agregar 2,94 gr de Cloruro de calcio, CaCl 2 y disolver,
llevar hasta 970 ml con H 2O de agua destilada y ajustar
a pH 7,3 con HCL 6 N y finalmente aforar a 1 L con
agua destilada.
Llevar 6 veces el peso de HCL concentrado y diluirlo a 1
HCL 6N L con agua destilada, debe realizarlo en cabina de
extracción.
Cu, Mn, Zn, Fe todas se preparan a concentración de
ESTANDARES 100 ppm
4.3.3. PREPARACION DE LOS ESTANDARES
 Se realizan a partir de los estándares: Cu, Mn, Zn y Fe de 100ppm

completando a volumen con la solución extractora de DTPA.
Estándar HIERRO Manganes COBRE ZINC Volumen

o final con
DTPA
2,5mL
1 6,25mL 3,12mL 2,5mL 250ml
5,0 mL
2 12,5mL 6,25mL 5,0 mL 250ml
10,0mL
3 25mL 12,5mL 10,0mL 250ml
 La concentración final en ppm QUEDA ASI:

Estándar HIERRO Manganeso COBRE ZINC
1 2,5ppm 1.25ppm 1.0ppm 1.0ppm
2 5.0 ppm 2.50ppm 2.0 ppm 2.0 ppm
3 10.0 ppm 5.0ppm 4.022ppm 4.0 ppm

Ppm Fe en el suelo:
Lcmg / 5x 103* 20x10-3/2 litros x106mg x 20 = Lc x40
Ecuación 1.
 Los estándares de trabajo alterados por el factor de dilución 40
quedarían en ppm del suelo así:
1 100 ppm 50 ppm 40 ppm 40 ppm
2 200 ppm 100 ppm 80ppm 80ppm
3 400 ppm 200 ppm 160 ppm 160 ppm
 Los estándares de trabajo alterados por el factor de dilución 4 quedarían

en ppm del suelo así:
1 10 ppm 5ppm 4ppm 4 ppm
2 20 ppm 10 ppm 8ppm 8ppm
3 40 ppm 20 ppm 16 ppm 16 ppm
Lámpara Longitud Slit Estándar 1 Estándar Estándar Absorbancia

elemento de onda Ancho 2 3 estándar
banda
Cu 324.8 0.7 8 16 16
23
Mn 279.5 0.2 10 20 10
Fe 248.3 0.2 200 400 200
Zn 213.9 0.7 8 16 4
Luego de haber insertado los datos individuales en el sistema de EEA;

podemos calibrar el equipo e inmediatamente proceder a realizar las lecturas
de cada elemento en el espectrofotómetro de absorción atómica.
4.3.4. OPERATIVIDAD DEL ESPECTROFOTOMETRO DE ABSROCION ATOMICA
Átomo Longitu SLIT Estándares Estándar Rango Relativ Sensibilid

d de Ancho para la curva de ajuste de linear e ad del
onda de calibración absorbancia Noise método
banda 0.200
Element nm Meq/100gr ppm Meq/10 Mg/L Db Mg/L

o ppm 0
Cu 324.8 0.7 4.0 8.0 16.0 16.0 4.0 5.0 1.0 0.077
1.0 2.0 4.0
Mn 279.5 0.2 5.0 10.0 20.0 10.0 2.5 2.0 1.0 0.052
1.25 2.50 5.0
Fe 248.3 0.2 100 200 400 200.0 5.0 5.0 1.0 0.100
2.5 5.0 10.0
Zn 213.9 0.7 4.0 8.0 16.0 4.0 1.0 1.0 1.0 0.018
1.0 2.0 4.0
 Control y seguimiento de corriente de lámpara, su energía, absorbancia,

expand y patrón.
 Insertar datos: Con los datos adjuntos en la presente tabla, insertar
datos a la memoria del equipo de absorción atómica, EAA,
correspondientes a cada elemento y lámpara en particular.
Cu Mn Fe Zn
24
Corriente
17/25 25/30 15/20
Energy
70 63/70 50/60
Absorbancia
0.200 0.200 0.200 0.200
Expand
8.15 4.95 10.0 2.05
Patrón
1.00 12.0 40.0 0.50
 Actividad previa: Tener limpio el equipo EAA y el botellón de succión

de los residuos líquidos. Verificar los PSI del gas Acetileno y oxigeno
(compresor), listo el extractor, corriente eléctrica, nivel de altura de
llama, agua destilada, blanco, estándares servidos, patrón y todas las
muestras.
 Encendido del EAA: Se inicia cuando se vaya a comprobar y ajustar el
0.200 de absorbancia, con el botón de ignición oprimido hasta aparición
de la llama Acetileno: Oxigeno- reductora, seguido con la inmersión de
blanco, estándares de calibración, calibración, patrón y las muestras
extraídas, revisando las instrucciones del manual de operación:
encendido y apagado del EAA.
4.4. BIBLIOGRAFIA
J. M. Álvarez, M. I. Rico, A. Obrador, L. M. López-Valdivia, D. González, J.

Novillo. Biodisponibilidad, movilidad, lixiviación y efectividad relativa de
fertilizantes con formas complejas de cobre en cultivos de invernaderos.
Proyecto DGI (MEC) nº AGL2006-13082/AGR.
PRACTICA N°5
5. CATIONES INTERCAMBIABLES DEL SUELO(Ca, Na, Mg, K)
5.1. INTRODUCCION DE LA PRÁCTICA

25
Estos cationes son conocidos como las bases del suelo, representan
especialmente en suelos no álicos la fracción dominante del total de cationes
absorbidos por los coloides del suelo y presentes en la solución del mismo,
para fines de diagnóstico de fertilidad de suelos, la disponibilidad de estos
cationes se determina extrayendo su fracción cambiable con una solución de
sal neutra.
La espectrofotometría se basa en la interacción de la materia con la energía
radiante en un rango de longitud de onda específico para cada método; para el
caso de la absorción atómica determinamos los elementos que absorben
energía en un rango del espectro electromagnético que va entre los 180
nanómetros hasta los 789 nanómetros.
Esta interacción energía- materia se basa en la ley conjugada de Beer-
Lambert que establece que al pasar un haz de luz sobre cualquier sustancia
existe una relación directamente proporcional entre absorbancia y la
concentración de la muestra.
La calibración del equipo se hace preparando una serie de soluciones con
concentraciones conocidas del elemento a analizar y registrando su respectiva
absorbancia, esta curva de calibración será tomada como patrón de referencia
del equipo que mediante interpolación de los datos nos permitirá conocer la
concentración del problema.
Materiales Equipos Reactivos

Erlenmeyer 125ml Acetato de amonio con
Espectrofotómetro de pH 7
absorción atómica
Frascos plásticos Solución de Lantanao al
Agitador lineal 1%
Papel filtro . Agua destilada
Micro pipetas
Balones aforados 100 Estándares
ml
1.
26
Pese 5gr de suelo seco tamizado a 2 mm póngalos en un recipiente de vidrio y

agréguele 25 ml de NH4O Ac 1m pH 7 con la ayuda del dispensador y póngalo
en agitación por 10 minutos.
Tome un pieza de papel filtro y dóblela por la mitad en 2 veces, luego ábrala
2.
por uno de los lados y dispóngala en un embudo analítico.
Pase la solución de suelo a través del papel filtro y lea en el espectrofotómetro
3.
de absorción atómica.
Tome 10 mL del patrón primario de 1000 ppm y llévelo a un balón d 100 ml y
4. afore, este será el patrón secundario. A partir de este patrón secundario
programe el volumen deseado en la micro pipeta y tome las alícuotas para la
elaboración de la curva
UTILIZAR LA FORMULA
C1V1= C2 x V2
Ecuación 1
CONCENTRACIONES PARA LA CUEVA DE DETERMINACION DE

BASES
Ca Mg Na K
10 0.2 1.0 0.8
20 0.5 1.5 1.5
30 0.8 2.0 2.0
40 1.0 2.5 2.5

50 1.5 3.0 3.0
27
DETERMINACION
Hacer una dilución 25 veces en este caso se toma 1 ml de filtrado de NH 4OAc,

se agregan 15 ml de solución lantano y 9 ml de agua. Si únicamente se
determina Na y K se agregan 24 ml de agua. Realizar la lectura en el
espectrofotómetro de absorción atómica y aplicar la formula.
E = Lc x 12.5
Ecuación 2
Con base a la ecuación anterior el cálculo para cada elemento es el siguiente:

Mg (me /100g) = Lc x12.5 / 20 = Lc x 0.625
K (me /100g) = Lc x12.5 / 12 = Lc x 1.04
Na (me /100g) = Lc x12.5 / 23 = Lc x 0.54
Donde:
Lc = Lectura de la curva expresada en mg/L
5.4. BIBLIOGRAFIA
FLOREZ, LOURDES y ALCALÁ. 2007, Manual de procedimientos analíticos

Laboratorio de física de suelos. Universidad Nacional Autónoma de Mexico.
Instituto de Geología. Departamento de Geología.
FAO. Guía para la descripción de suelos. Cuarta edición. Traducido y adaptado
al castellano por Ronald Vargas Rojas. Roma 2009.
28
MANUAL DE PROCEDIMIENTO PARA EL

MANEJO DE EQUIPOS.
RECURSO AGUA PRACTICA N°1
1. DETERMINACIÓN DE SOLIDOS SUSPENDIDOS TOTALES, VOLATILES Y

FIJOS.
Las características físicas y organolépticas son aquellas que se detectan

sensorialmente y las características químicas nos indican la presencia de algún
constituyente químico, entre las características más importantes podemos
encontrar:
 FISICAS: Las propiedades físicas se determinan por métodos analíticos

de laboratorio y pueden ser las siguientes :
29
SOLIDOS Los análisis de solidos son importantes en el control de procesos de

tratamiento biológico y físico de las aguas para vigilar el
cumplimento de la normatividad existente.
CLASIFICACION
SOLIDOS TOTALES: Se
define como la materia que SOLIDOS SOLIDOS
SOLIDOS VOLATILES:
permanece como residuo SUSPENDIDOS: VOLATILES: En
En aguas residuales y
después de la evaporación Son los residuos aguas residuales y
lodos, se acostumbra
y secado a 103°. El valor no filtrables o lodos, se acostumbra
hacer esta
de los sólidos totales material no hacer esta
determinación con el fin
incluye material disuelto y disuelto. determinación con el
de obtener una medida
no disuelto (Solidos fin de obtener una
de la cantidad de
suspendidos) medida de la cantidad
materia orgánica
de materia orgánica
presente.
presente.
1.2. MATERIALES Y EQUIPOS
MATERIALES EQUIPOS
Capsula de porcelana Balanza analítica

Mechero Fisher Placa de calentamiento
Pinzas de crisol Estufa de temperatura controlada
Cono Imhoff Desecador
Termómetro Mufla
Vasos de precipitado de 50 ml y 100 mL Bomba de vacío
Pipetas graduadas de 5 mL y 10 mL
Kit de ultrafiltración
Membranas de filtración
Caja Petri
Antes de comenzar con el desarrollo experimental, se deben lavar con cuidado

los contenedores y los filtros, se tienen que calentar todos los filtros a la
temperatura máxima antes de filtrar. También se tiene que obtener el peso
constante (+/- 5mg) antes de terminar cada experimento (huellas dactilares y
polvo cambiarán los resultados significativamente)
30
Decantar la muestra para eliminar partículas en suspensión de gran tamaño,

traer por equipo una botella de agua embotellada de 500 mL.
1.3.1. DETERMINACION SOLIDOS SEDIMENTABLES.
1 Mezclar la muestra a fin de asegurar una distribución homogénea de los

. sólidos en suspensión.
Depositar un litro de la muestra en un cono de Imhoff de un litro de capacidad y

2
dejarla reposar durante 45 minutos para que puedan sedimentar los sólidos
.
correctamente.
3 Transcurrido el tiempo se agita suavemente, por rotación para que sedimenten

. los sólidos adheridos a las paredes de la probeta y dejar reposar la muestra
otros 15 minutos.
4 Leer en la probeta los mililitros de solidos sedimentados y reportar el contenido

. e solidos sedimentables como mililitros de solidos por litro de muestra.
1.3.2. DETERMINACION SOLIDOS TOTALES
1 Pesar la capsula de porcelana vacía y luego Colocar alícuota de 50 mL de

. muestra de agua residual en una capsula de porcelana con el peso conocido y
constante.
2 Llevar la muestra de agua residual al horno a 105° por una hora, logrando una
.
sequedad, es muy importante tener en cuenta que se deben evitar
proyecciones en el horno.
3 Dejar enfriar en el desecador por una hora y se procede a pesar nuevamente

. en la balanza analítica. Es importante anotar todos los datos en una tabla de
resultados.
4
Determinar el contenido de solidos totales en la muestra usando la siguiente
.
ecuación:
mg
31 L
NOTA Las unidades con las que se trabajan los sólidos totales son
(A-B)*1000
mg de solidos totales =
Volumen de muestra (mL)
A= Peso del residuo + la cápsula en mg.

DONDE B= Peso de la cápsula en mg.
1.3.3. DETERMINACION SOLIDOS DISUELTOS
1 Filtrar 50 mL de agua a través de un embudo que contenga un papel filtro

. previamente lavado con agua des ionizada.
2 Recolectar el agua filtrada en una capsula de porcelana en condiciones
. similares a la de los sólidos totales.
mg Vaporizar el filtrado en el horno a 103°- 105°, 1 hora y luego colocar en el

3 desecador hasta que se enfrié, para proceder a pesar.
L .
4 Se procede a hacer los cálculos:

.
(A-B)*1000
mg
NOTA Las unidades con las que se trabajan los sólidos totales son:
L
32
1.3.4. DETERMINACION SOLIDOS SUSPENDIDOS
1 Montar el equipo de ultrafiltración, utilizar una membrana de nylon de 0.45 µm

de diámetro de poro, previamente pesada.
2 Filtrar 50 mL de muestra, y luego lavar el residuo depositado sobre la
membrana con 3 porciones de 10 mL de agua desionizada.
3 Retirar la membrana por medio de pinzas de crisol colocarla en una caja petri
de vidrio.
4 Se lleva al horno a 103° - 105° durante 1 hora.
Pesar la membrana una vez ya seca y determinar el contenido de solidos
5 totales suspendidos en la muestra de acuerdo a la siguiente ecuación:
mg/L
(A-B)*1000
A= Peso del residuo + la membrana en mg.

DONDE B= Peso de la membrana en mg.
1.3.5. DETERMINACION SOLIDOS VOLATILES Y FIJOS
1 Tomar el residuo del análisis de solidos totales.
2 Llevar a la mufla por 24 horas a 500°C, y luego colocar en el desecador por 1

hora para proceder a pesar en la balanza analítica.
3 Se proceden a hacer los cálculos.
mg
L
33
(A-B)*1000
mg de solidos totales = Volumen de muestra (mL)
A= peso de los sólidos totales en mg.

DONDE
B= Peso de los sólidos totales después de la
calcinación en la Mufla en mg.
1.4. BIBLIOGRAFIA
Romero Rojas Jairo A. “Calidad del agua” Ed. Alfaomega Editor, S.A de C. V.;
segunda edición; 1999.
Reussel, AWWA, APHA, WPCF, “Métodos normalizados para el análisis de
aguas potables y residuales” Ed. Díaz de Santos, S.A., 1989.
PRACTICA N°2
2. TEST DE JARRAS
El ensayo de jarras es utilizado en las plantas de tratamiento de agua potable

para hallar la dosificación del agente coagulante. Este ensayo es de bastante
simplicidad y verifica solamente la variación del PH y la relación con la
formación del floc, debido a que en el proceso de coagulación influyen muchas
variables el proceso no ha podido estandarizarse, en este también influye el
tipo de floculado y las características propias de cada uno de los mezcladores.
COAGULACION
El proceso consiste en la simulación en vasos de precipitado el proceso de
coagulación-floculación que se producirá en la planta de tratamiento y evaluar
distintos parámetros durante o al final de los ensayos para caracterizar su
34
funcionamiento. La coagulación es un proceso que implica muchas reacciones

de transferencia de masa, el proceso consta de 3 etapas:
1. Desestabilización de partículas.
Lo que permite
2. La interacción contaminante- coagulante
Favorece
3. La agrupación de partículas (ofloculación)
FLOCULACION
Es un proceso químico mediante el cual, son la adición de sustancias
denominadas floculantes, se aglutinan las sustancias coloidales presentes en el
agua, facilitando de esta forma la decantación y posterior filtrado.
SISTEMAS DE SIMULACION DEL PROCESO DE COAGULACION
Estos sistemas consisten en simular en unos vasos de precipitado o jarras el
proceso de coagulación que se produce en la planta de tratamiento y evaluar
distintos parámetros durante o al final de los ensayos para caracterizar su
funcionamiento. Las pruebas de jarra pueden utilizarse tanto para controlar la
coagulación- floculación de una planta de tratamiento existente como para
obtener los datos de diseño para el proyecto de nuevas unidades.
2.2. MATERIALES Y REACTIVOS
EQUIPOS MATERIALES REACTIVOS
35
Solución patrón
Equipo de jarras 12 Vasos de precipitado Sulfato de aluminio
Al₂(SO₄)₃
Turbidimetro 2 Peras de succión

Cloruro Férrico
FeCl₃
Pipeta de 10 mL
Agitador Magnético
Permanganato de Potasio
KMnO₄
1 Bureta de 50 mL
Balanza
6 Erlenmeyer de 250 mL
1 Determinar turbiedad, color, pH y alcalinidad del agua cruda o el tipo de

muestra que se tenga, se procede a depositar 1L de agua previamente
homogenizada en cada vaso de precipitado de capacidad igual a 1L y
colocarlos en la base iluminada del equipo de test de jarras para proceder a
introducir las paletas de agitación.
2 Agregar simultáneamente y en orden a las jarras que contienen 900 mL de

muestra, de esta manera se obtienen soluciones de 10 ppm, 20 ppm, 30ppm,
colocar las jarras en el equipo y graduarlo a 100RPM durante 1 minuto
(equivalente a mezcla rápido).
Una vez empiecen a girar se cronometra de 30 a 60 segundos desde el
3 momento en que simultáneamente se adicionan las cantidades del coagulante
definidas a cada jarra.
Una vez hecha la mezcla rápida durante el tiempo definido se disminuye la
4 velocidad de rotación de las paletas de 30 rpm a 60 rpm y se deja flocular el
agua durante 15 a 30 minutos aproximadamente.
5
36
Se suspende la agitación, se extraen las paletas y se deja sedimentar el agua

durante 15,30 y 60 minutos, es conveniente analizar el pH, color y turbiedad al
minuto.
Se evalúa y registra el tamaño del floc, producido y demás parámetros de
6 análisis requeridos, teniendo cuidado de no agitar las jarras ni su fondo en cada
toma de muestra para los análisis.
Se reporta con base en los datos anteriores la jarra con agua que mejor
7 comportamiento allá tenido y se establece si debe hacerse un nuevo ensayo
con igual o diferente condiciones.
NOTA: Normalmente el mejor resultado es el que haya presentado mayor

reducción de color y turbidez y se debe elegir esa dosificación.
2.4. BIBLIOGRAFIA
MAIER, F. J. Fluoruracion del agua potable. 1. ed. México: Limusa-Wiley, 1971.

MANUAL de tratamiento de aguas. 4. ed. México: Limusa-Wiley, 1974.
PRACTICA N°3
3. DETERMINACION DE ARSENICO TOTAL POR EL METODO DE ESPECTROFTMETRIA

DE ABSORCION ATOMICA
El arsénico es un elemento químico natural de la tabla periódica ampliamente

distribuido en la corteza terrestre, para la determinación de este se utilizó el
método de espectrofotometría de absorción atómica por generación continua
de hidruros, este método se usa para determinar arsénico en agua y efluentes
industriales en el rango de 0,001 a 0,050 mg/L; es posible determinar mayores
o menores concentraciones por dilución o concentración de la muestra
respectivamente.
La generación de hidruros, es la técnica más utilizada para la detección de este
componente altamente toxico para el medio ambiente, especialmente con
37
especies inorgánicas, para la cuantificación de Arsénico nos apoyamos en la

espectroscopia de absorción atómica por generación de hidruros, ya que esta
técnica de atomización se basa en la propiedad de elementos como As y Se,
de formar hidruros volátiles por reacción del metal con agente reductor Boro
hidruro de sodio NaBH4, el cual lo convierte en hidruro gaseoso que es
transportado por una corriente de gas inerte hacia el mechero o una celda
calentada eléctricamente donde se descompone y libera el analito de interés
IMPORTANTE
La muestra se debe recolectar en frasco de polietileno de alta densidad de 1 L

de capacidad de cierre hermético y se debe ajustar a un PH<2 con ácido nítrico
y es muy importante tener en cuenta que esta muestra se debe analizar antes
de seis meses para una correcta precisión y exactitud para las
determinaciones de arsénico y selenio.
3.2. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS
EQUIPOS MATERIALES
Espectrofotómetro de absorción Pipetas aforadas de 5-100 mL

atómica con generador continuo
Balanza analítica de precisión 10 Erlenmeyer de 100 – 125mL

mg
Balanza analítica de 0,1 mg
Papel de filtro libre de ceniza
Plancha calefactora Matraces aforados de 25- 1000 mL
38
1. ACIDO NÍTRICO= Ácido nítrico (HNO3) al 65% con una densidad de

1,40 gr/mL, ppa.
2. ACIDO CLORHIDRICO= (HCL) al 37%, ppa.
3. ACIDO SULFURICO= (H2SO4) al 95 – 98% w/V, ppa.
4. SOLUCION ESTANDAR DE ARSENICO= De 1000mg/L, disolver
1,3200 gr de óxido de arsénico III (As 2O3) (ppa para absorción atómica)
en 25 mL de solución de hidróxido de potasio (KOH, ppa) 20% w/v.
Neutralizar con H2SO4 20% v/v. Diluir a 1L en matraz aforado, con H 2SO4
al 1%, almacenar en frasco plástico, este será estable por 1 año.
5. SOLUCION DE BOROHIDRURO DE SODIO= (NaBH4) 0,4%, Disolver
2,5 gr de hidróxido de sodio (NaOH) y 2,0gr de NaBH 4 en 500 mL de
agua destilada. El reactivo pierde sensibilidad con el tiempo, prepararlo
diariamente.
6. SOLUCION DE ACIDO CLORHIDRICO = (HCL) 5M, diluir 210 mL de
HCL concentración a 500 ml con agua destilada.
7. SOLUCION DE IODURO DE POTASIO= (KI) al 20%, disolver 20 gr de
KI (ppa) en 100 mL de agua destilada.
8. AGUA DESTILADA
Se debe homogenizar la muestra, la toma mínima a realizar será de 5,0 mL, en

1
el caso de muestras muy concentradas diluirlas luego de la digestión. En caso
de estimar un concentrado de arsénico menor a 0,001 mg/L, y de ser
necesario, se puede concentrar la muestra durante la digestión. Una vez
realizado este paso se transfiere la toma a un Erlenmeyer de 100 -125 mL y se
realiza un blanco sustituyendo la muestra por agua destilada.
Agregar 5 mL de HNO3, calentar en una plancha calefactora hasta el punto que

2 se obtenga una ebullición leve, concentrar al menor volumen tal que no ocurra
una precipitación. Si es necesario agregar más ácido y seguir calentado hasta
obtener una solución clara. Es importante tener en cuenta que no se debe
permitir que la solución se seque durante el calentamiento.
NOTA: En caso de que la digestión con HNO 3 no sea suficiente, usar mezcla
de ácidos (Sulfúrico y clorhídrico) y las medidas se deben realizar por adiciones
estándar.
39
3
Lavar el Erlenmeyer con agua, si es necesario filtrar con papel filtro lavando
con gran precisión el precipitado, y recoger el filtrado en un matraz aforado, se
deja enfriar a temperatura ambiente y llevar a volumen con agua destilada,
homogenizar.
4 Agregar KI 20%, tal que se concentración final sea del 1%, esperar 15 minutos
antes de medir.
3.3.1. CURVA DE CALIBRACION
Preparar soluciones estándar entre 0,001 y 0,050 mg/L de arsénico a partir de

la solución estándar de arsénico de 1000mg/L con el agregado de HNO 3 tal que
su concentración final sea el 1%. Agregar también KI 20% solución de ioduro
de potasio, tal que su concentración final sea del 1%, esperar 15 minutos antes
de medir. Se mide la absorbancia a una longitud de 660nm.
Los parámetros de validación determinados fueron linealidad, límite de
cuantificación, límite de detección y precisión.
3.3.2. DETERMINACION DIRECTA
 Parámetros Instrumentales.
Lámpara de cátodo hueco o de descarga sin electrodo de arsénico.
Longitud de onda: 193,7 nm
Magnitud medida: concentración, altura de pico o área de pico (depende del
equipo usado)
 Realizar la curva de calibración con los estándares de 0,001 a 0,050
mg/L
 Medir las muestras y los blancos.
3.3.3. DETERMINACION POR ADICIONES ESTANDAR.
40
 Parámetros instrumentales.
Lámpara de cátodo hueco o de descarga sin electrodo de arsénico.
Longitud de onda: 193,7 nm
Magnitud medida: concentración, altura de pico o área de pico (depende del
equipo usado)
 Realizar una medida aproximada del contenido de arsénico en la
muestra.
 Tomar 4 alícuotas iguales de la muestra con pipeta aforada en matraces

aforados.
En el matraz A aforar
con agua destilada.
En el matraz B la
En el matraz D debe
4 concentracion debe
tener 4 veces mas la
ALICUOTAS ser el doble que en
concentracion del
A
matraz A
En el matraz C la
concentracion debe
ser el triple
 Una vez realizada las 4 alícuotas, se procede a determinar los límites de

cuantificación (LC) y detección (LDM), con estándares de 0,005 y 0,01
mg/L.
41
 Se determina la concentración de Arsénico (As) en la digestión de la

muestra y blanco (CM y CB) o en una dilución de los mismos a partir de la
curva de calibración obtenida en la digestión de la muestra.
 Si CM es menor a LDM informar: no detectable
Límite de detección = LDM * FC mg/L
Ecuación 1
NOTA: FC es el factor de concentración de la muestra, que se obtiene a partir
de la siguiente ecuación:
V
FC=
T
Donde: Ecuación 2
V= Volumen del matraz aforado usado para recoger el filtrado de digestión en

mL.
T= Toma de la muestra en mL
 Si CM es mayor a LDM pero menor a LC informar.
Se detecta, As (mg/L) <

LDM * FC mg/L
Donde:
FC= Es el factor de concentración de la muestra obtenida en la ecuación 2.
 Si CM es mayor a LC informar el valor obtenido según:
As (mg/L) = (CM * FDM – CB * FDB) * FC
Ecuación 3
Donde:
CM= Concentración de As en la digestión de la muestra en mg/L

FDM= Factor de dilución de la muestra
CB= Concentración de As en la digestión del blanco en mg/L
42
FDB= Factor de dilución del blanco

FC= Factor de concentración de la muestra, obtenida a partir de la ecuación 2
2.4. BIBLIOGRAFIA
2. TOUJAGUE, R.T., et al. "Arsénico y metales pesados en aguas del área

Delita, Isla de la Juventud". Ciencias de la Tierra y el Espacio, 2003, 4, 27-33,
ISSN 1729-3790
GOMES, N.J.A., et al. "Spectrophotometric detection of arsenic unsing flor-
injection hydride generation following sorbent extraction
preconcentration". Talanta, 1999, 50(5), 959-966
PRACTICA N°4
4. DETERMINACION DE NITRATO POR ESPECTROMETRIA ULTRAVIOLETA
La técnica de monitoreo por espectrofotometría ultravioleta (UV) mide la

absorbancia del nitrato (NO3-) a 220nm y es adecuada para la determinación
rápida de NO3- y el monitoreo de aguas con bajo contenido de materia
orgánica, como aguas naturales sin contaminar y fuentes de agua potable.
Debido a que la materia orgánica disuelta también puede absorber a 220nm y a
que el NO3- no absorbe a 275 nm, se usa una segunda medición a 275 nm para
corregir el valor de NO3-. Esta técnica mide la cantidad de energía radiante que
absorbe o transmite un sistema químico en función de la longitud de onda.
El contenido de nitrato es un indicador importante de la calidad del agua y ha
demostrado tener un alto peso estadístico a la hora de clasificarla, los nitratos
en altas concentraciones multiplican el crecimiento de organismos vegetales,
elevan el nivel de fotosíntesis y agotan el oxígeno en aguas superficiales
perjudicando la vida marina y sus ecosistemas.
43
La filtración de muestra tiene la intención de remover la posible interferencia de

partículas suspendidas. La acidificación con HCL 1 N esta designada para
prevenir la interferencia de concentraciones de hidróxido o carbonato hasta de
1000mg CaCO3/L. El cloruro no tiene efecto en la determinación. La técnica de
monitoreo espectrofotométrico ultravioleta de NO 3- obedece a la ley de Beer
entre 0.03 y 5 mg NO3- -N/L.
Celdas de cuarzo de 1 a 10 Agua libre de nitrato: Agua de

Espectrofotómetro UV-VIS cm de paso óptico. alta pureza o agua bidestilada
para usar a 220 y 275 nm
Balones aforados de 200, Solución patrón de nitrato: Secar

100 y 50 mL. nitrato de potasio (KNO3) al 99%
o mayor, en un horno a 105°C
por 24 hr. Disolver 0,1805 gr en
agua Bidestilada y diluir a
Equipo de filtración al vacío. 250mL; 1,00mL=100 µm NO3-
-N. Preservar con 0.5 mL de
CHCI3 /L. La solución es
estable en ausencia de
evaporación por lo menos 6
meses.
Pipeta aforadas de 25, 10, 3

y 2 mL. Solución intermedia de nitrato:
Diluir 100mL de la solución
patrón de nitrato a 1000mL con
Erlenmeyer de 125 mL. agua destilada; 1,00mL = 10,0
µm NO3- -N. Preservar con 2 mL
de CHCI3 /L. La solución es
44
estable en ausencia de
Pipeta graduada de 10 mL evaporación por lo menos 6
meses.
Vasos de precipitado de Solución de ácido clorhídrico:

100 mL Diluir 83 mL de HCL
concentrado en 800 mL de agua
Probeta de 25 Ml. Bidestilada, completar con
1000mL.
Filtros de acetato de
celulosa 0,45 µm.
4.3.1 PROCEDIMIENTO DE LIMPIEZA DE VIDRIERIA
Lave toda la vidriería con jabón alcalino, es un jabón cuya alcalinidad se

obtiene con álcalis, la cual proviene de la sosa, potasa, silicatos o fosfatos.
Posteriormente déjelo en ácido sulfúrico H 2SO4 al 10% por 30 minutos y
enjuague muy bien con agua destilada. Reserve esta vidriería para la
determinación de nitratos y utilice únicamente a la que se le haya efectuado el
control de calidad.
4.3.2. PROCEDIMIENTO DE PREPARACION DE ESTANDARES
A partir de la solución patrón de nitratos de 100 mg N- NO 3-/L prepare las

soluciones de trabajo de 0,03 – 0,010 – 2,0 y 5,0 mg N- NO 3-/L y elabore la
curva de calibración.
 Prepare un estándar de 5,0 mg N- NO 3-/L, a partir de la solución
intermedia de 10 mg N – NO 2-/L, tome 10 mL de esta solución y lleve a
volumen en un balón aforado de 50 mL, con agua Bidestilada.

intermedia de 10 mg N – NO 2-/L, tome 10 mL de esta solución y lleve a
45

intermedia de 10 mg N – NO2-/L, tome 2 mL de esta solución y lleve a

intermedia de 2,0 mg N – NO 2-/L, tome 3 mL de esta solución y lleve a
 Los estándares de control que se preparan con cada determinación son

los de 0,20 y 1,00 mg N- NO 3-/L, tomando alícuotas de 2 y 10 mL
respectivamente del patrón intermedio de 10 mg N- NO 3 /L y complete a
volumen de 100 mL, registre los resultados en tablas de control.
4.3.3. PREPARACION DE LA CURVA ESTANDAR
 Mida 25 mL de cada uno de los estándares de trabajo y transfiéralos a

un Erlenmeyer de 125 mL. Adicione 0,5 mL de solución de HCL al 1N y
mezclar muy bien.
 Con cada conjunto de muestras se debe montar un blanco y una
muestra patrón de 3mg NO3- -N/L.
4.3.4. PREPARACION DE LA MUESTRA
 Solicite las muestras mediante el formato TF0061, deje aclimatar y filtre

solo en el momento del análisis, a través de una membrana de acetato
de celulosa 0,45 µm. Las muestras con sólidos suspendidos
abundantes, fíltrelas primero con un pre- filtro de fibra de vidrio.
 Filtre aproximadamente unos 100 mL de muestra.
 Con cada lote de muestras analice un blanco, un duplicado, un estándar

de 0.2 mg/L y uno de 1.0 mg/L.
 Purgue una probeta de 25 mL con la muestra filtrada, blanco o estándar,

mida 25 mL y transfiéralos a un Erlenmeyer de 125 mL, reserve el resto
de filtrado para posibles diluciones.
46
 Adicione 0.5 mL de solución de HCL 1 N y mezclar muy bien.
4.3.5. MEDICION POR ESPECTROFOTOMETRIA.
 Encienda el espectrofotómetro UV-VIS con la lámpara de tungsteno, 45

minutos antes de iniciar las lecturas, tenga en cuenta el manual TM0166.
La lectura de nitrato debe hacerse a 220 y 275 nm.
 Verifique que la celda de vidrio de 1 cm este perfectamente limpia, si la

observa manchada déjela en jabón, hágale un lavado con H 2SO4 AL 5%
y enjuáguela perfectamente con agua desionizada.
 Para iniciar las lecturas fotométricas, coloque el blanco de reactivos en

la celda, léalo como blanco, verifique la observación de una línea recta
horizontal en el rango de la longitud de onda, inmediatamente léalo
como muestra y codifíquelo como blanco, la absorbancia debe registrar
cifras exponenciales de 10-4 y 10-5, continúe con los estándares de
control en orden creciente desde el de más baja concentración, léalos
como muestras siguiendo las instrucciones del equipo.
 El espectrofotómetro arroja resultado aplicando la siguiente formula:
Mg/L N- NO3= m x (Absorbancia 220 nm (2X Absorbancia 275nm))
Ecuación 1
Donde:
m= Inverso de la pendiente de la curva de calibración.
Absorbancia= Lectura realizada por espectrofotómetro.
Mg/L N- NO3= Concentración de nitratos calculadas y registradas por el
espectrofotómetro UV-VIS.
47
Para obtener la absorbancia debido al NO 3- en las muestras y los estándares,

se debe sustraer dos veces la lectura de absorbancia a 275 nm de la lectura a
220 nm.
 Registre los resultados de los estándares con 2 cifras significativas en la
carta de control, verifique que los valores se encuentren dentro del rango
de 2 (s) desviaciones estándar por encima o por debajo, respecto del
valor teórico esperado.
 Ajustar el 0 de absorbancia con agua Bidestilada. Leer la absorbancia a

una longitud de onda de 220 nm para obtener la lectura de NO 3- y a una
longitud de onda de 275 nm para determinar la interferencia debida a la
materia orgánica disuelta. En muestras con absorbancia a 275 nm
mayor a 0,200 uA diluya aunque el contenido de nitratos este dentro del
rango de medición.
NOTA: Tener en cuenta que la determinación sobre muestras preservadas con

ácido sulfúrico a pH < 2 incluye el contenido de nitritos, en muestras no
preservadas solo se determinan los nitratos. Para reportar el resultado en los
casos en que el dato de nitritos sea mayor al límite de detección, se realiza la
resta y se redondea a 2 cifras significativas.
4.4. BIBLIOGRAFIA
RODIER, J. Análisis de Aguas: aguas naturales, aguas residuales, agua de

mar.
Omega, Barcelona, 1981.
SAWYER, C.; McCARTY, P. Chemistry for Environmental Engineering.
McGraw Hill, New York, 1996
GARAY, J.; PANIZZO, L.; LESMES, L.; RAMIREZ, G.; SANCHEZ, J. Manual de
Técnicas Analíticas de Parámetros Físico-Químicos y Contaminantes Marinos.
Centro de Investigaciones Oceanográficas e Hidrográficas. Cartagena, 1993
48
PRACTICA N°5
5. ANALISIS DE CONTAMINANTES FENOLICOS EN AGUA POR

CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS DE ALTA RESOLUCION (HPLC)
La cromatografía liquida de alta resolución (HPLC) es la técnica analítica de

separación más utilizada, con ventas millonarias cada año tanto de equipos
como de consumibles.
Los dispositivos de inyección de muestras para cromatografía de gases tienen
la misión de vaporizar la muestra a analizar e incorporarla a la corriente de gas
portador que se dirige hacia la columna. La vaporización e introducción de la
muestras en el sistema, debe realizarse cumpliendo una serie de requisitos:
1. La vaporización de la muestra debe ser lo más rápida posible.
2. La vaporización debe realizarse sin discriminar ningún componente de la
muestra.
3. La muestra debe llegar a la columna como una banda los más fina
posible.
Los herbicidas fenoxi fueron introducidos al final de la segunda guerra mundial,
ambientalmente, los subproductos contenidos en los herbicidas fenoxi son, a
menudo más preocupantes que los mismos herbicidas. Por esta razón,
49
empezamos estudiando la química del fenol, que es el componente

fundamental de estos compuestos. El cloro benceno reacciona con el NaOH a
elevadas temperaturas para subsistir el grupo –Cl por –OH dando fenol.
C6H5CL + NaOH C6H5OH + NaCL
Ecuación 1
Los fenoles son moderadamente ácidos, en presencia de disoluciones

concentradas de una base fuerte, como el NaOH, el hidrogeno del grupo OH se
pierde como H+ (igual que un ácido común), produciéndose el anión fenoido
C6H5O- en la foma de sal sódica.
La
cromatografía de líquidos es esencialmente un método físico- químico de

Fig. 1. Compuestos fenólicos y sus derivados
separación de compuestos, los cuales se distribuyen entre 2 fases, una de ellas
es la fase estacionaria que es el material relleno de la columna cromatografía
donde se realizara la separación, mientras que la otra se denomina fase móvil y
es la que viaja a través de la columna. Los procesos de separación
cromatográficos se dan como resultado de una serie de repetidas adsorciones
y desorciones durante el movimiento de los diversos componentes de la
50
muestra a lo largo de lecho estacionario, lográndose la completa separación

gracias a las diferencias en los coeficientes de distribución de los mismos.
Un aparato de cromatografía consta de las siguientes partes:
 Sistema de distribución de disolventes (bomba peristaltica)
 Sistemas de inyección.
 Columna.
 Detectotr(Sistema UV-Visible, índice de refracción, fluorescencia,
conductividad, FTIR, etc)
 Registrador.
Matraces volumétricos de 5mL Agua desionizada

Columna analítica C-18 o 10ml
fase reserva
Cromatografía de líquidos Vasos de precipitado de 10 ml Metanol grado HPLC

de alta eficiencia con o tubos de ensayo con tapón
detector de UV- Visible. de rosca.
Sistema de ultrafiltración para Fenol

solventes
Balanza analítica
Micro jeringa de 10 µL
Resorcinol
Membranas de filtración para

disolventes de 0.045 o 0.02 0-Nitrofenol
micras
Sonicador
Filtros para jeringas de 0.45 P-Nitrofenol
micras de poro
51
Jeringa de vidrio de 5ml
Micro pipetas de 10-100 µL

y de 100 a 1000 µL
1 Filtrar 500 ml de metanol grado HPLC (fase móvil B) en el equipo de

ultrafiltración, con una membrana de 0.22 micras de poro.
2 Filtrar 500ml de agua desionizada (Fase móvil C) en el equipo de ultrafiltración,

con una membrana de 0.22 micras de poro.
3 Desgasificar las fases móviles mediante sonicacion durante 15 o 20 minutos.
Preparar 300 ml de una solución metanol-agua (50:50), utilizar la solución

4 anterior para preparar 50 ml de solución stock de cada uno de los fenoles a una
concentración de 0.05 mg /ml.
5 Filtrar las soluciones stock con los filtros para jeringa de 0.45 micras de poros y
establecer las condiciones de trabajo del cromatógrafo de líquidos.
a. Flujo de fase móvil: 1.5 ml/ mint.
b. Longitud de onda: 254nm.
c. Atenuación :64
d. Velocidad de carta de 0.5 mm/mint
Preparar una curva tipo con las siguientes concentraciones en mg/ml. Preparar
6 5 o 10ml de cada punto de la curva con la fase móvil metanol- agua (50:50), de
acuerdo a la siguiente tabla:
Nombre Solución 1 Solución 2 Solución 3
Resorcinol 0.061 0.122 0.183
Fenol 0.063 0.126 0.189
O-Nitrofenol 0.035 0.071 0.118
P-Nitrofenol 0.037 0.086 0.124
Inyectar por separado 10 nano-micras de cada uno de los fenoles a analizar,

7 para conocer sus tiempos de retención.
Inyectar por duplicado cada punto de la curva de calibración e inyectar la
8 muestra a analizar.
4.4. BIBLIOGRAFIA
52
Flaschka, A.H.; Bernard, Jr., A.,J. Sturrock, P.E. ; “Química Analítica

Cuantitativa”. Vol. I; Ed. CECSA (1978)
Muñoz M. Cuauhtémoc; “Prácticas de Instrumentación Analítica (Métodos de
separación) “. Ed. Limusa (1981)
PRACTICA N°6
6. DETERMINACION DE GRASAS Y ACEITES EN AGUAS POR EL METODO

SOXHLET.
En el método Soxhlet, el componente de interés son las grasas y su solubilidad

es la prioridad en la que se basa. Las grasas se disuelven en disolventes no
polares, como el cloroformo, el hexano y el éter de petróleo.
El equipo está integrado de abajo hacia arriba por:
 Parrilla: Fuente de calor para evaporar el disolvente.
 Matraz: Contienen el disolvente y el aceite extraído.
 Sifón: Contiene la muestra dentro de un dedal de celulosa y
donde ocurre la extracción solido- liquido,
 Refrigerante: Provee un ambiente frio en el que se condensa el
disolvente.
El método de extracción de Soxhlet para la determinación de grasas y aceites
es aplicable para determinar lípidos biológicos. Hidrocarburos y asea fracciones
pesadas o relativamente polares del petróleo y cuando los niveles de grasas no
53
volátiles pueden alterar el límite de solubilidad del solvente. El método es

aplicable en aguas residuales o afluentes tratados que contengan estos
materiales, aunque la complejidad de la muestra puede producir resultados
desviados a causa de la falta de especificidad.
En la determinación de grasas y aceites no se mide una cantidad absoluta de
una sustancia específica; se determina grupos de sustancias con
características físicas similares con base en su solubilidad en el solvente.
6.2. MATERIALES Y REACTIVO
EQUIPOS REACTIVOS MATERIALES
Embudo Buchner de 12 cm de
Extractor Soxhlet BUCHI B- Ácido clorhídrico, HCL diámetro.
810 concentrado o ácido sulfúrico
H2SO4 Concentrado.
Bomba de vacío Hexano C6H12, punto de Dedal de extracción de vidrio.

ebullición 69°C libre de
residuos.
Papel de filtro de 11 cm de
Cabina extractora de vapores Suspensión para ayuda de diámetro cuantitativo (Whatman N
orgánicos filtración, tierra diatomáceas, °40 o equivalente)
10gr/L. Suspender 10 gr de la
tierra diatomáceas en 1 L de
agua.
54
Aceite de origen vegetal o Disco de muselina

animal.
Balanza analítica de 4 cifras
decimales
Horno de secado
Rotavapor
Deseador grande
6.3.1. PROCEDIMIENTO DE LIMPIEZA DE VIDRIERIA
El material debe estar libre de grasa. Lavar con detergente y enjuagar con
abundante agua caliente. Si el material lo requiere, realizar un enjuague con
solvente.
6.3.2. PROCEDIMIENTO DE PREPARACION DE ESTANDARES
BLANCO: Tome 1 L de agua destilada y acidifique con H 2SO4 O HCL a PH<

de 2 (aproximadamente 2 gotas). Verificar con papel indicador.
ESTANDARES DE CONTROL: Pese 5 gr de aceite mineral en un vaso de
precipitado y disuelva con hexano, para obtener una concentración de 100
mg/L. Almacene inmediatamente en un frasco y refrigere en la nevera de
cromatografía a -18°C.
ESTANDAR DE 50 MG/L: Dispense de este stock 5 µL en un frasco de un litro
boca ancha utilizado para el muestreo de grasas. Lleve a la campana y
permita que se evapore el solvente. Adicione agua destilada hasta el cuello y
preserve H2SO4 a PH< de 2.
55
ESTANDAR DE 500 MG/L: Dispense de este stock 5 mL en un frasco de un

litro boca ancha utilizado para el muestreo de grasas. Lleve a la campana y
permita que se evapore el solvente. Adicione agua destilada hasta el cuello y
preserve H2SO4 a PH< de 2.
6.3.3. PROCEDIMIENTO DE ANALISIS
PREPARACION DEL LECHO FILTRANTE

 Corte la muselina en círculos de diámetro mayor a 1 cm al del embudo
Buchner a utilizar.
 Ponga en el fondo del embudo Buchner el disco de muselina y sobre
esta un papel filtro cuantitativo.
 Adhiera el papel filtro y la muselina al fondo del embudo
humedeciéndolo y presionando las orillas del papel con un agitador de
vidrio limpio.
 Aplique vacío y filtre 100 mL de suspensión de ayuda (tierra diatomácea)
y lave con abundante (100mL) agua destilada.
 Suspenda la filtración hasta cuando no pase más agua a través del
lecho filtrante, garantizar la simetría del papel y la homogeneidad de la
capa de tierra de diatomácea.
FILTRACION Y EXTRACION
 Consigne los datos y luego afore la botella demarcando el nivel de la
muestra, con la ayuda de la varilla de vidrio adicione poco a poco y
cuantitativamente la muestra a través del lecho filtrante evitando
perdidas por el borde del papel.
 Filtre el blanco, estándar o muestra cuantitativamente, utilizando varilla
de vidrio para cada uno. Aplique vacío hasta cuando no pase más agua
a través del lecho filtrante.
 No permita que el nivel de la muestra supere el borde del medio filtrante,
doble el filtro y transfiéralo al dedal de extracción.
 Seque el dedal con las muestras, el recipiente de la muestra y varilla
empleada en la filtración en el horno a 103°C durante 30 minutos.
 Lleve los dedales al extractor Soxhlet, pese los vasos de extracción.
 Enjuague con el solvente el recipiente que contenía la muestra y la
varilla de filtración, transfiera el enjuague al vaso de extracción para
recuperar el material graso adherido a las paredes del recipiente.
56
 Adicione el solvente al vaso de extracción hasta 180 mL para la

extracción (aproximadamente el 90% del volumen total del vaso de
extracción) y llévelo a la plancha de calentamiento del equipo extractor.
 Cierre el equipo verificando que haya sellado correctamente (el vaso no
gira, ajuste el vaso al sello del Soxhlet) compruebe que la palanca
situada en la parte superior derecha del equipo está en la posición
“CLOSED”
 Conecte el baño de aceite, verifique que la temperatura de
calentamiento es de 110°C y abra inmediatamente el suministro de agua
de refrigeración, realice la extracción durante 4 horas a partir del primer
sifón que realice el equipo.
 Acabada la etapa de extracción abra la válvula de drenaje (posición
OPEN) para la recuperación del solvente y deje secar los vasos de
extracción.
 Apague y desconecte el baño de aceite, deje el flujo de agua hasta que
el equipo se enfrié (aproximadamente 1 hora).
 Retire los vasos con la grasa obtenida en la extracción, no toque el vaso
con los guantes, emplee pinzas.
 Lleve al desecador los vasos fríos durante 30 minutos y determine el
peso final.
6.3.4. PROCEDIMIENTO DE DATOS Y CALCULOS
El aumento en peso del vaso de extracción tarado es debido principalmente a

la grasa y el aceite, siendo contenido de estos:
(Pf- Pi)
GYA, mg/L=
X 106
V
Ecuación 1
Donde
Pf = Peso final del matraz de extracción (gr)
57
Pi= Peso inicial del matraz de extracción (gr)

V= Volumen de la muestra (mL)
(Pafin - Pvaso)
%RECUPERACION =
X 100
Pesoaini
Ecuación 2
Donde:
Pafin= Peso con grasa obtenido después de la extracción.
Pvaso= Peso del vaso de extracción vacío.
Pesoaini= Peso del aceite para la preparación del estándar.
Los blancos se analizan para determinar si la calidad del material y de los
reactivos es óptima. Estos deben registrar pesos menores al límite de
detección. Si el valor de los blancos supera el límite del método se recomienda
lavar el material, el equipo de extracción y verificar el solvente. Si el solvente se
ha destilado realizarla nuevamente este procedimiento.
6.4. BIBLIOGRAFIA
Metcalf & Eddy. “Ingeniería de Aguas Residuales. Tratamiento Vertido y

Utilización. Vol. 1 Ed. Mc Graw Hill. México 1996.
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. American
Public Health Association, American Water Works Association, Water Pollution
Control Federation. 21 ed., New York. 2005.
ANÁLISIS DE AGUAS Y AGUAS RESIDUALES, Jorge Humberto Sierra C. ,
Facultad de Ingeniería Departamento de Ingeniería Sanitaria
58
PRACTICA N°7
7. DETERMINACION DEL PORCENTAJE DE AGUA Y SEDIMENTOS EN

PETROLEO Y SUS DERIVADOS.
La cantidad de agua que se determina por este método (lo más cercano a 0.05
o 0.1% en volumen, dependiendo del tamaño de la trampa utilizada) Puede ser
usado para corregir el volumen involucrado en la custodia de transferencia de
productos del petróleo y materiales bituminosos. La producción de petróleo de
un yacimiento viene generalmente acompañada por agua, cuya cantidad y
grado de salinidad depende de la edad del yacimiento. Por regla general,
mientas más viejo es el yacimiento productor, gran variedad de crudos de
diversos yacimientos que pueden tener contenidos de agua que van desde 1%
como es el caso del crudo Furrial, hasta 80% como en el caso del crudo
Guafita.
7.1.1. DEFINICIONES
59
PETROLEO: Es una mezcla homogénea de compuestos orgánicos,

principalmente hidrocarburos insolubles en agua. También es conocido como
petróleo crudo o simplemente crudo. Se produce en el interior de la tierra, por
transformación de la materia orgánica acumulada en sedimentos del pasado
geológico y puede acumularse en trampas geológicas naturales, de donde se
extrae mediante la perforación de pozos.
SEDIMENTOS: Es un material solido acumulado sobre la superficie terrestre
(litosfera) derivado de las acciones de fenómenos y procesos que actúan en la
atmosfera, en la hidrosfera y en la biosfera (vientos, variaciones de
temperatura, precipitaciones meteorológicas, circulación de aguas superficiales
o subterráneas, desplazamientos de masas de agua en ambiente marino o
lacustre, acciones de agentes quimios, acciones de organismos vivos).
CENTRIFUGACION: Es un método por el cual se pueden separar solidos de
líquidos diferente densidad mediante una fuerza giratoria. La fuerza centrífuga
es provista por una maquina llamada centrifugadora, la cual imprime a la
mezcla un movimiento de rotación que origina una fuerza que produce la
sedimentación de los sólidos o de las partículas de mayor densidad.
EMULSION: Es una mezcla de líquidos inmiscibles de manera más o menos
homogénea. Un líquido (la fase dispersa) es dispersado en otro (la fase
continua o la fase dispersante).
DEMULSIFICANTE: Es una sustancia de superficie activa que puede
emulsionar el daño estructural líquido a la emulsión con el fin de separar los
efectos de las fases.
DESTILACION: Es la operación de separar, mediante vaporización y
condensación en los diferentes componentes líquidos, solidos disueltos en
líquidos o gases licuados de una mezcla, aprovechando los diferentes puntos
de ebullición de cada uno de las sustancias.
METODO POR CENTRIFUGACION ASTM

 Equipo de centrifugación
 Tubos centrífugos
 Baño de calentamiento o circulación
 Tapones para tubos centrífugos
60
 Cilindro graduado de 100 ml

 Rejilla metálica
METODO POR DESTILACION ASTM D95/ IP74
 Equipo de destilación: Balón de destilación, esmerilado, trampa de
vapor, condensador o columna refrigerante y manta de calentamiento.
 Cilindro graduado de 100 ml
 Beaker de 100 ml
 Perlas de ebullición (vidrio)
7.3.1. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL A
En la presente práctica se trata sobre la determinación del % de agua y

sedimentos se utiliza el método ASTM agua y sedimentos en petróleo y crudos.
En capo suele utilizarse la ASTM D-96 (agua y sedimentos), por uno de los 3
métodos de centrifugación según el tipo de crudo.
1. Homogenizar la muestra agitándola en un envase original.
2. Añadir 50 ml de muestra en el balón de destilación, limpiar los restos de
crudo en el cilindro con 50 ml de solvente, añadiendo porciones que
oscilen entre 25 y 12.5 ml agregar unas perlas de vidrio para controlar la
ebullición.
3. Montar el equipo de destilación, el balón se adapta a la trampa de vapor
y la parte esmerilada va unida al condensador. Adecuar las conexiones
de agua en el condensador y abrir la llave de agua verificando que fluya
libremente.
4. Calentar la mezcla hasta ebullición, la destilación culmina cuando no se
nota ninguna parte del montaje, a excepción de la trampa gotas de agua.
5. Medir la cantidad de agua en la trampa, el % de agua se denota con la
siguiente formula.
Volumen de agua en la trampa X 100

% DE AGUA =
Volumen de la muestra
Ecuación 1.
7.3. 2. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL B

61
1. Homogenizar la muestra.
2. Agregar 50 ml de solvente (Xileno) y 50 ml demuestra al tubo centrífugo
y se agita fuerte hasta homogenizar la muestra.
3. Sumergirlos en el baño a 120 °F por 10 minutos, extraer, agitar durante
10 segundos y colocar la centrifuga a 1500 rpm durante 10 minutos.
4. Leer el volumen combinado de agua y sedimentos en el tubo centrifugo,
para asegurar repetividad en el resultado se puede someter a
centrifugación 3 veces comparando las lecturas.
% DE AGUA = Lectura del tubo A + Lectura del tubo B.
Ecuación 2.
7.4. BIBLIOGRAFIA
Romero Rojas Jairo A. “Calidad del agua” Ed. Alfaomega Editor, S.A de C.V.;
Segunda edición; 1999.
Stanley E. Manahan, #Enviromental Chemistry”, Ed. Lewis Publishers, Sixth
Edition 1994.
PRACTICA N°8
8. DETERMINACION DE HIDROCARBUROS DISUELTOS Y DISPERSOS EN EL

AGUA
El petróleo está constituido principalmente por hidrocarburos que se pueden

dividir en dos grandes grupos alifáticos y aromáticos, entre estos los
aromáticos, entre estos, los aromáticos resultan ser los más tóxicos dados su
efecto cancerígeno.
Los métodos que permiten determinar la concentración de hidrocarburos en
aguas, sedimentos y organismos, se fundamentan en la utilización de
instrumental especializado para ello. Tal es el caso de la cromatografía de
62
gases y la espectrofluorometría. Como la fluorescencia se presenta solo en los

hidrocarburos aromáticos, esta técnica es aplicable para la determinación de
hidrocarburos disueltos y dispersos. La cromatografía de gases es una técnica
en la cual se usa una fase móvil (un gas de arrastre) y una estacionaria o
adsorbente para separar los compuestos individuales, en ella, una pequeña
fracción del orden de micro-litros de muestra es inyectada a la columna con
una micro jeringa y los hidrocarburos son vaporizados y movidos a través de la
columna por el gas de arrastre.
Este método es aplicable para aguas de desperdicio de refinerías, efluentes de

seninas en los buques y aguas aledañas a los terminales de carga y de
descarga de oleoductos.
El alcance de este método se limita al agua comprendida entre la superficie y
una profundidad de 1 m, a profundidades mayores la concentración de los
hidrocarburos disueltos o dispersos se hace muy pequeña, siendo difícil
detectar por medio de esta técnica.
Hojas de aluminio Metanol

Cromatógrafo de gases con Hidróxido de Potasio
columna capilar de sílice
fundido de 30m de longitud
x o.25 mm de diámetro
interno.
Espectrofotómetro de Frasco de vidrio de 5 ml para Hexano

fluorescencia los extractos. Acetona
Erlenmeyer de 150 ml
Ácido sulfúrico concentrado
63
Oxido de aluminio
Centrifuga Balones aforados
Lana de vidrio
Dicromato de Potasio
Embudo de decantación
Diclorometano para análisis de
residuos.
Balanza analítica
Tapa de teflón
Pipeta Pasteur
Estándares de hidrocarburos
Microjeringa de 5-10 nano aromáticos y alifáticos
micras. certificados
Rotavapor
8.3.1. EXTRACCION, PROCEDIMIENTO DEL METODO DE LA PIPETA
Medir el volumen exacto de la muestra con una probeta y hacer la extracción

1 con hexano, usar 100 ml de hexano en 2 extracciones sucesivas y combinar los
extractos.
Separar aproximadamente 80 ml de la muestra en un Erlenmeyer limpio,
2 agregar 50 ml de hexano a la muestra en la botella se tapa la botella, junto con
el papel aluminio y agitar vigorosamente.
Después de unos segundos, aflojar la tapa para que salgan los vapores de
3 hexano y se repite el proceso por 5 minutos, colocar la botella boca arriba para
separar la fase de hexano. Esta fase debe llegar hasta el cuello de la botella,
sino es así se lleva a ese nivel agregando la muestra que se había separado.
64
Con una pipeta previamente enjuagada con hexano, extraer la fase hexanica y
4 transferir a un Erlenmeyer el cual debe tener tapa de vidrio, el proceso se repite
con otros 50 ml de hexano y se rotula el Erlenmeyer.
Agregar un poco de sulfato de sodio anhidro al extracto para remover el exceso
5 de agua, se tapa y almacena para el análisis.
CONCENTRACION
Los extractos hexánicos se someten a concentración en un equipo Rotavapor
hasta un volumen de 0.5 ml, se trasladan a viales y se guardan hasta el
siguiente paso.
PURIFICACION
En una columna rellena de silicagel, pasar el extracto para eliminar sustancias
fluorescentes que intervienen en la medición fluorometrica, la elución por la
columna se realiza con el hexano. El extracto final se concentra en Rotavapor
hasta 2 ml aproximadamente y se deposita con pipeta Pasteur en viales
pequeños para su posterior cuantificación.
CUANTIFICACION
La cuantificación fluorometrica del extracto permite solo la determinación de los
hidrocarburos aromáticos totales.
 Tomar los viales de las fracciones aromáticas de las muestras y el
blanco que deben estar a sequedad.
 Reconstituir los extractos a 2.5 ml o más, si es necesario.
 Hacer la lectura en el fluorómetro usando como blanco de
lecturas n-Hexano. Si se detecta la cuantificación de la fracción
alifática se debe emplear la técnica cromatografía de gases, para
ello el extracto debe ser sometido a un proceso de limpieza y
fraccionamiento con alúmina.
 Se reconstituye el extracto en 50 µl de hexano y se inyectan 1-2
µl al Cromatógrafo previa calibración de las condiciones de
equipo.
8.3.2. CALIBRACION
El instrumental se calibra de acuerdo con las instrucciones del fabricante para

lograr la sensibilidad deseada, seleccionando la longitud de onda de excitación
de 310nm y de emisión de 360nm y los slit de banda.
 Tomar una muestra de hexano para determinar el blanco de reactivos.
65
 Realizar una curva de calibración usando criseno como estándar. La

preparación estándar se realiza de la siguiente manera:
Preparar un stock secundario: Tomar 1250 µl del estándar de criseno

y llevar a 25 ml con hexano, la concentración de esta nueva solución es
de 10 µl/ml.
Tomar 100,300, 500, 700 y 900 µl del stock secundario y completar a 10

ml, con hexano, las concentraciones de estas soluciones son 0.1, 0.3,
0.5, 0.7, y 0.9 µg/ml respectivamente.
Leer la fluorescencia a cada solución y aplicar una regresión lineal a los

resultado para determinar la pendiente (m) y el intercepto (b) de la curva
de calibración (Y= mX + b)
Flu = C* m + B
Ecuación 1.
Donde:
Y= Flu= Unidades de fluorescencia de la muestra.
X=C = Concentración del extracto (µg/ml)
b= Intercepto
8.3.3. CROMATOGRAFIA
El Cromatógrafo debe ser calibrado para obtener su máxima sensibilidad, de

acuerdo con las especificaciones del fabricante. En general se busca adecuar
los flujos de hidrogeno y aire para la mayor sensibilidad.
Si se requiere la cuantificación individual de cada hidrocarburo (por lo general
los alcanos normales del C10 al C34y algunos aromáticos de interés como los
pirenos, naftalenos, antracenos), se deben elaborar curvas de calibración para
cada uno, por lo cual es necesario:
 Inyectar soluciones de cada compuesto para determinar sus tiempos de
retención.
 Preparar una solución que contenga todos los compuestos de iteres,
esta solución será el stock primario y contendrá una concentración
relativamente alta de cada compuesto.
 A partir del stock primario, preparar soluciones de menor concentración
(que estén dentro del rango lineal de respuesta del detector), se
66
preparan tanto soluciones como puntos de calibración que vayan tener

las curvas.
Inyectar cada solución en el Cromatógrafo y con los reportes del equipo
elaborar las curvas de calibración para cada compuesto. Aplicar una regresión
lineal para los resultados y determinar la pendiente (m) y el intercepto (b) de la
curva de calibración para el compuesto i (Y= mX + b)
Área = Ci x m+b
Ecuación 2.
Donde:
Y= Área= Área del pico reportado por el Cromatógrafo.
X= Ci= Concentración del compuesto i en la solución.

b= Intercepto
8.3.4. CALCULOS Y FORMULAS
FLUOROMETRIA.
El cálculo de concentración en la muestra se efectúa así:
Flu- b
C=
m
Ecuación 3.
67
Donde:
C= Concentración del extracto en µg/ml
Flu = Fluorescencia del extracto
b= Intercepto
m= Pendiente de la curva de regresión
La concentración en la muestra seria así
M x Ve x1000
ng/L =
V
Ecuación 4.
Donde:
M= Concentración del extracto de la muestra µg/ml
Ve = Volumen final del extracto en (ml)
V = Volumen de muestra sometida al análisis (L)
CROMATOGRAFIA
Identificados los picos del cromatograma, con las áreas reportadas se procede
a calcular la concentración en el extracto así:
Área i - b
Ci =
68
Ecuación 5.
Donde:
Y = Área= Área del pico reportado por el cromatograma
X = Ci= Concentración de la sustancia i en el extracto
b= Intercepto
m= Pendiente de la curva de regresión
La concentración en la muestra seria así
C i x Ve
Ng/l=
V
Ecuación 6.
Donde:
Ci = Concentración de la sustancia i en el extracto de muestra
Ve = Volumen final del extracto (µl)
V = Volumen de muestra sometida al análisis (L)
La concentración de los hidrocarburos no resueltos se calcula utilizando un

factor de respuesta de un compuesto alifático del cromatograma del stock de
estándares. Este pico debe estar bien definido y localizado en el centro del
cromatograma.
Para obtener la concentración por litro de muestra se aplica la siguiente
ecuación:
P (UCM) x Ve
UCM = 69
Ecuación 7.
Donde:
UCM = Concentración de UCM (ng/L)
P (UCM)= Concentración en el extracto (ng/µl)
Ve = Volumen final del extracto (µl) o disolución en el vial (50 µl)
V = Volumen de la muestra (L)
8.4. BIBLIOGRAFIA
CARIPOL. 1980. Manual para la vigilancia de la contaminación por petróleo.

IOCARIBE/CARIPOL, pp 12-22.
Garay, J.; Panizzo, L.; Ramírez, G.; Sánchez, J. Manual de técnicas analíticas
de parámetros físicoquímicos y contaminantes marinos. Centro de
Investigaciones Oceanográficas e Hidrográficas, CIOH. Cartagena, 1993.
PRACTICA N°9
9. DETERMINACION DE HIDROCARBUROS TOTALES POR ESPECTROSCOPIA

INFRAROJA.
La contaminación del agua (ríos, lagos y mares) es producida principalmente

por el vertimiento de aguas servidas de basuras, de relaves mineros y de
productos químicos, las aguas servidas, basura y desmontes en las aguas
además de productos químicos y desechos industriales. Las descargas
municipales, industriales, agrícolas y los vertimientos de residuos oleosos de la
actividad marítima y portuaria, así como la actividad petrolera, son las
principales fuentes de contaminación y deterioro de las aguas ocasionando la
70
presencia de tóxicos orgánicos, metales pesados solidos suspendidos,

microorganismos patógenos y nutrientes a los ambientes, los cuales afectan el
bienestar de los ecosistemas y la calidad de vida de los grupos humanos
presentes en la región.
La contaminación de las aguas por hidrocarburos en los sistemas de
almacenamiento, en las fuentes de abastecimientos subterráneos y
superficiales, así como en otros cuerpos de agua es un hecho que ocurre con
relativa frecuencia. Este tipo de contaminación produce un cambio en la
característica organolépticas del agua induce al rechazo de consumidores, y su
ingestión representa un riesgo para la salud, asimismo, el ecosistema puede
sufrir afectaciones debidas al impacto negativo de estos contaminantes sobre
sus diferentes componentes.
La determinación de hidrocarburos en aguas es de gran importancia para las
entidades ambientales, debido a los deterioros que causa esto al ambiente.
Entre los múltiples factores que afectan al ambiente están los derramamientos,
vertimientos de residuos industriales en ríos, mares y otras fuentes.
El método espectroscópico infrarrojo escogido se basa en la extracción de los
compuestos orgánicos no polares (principalmente hidrocarburos de origen del
petróleo) por su afinidad al tetracloroetileno. Sin embargo pueden ser extraídos
otros compuestos como grasas y aceite animal o vegetal y de comportamiento
no polar como los pigmentos, que no existen un disolvente que sea selectivo.
Los hidrocarburos disueltos en el tetracloroetileno se determinan
cuantitativamente en una curva de calibración, por comparación de la
absorbancia leída en un número de onda de 2925cm -1, situada en la región
media infrarroja del espectro electromagnético y que corresponde a la vibración
de valencia.
EQUIPOS MATERIALES
Botellas de boca ancha y de color ámbar.
Espectrofotómetro
infrarrojo modelo FTIR 330
Thermo Nicolet
Embudo de separación con llave de teflón
71
Probetas graduadas
Embudos de vidrio
Lana de vidrio
Balanza analítica con
precisión de 0.1 mg
Papel con barras magnéticas
Erlenmeyer con tapa esmerilada
Celdas de cuarzo de 40 mm de paso

óptico
REACTIVOS
Para la preparación de reactivos patrones y muestras, se empleara agua

desionizada. Todos los reactivos son de grado analítico, mezcla comercial
certificada de hidrocarburos patrones (n-Hexadecano, Isoctano y
Clorobenceno), Tetracloroetileno (Solvent IR), Ácido clorhídrico (HCL) con
relación 1:1 Sulfato de Sodio anhidro (Na 2SO4), mezcla patrón de referencia;
utilizar la mezcla de referencia comercial de n-Hexadecano (37.5 %v/v) y
Clorobenceno (25.0% v/v). De forma alternativa prepararla a partir de los
compuestos individuales. Por ejemplo para 40 mL, mezclar 15 mL de
Hexadecano e Isoctano y 10 mL de Clorobenceno. Guardar herméticamente en
refrigeración durante 6 meses como máximo.
Mezcla patrón de trabajo: Pipetear 0.5mL de la mezcla de referencia a un
volumétrico de 100 mL previamente tarado y pesar hasta la décima de mg,
disolver y enrasar con Tetracloroetileno. Calcular la concentración real en mg/L.
Muestra control: En un vial pipetear 0.1mL de la mezcla de referencia y pesar
hasta la décima de mg, disolverlo con Tetracloroetileno y trasvasarlo
cuantitativamente al embudo de separación que contiene 500 mL de agua.
Mezclar bien y analizar como una muestra.
COLECCIÓN, PRESERVACION Y ALMACENAJE DE MUESTRAS
72
Solo deben recolectarse muestras puntuales. La muestra deberá recogerse

directamente en la botella de boca ancha. El volumen a colectar depende del
tipo de agua y la concentración de hidrocarburos totales presentes; este varía
desde 500 mL para aguas residuales industriales y/o domesticas hasta 2 litros
para aguas potables y/o superficiales dulces o salinas. Las muestras deben
preservarse a pH<2 por adición de 2 a 5 mL aproximadamente de HCL 1:1
debe verificarse el pH de la muestra a su arribo al laboratorio y corregirlo si es
necesario con adición de ácido.
Es muy importante que al recolectar la muestra no se debe purgar las botellas
de muestreo con las muestras antes de la toma, ya que los hidrocarburos como
también otras grasas presentes se adhieren a las paredes de las botellas
generando resultados más altos de los esperados. Dejar un espacio prudente
entre el líquido la boca de la botella para facilitar la agitación y el manejo
durante el análisis y almacenamiento en la nevera.
Las condiciones ambientales no son críticas para la realización de este

ensayo, sin embargo la húmeda es crítica para el funcionamiento del equipo IR
por lo que este debe permanecer en un local con climatización y
deshumidificación.
9.3.1. EXTRACCION CON SOLVENTES ORGANICOS
Marque el nivel de la muestra en la botella para determinar el volumen de la

1 misma. Si el volumen de la muestra es mayor a 1.5 litros, extraía directamente
en la botella, si no, la muestra es transferida a un embudo de separación
lavando la botella con 15 mL de Tetracloroetileno para recuperar perdida de
2 hidrocarburos que puedan quedar en ella.
Adicione el lavado al embudo de separación y agite vigorosamente durante 2

3 minutos. Si se sospecha de la formación de emulsiones estables, agite con
suavidad de 5 a 10 minutos.
Deje separar las capas y drene la capa de disolvente a un Erlenmeyer, realice
4 2 extracciones más cada una con 15 mL de Tetracloroetileno, pero
73
adicionándolos primero a la botella de muestra antes de agregarlos al embudo

de separación para recoger los hidrocarburos adheridos.
IMPORTANTE
El Erlenmeyer debe permanecer tapado durante el proceso de extracción, a
través de un embudo con papel filtro, trasvasar el extracto líquido a un matraz
volumétrico de 50 mL y enrase con Tetracloroetileno.
9.3.2. PREPARACION DE LA CURVA DE CALIBRACION
A partir de la mezcla patrón de trabajo, prepare 5 o 6 patrones en el intervalo

de 10 a 200 mg/L, en todo caso consideren la concentración real de la mezcla
patrón. Prepare simultáneamente al menos 7 blancos. Lea las absorbancias de
los patrones y las muestras en el intervalo de 3200 a 2700 cm -1 y al pico
máximo de 2925 cm-1. Mientras esté vigente la curva conserve los patrones en
viales con tapa de teflón y protegidos de la luz.
9.3.3. LECTURA DE ESPECTROS
1 Ejecutar los siguientes pasos para garantizar el correcto funcionamiento del

espectrofotómetro infrarrojo:
Cerciórese que el espectrofotómetro esta encendido y una vez verificado, libere
2 las ventanas del espectrofotómetro quitándole los protectores de ventana de
color rojo.
Abrir la válvula de gas nitrógeno (N 2) a una presión constante entre 5 -10 psi,
3 tenga en cuenta que no es necesario pasar un flujo de N 2 alto, ya que esto
llevaría pérdidas o gastos excesivos y sin ninguna justificación.
Abrir la aplicación EZ-OMNIC, antes de iniciar cualquier operación o análisis,
4
debe alinear el espectrofotómetro infrarrojo.
En el cuadro de dialogo que se despliega seleccionar el experimento
5 predeterminado (que para el caso sería el de Hidrocarburos Totales en agua X
IR).
En la ventana del OMNIC, despliegue la opción recoger en la barra de menú y
6 posteriormente la opción “seleccionar experimento” se abrirá un cuadro de
dialogo, escoger la opción diagnóstico y posteriormente seleccionar alinear.
Esperar a que se cumplan los pasos necesarios para cumplir con la alineación
7 del espectrofotómetro, al final de este paso, la señal deberá estar dentro del
intervalo esperado de -5.6 a 9.8 V en la bancada o Bench. Si es así continúe
con el procedimiento; en caso contrario deberá volver a alinear el FT-IR hasta
74
lograr alcanzar el valor aceptable y luego de haber tomado los valores cierre el
EZ-OMNIC.
Abrir el Bench (Bancada) desde el acceso directo en el escritorio y seleccione
8 Performance Test (Prueba de nivel de ruido) y siga las instrucciones del cuadro
de dialogo y guarde los datos.
Regresar al cuadro de dialogo del Bench y seleccione Laser para registrar de la
9 forma descrita las ganancias X, Y, y R, Mcoil X e Y y si todos los valores son
aceptables o satisfactorios, según el historial del equipo, cierre el Bench y
continúe con la validación.
9.3.4. VALIDACION DEL EQUIPO
Esta debe realizarse previo al análisis de un lote de muestras. Los resultados

se guardan automáticamente en el archivo del equipo:
 Para iniciar el Valpro, abra nuevamente el EZ-OMNIC y cargue el
experimento a seguir.
 Seleccionar en la barra de menú la opción Analyze, escoja Valpro
(validación del equipo) y siga las instrucciones del cuadro de dialogo o
lea el manual de validación.
 Si el equipo pasa todas las pruebas de alineación, chequeos y Valpro,
realice los análisis de HCT.
 Cerrar la válvula del gas Nitrógeno.
En todo el procedimiento previamente descrito, el color verde que acompaña
los valores de aceptación es indicativo de que están dentro del intervalo
esperado. Otro color será el indicativo de que hay un problema y la aplicación
mostrara un mensaje de error, si esto sucede, se debe reportar.
9.3.5. VERIFICACION DE LA CURVA DE CALIBRACION
 Inicialmente verifique la calidad del Tetracloroetileno mediante un fondo

obtenido de la extracción de un blanco de agua desionizada que servirá
como blanco de compensación. Utilícelo para analizar patrones y
muestras.
 Verifique la validez de la curva existente mediante el análisis de un
patrón de concentración conocida, preferiblemente cercano al punto
medio de la curva. Si el resultado es coincidente +/- 10%, se considera
que la curva es válida y se procede a preparar y leer las muestras. En
caso negativo, repetir el patrón. Si el problema persiste, construir una
nueva curva de calibración.
75
9.3.6. DETERMINACION DE HCT EN LAS MUESTRAS
 Transfiera cuidadosamente el extracto obtenido a la celda de cuarzo

previamente limpia y seca, dejando un espacio libre de llenado para
evitar derrames, cubra la celda con la tapa de teflón.
 Realice un Background o blanco de disolvente previo a las lecturas.
 Lea las muestras en el intervalo de trabajo de 3200 a 2700 cm -1
registrando la absorbancia a 2925cm-1 que corresponde al máximo de la
banda (CH-) de hidrocarburos.
 Si la concentración de la muestra resulta >200 mg/L, analizar 2
disoluciones diferentes y aceptar los resultados si el coeficiente de
variación es < 10%.
La ecuación 1 es la fórmula general para calcular los hidrocarburos totales:
a x 0.05 x Fd
HCT=
V
Ecuación 1.
Donde:
HCT = Hidrocarburos totales en la muestra (mg/L)
a= Lectura en mg/L de HCT en el extracto determinado a partir de la curva de
calibración.
V= Volumen en L de muestra extraída
Fd= Factor de dilución (en caso necesario)
El resultado se obtendrá de la formula general después de haber obtenido la
lectura de la muestra a partir de la curva de calibración y se expresara cono 2
cifras decimales. Se deben consultar los datos de la curva vigente para
informar aquellos resultados que resulten menores al límite de detección. Con
cada lote de muestras, analizar una muestra de control.
76
9.4. BIBLIOGRAFIA
Díaz, N.; Alfaro, J.; & Garza, H. 2001. Método analítico para detectar
hidrocarburos aromáticos policíclicos en agua potable. Revista Ciencia UANL,
Vol. 4, Núm. 4, pp.420-425.
Velázquez, M.; Pimentel, J.; & Ortega, M. 2011. Estudio de la distribución de
boro en fuentes de agua de la cuenca del río Duero, México, utilizando análisis
estadístico multivariado. Revista Internacional de Contaminación Ambiental,
Vol. 27, Núm. 1, pp. 9-30.
PRACTICA N°10
10. DETERMINACION DE AGUA POR METODO VOLUMETRICO KARL FISCHER
La determinación volumétrica de agua está basada en la reacción cuantitativa

del agua con una solución anhidra de dióxido de azufre e iodo en presencia de
una solución amortiguadora, que reacciona con los iones de hidrogeno, según
la siguiente ecuación:
I2 + SO2 + 3C5H5N +CH3OH + H2O----------------- 2(C5H5N + H) I- + (C5H5N+H)- OSO2OCH3

77
En la solución volumétrica original, conocida como reactivo de Karl Fischer, el

dióxido de azufre y el iodo se disuelven generalmente en piridina y metanol,
pudiéndose utilizar otros solventes y bases, en cuyo caso es necesario verificar
la estequiometria y la ausencia de interferencias. Existen 2 métodos diferentes
basados en la reacción con el iodo, uno es la titulación volumétrica y el otro es
un método de titulación culombimétrica.
En el primero, el iodo se disuelven en el reactivo y el contenido de agua es
determinado midiendo la cantidad de iodo consumido como resultado de la
reacción con el agua. La muestra en ensayo puede valorarse con el reactivo
directamente o el análisis puede realizarse mediante un procedimiento de
valoración indirecta.
La estequiometria de la reacción no es exacta y la reproducibilidad de la
determinación depende de factores tales como la concentraciones relativas de
los componentes del reactivo, la naturaleza del solvente inerte utilizado para
disolver la muestra en ensayo y la técnica utilizada en la determinación, por lo
tanto resulta necesario estandarizar previamente la técnica a fin de conseguir
una exactitud adecuada. Asimismo, la precisión del método depende de la
eficacia de la eliminación de la humedad atmosférica del sistema.
REACTIVOS
El reactivo de Karl Fischer puede preparase por cualquiera de los métodos

indicados a continuación:
NOTA:
 El cloroformo y el metanol empleados para la preparación del reactivo
deben tener un contenido de agua inferior a 0,1 mg/mL.
 El metilcellosolve y el éter mono metílico de di etilenglicol deben tener un
contenido de agua inferior a 0,3 mg/mL
PREPARACION
METODO A: Agregar 125 gr de iodo a una solución que contenga 670 ml de

metanol y 170 ml de piridina y enfriar. Colocar 10 ml de piridina en una probeta
graduada de 250 ml y manteniendo la piridina fría en un baño de hielo,
introducir dióxido de azufre seco hasta alcanzar un volumen de 200 ml. Agregar
lentamente esta solución a la mezcla de iodo enfriada agitando hasta disolver
el iodo. Transferir la solución al aparato y dejar la solución en reposo durante
78
24 horas antes de estandarizar. Un mL de esta solución de la luz mientras se

esté utilizando. Para determinar agua en cantidades de trazas (menos de 1%)
es preferible usar un reactivo con factor de equivalencia de agua no más 2,0; el
cual generara el consumo de un volumen más significativo de solución
volumétrica.
METODO B: Disolver 63gr de iodo en 100 ml de piridina, con un contenido de
agua inferior a 1 mg/mL, enfriar la solución en el baño de hielo y hacer pasar
dióxido de azufre seco a través de esta solución hasta que el aumento de peso
sea de 32 gr. Llevar a 500 mL agregando cloroformo y metanol, dejar en
reposo durante no menos de 24 horas antes de usar.
METODO C: Disolver 102 gr de imidazol, con un contenido de agua inferior a
0,1% en 350 mL de metilcellosolve o éter monometilico de dietilenglicol, enfriar
la solución en el baño de hielo y hacer pasar dióxido de azufre seco a través de
esta solución hasta que el aumento del peso sea de 64 gr manteniendo la
temperatura entre 25°C Y 30°C. Disolver 36 gr de iodo en esta solución y dejar
en reposo durante no menos de 24 horas antes de usar.
METODO D: Hacer pasar dióxido de azufre a través de 150 ml de
metilcellosolve hasta que el aumento de peso sea de 32 gr. A esta solución
previamente enfriada en un baño de hielo, agregar 250 ml de metilcellosolve o
cloroformoqe contiene 81 gr de 2 metilaminopiridina, con un contenido de agua
inferior a 1mg/mL. Disolver 36 gr de iodo en esta solución y dejar en reposo
durante no menos de 24 horas antes de usar.
El reactivo Karl Fischer, preparando por cualquiera de estos métodos debe
estandarizarse dentro de un periodo de 1 hora antes de su uso o diariamente si
su uso es continuo, dado que su actividad para la determinación de agua
cambia con el tiempo. Almacenar el reactivo refrigerado, protegido de la luz y la
humedad.
ESTANDARIZACION
Colocar una cantidad suficiente de metano o de otro solvente adecuado en el

vaso de valoración para cubrir los electrodo y agregar suficiente reactivo hasta
obtener el color característico del punto final o 100 +/- 50 μA de corriente
continua con un potencial aplicado de aproximadamente 200 mV.
PREPARACION DE LA MUESTRA
Utilizar una cantidad pesada o medida con exactitud de la muestra en análisis

con un contenido de agua estimado entre 2 y 250 mg. La cantidad de agua
depende del factor de equivalencia de agua del reactivo y del método de
79
determinación del punto final. En la mayoría de los casos, se puede estimar la

cantidad mínima de la muestra (Pm) en mg por la fórmula:
Pm = FCV/ Kf
Ecuación 1.
Donde:
F = Es el factor de equivalencia de agua del reactivo en mg/mL
C= Volumen usado, en porcentaje de la capacidad de la bureta
V= Volumen de la bureta en ml.
Kf= Es el limite o contenido esperado de agua en la muestra, en porcentaje.
C= esta generalmente entre 30 % y 100% para la valoración manual y entre
10% y 100% para el método instrumental de determinación del punto final.
NOTA: Se recomienda que el producto FCV sea mayor o igual a 200 para el
cálculo, a fin de asegurar que la cantidad mínima de agua valorada sea mayor
o igual a 2mg.
METODO CULOMBIMETRICO
Para la determinación culombimétrica del agua se utiliza la reacción e Karl

Fischer. El iodo, sin embargo, no se agrega en forma de solución volumétrica
sino que se obtiene popr oxidación anódica en una solución que contiene
ioduro.
La celda de reacción consta normalmente de un amplio compartimiento
anódico y de un pequeño compartimento catódico, separados entre sí por un
diafragma. Cada compartimento tiene un electrodo de platino que conduce la
corriente a través de la celda. El iodo que se produce en el electrodo anódico,
reacciona inmediatamente con el agua que está presente en el compartimento.
Cuando se ha consumido toda el agua, se produce un exceso de iodo que
normalmente se detecta electrométricamente, lo que indica el punto final. La
humedad se elimina del sistema mediante pre-electrolisis. No es necesario
cambiar la solución del vaso después de cada determinación.
Normalmente las muestras deben ser transferidas al vaso en forma de solución
mediante la inyección atrás de un septo, los gases se pueden introducir en la
celda utilizando un tubo de entradas de gas adecuado. La precisión del método
80
depende fundamental del grado de eliminación de la humedad atmosférica en

el sistema; por tanto, la introducción de los sólidos en la celda puede requerir
precauciones tales como trabajar en una atmosfera de gas inerte seco.
10.4. BIBLIOGRAFIA
FAO. 1975. Manual of Methods in Aquatic Environment Research. Parte 1. FAO

fish. Teach. Paper No. 137.
Garay, J.; Panizzo, L.; Ramírez, G.; Sánchez, J. 1993. Manual de técnicas
analíticas de parámetros físico-químicos y contaminantes marinos. Centro de
Investigaciones Oceanográficas e Hidrográficas, CIOH. Cartagena.
PRACTICA N°11
11. DETERMINACION DE METALES EN AGUA POR ESPECTROSCOPIA DE

ABSORCION ATÓMICA
81
Los metales pesados son un tipo de elementos químicos que tienen como
particularidad que sus densidades son altas en comparación con otros
materiales, muchos de los cuales son tóxicos para los seres humanos. Los
metales que presentan mayor riesgo ambiental son: Mercurio, Plomo, Cadmio y
Arsénico, debido a su uso extensivo, a su toxicidad y amplia distribución. Los
metales pesados se encuentran cerca de la parte inferior de la tabla periódica
por lo que sus densidades son altas en comparación con otros metales.
SUSTANCIAS DENSIDAD (gr/Cm3)
Hg 13.5
Pb 11.3
Cd 8.7
As 5.8
H2o 1.0
Mg 1.7
Al 2.7
Aunque asociamos los metales pesados con la contaminación del agua y los
alimentos en realidad son transportados en su mayor parte de un lugar a otro a
través del aire, como gases o especies absorbida o como especies absorbidas
en las partículas materiales suspendidas. Así por ejemplo, cerca de la mitad de
la entrada de metales pesados en los lagos es debida a la deposición desde el
aire. Aunque el vapor de mercurio es altamente toxico, los metales pesados
Hg, Pb, Cd y As, no son particularmente tóxicos como elementos libres en su
forma condensada. Sin embargo, los 4 son peligrosos en forma catiónica y
también enlazados a cadenas cortas de átomos de carbono. Bioquímicamente,
el mecanismo de su acción toxica proviene de la fuerte afinidad de los cationes
por el azufre. Así los grupos sulfhídricos, -SH, los cuales están presente
comúnmente en las enzimas que controlan la velocidad de las reacciones
metabólicas críticas en el cuerpo humano, se enlazan fácilmente a los cationes
metálicos ingeridos o a las moléculas que contienen los metales.
En la espectroscopia de absorción atómica, las muestras se vaporizan a muy

altas temperaturas y las concentraciones de átomos seleccionados se
determinan midiendo la absorción o la emisión en sus longitudes de onda
características. Debido a su alta sensibilidad y a la facilidad con la cual muchas
muestras pueden analizarse, la espectroscopia de absorción atómica ha
llegado a ser una de las principales herramientas de la química analítica. Es
común determinar concentraciones de analito en niveles de partes por millón
(ppm) y en algunos casos se determinan en niveles por partes por mil millones
(ppb)
82
MATERIAL EQUIPO REACTIVOS

Matraces aforados de Balanza analítica Agua desionizada
50 mL
Pipetas volumétricas Espectrofotómetro de Reactivo que contenga el metal

de 1,5 y 10 ml. absorción atómica para analizar grado Q.P.
Vasos precipitados de
250 ml Placa de calentamiento Ácido nítrico concentrado
Caja Petri
Lámparas de cátodo Ácido Clorhídrico concentrado
Vidrio Reloj
Campana de extracción
11.3.1. PREPACION DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN
1 Preparar 100 mL de una solución patrón que contenga 1000 ppm del metal a
analizar.
A partir de la solución anterior preparar diluciones de 25 mL de la solución
2 patrón a diferentes concentraciones de acuerdo al intervalo lineal de cada
elemento.
3 Analizar los estándares preparados anteriormente por espectroscopia de

absorción atómica y tomar los valores de absorbancia de cada uno de los
estándares y construir la gráfica de absorbancia contra concentración (se
construye una curva de calibración para cada metal que se vaya a analizar)
11.3.2. TRATAMIENTO DE LA MUESTRA
Transferir una alícuota de 50 o100 ml de la muestra de agua bien mezclada a

1 un vaso de precipitado de 250 ml. Agregar 10 ml de HNO 3 y 10 ml de HCL
concentrados.
NOTA: No emplear HCL para el análisis de Pb en agua.
2
83
Poner a digerir la muestra en una placa de calentamiento hasta que la digestión

sea completa. Esto se indica por un residuo rojo claro (el color depende de la
muestra a analizar), de ser necesario agregar 10 ml de HNO 3; HCL. (1:1)
Interrumpir la digestión, si el volumen final es mayor al volumen del matraz
3 aforado, evaporar con precaución a un volumen menor del matraz aforado y
dejar enfriar el vaso de precipitado.
Enjuagar con un poco de agua Bidestilada las paredes del vaso de precipitado
4 y del vidrio de reloj y en caso de existir precipitado filtrar la muestra para evitar
que los silicatos y otros materiales disueltos insolubles obstruyan el atomizador
(humedecer con agua el papel filtro antes de filtrar).
Transferir la solución filtrada a un matraz aforado de 50 o 100 mL, lavando las
5
paredes del vaso de precipitado con agua Bidestilada y aforar con agua
Bidestilada.
La solución obtenida anteriormente se analiza por espectroscopia de absorción
6 atómica, donde se procede a leer su absorbancia. Con el valor de la
absorbancia obtenida, se realiza una interpolación en la curva de calibración y
se obtiene la concentración del metal analizado.
7 Realizar el mismo procedimiento para todos los metales a analizar.
11.4. BIBLIOGRAFIA
Flaschka, A.H.; Bernard, Jr., A.,J. Sturrock, P.E. ; “Química Analítica

Cuantitativa”. Vol. I; Ed. CECSA (1978)
NOM-AA-051-1981 “Análisis de Metales Pesados en Aguas Residuales Por
Espectroscopia de Absorción Atómica”.
84

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS

PARA EL MANEJO DE EQUIPOS

La creciente preocupación por el medio ambiente y la necesidad de eliminar o

Determinación de metales en agua por espectroscopia de absorción

1. DETERMINACION DE LA DENSIDAD APARENTE Y REAL DEL SUELO.

1.1. INTRODUCCION DE LA PRACTICA

La densidad aparente (DA) es una propiedad del suelo ampliamente utilizada

Peso de la muestra seca (gr)

2.3 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Fuente: Guide for educators USDA

1.2. MATERIALES Y EQUIPOS

TEXTURA Densidad Densidad Densidad aparente

Franco arenoso- Franco <1.40 1.63 >1.80

Limo- franco limoso <1.40 1.60 >1.75

Terrones de suelo seco Balanza analítica.

1.3. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1.3.1. DENSIDAD APARENTE

1 Caliente la parafina (nombre común de un grupo de hidrocarburos)

Tome un terrón de suelo indisturbado, haga un nudo con un hilo y

3 Sumergir el terrón en la parafina ya calentada, sacar y dejar enfriar,

4 Pese de nuevo el terrón de suelo ahora parafinado y tome el dato en

5 Mida un volumen exacto de agua en una probeta cuidando de no

6 Sumerja el terrón en el contenido de la probeta y tome el dato del

Vd= Volumen desplazado

1.3.2. DENSIDAD REAL

1 Pesar un picnómetro limpio y seco con tapa en la balanza analítica.

3 Pesar nuevamente el picnómetro pero esta vez ya con el suelo y la tapa.

Factores para la corrección de la densidad del agua

FAO, 1970, Boletin n°10. Metodos físicos y quimics de análisis de suelos y de

2. DETERMINACIÓN POTENCIOMÉTRICA DEL PH DEL SUELO.

2.1. INTRODUCCION DE LA PRACTICA

En el año de 1909, el químico danés Sorense propuso o definió la utilización de

Fuerza de los ácidos Fuerza de las Bases

H+ (CH3COOH) Acidez débil Alcalinidad débil (NH4OH)

La concentración de iones de Hidrogeno es una propiedad importante cuando

5.1- 6.0 MODERADAMENTE ÁCIDO -Baja solubilidad del P y regular disponibilidad de Ca y

6.1- 6.5 LIGERAMENTE ÁCIDO -Condición adecuada para el crecimiento de la mayoría

6.6- 7.3 NEUTRO - Buena disponibilidad de Ca y Mg.

7.4 – 7.8 LLIGERAMENTE -Posible exceso de Ca y Mg y carbonatos.

>7.8 MEDIANAMENTE ALCALINO -Posible exceso de sodio intercambiable.

2.2. CALIBRACIÓN GENERAL DEL POTENCIÓMETRO O PH-METRO.

2.3. MATERIALES Y REACTIVOS.

Reactivos Formula Soluciones

MATERIALES EQUIPOS INSUMOS

Vidrio reloj Balanza analítica Agua potable

2.4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Encender el PH-metro y calibrarlo con las soluciones Buffer, se deja el equipo

CALIBRACIÓN CON LAS SOLUCIONES DE BUFFER O TAMPÓN EN MEDIO

 Introduzca el electrodo primero en un vaso precipitado plástico con

Una vez tengamos el PH-metro calibrado, se procede a hacer la medición,

Tome el dato que arroja el PH-metro y anótelo en su hoja de cálculos, si va a

NOTA Los valores de referencia: entre PH: 4,8 a 8, 2 definidos por

Bornemisza, E., M. Constenla, A. Alvarado, E.J. Ortega, y A.J. Vásquez. 1979.

3. CUANTIFICACION DE FOSFORO (P) EN EL SUELO

3.1. INTRODUCCION DE LA PRACTICA

El fosforo es un no metal perteneciente al grupo 15, es decir al grupo del

3.1.1. METODO DE BRAY Y KURTZ

La espectrofotometría es la medida de la cantidad de energía radiante

3.2. MATERIALES Y REACTIVOS.