UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA

(Creada por Ley Nro. 25265)

FACULTAD DE CIENCIAS DE INGENIERÍA

ESCUELA PROFESIONAL DE ZOOTECNIA
TESIS
“PREVALENCIA DE MASTITIS SUBCLÍNICA, CAUSADA POR Escherichia coli, EN
VACAS DE DIFERENTES LACTACIONES, EN LA ESTACIÓN EXPERIMENTAL
CALLQUI GRANDE HUANCAVELICA”
LINEA DE INVESTIGACION:

LINEA DE INVESTIGACIÓN
SANIDAD ANIMAL
DISCIPLINA
CIENCIAS VETERINARIAS
PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE:
INGENIERO ZOOTECNISTA
PRESENTADO POR:
Bach. HEGEL SIERRA MATOS
Bach. ROXANA CEDANO CONTRERAS
HUANCAVELICA – 2018
II
 ASESOR

Dr. Nicasio Valencia Mamani

CO – ASESOR

MSc. Víctor Guillermo Sánchez Araujo

III
 DEDICATORIA

Póstumamente a mi querido, amado y

respetado padre Dr. Elías Sierra Ludeña,
quien supo inculcar en mí el deseo de
superación y desarrollo constante con sus
conocimientos, consejos y orientaciones.

A mi amada y adorada madre Prof.

Emilia Matos Tovar por su noble
paciencia y abnegado apoyo en el
transcurrir de mi vida y estudios.

A mis amados hijos Criz Emily, Mahelly

Brighitt, Piero Martín y descendencia
En el afán de la constante lucha por su
Superación.

Hegel

IV
A Dios que me da vida y fortaleza para
Conseguir mis sueños y entender que
A través de ellos cada día termina e
Inicia una mejor oportunidad.

A mi familia, joya preciada,

Sin ella no fuera posible
Conseguir la fuerza necesaria
Para lograr mis metas.

A mis padres, Amancio y Martina que me

Brindan su apoyo incondicional, fortaleza
Y constancia en mi formación haciendo
De mí una mujer positiva a la sociedad.

A mis hijos Alyzee Camila y

Adriano, motor que me obliga
A ser mejor cada día.

Roxana

V
 RESUMEN

El estudio tuvo como objetivo determinar la prevalencia de mastitis subclínica causada

por Escherichia coli, en vacas de diferentes lactaciones, para lo cual hemos utilizado una
población de 20 vacas en producción, obteniendo 14 vacas positivas mediante la prueba
de California Mastitis Test (CMT), con prevalencia de mastitis subclínica, dando como
resultado un 70% de prevalencia; luego realizamos la determinación de prevalencia de
mastitis subclínica por etapas de lactación, sobre los 14 que dieron positivos habiendo
obtenido una prevalencia mayor en las 1ra. Lactación en un 13%, 5ta. Lactación 14% y
en la 6ta. Lactación un13%., para determinar si las etapas de lactación influyen en la
prevalencia de mastitis sub clínica, utilizamos la prueba Ji² de homogeneidad
determinando que existe diferencia estadística (p<0.05), lo que nos indica que influyen las
etapas de lactación en la prevalencia de mastitis subclínica causada por Escherichia coli.

Concluyendo como resultado que las diferentes etapas de lactación influyen en la

prevalencia de la mastitis subclínica y recomendando se efectúe más trabajos de
investigación para determinar la prevalencia de mastitis sub clínica causada por otras
bacterias.

Palabras clave: mastitis subclínica, incidencia, prevalencia.

VI
 SUMMARY

The objective of the study was to determine the prevalence of subclinical mastitis caused
by Escherichia coli, in cows of different lactations, for which we used a population of 20 cows
in production, obtaining 14 positive cows by means of the California Mastitis Test (CMT), with
prevalence of subclinical mastitis, resulting in a 70% prevalence; then we made the
determination of prevalence of subclinical mastitis by stages of lactation, on the 14 that were
positive having obtained a higher prevalence in the 1st. lactation by 13%, 5th. Lactation 14%
and in the 6th. Lactation un13%., to determine if the stages of lactation influence the
prevalence of sub-clinical mastitis, used the Ji² homogeneity test determining that if there
statistical difference (p<0.05), this indicates that if the stages of lactation influence the
prevalence of subclinical mastitis caused by Escherichia coli.

Concluding as a result that the different stages of lactation they influence the prevalence of
subclinical mastitis and recommending more research work to determine the prevalence of
sub-clinical mastitis caused by other bacteria.

Key words: subclinical mastitis, incidence, prevalence.

VII
 AGRADECIMIENTOS

Expresamos nuestros sinceros agradecimientos a las siguientes personas; quienes

contribuyeron en forma desinteresada e incondicional, en el desarrollo de nuestro trabajo de
investigación, con su apoyo, enseñanza y orientación.

Al Dr. Nicasio Valencia Mamani, docente nombrado en la Facultad de Ciencias de

Ingeniería de la Universidad Nacional de Huancavelica, asesor de nuestra tesis quién dedicó
parte de su tiempo guiándonos en el desarrollo del presente trabajo de investigación.

Al Ing. Marino Ártica Félix, quien nos apoyó en forma incondicional y adhonoren con su
asesoría y orientación para que nuestro trabajo de investigación se concluya
satisfactoriamente.

A los empleados del área administrativa, almacén y de sanidad animal del laboratorio
central de la Universidad Nacional de Huancavelica; quienes nos brindaron en forma
incondicional, desinteresada y amable su apoyo decidido, para la conclusión de nuestro
trabajo de investigación.

Al Jefe, empleados administrativos y personal de planta de la Estación Experimental

Agraria Callqui del Ministerio de Agricultura de Huancavelica, quienes nos brindaron las
facilidades del caso para la obtención de nuestras muestras para el logro y consecución de
nuestro trabajo de investigación.

Y al más grande, que omnipresente en todo puso fuerza, valor y tesón en nosotros para
llegar a la feliz consecución de esta tesis, DIOS.

VIII
 INDICE GENERAL

Pág.
CARATULA
ACTA DE SUSTENTACION
ASESOR
DEDICATORIA…………………………………………………………………………………………IV
RESUMEN………………………………………………………………………………………………VI
ASBTRAC………………………………………………………………………………………………VII
AGRADECIMIENTO…………………………………………………………………………………VIII
INDICE GENERAL…………………………………………………………………………………….IX
INDICE DE CUADROS……………………………………………………………………………….XII
INDICE DE TABLAS………………………………………………………………………………….XIII
INDICE DE FOTOGRAFIAS…………………………………………………….……………….….XIV
INTRODUCCION……………………………………………………………………………………...XV

CAPITULO I
PROBLEMA
1.1. Planteamiento del problema…………………………..…………………………………...1
1.2. Formulación del problema…………………………..…………………………………......4
1.3. Objetivo: General y Específicos………………..……………….…………………………4
1.4. Justificación….………………………………………………… .……………...………..…5

CAPÍTULO II
MARCO TEORICO
2.1. Antecedentes…………………………………………………………….………………...…7
2.2. Bases. teóricas…………..………...………………………………………………………..10
2.2.1. Morfología de la glándula mamaria…………………………...……………..……………10
2.2.2. La ubre de la vaca y el conteo celular somático…………..……………………….……11

IX
2.2.3. La leche………………..…………………………………………………….….………....13
2.2.4. Aspectos generales de la mastitis……………………………………..……….……….16
2.2.5. La Escherichia coli………………………………………………………,,,…….…...…...25
2.2.6. Transmisión y establecimiento de la enfermedad………………..…………..………..28
2.2.7. Impactos que genera esta enfermedad………………………………………….......…29
2.2.8. Diagnóstico de la mastitis subclínica……………………..…………………................30
2.2.9. Técnicas de identificación de Escherichia coli en laboratorio………...….....………..35
2.2.10. Vacunación contra mastitis……………..……………………..…………………...……..38
2.3. Hipótesis…..………………………………………………………………..…….…..…...38
2.4. Variables de estudio…………….…………………………………………….…….…….38

CAPITULO III
METODOLOGIA DE LA INVESTIGACION
3.1. Ambito de estudio………………………………………………………………………...40
3.2. Tipo de investigación………………………………………………………………….….40
3.3. Tivel de investigación…………………………………….………………………………40
3.4. Método de investigación…………………………………………………………………41
3.5. Diseño de investigación………………………………………………………….………41
3.6. Población, muestra, muestreo………………………………………………….……….42
3.7. Técnicas e instrumentos de recolección de datos……………………………………42
3.8. Procedimiento de recolección de datos………………………………………………..43
3.9. Técnicas de procesamiento y análisis de datos………………………………………52

CAPITULO IV
RESULTADOS
4.1. Presentación de resultados…………………………………………………………...…54
4.2. Discusión..………………………………………………………….………………..…....55
CONCLUSIONES....................................................................................................................60
RECOMEDACONES…………………………………………………………………………………58

X
REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA ............................................................................................. 59
ANEXOS …………………………………………………….……………….………………….. 65 - 80

XI
 INDICE DE CUADROS

Cuadro 1: Escore para la interpretación de los grados de california mastitis Test………88

XII
 INDICE DE TABLAS
Pág.
Tabla 1: Composición general de la leche en diferentes
especies (por cada 100 gr)…………………………………….....…….….…………31
Tabla 2: Interpretación del Agar Hierro Tres Azucares (TSI)…………………………..…...68
Tabla 3: Resultados de la prevalencia general de mastitis
subclínica por unidad animal…………………………………………………………70
Tabla 4: Resultados de la prevalencia de mastitis sub clínica
por etapa de lactación en vacas que dieron positivo………………………..…….70
Tabla 5: Resultados de la prevalencia de mastitis sub clínica en vacas que dieron
Positivas por etapas de lactación………………………………………………...….71
Tabla 6: Prueba de Ji² de homogeneidad para determinar si las etapas
de lactación influyen en la prevalencia de mastitis sub clínica……….……….…71
Tabla 7: Lectura e interpretación de la coloración gram…………………….……………....83
Tabla 8: Resumen de la lectura de coloración gram…………………………………..…….83
TABLA 9: Resultados obtenidos con medios diferenciales……………….…………….….…84
TABLA 10: Estadística pecuaria sobre el número de cabezas
de vacuno en la Región Huancavelica…………………………….………….…….86
TABLA 11: Estadística pecuaria sobre el número de cabezas
existente en el distrito de Huancavelica………………………………..…….……..87

XIII
 INDICE DE FOTOGRAFIAS

FOTO 01: Letrero de la Estación Experimental Agraria “Callqui”…………………….…...…90

FOTO 02: Vacas dispuestas para la obtención de muestras, previamente
al inicio de ordeño………………………………………………………….….…..…..90
FOTO 03: Obteniendo muestras de leche para evaluar mediante la prueba
de California Mastitis Test (CMT) in situ…………………………………….……...91
FOTO 04: Aplicando la solución CMT. a las muestras de leche para evaluarlos…………..91
FOTO 05: Realizando el análisis de reacción de las muestras de leche……………………92
FOTO 06: Resultados de la reacción de la leche a la aplicación de la
solución del California Mastitis Test (CMT)………………………………………..92
FOTO 07: Muestras obtenidas en los viales para su traslado al
laboratorio de sanidad animal de la UNH……………………………….………….93
FOTO 08: Soluciones bioquímicas para la realización de las
pruebas en laboratorio……………………………………………...…………………93
FOTO 09: Algunos resultados de las colonias que se obtuvieron
previamente como prueba…………………………………..………………………..94
FOTO 10: Resultados de colonias obtenidas mediante la prueba
de Agar Macconkey; expuestas en forma general, para su evaluación….……...94
FOTO 11: Resultados de colonias obtenidas con la prueba de
Agar Macconkey de la vaca Nancy, en sus 4 flancos
(ubre) expuesta como detalle regional……………………….……………………..95
FOTO 12: Medios bioquímicos listos para ser utilizados……………….……………………..95
FOTO 13: Prueba bioquímica TSI. En tubos de ensayo………………………….……………96
FOTO 14: Prueba bioquímica LIA. En tubos de ensayo………………………….……………96
FOTO 15: Prueba bioquímica de Citrato de Simmons en tubos de ensayo…….…..………97
FOTO 16: Prueba bioquímica del Medio SIM. en tubos de ensayo…….…………………….98
FOTO17: Protocolo para establecer las pruebas bioquímicas en
el desarrollo de la investigación………………………….…………………………..98

XIV
FOTO 18: Resultados de las pruebas bioquímicas expuestas en
forma general para su respectiva interpretación…………………………………99
FOTO19: Resultados obtenidos en forma regional (ubre) de la vaca
Alicia con la prueba en medios bioquímicos……………………………………..99
FOTO 20: Resultados obtenidos de pezón anterior derecho de la vaca Epifania……….100
FOTO 21: Resultados obtenidos de pezón anterior derecho de la vaca Rufina…………100
FOTO 22: Equipo de investigación y asesor en pleno……………………….……………..101
FOTO 23: Tesistas investigadores…………………………………………….………………101

XV
 INTRODUCCIÓN

La producción de leche es una actividad muy importante en el Perú, que permite a los
productores obtener ingresos económicos para cubrir sus necesidades fundamentales; sin
embargo, esta actividad muchas veces se ve afectada por una enfermedad prevalente
conocida como mastitis subclínica cuya característica principal es no presentar signos visibles.
Antecedentes de nivel internacional como las de Danilo (2006) en su tesis “Estudio
Epidemiológico de la Prevalencia de Mastitis Sub Clínica En El Ganado Reina En La Finca
Santa Rosa (UNA) En Época de lluvia”, concluye; la mastitis subclínica es de curso apirético y
sin trastornos generales, encontrándose inflamación interna de la glándula mamaria y se
diagnostica solamente por la realización de pruebas secundarias como es el caso de la
prueba de California. Así también Correa, Cerrón-Muñoz; Wellenberg et al., (2002), explica; la
mastitis es una enfermedad altamente prevaleciente en el ganado lechero, y es una de las
enfermedades más importantes que afecta mundialmente la industria lechera; pues ocasiona
pérdidas económicas muy fuertes a todos los productores de leche en el mundo debido a la
disminución en el rendimiento de leche y un aumento en el número de tratamientos clínicos y
desecho temprano de vacas, por lo que se ha reconocido, durante algún tiempo, como la
enfermedad más costosa en los hatos lecheros.
De igual modo Ferreira, (1984) dice; la mastitis subclínica, no presenta síntomas exteriores
que indican algunas anormalidades, indica también que la leche no sufre una alteración
visible. Es la manifestación más frecuente de mastitis (de 15 a 40 veces más común que la
mastitis clínica) pero solo puede detectarse mediante la ayuda de pruebas especiales.
Luego en la tesis “Determinación de la Prevalencia e Incidencia de Mastitis Sub clínica en
vacunos brown swiss del distrito de Chamaca - Chumbivilcas - Cusco”, explica; considerando
las pesquisas realizadas, esta investigación se fundamenta teórica y científicamente, teniendo
en cuenta la siguiente bibliografía. “La leche es un producto fisiológico de las glándulas
mamarias posee un elevado contenido calórico y un equilibrio de nutrientes que satisface las
necesidades de los recién nacidos durante su periodo crítico de desarrollo y permite un

XVI
crecimiento adecuado hasta que los mismos sean capaces de ingerir sus propios alimentos
sólidos. (…). Señala que, estas sustancias nutritivas aportan a la dieta, algún nutriente en
particular, pero ninguna la supera como alimento equilibrado en componentes para el ser vivo.
Desde el punto de vista sanitario la leche, aun cuando reúne las condiciones organolépticas
básicas, puede ser nociva al contener patógenos para el ser humano, toxinas de micro
organismos. (…). La mastitis se define como una reacción inflamatoria de la glándula
mamaria, la cual es caracterizada por alteraciones físicas y químicas de la leche
representadas por el aumento del número de células somáticas de la leche y por alteraciones
patológicas de la glándula mamaria. (…). Tiene una forma de presentación en la cual no hay
signos visibles en la glándula, pero si una disminución en la producción de leche e incremento
en el número de células somáticas, es de curso apirético y sin trastornos generales,
encontrándose inflamación interna en la glándula mamaria y se diagnostica solamente por la
realización de pruebas secundarias como es el caso de la prueba de California (Danilo, 2006)
Así mismo Stephen (1983) dice; se encontró una prevalencia de mastitis subclínica en 108
de 470 vacas (23%). Hubo infección en 478 de 1880 cuartos (25.3%), 286 cuartos anteriores
(40%). La producción láctea actual era un promedio de 3.2 Kg. diario por vaca. La mastitis
subclínica era responsable de una disminución de producción costando $119.00 por vaca por
mes o $ 1190.00 por vaca durante una lactación de 300 días. Conclusión que demuestra que
la prevalencia de mastitis sub clínica genera una baja en la producción de leche, la misma que
genera pérdidas económicas para los productores que se dedican a esta actividad ganadera o
agroindustrial.
Por ello la presente investigación tiene como objetivo general determinar la prevalencia de
mastitis sub clínica causada por Escherichia coli, en vacas de diferentes lactaciones en la
Estación Experimental Agraria “Callqui” de la Dirección Regional Agraria Huancavelica; ya que
esta influye enormemente en los niveles de producción causando grandes pérdidas
económicas.

Los Tesistas

XVII
 CAPÍTULO I
PROBLEMA

1.1 Planteamiento del Problema

En el distrito de Huancavelica existen 5,440 vacunos entre productores de carne y

leche que constituye el 2.20 % de la población regional que llega a 247,801 cabezas
(Dirección de Información Agraria Huancavelica, 2015).

La producción de leche es una actividad económica importante en la Estación

Experimental Agraria “Callqui”, de la Dirección Regional Agraria Huancavelica, que les
permite obtener ingresos económicos para generar su auto sostenimiento y
mantenimiento a nivel institucional (Dirección de Información Agraria Huancavelica,
2015). El tipo de producción empleada en la estación experimental es semi-intensivo o
mixto no llegando a efectuar una producción técnicamente adecuada ya que a la fecha y
habiendo observado insitu las técnicas de manejo que emplean es inadecuada y sin un
control estricto en la limpieza, higiene y asepsia en el establo, aspecto que nos conlleva a
pensar que podría existir un potencial riesgo de contaminación invisible de la leche que
se produce en estas condiciones y muchas veces esta contaminación es ocasionada por
la bacteria del Escherichia coli, que es una bacteria ambiental y además presente en la
flora intestinal de los animales, en este caso las vacas y a través de sus heces pueden
contaminar la leche, ya que luego de su alimentación tienden a recostarse sobre estas
heces que pudieran estar contaminadas llegando a que los flancos mamarios se pongan
en contacto con las zonas donde se encuentran las heces que pueden generar riesgos de
contaminación de mastitis sub clínica, además hemos observado que el ordeño que
realizan en la Estación Experimental Agraria “Callqui” es en forma manual habiendo
notado que los operarios antes de iniciar con el ordeño no se lavan adecuadamente las
manos, ni tampoco realizan la limpieza de las ubres con alcohol yodado y finalmente ni
usan guantes otro aspecto que nos hace sospechar que pidiera haber contaminación de
1
la leche, al respecto mencionan que; “La leche que así se comercializa se obtiene bajo
condiciones de higiene deficiente, a través de ordeña manual” (…), Estos aspectos
pueden determinar una prevalencia de mastitis con tasas de incidencia elevadas que
podrían impactar negativamente el volumen y calidad de leche que producen, la viabilidad
de cuartos productivos, la tasa de segregación de vacas en producción, los costos de
producción asociados al tratamiento de animales que padecen la enfermedad, e inclusive
el inventario animal por la muerte asociada a cuadros de mastitis hiperaguda, o bien, por
la eliminación temprana de vacas afectadas por procesos crónicos o agudos que
terminaron en fibrosis de tejido glandular (Silva, 2007). Además, no hemos hallado
información local, sobre trabajos de investigación referente a la prevalencia de mastitis
subclínica en diferentes lactaciones que nos permitan tomar decisiones con respecto a la
productividad y a la disminución económica en la producción de leche.

“La mastitis subclínica es de curso apirético y sin trastornos generales, encontrándose

inflamación interna de la glándula mamaria y se diagnostica solamente por la realización
de pruebas secundarias como es el caso de la prueba de California” (Danilo, 2006).

“Se dice que la mastitis es subclínica cuando no hay evidencia de inflamación; por
ejemplo, recuento elevado de células sin anormalidad visible de la leche o ubre” (Blood y
Radostits, 1992).

Las mastitis subclínicas: No presenta signos y por lo general el animal, la ubre y la

leche aparentan ser normales” (…) “Debido al elevado número de casos sub clínicos el
diagnóstico de mastitis depende de pruebas indirectas basadas en recuento de leucocitos
en la leche. (…). “De acuerdo a su epidemiología se clasifican en dos grupos: 1) Los
microorganismos ambientales, 2) Los microorganismos contagiosos” (…). Los
microorganismos ambientales viven en los alrededores de la vaca y acceden a la ubre en
los intervalos entre los ordeños Streptococcus no agalactiae, coliformes, siendo estos los
agentes responsables de infecciones intramamarias, siendo principalmente mastitis de
2
tipo clínico. La fuente de estos microorganismos es el entorno, por ejemplo; cama,
estiércol, agua estancada, restos de comida y también las agujas y cánulas contaminadas
de uso intramamarias (…). Los microorganismos contagiosos: La fuente es la ubre
infectada, diseminándose a partir de esta hacia otras vacas. El lugar donde se produce el
contagio es la sala de ordeño, este grupo incluye bacterias como Staphylococcusaureus,
Streptococus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Mycoplasma sp y Corynebacterium
bovis, una característica común a los microorganismos contagiosos es la de colonizar y
crecer en la piel de la ubre y dentro del canal del pezón. (Silva, 2007).

La, Escherichia coli es una bacteria que figura como una especie predominante entre
la flora anaeróbica facultativa normal del intestino del hombre y animales, donde juega un
rol importante en su fisiología. Sin embargo, dentro de la especie se encuentran cepas
patógenas que causan distintos síndromes diarreicos. Se las ha clasificado en cinco
categorías, de acuerdo a sus propiedades de virulencia, interacción con la mucosa
intestinal, cuadro clínico, epidemiología y serotipos O: H; además Prado y O. Ryan (1994)
explican, que el Escherichia coli enterotoxigénica (ECET), Escherichia coli entero
patogénica (ECEP), Escherichia coli entero hemorrágica (ECEH), Escherichia coli entero
invasiva (ECEI) y Escherichia. Coli entero agregativa (ECEA). Actualmente se
propone subdividir la categoría ECEA en Escherichia coli entero agregativa (ECEAgg)
y Escherichia. Coli de adherencia difusa (ECAD) según su patrón de adherencia a la
mucosa intestinal” y según Griffin y Tauxe, (1991) explican que “De todas las categorías,
la única considerada como zoonosis es ECEH. (BORIE, et al., 199).
La mastitis coliforme se considera de distribución mundial y es más frecuente en
vacunos lecheros que están estabulados durante los meses de invierno o mantenidos en
estabulación total en lotes de secado. Aunque se ha descrito en vacuno lechero en
pastoreo en Nueva Zelanda, esta enfermedad no es frecuente en ganado vacuno lechero
que se mantiene en pastoreo. (…). La mastitis coliforme subclínica se caracteriza por la
existencia de microorganismos coliformes en muestras de leche de vaca sin datos

3
 clínicos de mastitis. Hay un nivel de fondo de infección coliforme que varía de 0.9 a 1.2
por 100 en los cuarterones de la ubre (Blood y Radostits, 1992).

Castillo, et al., (2009), la prevalencia general de mastitis subclínica estimada por el

CMT (resultados positivos ≥ 2) fue de 36.2%, afectando negativamente la producción de
leche de la zona de estudio. El índice de mastitis subclínica es de 1.81, lo cual indica un
elevado conteo de células somáticas, como consecuencia de deficientes medidas
sanitarias en los rebaños. Los resultados de análisis bacteriológicos, señalan presencia
de colonias sospechosas de Salmonella y S. aureus, estas muestras deben ser
sometidas a identificación definitiva de los patógenos involucrados con pruebas de alta
especificidad, para poder emitir tratamientos y medidas específicas de control sanitario.

1.2 Formulación del problema

¿Cuál es la prevalencia de mastitis subclínica, causada por Escherichia Coli, en vacas

de diferentes lactaciones, en la Estación Experimental Agraria “Callqui”, de la Dirección
Regional Agraria Huancavelica?,

1.3 Objetivo: general y específicos

1.3.1. General

Determinar la prevalencia de mastitis subclínica causada por Escherichia

Coli, en vacas de diferentes lactaciones, en la Estación Experimental Agraria
“Callqui”, de la Dirección Regional Agraria Huancavelica.

4
 1.3.2. Específicos

1. Determinar la prevalencia de mastitis sub clínica causada por Escherichia

coli, en 1ra., 2da.,4ta.,5ta. Y 6ta. etapas de lactación en vacas de la
Estación Experimental Agraria “Callqui”, de la Dirección Regional Agraria
Huancavelica.
2. Determinar si las etapas de lactación influyen o no en la prevalencia de la
mastitis subclínica

1.4 Justificación

La crianza de vacas productoras de leche es una actividad muy importante en la

actividad pecuaria, que permite a los productores obtener ganancias económicas muy
rentables, y a la población que la consume le permite aprovechar los valores nutritivos
que la leche como alimento posee; siendo estas calorías, proteínas, grasa,
carbohidratos, agua, vitaminas A, B1, C; es un alimento nutritivo no superado por ningún
otro alimento consumido por los seres humanos, cuyas características de calidad son;
limpia, de color blanco, con un sabor dulce característico, el olor lo adquiere del envase
en que se almacena.

La mastitis subclínica es una enfermedad que no presenta cambios visibles en la

leche o ubre de la vaca, apenas se percibe una reducción en el rendimiento de la
producción de leche, siendo alterada su composición por la presencia de componentes
inflamatorios y bacterias Escherichia coli. En la práctica los casos de mastitis subclínica
no son detectadas rápidamente e incluso no son reconocidos por el ordeñador.

La mastitis se presenta en todos los mamíferos con mayor importancia en las

explotaciones ganaderas bovinas, por las grandes pérdidas económicas que genera, se
caracteriza por un incremento en el número de células somáticas de la leche y por la
5
destrucción del tejido glandular mamario, provocando descenso brusco en la producción
de leche (Danilo, 2006).

Pero el principal problema sanitario en el sector lo constituye la mastitis subclínica,

siendo está ocasionada por el Escherichia coli u otros microorganismos, ocasionando
disminución en la producción láctea y en la calidad de la leche y como consecuencia de
esto existan pérdidas económicas considerables para el productor y el peligro de
transmitir enfermedades a la población que consuma esta leche infectada.

Además, no hemos encontrado trabajos realizados anteriormente sobre prevalencia

de mastitis subclínica causada por Escherichia coli, en vacas de diferentes lactaciones,
ni información alguna que podamos tomar como base para contrastar con nuestro trabajo
de investigación; en la Estación Experimental Agraria “Callqui”, de la Dirección Regional
Agraria Huancavelica, realizando nosotros mismos nuestra base de datos, utilizando la
prueba de California Mastitis Test (CMT) para determinar la presencia de mastitis sub
clínica y análisis en laboratorio para detectar la bacteria Escherichia coli, considerando
que la ejecución del presente trabajo de investigación es nueva en la Estación
Experimental Agraria “Callqui”, de la Dirección Regional de Agricultura Huancavelica; que
nos permitió determinar el bajo índice de prevalencia de mastitis subclínica causada por
bacterias de Escherichia coli, en las vacas productoras de leche de la estación
experimental, permitiéndonos recomendar, un adecuado plan de manejo, ordeño y
obtención de leche de calidad; enmarcándose el proyecto dentro de las políticas de
sanidad del Ministerio de Agricultura y el Servicio Nacional de Sanidad Agraria.

6
 CAPÍTULO II
MARCO TEÓRICO

2.1 Antecedentes

Silva, (2007), concluye que, más del 80% de los establos del sistema familiar de
Cotzio y Tejaro, Michoacán, tienen en el periodo de un mes al menos un caso de mastitis
clínica. Este comportamiento se potencializa por la tasa de reincidencia de los casos
clínicos y la proporción de los casos de mastitis subclínica que evolucionan en casos de
mastitis clínica. Sin embargo; se observan diferencias en la prevalencia de punto durante
el periodo de estudio, lo cual confirma la presencia de factores estacionales que deben
ser evaluados para la identificación de factores de riesgo específicos.

Muñoz, Hernández Andrade, Arrieta, Camacho y Hernández Valenzuela, (2012)

concluyen; la prevalencia de mastitis subclínica, en vacas de doble propósito en
Márquela, Guerrero, es alta y la principal bacteria asociada a esta enfermedad es
Staphylococcus aureus y en menor medida, Staphylococcus coagulasa negativa, bacilos
gram negativos y gram positivos. Estos microorganismos afectan principalmente a los
grupos genéticos ¾ suizo y cebú.

Ruiz, et al., (2011), indica en su conclusión, “los rebaños de ordeño mecánico tuvieron
mayor prevalencia de mastitis subclínica, tanto en el diagnóstico por California Mastitis
Test (C.M.T.) como para Conteo de Células Somáticas (C.C.S.) y cultivo bacteriológico”.

También Danilo, (2006), concluye, la prevalencia de mastitis en el hato fue de un 41%,

de esto un 35% mastitis subclínica, un 5.1% de mastitis clínica y un 59% negativo. Los
cuartos anteriores presentaron mayor prevalencia de mastitis con un 49.30% y el más
afectado fue el anterior derecho (AD) con el 24.82%, ya que la probabilidad de infestación

7
de cada cuarto está influenciada por los efectos del número de partos y periodos de
lactación, que interactúa con los cuartos.

Stephen, (1983), concluye, se encontró una prevalencia de mastitis subclínica en 108

de 470 vacas (23%). Hubo infección en 478 de 1880 cuartos (25.3%), 286 cuartos
anteriores (40%). La producción láctea actual era un promedio de 3.2 Kg. diario por vaca.
La mastitis subclínica era responsable de una disminución de producción costando
$119.00 por vaca por mes o $ 1190.00 por vaca durante una lactación de 300 días.

Guisar, Ignacio, Bedolla y Carlos, (2008), en sus conclusiones y discusiones indican

que, en base a los resultados obtenidos del estudio realizado en el período de
investigación sobre la mastitis bovina en el municipio de Tarímbaro, Michoacán., se
determinó una prevalencia de 43.14%, la cual resulta baja en comparación con un
estudio realizado por Armenteros, et al. (2002), En 4 zonas de la región occidental y
central de Cuba, los cuales encontraron un porcentaje general de 76.5% de mastitis
subclínica, de acuerdo a la prueba de California, considerando los cuartos positivos a
partir de 200 000 células/ml. Resultados que se corresponden con lo encontrado por
Philpot y Nickerson (1993), los cuales reportan una relación de correspondencia de 70%
de afectación por conteo celular, con aproximadamente un 40% de cuartos infectados. En
este mismo estudio, Armenteros, et al., (2002) reportan una prevalencia de mastitis
clínica general de 3.02%, la cual resulta más elevada a lo reportado en este estudio que
es de un 2.02%. Sin embargo, la prevalencia de mastitis subclínica encontrada en este
estudio resulta elevada en comparación con un estudio realizado también en tres
vaquerías en Cuba por Alfonso, et al., (2008), los cuales encontraron una prevalencia de
mastitis subclínica promedio de 23,6% en los rebaños estudiados lo que se traduce en
grandes pérdidas económicas por la cantidad de leche que se deja de producir.

Sin embargo, se encuentra por debajo de lo encontrado por Galeana, et al., (2008).
En un, estudio realizado en el Municipio de Pátzcuaro Michoacán, en ocho rebaños de 10
8
 vacas en promedio cada uno, los cuales reportan una prevalencia de mastitis subclínica
de 83.52%. Asimismo, se encuentra por debajo de lo encontrado por Méndez (2005), en
un estudio realizado en la cuenca lechera Morelia - Queriéndolo, el cual obtuvo una
prevalencia de mastitis subclínica de 49.58%, en donde el 90% de las unidades de
producción se encontraban ubicadas en la zona urbana anexa a la vivienda, con una
fuerza de trabajo familiar, una alimentación del ganado a base de rastrojo de maíz,
avena, alfalfa, granos y concentrados y con una producción diaria de leche de 12
litros y por lactancia de 3,697.

Así mismo Cepero, et al., (S.f), Concluye, Existe una correlación positiva entre la
California Mastitis Test (C.M.T.) en relación con las pruebas de conductividad eléctrica,
pH y sales. No se evidencio existencia de correlación entre la California Mastitis Test
(C.M.T.) y potencial redox ni tampoco entre los valores de pH y potencial redox. Se
determinó correlación entre los valores de conductividad eléctrica y las sales.

Velásquez, y Vega, (2012), concluyen que, el recuento promedio de las células

somáticas en tanques de leche de establos y de asociaciones de ganaderos de la
provincia de Huaura es elevado y está por encima del límite máximo permitido por las
normas técnicas de calidad del país. La frecuencia de mastitis subclínica fue mayor en
establos grandes, en vacas con más de dos partos y en la etapa de lactancia.

2.2 Bases Teóricas

2.2.1. Morfología de la glándula mamaria

La glándula mamaria de la vaca consiste de cuatro glándulas separadas,

localizadas en la región ventral o inferior de la vaca. Cada glándula tiene una
teta y cada teta un orificio. La piel de las glándulas está cubierta de pelo a
excepción de las tetas. Las mitades derecha e izquierda están separadas
9
 completamente, externamente esto está indicado por un surco que se observa
en la región inferior de la glándula. Los cuartos traseros, aportan del 55 al 60%
de la leche producida, y son el 55 al 60% del peso de la glándula y son
usualmente más cortas que los cuartos delanteros. Las tetas o papilas
mamarias. La función de las tetas, es únicamente para la secreción y único
medio del becerro para recibir la leche. Usualmente sólo una teta drena a una
glándula. Las tetas de la vaca, usualmente no tienen pelo, glándulas sebáceas o
sudoríparas. El tamaño y forma es independiente del tamaño y forma o
producción de leche de la glándula. El promedio de tamaño para las tetas
anteriores es de cerca de 6.6. cm. de largo y 2.9 cm. de diámetro, y para las
tetas posteriores es de 5.2 cm. de largo y 2.6 cm. de diámetro. (Cervantes,
Hernández, Bonilla, Martínez y Lamothe, s.f.).

2.2.2. La ubre de la vaca y el conteo celular somático

Para abordar el tema referente al conteo celular somático (CCS) es necesario

revisar algunos conceptos generales sobre la glándula mamaria de las vacas. En
principio recordar que la leche se forma en las células del epitelio que recubren
los alvéolos de la ubre y que en la vaca existen, en realidad, cuatro glándulas
independientes que conocemos como “cuartos, (anterior derecho, anterior
izquierdo, posterior derecho y posterior izquierdo), que no tienen en común más
que la piel que los envuelve, razón por la que existen infecciones en la ubre que
pueden estar localizadas en un solo cuarto. La ubre se encuentra suspendida
mediante ligamentos carentes de elasticidad, lo que impide que la deformación
de la glándula sea irreversible, cuando se llevan a cabo prácticas indeseables
durante el ordeño. La ubre se encuentra fuertemente irrigada por dos vastas
redes capilares, alimentadas por las arterias, lo que explica que por ella circulen
aproximadamente 400 litros de sangre por cada litro de leche: Este enorme
aporte sanguíneo hace que la ubre sea un órgano “limpiador”, de tal manera que
10
por esta vía se eliminan diversas sustancias, incluyendo bacterias. La migración
de los leucocitos de los cuartos a la leche es un hecho fisiológico natural, no
obstante, el número de células que pasan, en condiciones normales, es
reducido. La presencia de numerosos leucocitos, sobre todo polimorfo
nucleares, tiene un significado patológico o de enfermedad. En la ubre de una
vaca se encuentran, específicamente en la leche, dos tipos de células: a) los
glóbulos blancos; y b) células secretoras de leche (células epiteliales). Las
células somáticas son células del cuerpo, esto quiere decir que son parte natural
de la vaca. El contenido celular somático está compuesto principalmente de
glóbulos blancos, por lo que es importante saber que existen diferentes tipos de
células somáticas presentes en la leche de una ubre sana, en primer lugar,
están los macrófagos (60%), en segundo término, los linfocitos (25%) y en tercer
lugar los neutrófilos o leucocitos neutrófilos polimorfo nucleares (15%). Las
células somáticas tienen dos funciones principales en la ubre, la primera es la de
combatir a los microorganismos infectantes mediante un proceso llamado
fagocitosis que los envuelve y destruye y, la segunda, es la de intervenir en la
reparación del tejido secretor que ha sido dañado por una infección o lesión. Es
por ello que el CCS es la medida más usada para evaluar el estado de salud de
la ubre y puede ser medida en leche que proviene de un cuarto, de una vaca, de
un hato; También, el CCS es un procedimiento común sobre todo en la industria
láctea para medir la calidad de la leche cruda. Cuando el conteo celular
somático resulta elevado, ya sea de una vaca o del tanque enfriador, nos indica
que hay un problema en la salud de la ubre, generalmente se trata de mastitis.
El CCS es un fenómeno biológico dinámico, sujeto a una gran variación debido a
múltiples factores, entre los cuales se pueden señalar a la Mastitis como el
principal causante que provoca incremento de leucocitos. Cuando los
microorganismos entran en la ubre, los mecanismos de defensa envían grandes
cantidades de leucocitos a la ubre para intentar destruir las bacterias; Si la
infección es eliminada el recuento de células vuelve a su normalidad. Si los
11
 leucocitos no pueden destruir los organismos se crea una infección subclínica y
esto va originar un conteo elevado de células somáticas. Un segundo factor que
contribuye en el aumento del CCS son las lesiones en la ubre, ya que atrae a los
leucocitos a la zona de daño. Hay que recordar que una lesión en la ubre
obedece, en la mayoría de los casos a diseños deficientes en las instalaciones y
en el equipo de ordeño, otras veces se debe al accidente entre una vaca y otra,
pero la mayoría de las veces el hombre es el principal responsable de las
lesiones en la ubre. (Álvarez, S.f).

2.2.3. La leche

 Concepto

La leche es el producto de la secreción normal de la glándula mamaria de

animales bovinos sanos, obtenida por uno o varios ordeños diarios,
higiénicos, completos e ininterrumpidos. Por otro lado, desde el punto de vista
dietético la leche es el alimento puro más próximo a la perfección. Su principal
proteína, la caseína, contiene los aminoácidos esenciales y como fuente de
calcio, fósforo y riboflavina (vitamina B12), contribuye significativamente a los
requerimientos de vitamina A y B1 (tiamina). Por otra parte, los lípidos y la lactosa
constituyen un importante aporte energético. Químicamente, la leche es uno de los
fluidos más completos que existen. El término “sólidos totales” se usa
ampliamente para indicar todos los componentes con exclusión del agua y el de
“sólidos no grasos” cuando se excluye el agua y la grasa. El agua representa
aproximadamente entre un 82% y un 82.5% de la leche, los sólidos totales
alcanzan habitualmente la cifra de 12% hasta un 13% y los sólidos no grasos
casi siempre están muy próximos al 9 %. La definición física, señala que la
leche es un líquido de color blanco opalescente característico. Este color se

12
debe a la refracción que sufren los rayos luminosos que inciden en ella al chocar
con los coloidales en suspensión. (Agudelo y Bedoya, 2005).

 Fisiología de la producción de leche por parte de la glándula mamaria

Explican que “La leche es producida por los alvéolos dentro del tejido
mamario. Cerca del 60% de la leche se acumula en esta zona y el resto en los
vasos galactóforos mayores y en la cisterna de la ubre”. (Pinzón, 2007).

 Composición de la leche

Menciona que La leche es un producto fisiológico de las glándulas mamarias

posee un elevado contenido calórico y un equilibrio de nutrientes que satisface
las necesidades de los recién nacidos durante su periodo crítico de desarrollo y
permite un crecimiento adecuado hasta que los mismos sean capaces de ingerir
sus propios alimentos sólidos. (…). Que estas sustancias nutritivas aportan a la
dieta, algún nutriente en particular, pero ninguna la supera como alimento
equilibrado en componentes para el ser vivo. Desde el punto de vista sanitario la
leche, aun cuando reúne las condiciones organolépticas básicas, puede ser
nociva al contener patógenos para el ser humano, toxinas de micro organismos.
(Citado en Danilo, 2006).

“El valor nutritivo de la leche y de cualquier otro alimento de la dieta humana

y animal está determinado por la composición y calidad de sus constituyentes”.
(Citado en Danilo, 2006).

13
 Composición nutricional de la leche

La leche es una compleja mezcla de distintas sustancias, presentes en

suspensión o emulsión y otras en forma de solución verdadera y presenta
sustancias definidas: agua grasa, proteína, lactosa, vitaminas, minerales; a las
cuales se les denomina extracto seco o solidos totales varían por múltiples
factores como lo son: la raza, el tipo de alimentación, el medio ambiente y el
estado sanitario de la vaca entre otros. (Agudelo y Bedoya, 2005).

Tabla 1
Composición general de la leche en diferentes especies (por cada 100 gr).
Nutriente (gr.) Vaca Búfala Mujer
Agua 88 84 87.5
Energía (Kcal) 61 97 7.0
Proteína 3.2 3.7 1.0
Grasa 3.4 6.9 4.4
Lactosa 4.7 5.2 6.9
Minerales 0.72 0.79 0.20

(Agudelo y Bedoya, 2005, p. 39.).

 Propiedades físico químicas de la leche

Tiene un sabor medio dulce debido, a su alto contenido de lactosa; el sabor

de la leche al final de la lactancia es ligeramente salado debido al aumento de
cloruros. También la leche puede absorber el sabor de los alimentos, del medio
ambiente, del equipo y utensilios usados o generados a partir de la misma leche,
mientras que en el Olor: La leche recién ordeñada tiene un ligero olor al medio

14
ambiente donde se obtiene, pero este aroma desaparece y respecto al Color: La
leche es un líquido blanquecino, ligeramente amarillo y opaco el color se debe
principalmente, a la dispersión de la luz por las micelas de fosfocaseinato de
calcio. Los glóbulos grasos dispersan la luz, pero contribuyen muy poco al color
blanco. El caroteno y la riboflavina son los responsables del color amarillo de la
leche de algunas razas de vacas o especie animal. En cuanto a la Viscosidad:
La viscosidad de la leche está dada por el grado de resistencia al fluir o sea que
es el coeficiente entre las moléculas. La viscosidad aumenta con la temperatura,
el incremento del contenido graso, el proceso de homogenización, fermentación
ácida y el envejecimiento o maduración, mientras que el Calor específico: El
calor específico de la leche varía según la temperatura en la que se encuentre;
ejemplo: leche con 0°C, Contiene un calor específico de 0.92 15°C es de 0.94
de 40°C es de 0.93. El calor específico es necesario para determinar la cantidad
de energía requerida al enfriar o calentar la leche de una temperatura a otra y el
Punto de congelación: La leche se congela a 0.54°C en promedio, pero puede
variar entre 0.53 – 0.57°C, en casos extremos puede llegar a 0.50 – 0.1°C. El
punto de congelación se utiliza para detectar adulteración con agua; ya que la
adición de esta aproxima a 0°C el punto de congelación y su Punto de ebullición:
La leche hierve a 100.17°C, a nivel del mar, debido a las sustancias solubles
que posee la Reacción química: La leche normal se comporta como un
compuesto anfótero. Lo que significa que puede comportarse como base y como
ácido. El pH de la leche normal es de 6.5 y 6.7; la leche con un pH 6.8 o mayor
se consideran proveniente de una ubre con mastitis, si la leche tiene un pH de
6.4 o menor es posible que contenga calostro o que esté ácida por la acción
microbiana. (Danilo, 2006).

15
2.2.4. Aspectos generales de la mastitis

 Definición

Mastitis (del griego mastos - glándula mamaria y del sufijo Itis – inflamación)
se define como la inflamación de la glándula mamaria que generalmente se
presenta como una respuesta a la invasión de organismos patógenos y se
caracteriza por daños en el epitelio glandular, seguido por una inflamación
clínica o subclínica, pudiendo presentarse con cambios patológicos localizados o
generalizados, dependiendo de la magnitud del daño (…) La mastitis se define
como una reacción inflamatoria de la glándula mamaria, la cual es caracterizada
por alteraciones físicas y químicas de la leche representadas por el aumento del
número de células somáticas de la leche y por alteraciones patológicas de la
glándula mamaria. (Danilo, 2006).

 Tipos de mastitis

La mastitis se clasifica en mastitis clínica, subclínica para un mejor estudio

según Etgen y Reaves, (1989) e infección latente, según el grado de
inflamación, la inflamación de la glándula mamaria se caracteriza por los signos
cardinales de esta, los cuales son tumor, rubor, dolor y calor. (Danilo, 2006).

 Mastitis clínica:

“En algunos casos la inflamación de los cuartos mamarios es

acompañada de signos clínicos (signos pronunciados de inflamación mamaria y
de enfermedad sistémica), por lo que es diagnosticada entonces como
mastitis clínica” (…). Expresan que, se caracteriza por la tumefacción o dolor

16
en la ubre, enrojecimiento, la leche presenta una apariencia anormal y, en
algunos casos, hay aumento de la temperatura rectal, letargo, anorexia e
incluso la muerte. Además, las bacterias están presentes en la leche, el
rendimiento es muy reducido, y su contenido está alterado considerablemente.
(Guisar, 2008).

 Mastitis subclínica:

Tiene una forma de presentación en la cual no hay signos visibles en la

glándula, pero si una disminución en la producción de leche e incremento en el
número de células somáticas, es de curso apirético y sin trastornos generales,
encontrándose inflamación interna en la glándula mamaria y se diagnostica
solamente por la realización de pruebas secundarias como es el caso de la
prueba de California. (Danilo, 200).

“La infección latente es una forma de presentación de la mastitis subclínica

en la cual se presenta en la leche el aislamiento de microorganismos
considerados tradicionalmente patógenos para la glándula mamaria”. (Danilo,
2006).

 Clasificación de los microorganismos causantes de la mastitis bovina.

En la glándula mamaria bovina se han identificado hasta 140 especies,

subespecies y cero variedades microbianas. Las técnicas microbiológicas han
permitido la determinación precisa de la identidad de muchos microorganismos
patógenos de la mastitis. Tomando como base la epidemiología y la
fisiopatología, se han clasificado estos microorganismos como causantes de la
mastitis contagiosa o ambiental, en base a su asociación epidemiológica con la

17
enfermedad y a su proclividad de causar la infección oportunista, persistente o
transeúnte, respectivamente. (…).“Las bacterias responsables de la mastitis
bovina pueden ser clasificadas como contagiosas y ambientales, dependiendo
de su reservorio primario y el ambiente contra el cuarto de la glándula
mamaria infectada”. (Guisar, 2008)

 Microorganismos causantes de la mastitis contagiosa.

Los patógenos contagiosos de primera importancia incluyen al

Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium spp., y al
Mycoplasma spp. (…). Son organismos transmitidos de vaca a vaca a través de
los paños utilizados para limpiar las ubres, la leche residual en las pezoneras y
un equipo de ordeño inadecuado donde el reservorio primario que alberga los
patógenos es el animal infectado o el cuarto de la ubre. (…). y la
exposición de los cuartos mamarios no infectados se restringe al proceso de la
ordeña.(…).Los patógenos contagiosos de la mastitis como el Staphylococcus
aureus y Streptococcus agalactiae que son infecciosos a nivel individual y a nivel
de población, han sido reportados bajo control en los hatos lecheros a través del
uso de prácticas de manejo que utilizan la desinfección de las tetas después
de la ordeña, terapia de la vaca seca, desecho, mantenimiento del equipo de
ordeño, y terapia antibiótica de las infecciones intramamarias.(…). A pesar de
que la mastitis por organismos contagiosos (especialmente Streptococcus
agalactiae) ha disminuido por mejoramiento en el manejo, las pérdidas
económicas debido a la enfermedad pueden continuar porque los organismos
causales no pueden ser erradicados del medio ambiente de las vacas lecheras.
(…). En general, un programa de control de la mastitis concienzudo puede
erradicar a Streptococcus agalactiae de la mayoría de los rebaños lecheros. Es
mucho más difícil tratar los rebaños en los que Staphylococcus aureus tiene
una prevalecía alta, (Guisar, 2008).
18
 Microorganismos causantes de la mastitis ambiental.

“Los patógenos principales en este grupo son los bacilos entéricos Gram-
negativos (Escherichia coli, Klebsiella spp.), Streptococcus dysgalactiae,
Streptococcus uberis, y Enterococcus spp. (Guisar, 2008).

Otros microorganismos patógenos se incluyen en la clase ambiental de este

tipo de infecciones. Se trata generalmente de oportunas que invaden la glándula
mamaria cuando los mecanismos de defensa están disminuidos o cuando se
introducen inadvertidamente en la glándula mamaria al realizar un tratamiento
intramamarias. Este grupo de microorganismos oportunistas incluyen a
Pseudomona spp., levaduras, Prototheca spp., Serratia marcescens y
Nocardia spp. Cada uno de estos agentes posee características de
cultivo, mecanismos patógenos y consecuencias clínicas singulares. (Guisar,
2008).

La fuente de estos agentes patógenos es el entorno de la vaca. La forma de

transmisión principal es del ambiente a la vaca a través de un manejo
inadecuado del primero. Algunos ejemplos incluyen la cama húmeda, terrenos
sucios, ubres mojadas por la leche, preparación inadecuada de la ubre y los
pezones antes del ordeño y sistemas de estabulación que favorecen las lesiones
en los pezones. (…). Y la exposición de los cuartos no infectados a los
patógenos ambientales que puede ocurrir en cualquier momento durante la
vida de una vaca. (…). Estas infecciones generalmente ocurren de forma
esporádica. Sin embargo, se pueden producir brotes en los rebaños o en una
región entera, normalmente como consecuencia de problemas con la higiene o
el tratamiento. Por ejemplo, se ha producido mastitis causada por Pseudomona
a eruginosa en brotes relacionados con la contaminación de las
conducciones de goma en las salas de ordeño. (…). La mastitis ocasionada por
19
patógenos ambientales es el principal problema que afecta a muchos hatos
lecheros bien manejados, que aplican un programa de control de los patógenos
contagiosos de la mastitis. (…). Debido a que en la actualidad estos patógenos
no han sido bien controlados por los métodos arriba mencionados, ahora están
surgiendo como la causa más frecuente de mastitis en muchos hatos,
particularmente bien manejados, hatos con bajo conteo de células somáticas
(<200,000 cs/ml). (…). Tradicionalmente, los agentes más comunes causantes
de la mastitis también han sido clasificados como patógenos principales
(mayores) y menores según el grado de inflamación que estos producen en la
glándula mamaria.(…).Los patógenos principales son definidos como los
patógenos responsables, la mayoría de las veces, de las mastitis clínicas o de
fuertes respuestas inflamatorias (conteos elevados de células somáticas en la
leche) y comprenden al Staphylococcus aureus, Streptococcus (S. uberis, S.
agalactiae, S. dysgalactiae) y coliformes.(…). Los patógenos menores son
definidos como los patógenos que infectan la glándula mamaria, causando
conteos moderados de células somáticas, pero en lo general no causan
signos clínicos. Estas infecciones, son especialmente frecuentes, debidas
sobre todo a otros Staphylococcus (principalmente S. chromogenes, S. hyicus,
S. epidermidis, y S. xylosus) o por Corynebacterium bovis y Micrococcaceae
coagulasa-negativos. (…). (Guisar, 2008).

 Importancia

La mastitis es una enfermedad de mayor impacto económico para la

actividad lechera, siendo la mastitis sub clínica, la cual pasa fácilmente
desapercibida para el productor, la causante de la mayor parte de las pérdidas.
Alrededor del 70% de las pérdidas atribuibles a mastitis están dadas por la
disminución en la producción de leche, el resto se debe a descarte de leche por
anormalidades notorias o residuos de antibióticos, gastos en cuanto a la
20
magnitud de la disminución en la producción de leche, se ha encontrado
asociación entre esta y la severidad de la mastitis, describiéndose pérdidas que
van desde 2,8% a 45% por cuarto/día, según el grado de reacción al Test de
California para la mastitis (CMT). De esta misma forma, se han estimado
pérdidas de 2,5% en producción de leche por vaca, por cada 100,000 cél/ml.
Sobre un nivel de 200,000 cél/ml. (…). Debido a los cambios físico-químicos, las
leches mastíticas tienen una menor estabilidad, se enrancian con mayor
facilidad, se dificulta la elaboración de productos fermentados, se afecta el
rendimiento, tiempo y costos de elaboración de quesos, resultando también
afectada la palatabilidad y el valor nutricional de la leche pasteurizada.
Económicamente algunos investigadores han reportado que las vacas
eliminadas, a causa de mastitis varían anualmente desde 1.3 hasta 25%. En un
estudio realizado en un hato del Altiplano de México con 500 animales en
ordeño, se determinó que el costo anual por mastitis clínica fue de $244,797,
que equivale a la producción por lactancia (305 días) de 43 vacas con 6,000 Kg.
(Danilo, 2006).

 Factores de riesgo en el desarrollo de la mastitis

Son fenómenos de naturaleza físicos, químicos, orgánicos, psicológicos o

sociales, en el genotipo o en el fenotipo, o alguna enfermedad anterior al efecto
que se está estudiando, que por la variabilidad de su presencia o de su ausencia
está relacionada con la enfermedad investigada, o puede ser la causa de su
aparición. Cuando un factor es conocido como tal, se llama causa, cuando se
sospecha que este evento puede tener alguna relación con el evento, se llama
factor de riesgo o factor de exposición. Cuando el factor de riesgo deja el nivel
de sospecha de que se produce el efecto y se comprueba efectivamente su
acción en la producción del mismo, dicho factor pasa a ser causal, (Silva, 2007).

21
 Algunos factores considerados entre los más importantes son los
siguientes:

Edad

“A mayor edad existe mayor predisposición, debido a una menor tendencia

de curación en las alteraciones de pezones, el canal del pezón se va alterando
con la edad, facilitando la entrada a microorganismos, (Silva, 2007).

Lesiones en el pezón

Las lesiones o llagas que pueden llegar a sufrir un animal en lactación,

pueden ser traumáticas resultado de un mal manejo, cortaduras, infecciosas
causadas por colonización bacteriana o viral en los pezones, químicas debidas a
daños ocasionados por la solución para lavar ubres, o los productos de sellado
de los pezones que se formulan o se mezclan de forma indebida, ambientales
por problemas que resultan del congelamiento de los pezones en el invierno,
genéticas estas son por defectos en el pezón o callosidades (Silva, 2007).

Etapa de lactancia

“Se ha registrado mayor susceptibilidad en la primera y última semana de la

lactancia, así como, en la primera semana del secado o periodo en que el animal
no produce leche (Silva, 2007).

22
 Estación del año

“Una observación común en los informes mensuales en hatos lecheros es

que aumenta la incidencia de mastitis clínica en los meses cálidos, debido al
estrés derivado de las altas temperaturas (Silva, 2007).

Genéticos

Es un hecho que algunas vacas presentan una mayor susceptibilidad a la

mastitis que otras, los factores estructurales del canal del pezón son importantes
en la regulación de la entrada de microorganismos. Algunos autores afirman
que, si el tono de las estructuras anatómicas de la apertura del pezón es
reducido lo que es un carácter heredable, la resistencia a la entrada de los
microorganismos será menor y seleccionando genéticamente vacas con
diámetro pequeño del canal del pezón, la frecuencia de mastitis disminuirá,
(Danilo, 2006).

Nutricionales

“La alimentación actual de la vaca lechera está destinada a mantener un alto

nivel de producción; esto constituye un factor de tensión fisiológico que puede
provocar mastitis clínica en vacas con antecedentes de infecciones o mastitis
subclínica”. (Danilo, 2006).

Higiene durante el ordeño

Los procedimientos de higiene durante el ordeño como, lavado de la ubre y

pezones con agua potable, desinfectantes, secado con toallas desechables
antes de cada ordeño con especial atención en el interior de las pezoneras
23
 mediante la aplicación de chorro de agua y desinfección y sellado de los
pezones con material que haya mostrado capacidad para bloquear el
crecimiento y desarrollo microbiano, previenen la transmisión de
microorganismos entre vacas y disminuye la población microbiana sobre la piel
del pezón (Danilo, 2006).

Algunos rasgos anatómicos pueden predisponer a las vacas para

infecciones de organismos productores de mastitis. Una vaca con una ubre
pendiente es muy probable que experimente lesiones mecánicas que pueden
causar daño en el tejido e incrementar las probabilidades de infección. Esto
incluye pisoteo de los pezones, cortes y hematomas. Virtualmente todas las
mastitis son causadas inicialmente por microorganismos que entran el canal del
pezón. Por lo tanto, las barreras físicas del pezón son la primera defensa contra
mastitis. (Salazar, 2001).

2.2.5. La Escherichia coli

La “Escherichia coli se describió por primera vez en 1885 por el pediatra

alemán Theodore Escherich. Fue nombrada inicialmente como “Bacterium coli
commune”, pero en 1919 fue renombrada con el nombre actual en honor a su
descubridor”. (Romeu, 2012).

Los representantes de esta especie son bacilos gramnegativos, oxidasa

negativos, con un tamaño promedio de 1,1 – 1,5 μm de ancho y 2,0-6.0 μm de
largo. De acuerdo a sus requerimientos de oxigeno son anaerobios facultativos y
pueden ser móviles por la presencia de flagelos peritricos o no móviles. (Romeu,
2012).
Desde el punto de vista taxonómico su clasificación es la siguiente:

24
Phylum Proteobacteria
Clase Gammaproteobacteria
Orden Enterobacteriales
Familia Enterobacteriaceae
Género Escherichia
Especie Escherichia coli “. (Romeu, 2012).

 Ciclo de vida de la Escherichia coli

Un ciclo celular es una secuencia de crecimiento de cada célula individual y

su división celular; comienza con la formación de una nueva célula se divide en
otras dos hijas esta mantiene cuatro fases definidas Fase de latencia (Fase de
adaptación de las células a las nuevas), Fase de crecimiento exponencial (Fase
en la que en la que las células se están dividiendo regularmente a ritmo
constante), Fase estacionaria (El nº de células no se incrementa, el nº de células
que se originan es igual al nº de las que mueren) y fase de muerte celular ( las
células mueren a una velocidad mayor a la que se originan); en condiciones
óptimas E. Coli tiene un ciclo de vida de 15 – 20 minutos. (De la Cruz, 2012).

 Etiología de la mastitis subclínica asociada a Escherichia coli

E. coli aislado de la leche de vaca con mastitis aguda no puede distinguirse

como un grupo patógeno específico, en base al test de reacciones bioquímicas y
serológicas. En un estudio, de 290 E. coli aislados, había sesenta y tres
serogrupos O, lo que indica que la mastitis coliforme no está causada por un
número limitado de cepas patógenas específicas. La incidencia de la resistencia

25
a los antibióticos fue también baja, posiblemente, debido a que estos
microorganismos son oportunistas procedentes del tracto alimentario, en el cual
es muy raro encontrar E. coli resistentes a los antibióticos en el adulto. (Blood y
Radostits, 1992).

 Patogenia de la mastitis subclínica asociada a Escherichia coli.

Después de haber invadido e infectado la glándula mamaria, E. coli prolifera

abundantemente y elabora una endotoxina potente, que provoca cambios en la
permeabilidad vascular, Esto origina edema e inflamación aguda de la glándula y
un gran aumento de los neutrófilos de la leche. Los leucocitos polimorfo
nucleares pueden aumentar de 40 a 250 veces e inhibir fuertemente la
supervivencia de E. coli. Esta acentuada diapédesis de neutrófilos explica la
importante leucopenia y neutropenia que se observa en la mitad de la mastitis
coliforme sobreaguda. La gravedad de la enfermedad esta favorecida por el
grado de leucocitos previos en la leche y la cantidad de neutrófilos que invaden
la glándula afectada, como un intento de controlar el crecimiento de los
microorganismos y la susceptibilidad a las bactericidas séricas secretadas hacia
la glándula, así como la cantidad de endotoxina producida. La cinética de
neutrófilos en casos naturales se ha reproducido experimentalmente. La
gravedad de la enfermedad puede depender también de la fase de la lactación.
La infección experimental de la glándula mamaria de vacas recién paridas con E.
Coli, produce una mastitis más grave comparada con la que se produce en
animales en la fase media de la lactación. Esto quizás se deba al retraso de
entre 10 y 12 horas en la diapédesis de neutrófilos hacia la glándula mamaria en
vacas recién paridas. Además, debido a este retraso pueden no existir cambios
no visibles en la leche durante incluso 15 horas después de la infección, pero los
efectos sistémicos de la endotoxina liberada por la bacteria son evidentes en la
vaca (anorexia, fiebre y diarrea grave). El resultado neto es una endotoxemia,
26
 que posiblemente persiste mientras los microorganismos se multipliquen y
liberen endotoxemia. Esta endotoxina persistente puede ser una causa
importante de la falta de respuesta al tratamiento, en comparación con la
endotoxemia transitoria en la inoculación experimental de una dosis de
endotoxina. (Blood y Radostits, 1992).

2.2.6. Transmisión y establecimiento de la enfermedad

En un intento por controlar los diferentes tipos de infecciones, es importante

considerar la fuente y formas de transmisión de la enfermedad, los organismos
que causan la mastitis viven en diferentes ambientes (materia fecal, cama, piel).
La limpieza general de las vacas y su alojamiento, como también buenos
procedimientos de manejo (especialmente ordeño) son formas efectivas de
controlar la difusión de la mastitis. (Danilo, 2006).

Algunas bacterias pueden avanzar dentro de la ubre atacando y colonizando

nuevos tejidos, otras pueden moverse por medio de la corriente de leche
producida por el movimiento de la vaca, las bacterias dañan primero los tejidos
que recubren los grandes tubos colectores de leche. Las bacterias pueden
enfrentarse con leucocitos (células blancas de la leche) presentes naturalmente
en bajas cantidades en la leche. Estas células son la segunda barrera de
defensa debido a que pueden englobar y destruirá las bacterias. Aun así,
durante este proceso, los leucocitos liberan sustancias que atraen a más
leucocitos desde el torrente circulatorio hacia la leche. (Danilo, 2006).

Si las bacterias no son totalmente destruidas, pueden continuar

multiplicándose y comenzar a invadir los pequeños ductos y áreas alveolares.
Las células secretoras de leche que son dañadas por las toxinas, liberan
27
 sustancias que conducen a un incremento en la permeabilidad de los vasos
sanguíneos. Leucocitos adicionales se mueven al lugar de la infección ellos
penetran al tejido alveolar en gran medida moviéndose entre el tejido secretor de
leche dañado. Fluidos. Minerales y factores de coagulación también se mueven
dentro del área infectada. La leche coagulada también puede cerrar conductos y
en efecto, aislar las regiones infectadas. (Danilo, 2006).

2.2.7. Impactos que genera esta enfermedad

 En la calidad de leche

Investigaciones realizadas, han descubierto que la leche en crudo, que tiene

un alto porcentaje de células somáticas, influye directamente en la calidad de los
derivados de la misma, produciendo un queso que en textura y sabor es de
inferior calidad; los niveles altos de ácidos grasos libres encontrados en leches
con recuentos celulares tan bajos con 400,000 células/ml dan a la leche un
sabor rancio. La leche pasteurizada que es procesada de leche cruda con un
conteo de células somáticas más bajo que 250,000, tiene un promedio de vida
de almacenamiento más largo que la que es procesada teniendo un conteo
superior a 500,000 (Danilo, 2006).

 En lo económico

La mastitis representa el 26% del costo total de todas las enfermedades en el

ganado lechero, las pérdidas por mastitis son el doble de altas que las pérdidas
por infertilidad y problemas de reproducción, un cuarto glandular afectado
experimenta un 30% de baja en su productividad y una vaca afectada pierde un
15% de su productividad”. Confirman que del 70 al 80% de todas las pérdidas

28
 son asociadas con la mastitis subclínica mientras que solo del 20% al 30% se
deben a la mastitis clínica. Se estima que un cuarto infectado produce
aproximadamente 780 litros menos de leche por lactancia que un cuarto sin
infección. Conteo de células somáticas debajo de 250,000 leucocitos/ml son
indicadores de ausencia de inflamación a pesar de que la mayor parte de
cuartos normales presenta conteos inferiores a 100,000 leucocitos/ml de leche.
La mayoría de los hatos estudiados en Estados Unidos tienen un nivel de células
somáticas entre 200,000 y 500,000 células por mililitro. Estos hatos están
perdiendo por lo menos 8% en producción potencial de leche. Las pérdidas con
conteo de células de 400,000 están perdiendo 586 litros de leche por vaca
adulta por año”. “Las pérdidas son aún mayores cuando el conteo es más alto
(Danilo, 2006).

2.2.8. Diagnóstico de la mastitis subclínica

Las vacas afectadas con mastitis clínica muestran una marcada declinación
en la producción láctea, signos cardinales de la inflamación y cambios
macroscópicos en la composición de la leche, no requiriendo de pruebas
complementarias para el diagnóstico. En la mastitis subclínica, por el contrario,
no se observan alteraciones macroscópicas de la leche, pero se reduce la
producción y se altera la composición química de la misma. La inflamación
debería ser analizada haciendo un seguimiento de diversos mediadores del
proceso. Sin embargo, estos compuestos son inestables y su análisis requiere
técnicas sofisticadas de laboratorio. Por este motivo, las pruebas de rutina sólo
detectan los cambios secundarios que tienen lugar en la composición de la
leche. (Calvino, S.f).

El diagnóstico de Inflamación Intra Mamaria (IIM) se puede hacer por

métodos directos o indirectos. El primero es el aislamiento del agente causal.
29
Para ello se toman muestras de leche en forma aséptica sobre las cuales se
practican análisis bacteriológicos. Para el segundo existen varias técnicas,
incluyendo la medición de variables tales como el número de células somáticas,
concentración de lactosa, albúmina sérica, N-acetil-β-D-glucosaminidasa
(NAGasa), anti tripsina, enzimas, aumento de la conductividad eléctrica, y
presencia de antígenos bacterianos. (Calvino, S.f).

 Recuento de células somáticas.

En el caso del diagnóstico de mastitis subclínica a nivel de rodeo, el método

más utilizado es el recuento electrónico de células somáticas en leche Recuento
de Células Somáticas (RCS). El RCS es un indicador general de la salud de la
ubre, ya que el factor más importante responsable de altos RCS en leche
individual de vacas es la IIM por patógenos de mastitis. Existe correlación entre
el número de vacas con cuartos infectados en un rodeo y el valor del RCS en
leche de tanque. Aunque el RCS es un índice confiable para medir la salud de la
ubre en un rodeo particular, la evaluación de un sólo resultado puede llevar a
una conclusión equivocada. Para evitar errores se deben promediar varios
resultados y obtener la media geométrica de los mismos. En general, un
promedio inferior a las 200.000 células/ml en la leche total del tambo indica bajo
nivel de IIM en el rodeo, mientras que por encima de las 500.000 cél. /ml., se
considera un rodeo problema. (Calvino, s.f.).

Las Células Somáticas (CS) se cuentan normalmente en leche a granel o en

leche proveniente de los cuatro cuartos de la vaca. El RCS en leche de vaca y
de tanque es utilizado como una herramienta diagnóstica y de seguimiento de
los progresos en el control de mastitis. Además, el RCS en leche de tanque es
utilizado para determinar la calidad sanitaria de la leche cruda y es generalmente
incluido dentro de los parámetros que definen el pago de la leche. (Calvino, s.f.).
30
 Para determinar el número de células somáticas en la leche existen métodos
"directos", que son aquellos que cuentan partículas o células y los "indirectos",
que estiman la cantidad de células sobre la base de reacciones que ponen en
evidencia componentes celulares. Tradicionalmente, la interpretación de los
RCS se ha basado en el número total de células presentes, incluyendo células
epiteliales y glóbulos blancos. En la leche de una glándula mamaria sana, se
considera que el 10 al 20% está compuesto por células epiteliales. El aumento
del número de CS está sujeto a distintos factores independientes de la infección.
Sin embargo, la mayor influencia en el contenido individual de células de un
animal la ejerce la inflamación. Las células presentes en un cuarto sano son
fundamentalmente macrófagos, mientras que durante la inflamación se produce
un aumento en la proporción de leucocitos polimorfo nucleares neutrófilos. En
casos de mastitis, más del 90% de las CS pertenecen a esta serie de células
blancas. ¿Cuál es el número de células que se considera normal? Antes de
considerar un valor como normal, se debe tener en cuenta que existen
diferencias entre los valores de RCS de leche de vaca y de tanque. Cuando la
leche de los cuartos afectados es mezclada con la leche de los cuartos
normales, el RCS de la vaca y del rodeo tenderá a aumentar. Paralelamente, el
contenido de células de la leche de tanque puede reflejar la dilución de leches
con contenidos de CS variables. Existe acuerdo general en que un elevado
recuento de CS en leche de tanque está asociado a una prevalencia alta de
mastitis en el rodeo. Sin embargo, la correlación con el aislamiento bacteriano,
considerado como método de diagnóstico directo, es pobre. Esto es debido a
que existen variables que influyen sobre el contenido celular de la leche normal y
anormal y a que los patógenos de mastitis presentan distintos patrones de
eliminación en la leche de vacas infectadas. Si bien los coeficientes de
correlación entre RCS y presencia de IIM están en el orden de 0,5 a 0,6, la
prevalencia de cuartos infectados dentro de un rodeo es el factor más
determinante en el RCS del mismo. Por eso, está generalmente aceptado que
31
cuanto mayor es el recuento individual, mayor será el problema de mastitis.
(Calvino, s.f.).

 Cultivo bacteriológico de la leche

El cultivo de muestras de leche es un método típico de examen para

descubrir mastitis. Debe efectuarse con muestras diferentes de cada cuarterón o
de muestras conjuntas que incluyan leche de los cuatro cuarterones individuales,
pues los costos de tratamiento requieren que se trate el menor número posible
de cuarterones en cada ubre. Al usar la primera técnica, se tratan solo los
cuarterones afectados y, si es bajo el índice de infección, el ahorro podría ser
considerable. En los programas de control de mastitis, los costos del cultivo
bacteriológico en el laboratorio pueden reducirse mucho si sometemos primero a
las vacas a una prueba indirecta, para luego practicar cultivo en los animales
positivos. A menos que sea necesaria la identificación bacteriológica o haya
cambiado la frecuencia o cuadro clínico, este estudio puede ser el primer
examen del rebaño y puede lograrse un ahorro adicional estudiando pequeños
grupos representativos del total del rebaño…El cultivo de muestras de leche
procedente de cuarterones que se ha tratado recientemente, trae el
inconveniente de que se eliminan bacterias importantes. Sin embargo, el
muestreo debe retrasarse hasta al menos 12 horas después del tratamiento, en
caso contrario las muestras son en su mayoría positivas en el cultivo (53). (Blood
y Radostits, 1992).

Los cultivos en laboratorio son necesarios parta identificar los organismos

específicos que se encuentran comprendidos en un caso clínico de mastitis y
para distinguir los animale4s sanos de aquellos que presentan un caso
subclínico. LA fidelidad de los resultados de laboratorio depende de los cuidados

32
sanitarios que se tengan durante la toma de muestras y su manipulación
posterior. (Almeida, 2015).

 Otros métodos indirectos.

Una prueba de uso extensivo es el Test de mastitis de California, conocida

generalmente por su sigla en inglés "CMT" (California Mastitis Test). Esta prueba
mide en forma indirecta la cantidad de células somáticas suspendidas en la
leche del cuarto mamario. Es muy práctica para utilizar al pie de la vaca, aunque
la interpretación de los resultados tiene cierto grado de subjetividad. (Calvino,
s.f.).

 La prueba california mastitis test

“Entre otras pruebas empleadas para explorar por inspección mediata el

contenido de células somáticas en la leche se tiene: la prueba de California para
Mastitis (CMT)”. (…). (Ávila y Gutiérrez, 2010).

En la infección de la glándula mamaria, de los vasos localizados en el área

afectada, escapan leucocitos y es por lo general esta respuesta celular
proporcional a la severidad de la infección. No obstante, en algunas infecciones
latentes o subclínicas pueden o no aparecer leucocitos en la leche, menciona
que las cuentas de células somáticas mayores a 500 000/mL., indican mastitis
sub clínica. (Ávila y Gutiérrez, 2013).

“La Prueba de California para Mastitis (CMT, por sus siglas en inglés) ha sido
empleada durante décadas y sigue siendo la prueba más utilizada a nivel de

33
 campo para el diagnóstico de mastitis en el ganado bovino. (Bedolla, Castañeda
y Wolter, 2007).

Es una prueba sencilla que es útil para detectar la mastitis subclínica por
valorar groseramente el recuento de células de la leche. No proporciona un
resultado numérico, sino más bien una indicación de si el recuento es elevado o
bajo, por lo que todo resultado por encima de una reacción vestigial se considera
sospechoso. (Bedolla, Castañeda y Wolter, 200).

2.2.9. Técnicas de identificación de Escherichia coli en laboratorio

 Medio de cultivo
“Son fuentes nutritivas, naturales o sintéticas que se asemejan al nicho
ecológico de los microorganismos en el cual se desarrollan; estas necesidades
nutricionales se han determinado mediante extensas investigaciones”. (De la
Cruz, 2012).

 Cultivo en placas

“La técnica más utilizada es la siembra por estría en placa Petri esto
permite obtener colonias separadas”. (Dela Cruz, 201).

 Cultivo en tubos

“Para repartir los medios de cultivo en tubos el operador debe sentarse

cómodamente, colocando los tubos al lado izquierdo y el medio a repartir al lado
derecho”. (Dela Cruz, 2012).

34
 Medio selectivo:

Agar Mac conkey

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil
desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que
utilizan o no, lactosa en muestras clínicas. Todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo; el medio preparado es de color rojo
purpura; los inhibidores no permiten el desarrollo de otras bacterias
especialmente de las gram positivas. Las bacterias degradan la lactosa,
haciendo variar el pH, y el indicador es el cambio de color, la Escherichia coli es
una de las especies bacterianas, capaz de fermentar la lactosa”. Así mismo,
Jawetz, et al., 2005) explica “específicamente forman colonias lisas, circulares,
convexas, con bordes bien diferenciados; fermenta la lactosa. (Dela Cruz, 201).

 Medios diferenciales:

Agar citrato de Simmons

“Medio para la diferenciación de entero bacterias basadas en la, utilización

del citrato como única fuente de carbono”. (Dela Cruz, 2012, p. 20.)

Agar Hierro Tres Azucares (TSI)

Los cultivos típicos de E. coli en 1ººººººagar TSI presentan el bisel amarillo,

sin oscurecimiento y con formación de gas; este medio se emplea para detectar
la fermentación de la lactosa, sacarosa y glucosa, con formación de ácido y gas
y, también para detectar la producción de ácido sulfhídrico, (Dela Cruz, 2012).

35
 Agar Lisina Hierro (LIA)

“Medio diferencial para la detección de entero bacterias, basada en la

descarboxilacion de la lisina (anaerobias), formación de sulfuro de hidrogeno y
producción de gas”, (Dela Cruz, 201).

Medio para Sulfuro, Indol y Movilidad (SIM)

“Se usa en la determinación de la producción de sulfuro de hidrogeno, la

formación de Indol y la movilidad de miembros de los grupos de Salmonella y
Shigella”. (Lecciones de microbiología y medios de cultivo, 1995).

 Tinción gram

Una posible teoría del mecanismo de tinción es la siguiente: El colorante

básico entra al microorganismo, donde forma con el yodo una laca insoluble en
agua. El alcohol o la acetona empleados para aclarar, deshidrata las paredes de
los microorganismos Gram. Positivos, tratados con mordiente, y forma una
barrera que la laca no puede atravesar. En las células Gram. Negativas, los
lípidos de la pared (más abundantes que en las células Gram. positivas) se
disuelven por este tratamiento, lo que permite el escape del complejo de violeta
de genciana con yodo. Algunos autores objetan esta teoría, pero es indudable la
importancia general de la pared celular. (Acuña y Rivadeneira, 2008).

Varias son las teorías emitidas para explicar el mecanismo de la tinción de

Gram, basan la suya en una combinación química entre el colorante y las
proteínas de las bacterias. Las proteínas y aminoácidos son cuerpos anfóteros,
esto es, tienen la facultad de reaccionar con ácidos y con bases, gracias a sus

36
 grupos amino y carboxilo; en soluciones ácidas, reaccionan con los ácidos, y en
soluciones alcalinas lo hacen con las bases. (Acuña y Rivadeneira, 2008).

Elaborada por Hans Gram en 1884, es la más empleada en bacteriología,

permite diferenciar a las bacterias en:

 Bacterias Gram positivas

Toman el colorante violeta de genciana, tiñéndose de azul violáceo.

 Bacterias Gramnegativos

Pierden el violeta de genciana al ser lavados con el diferenciador (alcohol-

acetona). Es necesario imprimir un colorante de contraste (fucsina o safranina),
para ser observadas, tiñéndose de rojo.

Cuando las bacterias se tiñen con el complejo colorante básico-mordiente,

este queda atrapado en las bacterias Gram positivas y no puede ser arrastrado
por el decolorante a causa de la naturaleza y físico-química de su pared. Por el
contrario, en los gramnegativos es arrastrado debido a su alto contenido lipídico.
(Lecciones de microbiología y medios de cultivo, (1995).

2.2.10. Vacunación contra mastitis

Las vacunas desarrolladas contra la mastitis no han tenido mucho éxito en el

pasado. Hace varias décadas se elaboró un toxoide a base de Staphylococcus
aureus para inmunizar las vacas contra mastitis causadas por este germen, pero
lamentablemente tuvo poco éxito. Hasta hace poco, la única vacuna que ha
demostrado un éxito razonable ha sido la J-5 (basado en una mutante de E.

37
 Coli) en el control de mastitis aguda causada por coliformes (E. coli, Klebsiella,
Enterobacter y Serratia), con un 70 a 80% de reducción en la casuística clínica,
siguiendo un programa de 3 vacunaciones: (60 y 30 días antes del parto, y al
parto). La mutante J-5 posee algunos carbohidratos que pueden causar algunos
efectos indeseables en los animales vacunados. (Andresen, 2001).

2.3 Hipótesis

Ho = La prevalencia de mastitis subclínica no es diferente en las diversas lactaciones.

Ha = La prevalencia de mastitis subclínica es diferente en las diversas lactaciones.

2.4 Variables de estudio

Prevalencia de mastitis subclínica.
Diferentes lactaciones

38
Definición operativa de variables

INSTRUMENTOS
VARIABLES DIMENSIÓN INDICADORES DE MEDICION UNIDAD DE MEDIDA

VARIABLE Evaluación de la Formación de Paleta CMT. Ufc/g. > 10ⁿ

Independiente leche en 1ra. grumos en forma Prueba CMT.
Lactación. de gel en el centro Toma de muestras Si a las 72 horas las
Diferentes Evaluación de la de la paleta de Pruebas Unidades Formadoras de
lactaciones leche en 2da. CMT. bioquímicas. Colonias (ufc) del e. coli,
Lactación. Formación de Control de las etapas son mayores a 10ⁿ
Evaluación de la colonias de de lactación. entonces la prevalencia
leche en 5ta. Escherichia coli. de mastitis sub clínica es
Lactación. positivo.
Evaluación de la
leche en 5ta. RCS/ml.
Lactación. N. Negativo de 0-
200.000
Presencia de Agar MacConkey T. Trazas de 150.000 -
VARIABLE Evaluación de la bacterias de E. Citrato de Simmons 500.000
Dependiente leche en 6ta. coli. (C.S.) 1.Ligeramente positivo De
Prevalencia de Lactación. Tres Azúcar Hierro 400.000 -1.500.000
mastitis subclínica Evaluación por el (T.S.I.) 2.Positivo De
método de CMT. Agar Lisina Hierro 800.000 – 5.000.000
Pruebas (L.I.A.) 3.Muy positivo >
bioquímicas Medio SIM. 5.000.000
Medios Mililitros
diferenciales Ufc/g,
Ranking

39
 CAPÍTULO III
METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN

3.1 Ámbito de estudio

El estudio fue ejecutado en la Estación Experimental Agraria “Callqui”, de la

Dirección Regional Agraria de Huancavelica, cuya localización y ubicación geográfica es;
región y provincia: Huancavelica, distrito: Ascensión, lugar: Callqui ubicado al oeste de la
ciudad, a una distancia de 7.07 km del centro de Huancavelica, contando con una trocha
carrozable, de acceso al margen izquierdo del rio Ichu; con una altitud de 3,718 m.s.n.m.,
Latitud Sur:12º 46′ 59.2″ y Longitud Oeste: 75º 2′ 1.5″, su clima y meteorología presentan
una temperatura máxima de 16ºC. Y una temperatura mínima de 15ºC. Con una
precipitación pluvial de 829.6 mm.

3.2 Tipo de investigación

Básica; Tiene fines teóricos y científicos: descubrir leyes, principios o formular teorías.
(Yarleque, 2014)

3.3 Nivel de investigación

Descriptivo; Consiste en describir, analizar e interpretar sistemáticamente un conjunto

de hechos relacionados con otras variables tal como se dan en el presente. El método
descriptivo apunta a estudiar el fenómeno en su estado actual y en su forma natural, (…)
(Sánchez y Reyes, 1998)

40
3.4 Método de investigación

Deductivo; El método deductivo, (…) considera que la conclusión está implícita en las
premisas, (…) Es un tipo de razonamiento que nos lleva: a) de lo general a lo particular,
b) de lo complejo a lo simple. (Estrada, 2014)

3.5 Diseño de investigación

 Diseño no experimental o ex post facto; la investigación se desarrolló de acuerdo al

cronograma que hemos establecido, donde se evaluó el porcentaje de la prevalencia
general por unidad animal, luego se determinó la prevalencia de mastitis sub clínica en
diferentes etapas de lactación, determinó la prevalencia de mastitis sub clínica por
cuartos, luego se detectó la presencia de la Escherichia coli, mediante la aplicación de
Agar MacConkey, contrastando con los medios diferenciales Agar citrato de Simmons,
Agar Hierro Tres Azucares (TSI), Agar Lisina Hierro (LIA), Medio para Sulfuro, Indol y
Movilidad (SIM) y se determinó, si las etapas de lactación influyen o no en la prevalencia
de la mastitis sub clínica mediante la prueba de Ji² de homogeneidad, habiendo sido el
esquema el siguiente:

M --------------- O

Donde:
M : Muestra
0 : Observación

41
3.6 Población, Muestreo

Población

La población en estudio fue 20 vacas que se encontraban en producción al momento

de iniciar con el trabajo de investigación en la Estación Experimental Agraria de “Callqui”
3.7 Técnicas e instrumentos de Recolección de Datos

 Técnica de colección de muestras de leche

Se utilizó muestras representativas de las vacas productoras de leche, en época de

lactación, para realizar la prueba de California Mastitis Test (CMT)., así como de la
prueba en laboratorio, para el análisis bacteriológico del Escherichia coli.

 Toma de muestras de leche para análisis bacteriológico

El método de obtención fue el siguiente:

Se tomaron de las 20 vacas de leche de la estación experimental, obteniendo un

total de 80 muestras debido a que cada vaca productora de leche posee cuatro
pezones.
Las muestras se tomaron siguiendo los procedimientos descritos en la recolección
de datos.
El mínimo total de toma de muestras fue de 4 a 5 ml., por pezón.
Se identificó cada muestra mediante marcas realizadas en los viales
correspondientes al número de vaca y pezón al que corresponde.
El material obtenido se guardó en una caja isotérmica, con hielo.

42
 Luego este material se trasladó directamente al laboratorio de sanidad animal de la
Universidad Nacional de Huancavelica

3.8 Procedimiento de Recolección de Datos

 Preparación de los pezones

Se lavaron los pezones con solución salina, secándolos luego con toallas
desechables, luego de esto se procedió a eliminar los primeros chorros de leche cuyo
propósito fue evitar residuos contaminantes.

Con torundas de algodón humedecidas en alcohol (metílico, etílico al 70% se

desinfecto la punta del pezón, para tomar las muestras de los cuatro pezones para evitar
la contaminación.

Luego se tomó las muestras, identificándolos con el número de la vaca y el pezón

muestreado.

Se tomó el tubo con la mano y el dedo meñique y la palma de la otra mano se quitó el
tapón.

Sin que el tubo toque el pezón. Con la misma presión posible se ordeño manteniendo
alejado del pezón el tubo.

Hemos procedido a recolectar de 4 a 5 ml., de leche que fueron suficientes y luego se

tapó el tubo, este proceso de muestreo se hizo lo más rápido posible comenzando por los
más cercanos.

43
 Las pruebas para determinar la mastitis subclínica se realizaron directamente en el
lugar de recolección aplicando la metodología de California Mastitis Test (CMT).

Para el análisis en laboratorio se tomaron muestras de cada flanco de la ubre de las

vacas primeros chorros, se mantuvieron a una temperatura de 4 a 5 Cº, por lo que fue
necesario mantenerlas en cajas isotérmicas con hielo.

Luego se trasladaron las muestras al laboratorio para efectuar el cultivo bacteriano y

poder determinar la prevalencia de Escherichia coli., en vacas de diferentes lactaciones,
en la estación experimental agraria, Callqui Huancavelica.

 Actividades previas en laboratorio

Previo al inicio del cultivo y aislamiento del Escherichia coli, se ha procedido a

efectuar la preparación del material de laboratorio, (instrumental, placas Petri, pipetas,
probetas entre otros) procediendo a esterilizar los mismos en la autoclave a una
temperatura de 121ºC por un periodo de 20 minutos.

 Proceso de preparación de los medios de cultivo

Primero hemos realizado el pesaje del Agar Mac conkey en la balanza analítica, en la
siguiente proporción:

Agar Mac conkey, la cantidad de 5.15 gr. Por cada 100 mililitros de agua destilada.

Hicimos previamente la tara del papel; en seguida se inició con la dilución del agar, en
el agua destilada, calentándolo en la estufa eléctrica a punto de ebullición para
homogeneizar el medio y quede sin granulaciones, luego se dejó entibiar, para luego

44
cubrir el frasco de Erlenmeyer con torunda de algodón y papel aluminio y se llevó el
medio de cultivo al autoclave por un periodo de 15 minutos a una temperatura de 121ºC,
concluido el proceso de preparado y esterilizado, procedimos a distribuir en las placas
Petri el medio de cultivo, apoyándonos con el mechero de bunsen para evitar que se
contamine el ambiente, en todo momento del proceso hemos utilizado en forma muy
estricta guantes quirúrgico, mascara protectora para la boca, el mandil o guardapolvo y la
gorra, con la finalidad de mantener la asepsia respectiva en los ambientes del
laboratorio, en el proceso de reparto del medio de cultivo en las placas Petri, estas se
colocaron al lado izquierdo de nuestra ubicación y el balón conteniendo el medio de
cultivo al lado derecho; para iniciar con la distribución del medio del cultivo, hemos
procedido a desatar el hilo de la boca del balón, abriendo el frasco con la mano derecha y
tomarlo con la misma, con la mano izquierda abrimos la placa Petri y vertimos una
cantidad adecuada de medio de cultivo en forma lenta, flameando entre 2 a 3 veces la
boca del frasco de Erlenmeyer, manteniéndolo en una posición semi inclinada cerca del
mechero; luego finalmente depositamos las placa de Petri conteniendo el medio de cultivo
en un lugar plano para que enfríe y posteriormente efectuar la siembra en ellas; haciendo
la aclaración que hemos utilizado el mismo procedimiento para con las demás placas
Petri hasta concluir con todas las placas en uso.

 Coloración gram

Luego procedimos a efectuar la coloración o tinción gram, con la finalidad de detectar

la existencia de Escherichia coli, gram – realizando el siguiente procedimiento; tomamos
un portaobjetos nuevo y con el asa bacteriológica al cual previamente lo calentamos en el
mechero, tomamos una muestra de las colonias de Escherichia coli formadas en la placa
Petri en el orden en el que se realizó la siembra, luego hicimos un frotis en el porta
objetivo, habiendo puesto previamente una gota de agua destilada para extender en
forma más fácil y uniforme la muestra de bacterias, luego de esto procedimos a fijar la
muestra en el portaobjetos pasándolo por el fuego del mechero de bunsen hasta por dos
45
 veces, luego hemos cubierto la muestra fijada, primero con el reactivo cristal violeta
(violeta de genciana) y hemos esperado a que se seque por un tiempo de 2 minutos y
luego de esto quitamos el exceso con de cristal violeta, aplicando unos chorritos de agua
mediante el cristal piceta, para luego aplicar el reactivo lugol y dejar secar por 2 minutos
procediendo a lavar con agua mediante el cristal piceta; seguidamente hemos procedido
a efectuar la decoloración, agregando el alcohol acetona cubriendo en su totalidad la
muestra y lo dejamos secar igual por 2 minutos, para posteriormente enjuagar con agua y
finalmente agregamos unas gotas de safranina tratando de cubrir toda la muestra y luego
escurrimos el exceso para lavar igual con agua que se aplicó con el cristal piceta,
esperando a que se sequen por 2 minutos, este mismo procedimiento se aplicó en todos
los demás casos hasta culminar con las 28 muestras de colonias cultivadas en las placas
Petri, que solo presentaron prevalencia de mastitis subclínica.

 Lectura e interpretación de resultados

Una vez terminado con las muestras preparadas en la porta objetivos, procedimos a
observar en el microscopio, primero a 10X para enfocar el campo microscópico, luego
pasamos a 40X, para confirmar el campo seleccionado, en esta etapa procedimos a
agregar una gota de aceite de inmersión y colocamos el objetivo a 100X, para poder
observar la morfología, agrupación y el color de los bacilos.

 Morfología, agrupación y color

Al observar al microscopio la morfología de las bacterias del Escherichia coli, se notó

que la forma era de bacilos (abastonado) y realizando la medición con el microscopio esta
resulto en promedio 2 μm. De largo, la agrupación que presentaron fueron en cadenas, el
color que presentaron fue rosado intenso.

46
 Preparación de los medios diferenciales

Se pesó cada uno de los medios diferenciales, en la balanza analítica por separado y
en la siguiente proporción:
 Agar citrato de Simmons, la cantidad de 2.40gr., por cada 100 ml. de agua
destilada.
 Agar Hierro Tres Azucares (TSI), la cantidad de 6.46gr., por cada 100 ml., de
agua destilada.
 Agar Lisina Hierro (LIA), la cantidad de 3.45gr., por cada 100 ml., de aguas
destilada.
 Medio para Sulfuro, Indol y Movilidad (SIM), la cantidad de 3.00gr., por cada 100
ml., de agua destilada.
 Peptona, la cantidad de 2.00gr., por cada 100 ml., de agua destilada.

En vista que se obtuvo 76 muestras en viales graduados de 5 ml., de las 20 vacas en

observación, habiendo existido 04 flancos con el pezón reprimido, cerrado y seco, siendo
estos de las siguientes; vaca Nancy presento 01 pezón reprimido en el flanco anterior
derecho, vaca Lili presento 02 pezones cerrados en los flancos posterior izquierdo y
anterior derecho, finalmente la vaca Deisy presento un pezón seco en el flanco posterior
derecho; sin embargo hemos utilizado la cantidad de 1280 tubos de ensayo, siendo
distribuido para cada agar del siguiente modo:

 Agar citrato de Simmons, 320 tubos de ensayo

 Agar Hierro Tres Azucares (TSI), 320 tubos de ensayo
 Agar Lisina Hierro (LIA), 320 tubos de ensayo
 Medio para Sulfuro, Indol y Movilidad (SIM), 320 tubos de ensayo

Luego hemos iniciado con la dilución de cada medio hasta llegar a homogeneizar
uniformemente, calentando con la estufa a punto de ebullición, luego dejamos enfriar y
47
una vez manipulable procedimos a tapar el frasco con algodón y papel Graf amarrándolo
luego con papel pabilo, llevándolo luego a esterilizar en el autoclave a 121ºC por 15
minutos; luego de esto repartimos en cada tubo de ensayo, colocando los tubos de
ensayo al lado izquierdo y el balón conteniendo el medio de cultivo al lado derechos, para
el respectivo servido tal y como lo recomiendan los procedimientos, en el proceso de
servido se destapo el tubo luego se vertió el agar en forma lenta, se hizo el flameo de la
boca del frasco entre 2 a 3 veces manteniendo este último en una posición semi inclinada
y cerca al mechero, acostando los tubos de ensayo sobre una tablilla de
aproximadamente 3 cm., de grosos de tal modo que permanezcan en una posición de
echado semi inclinada con la finalidad de que enfríen los medios y conserven al secarse
la posición de bisel; mientras que con el medio SIM una vez servido en una posición recta
se ha procedido a colocar los mismos en una gradilla ( por ser este un medio solido);
procediendo de igual modo con todo los tubos y en cada tipo de agar hasta culminar con
la cantidad arriba indicada de 1280 tubos en general.

 Evaluación microbiológica

Para realizar la evaluación microbiológica se ha tenido en cuenta los siguientes datos;

el número de lactación, la fecha de siembra de la muestra, cantidad de colonias crecidas,
fecha de siembra de colonias crecidas, resultado de las pruebas bioquímicas; agar citrato
de Simmons, agar Hierro Tres Azucares (TSI), agar Lisina Hierro (LIA), Medio para
Sulfuro, Indol y Movilidad (SIM).

 Siembra de muestra (leche) en agar Mac conkey

Iniciamos este procedimiento tomando 1ml. de las muestras de leche pura de los
viales graduados; con la finalidad de hacer la dilución del mismo en 9ml., de caldo
peptona, manteniendo el orden en el que se trasladó dichas muestras del Centro

48
Experimental Callqui hacia el laboratorio; los mismos que fueron, vacas en 1ra. Lactación,
2da. Lactación hasta la sexta lactación, iniciándose con la vaca Roxana hasta culminar
con la vaca Perica; llegando a hacer la dilución hasta una tercera vez es decir 10ˉ³,
repitiendo el proceso para todas las muestras; hemos tomado una muestra de 1ml. de
leche con la pipeta graduada y servido en los 9ml., de caldo peptona para el primer tubo
de ensayo, seguidamente tomamos nuevamente 1 ml., de la dilución en el primer tubo de
ensayo y lo servimos al segundo tubo de ensayo que contenía 9ml. de caldo peptona y
finalmente tomamos de nuevo 1ml., de dilución de este segundo tubo de ensayo y lo
servimos en el tercer tubo de ensayo conteniendo 9ml., de caldo peptona, luego de esto
hemos procedido a efectuar la siembra en las placas Petri previamente conteniendo la
preparación del agar Mac conkey, inoculando 1ml., de la solución con la pipeta, para
luego hacer la siembra por extensión con el asa Drigalsky el cual hemos esterilizado y
flameado constantemente con el mechero de bunsen, el proceso de extendido,
distribución de la solución fue en forma constante llevando una secuencia hasta que la
solución se impregne en el agar Mac conkey llegando a tomar una contextura gelatinosa
semi sólida, repitiendo este proceso en forma idéntica con las demás placas Petri hasta
concluir con todas las muestras, finalmente cerramos la placa e identificamos con el
plumón indeleble para luego colocarlos en la incubadora en forma invertida para el
respectivo crecimiento de las colonias a una temperatura de 37ºC por 24 horas.

 Siembra de las colonias en los medios diferenciales

Una vez se tuvo servido y enfriado los medios diferenciales dimos inicio con la
siembra de las colonias de Escherichia coli, tomando muestras de colonias de las placas
Petri con cultivos, donde se podía observar el crecimiento de las mismas en forma
abundante, realizando de la siguiente manera:

Primero realizamos el conteo de las colonias crecidas para verificar la presencia de

estas en los cultivos, siendo lactosa positiva (color rojo) y lactosa negativa (color blanco).
49
 Luego separamos las placas para apreciar el crecimiento de las colonias en el
siguiente orden, primero las placas que contenían las lactosas positivas (color rojo) y
luego las lactosas negativas (color blanco), finalmente aquellas placas que no contenían
crecimiento bacteriano alguno.
Luego procedimos a realizar el conteo en el contador de colonias.
En seguida colocamos los tubos de ensayo conteniendo los medios diferenciales en
las gradillas con la finalidad de realizar la siembra en el siguiente orden: Agar citrato de
Simmons, Agar Hierro Tres Azucares (TSI), Agar Lisina Hierro (LIA), Medio para Sulfuro,
Indol y Movilidad (SIM).
Luego iniciamos con la siembra de las colonias en los medios diferenciales; cogiendo
solo una colonia con el asa de Colle o siembra, el cual desinfectamos previamente con el
mechero de bunsen, escogiendo preferentemente de las colonias más grandes y con
mayor crecimiento de colonias, sembrando con el método de estrías en el siguiente
orden, Agar citrato de Simmons de (color verde), Agar Hierro Tres Azucares (TSI) (color
rojo) y Agar Lisina Hierro (LIA)(color morado) para lo cual tomamos los tubos que
contenían el medio, en posición inclinada a bisel, inoculando las colonias con una misma
toma de muestra para los medios, jalando la punta del asa de siembra hasta el final,
procediendo a rotular en cada una de las muestras el flanco, el número de lactación y la
vaca a al que pertenecía; seguidamente procedimos con la siembra en el Medio para
Sulfuro, Indol y Movilidad (SIM) (color amarillo) introduciendo la punta en forma recta y
profunda en el medio, procediendo a rotular con plumón indeleble cada una de las
muestras igualmente, el cuarto, el número de lactación y la vaca a al que pertenecía.
Una vez concluida con todas las siembras procedimos a colocar las gradillas en la
incubadora por un tiempo de 24 horas a 37ºC.
Finalmente, pasada las 24 horas procedimos a realizar la lectura de las muestras de
los tubos y la correspondiente toma de datos obtenidos procesando estos datos en tablas
anexas.

50
 Lectura del Escherichia coli en los medios diferenciales

Para efectuar la lectura de las colonias que crecieron en las pruebas bioquímicas
hemos tomados características resaltantes de cada medio, expresadas en forma de letras
(A, K) y signos (+) (-) según la característica de cada medio, dando inicio con el medio,
Agar citrato de Simmons, prosiguiendo con el Agar Hierro Tres Azucares (TSI),
continuando con el Agar Lisina Hierro (LIA), para finalmente seguir con el Medio para
Sulfuro, Indol y Movilidad (SIM).
Interpretación del medio Agar citrato de Simmons; estos cultivos típicos de Escherichia
coli, no utilizan el citrato como fuente de carbono (citrato -) por esto mantienen en color
verde.
Interpretación del medio, Agar Hierro Tres Azucares (TSI); este medio arroja
resultados expresados en forma de letras y signos, tal como podemos apreciar en el
cuadro abajo descrito; los cultivos típicos de Escherichia coli, presentan el bisel amarillo,
por la fermentación de la glucosa (A), si fermenta la lactosa y/o sacarosa entonces
presenta el tendido amarillo (A), y si existe formación de gas es (+) y si es sin producción
de H2O – con oscurecimiento (-).

Tabla 2
Interpretación del Agar Hierro Tres Azucares (TSI)
Expresiones Interpretación del medio Características
A/K Fermentación por acidificación Color amarillo
A/K Fermentación por bacidificación Color amarillo
+/- Producción de gas Presencia de aire
+/- Hidrogeno Color negro
Escherichia coli = A/A +++,-

51
 Interpretación del medio, Agar Lisina Hierro (LIA); Los cultivos típicos de Escherichia coli,
en este medio descarboxilan la lisina y presentan el fondo y tendido purpura, el signo es
(+).
Medio para Sulfuro, Indol y Movilidad (SIM); los cultivos típicos del Escherichia coli, en
este medio presentan enturbiamiento del medio y hay motilidad de la bacteria, el signo es
(+).
3.9 Técnicas de Procesamiento y Análisis de Datos

Los datos se procesaron mediante la aplicación de estadística descriptiva y para

determinar la influencia de las lactaciones sobre la prevalencia de la mastitis se utilizó el
Ji² de homogeneidad:

n k (Oij - Eij) ²
X² = ∑ ∑
i =l j =l Eij

Dónde:
Oij = Valor observado del evento j.

Eij = Valor esperado del evento j.

X² = Es el Ji cuadrado.

52
 CAPÍTULO IV:

RESULTADOS
4.1 Presentación de Resultados.
En la tabla 3 se aprecian los resultados obtenidos de la prueba de California Mastitis
Test, (C.M.T.) efectuada a las 20 vacas que se encontraban en producción de leche, de
las cuales 14 animales dieron positivos significando una prevalencia del 70% y 6
resultaron negativos (30%).
Tabla 3
Resultados de la prevalencia general de mastitis subclínica por unidad animal.

Nº DE VACAS POSITIVOS NEGATIVOS PREVALENCIA (%)

20 14 6 70

En la tabla 4 se aprecian los resultados obtenidos de prevalencia de mastitis

subclínica por etapa de lactación de las 14 vacas que resultaron positivo; mismos que
reflejan en 1ra. Lactación una prevalencia del 15%, en 2da. Lactación un 10%, en 4ta.
Lactación un 5%, en 5ta. Lactación un 25% y en 6ta. Lactación un 15%, que sumados a
nivel general dan un 70%
Tabla 4
Resultados de la prevalencia de mastitis sub clínica por etapa de lactación en vacas
que dieron positivo.
NUMERO
ETAPA DE TOTAL DE VACAS CON PREVALENCIA
LACTACION VACAS PREVALENCIA POSITIVA NEGATIVO (%)
1ra 7 3 4 15
2da 2 2 0 10
4ta 3 1 2 5
5ta 5 5 0 25
6ta 3 3 0 15
total 20 14 6 70

53
 En la tabla 5 podemos ver los resultados obtenidos en la prueba de California Mastitis
Test, efectuada a las 14 vacas que dieron positivo en las diferentes etapas de lactación
siendo; en 1ra. Lactación un 13%, 2da. Lactación 7%, 4ta. Lactación 4%, 5ta. Lactación
14% y 6ta. Lactación 13% que en forma general suman un 50%.
Tabla 5
Resultados de la prevalencia de mastitis sub clínica en vacas que dieron positivas,
por etapas de lactación.

ETAPA DE VACAS CON PREVALENCIA NUMERO DE CUARTOS CON NUMERO TOTAL PREVALENCIA
LACTACION POSITIVA PREVALENCIA POSITIVA DE CUARTOS (%)
1ra 3 7 14 13
2da 2 4 8 7
4ta 1 2 4 4
5ta 5 8 16 14
6ta 3 7 14 13
total 14 28 56 50

En la tabla 6 observamos resultados sobre la influencia de las etapas de lactación en

la prevalencia de mastitis subclínica mediante la prueba Ji² de homogeneidad que existe
diferencia estadística (p<0.05), lo que indica que influye sobre la mastitis subclínica
causada por Escherichia coli en vacas de diferentes lactaciones en la Estación
Experimental Agraria “Callqui” Huancavelica.
Tabla 6
Prueba Ji² de homogeneidad para determinar si las etapas de lactación influyen en la
prevalencia de mastitis sub clínica.

Significación asintótica
Valor gl
(bilateral)
Ji-cuadrado de homogeneidad 7,619a 5 0,179

54
4.2 Discusión.

En el presente estudio se encontró un 70% de prevalencia de mastitis subclínica

causada por Escherichia coli, resultados similares encontró, Guisar, et al., (2008) en sus
conclusiones y discusiones indica; “en base a los resultados obtenidos del estudio
realizado en el período de investigación sobre la mastitis bovina en el municipio de
Tarímbaro, Michoacán., se determinó una prevalencia de 43.14%”; por otro lado ,
Danilo, (2006) concluye, la prevalencia de mastitis en el hato fue de un 41%, (…).
Fenómeno que se asemeja a lo anterior.

Colque (2015) concluye, “la prevalencia de mastitis subclínica en vacunos según el

mes de lactación fue 4.41, 8.82 y 6.62 % para 1 a 3 meses, 4 a 6 meses, y de 7 a 9 meses
de lactación, respectivamente (P≥0.05)”. Este comportamiento es similar a lo hallado por
nosotros en las etapas de lactación (Tabla 4) donde encontramos 9, 5, 3, 10 y 9% para la
1ra., 2da., 4ta., 5ta y 6ta. Lactación respectivamente y del mismo modo contrastamos con
estos resultados con los obtenidos de la prevalencia de mastitis subclínica positiva, ya
que se asemejan en los resultados por etapas de lactación 1ra. 2da. 4ta. 5ta y 6ta. Cuya
prevalencia general fue de 50%.

Muñoz, et al., (2012), concluye; la prevalencia de mastitis subclínica, en vacas de

doble propósito en Márquela, Guerrero, (…), resultados que no muestran la presencia de
Escherichia coli. Resultado que se asemeja a lo obtenido por nosotros en nuestro trabajo
de investigación en el cuadro 1, donde obtuvimos de la suma de todas las etapas de
lactación, un total de 1938 colonias de Escherichia coli. Siendo muy bajo para ser
considerado como infección.

Finalmente, consideramos que esta investigación es un aporte que permitirá en el

futuro tener en cuenta el control de la prevalencia de la mastitis sub clínica en la Estación
Experimental Agraria “Callqui”, de la Dirección Regional de Agricultura Huancavelica,
55
permitiéndoles una producción de leche sana y libre de esta enfermedad, generándoles
una producción estable y mayores ingresos económicos.

56
 CONCLUSIONES

1. La prevalencia general de mastitis subclínica por unidad animal en vacas de diferentes

lactaciones, en la estación Experimental Agraria “Callqui”, de la Dirección Regional
Agraria Huancavelica, fue del 70%.
2. La prevalencia de mastitis subclínica en vacas que dieron por etapas de lactación fueron;
en 1ra. etapa de lactación del 13%, 2da., etapa de lactación del 7% en, 4ta etapa de
lactación de 14%., en 5ta., etapa de lactación del 14% y en la 6ta., etapa de lactación del
13%. Significando que en las cinco etapas tienen el riesgo de ser infectados.
3. De acuerdo al valor arrojado mediante el Ji² de homogeneidad las etapas de lactación si
influyen en la prevalencia de mastitis subclínica.

57
 RECOMEDACIONES

Se recomienda profundizar y realizar trabajos de investigación en prevalencia de mastitis

subclínica causada por otras bacterias tales Staphylococcusaureus, Streptococus
agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Mycoplasma sp y Corynebacterium bovis y otros
ya que se han encontrado ubres con presencia de mastitis aguda.

Se recomienda efectuar cursos de capacitación en manejo y sanidad al personal encargado

del ordeño, con la finalidad de mejorar la producción de leche.

Se recomienda llevar un historial de las enfermedades que presenten las vacas en

producción, mediante tablas de control, los cuales deben estar debidamente actualizadas y
refrendadas por un profesional competente.

58
 REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

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Recuperado de https://es.scribd.com/presentation/200661079/INVESTIGACION-yarleque

63
ANEXOS

64
 Anexo A
MATRIZ DE CONSISTENCIA
TITULO: PREVALENCIA DE MASTITIS SUBCLÍNICA, CAUSADA POR Escherichia coli, EN VACAS DE DIFERENTES LACTACIONES, EN LA ESTACIÓN
EXPERIMENTAL AGRARIA “CALLQUI” HUANCAVELICA.

POBLACION Y
PROBLEMA OBJETIVOS HIPOTESIS VARIABLES INDICADOR DISEÑO MUESTRA

¿Cuál es la General: Hipótesis: Independiente Presencia de Tipo de Población

prevalencia Determinar la prevalencia de mastitis subclínica causada por Escherichia Coli, en
Ho = La Diferentes bacterias de Investigación La población
vacas de diferentes lactaciones, en la Estación Experimental Agraria “Callqui”, de
de mastitis la Dirección Regional Agraria Huancavelica. prevalencia lactaciones E. coli; en experimental es de
subclínica, 3. Específicos: de mastitis colonias. Observación aproximadamente
causada por 1. Determinar la prevalencia de mastitis sub subclínica no Dependiente Formación 90 vacas de leche
Escherichia es diferente Prevalencia de de grumos Nivel de en la zona de
coli, en vacas clínica causada por Escherichia coli, en 1ra., en las mastitis en forma de Investigación intervención.
de diferentes 2da., 4ta., 5ta. Y 6ta. etapas de lactación en diversas subclínica. gel en
lactaciones, lactaciones. El centro de Descripción Muestra
en la Estación vacas de la Estación Experimental Agraria Ha = La la paleta de univariable La muestra será
Experimental prevalencia CMT. tomada de 20 vacas
Agraria “Callqui”, de la Dirección Regional Agraria de mastitis La etapa de Método de de leche en la zona
“Callqui”, de la Huancavelica. subclínica es lactación en Investigación de intervención
Dirección diferente en el que se haciendo un total de
Regional 2. Determinar si las etapas de lactación las diversas encuentran Transversal 80 muestras
Agraria lactaciones. las vacas de independientes
Huancavelica influyen o no en la prevalencia de la mastitis leche. Diseño de debido a que cada
? subclínica Investigación vaca posee cuatro
pezones por ubre.
Ji² de
homogeneidad

65
 Anexo B
DEFINICIÓN OPERATIVA DE VARIABLES

VARIABLES DIMENSIÓN INDICADORES INSTRUMENTOS UNIDAD DE MEDIDA

DE MEDICION

VARIABLE Evaluación de la Formación de Paleta CMT. Ufc/g. > 10ⁿ

Independiente leche en 1ra. grumos en forma Prueba CMT.
Lactación. de gel en el centro Toma de muestras Si a las 72 horas las
Diferentes Evaluación de la de la paleta de Pruebas Unidades Formadoras de
lactaciones leche en 2da. CMT. bioquímicas. Colonias (ufc) del e. coli,
Lactación. Formación de Control de las etapas son mayores a 10ⁿ
Evaluación de la colonias de de lactación entonces la prevalencia
leche en 5ta. Escherichia coli. de mastitis sub clínica es
Lactación. Presencia de positivo.
Evaluación de la bacterias de E. Agar Mac conkey
leche en 5ta. coli. Citrato de Simmons
VARIABLE Lactación. (C.S.) RCS/ml.
Dependiente Evaluación de la Tres Azúcar Hierro
Prevalencia de leche en 6ta. (T.S.I.) N. Negativo de 0-
mastitis subclínica Lactación. Agar Lisina Hierro 200.000
Evaluación por el (L.I.A.)
método de CMT. Medio SIM. T. Trazas de 150.000 -
Pruebas 500.000
bioquímicas
Medios 1.Ligeramente positivo De
diferenciales. 400.000 -1.500.000
2.Positivo De
800.000 – 5.000.000

3.Muy positivo
> 5.000.000

66
 Anexo C
TABLA 7
Lectura e interpretación de la coloración gram
LECTURA E INTERPRETACION DE RESULTADOS DE LA COLORACION GRAM

TOMA DE DATOS EN LABORATORIO

Nombre del dueño : Estación experimental Agraria "Callqui"
Fecha : Huancavelica 12 de octubre del 2016
Nº DE Número de DATOS DEL ANIMAL FLANCOS
IZQUIERDO DERECHO
SCORE
VACA N° Nombre Nº Arete PEZONES PEZONES
ORDEN lactación AI PI AD PD
1 12 ROXANA 358 T + + + +
2 1ra. 16 CARMEN 362 T +
3 19 MARITZA 348 T + +
4 3 RUFINA 280 T +
2da.
5 15 DEYSI 272 T + + +
T +
6 4ta 5 PAOLA 156
1 +
T +
7 2 EPIFANIA 164
1 +
8 7 PAULINA 186 1 +
5ta.
9 8 LILI 6032 1 + +
10 13 NELLY 200 T +
11 18 ROCIO 192 T + +
12 4 ROSALINA 158 1 +
13 6ta. 14 ALICIA 182 T + +
14 17 PERICA 20510 T + + + +

TABLA 8
Resumen de la lectura de coloración gram
Numero de lactación Positivo Negativo
1ra. 7
2da. 4
3ra. - -
4ta. 2
5ta. 8
6ta. 7
Total 28

67
TABLA 9
Resultados obtenidos con medios diferenciales
RESULTADOS OBTENIDOS CON LOS MEDIOS DIFERENCIALES
Fecha : Huancavelica, 12 de Octubre del 2016
Número de FLANCOS
IZQUIERDO DERECHO
Nº VACA N° Nombre Arete MEDIO DE CULTIVO
PEZONES PEZONES
lactación AI PI AD PD
Agar Citrato de Simmons + + + +
Agar Hierro Tres Azucares (TSI) A/A+ A/K++ A/K+- A/K++
1 12 ROXANA 358
Agar Lisina Hierro (LIA) + + + +
Medio para Sulfuro Indol y Motilidad (SIM) - - + -
Agar Citrato de Simmons - - - +
Agar Hierro Tres Azucares (TSI) A/A+- A/A+- A/A++ A/K++
2 1ra. 16 CARMEN 362
Agar Lisina Hierro (LIA) + + + +
Medio para Sulfuro Indol y Motilidad (SIM) + + + +
Agar Citrato de Simmons - - + +
Agar Hierro Tres Azucares (TSI) A/A++ A/A++ A/K+- A/K+-
3 19 MARITZA 348
Agar Lisina Hierro (LIA) + + + +
Medio para Sulfuro Indol y Motilidad (SIM) + + + +
Agar Citrato de Simmons - - - -
Agar Hierro Tres Azucares (TSI) A/A+- A/A+- A/A+- A/A+-
4 3 RUFINA 280
Agar Lisina Hierro (LIA) + + + +
Medio para Sulfuro Indol y Motilidad (SIM) - - - -
2da.
Agar Citrato de Simmons + + +
Agar Hierro Tres Azucares (TSI) A/K+- K++ K++
5 15 DEYSI 272
Agar Lisina Hierro (LIA) + + + S
Medio para Sulfuro Indol y Motilidad (SIM) + + +
Agar Citrato de Simmons - - - -
Agar Hierro Tres Azucares (TSI) A/A+- A/A+- A/A+- A/A+-
6 4ta 5 PAOLA 156
Agar Lisina Hierro (LIA) + + + +
Medio para Sulfuro Indol y Motilidad (SIM) - - - -
Agar Citrato de Simmons - - - -
Agar Hierro Tres Azucares (TSI) A/A+ A/k++ A/k+- A/k++
7 2 EPIFANIA 164
Agar Lisina Hierro (LIA) + + + +
Medio para Sulfuro Indol y Motilidad (SIM) - - - -
Agar Citrato de Simmons - - + +
Agar Hierro Tres Azucares (TSI) A/A++ A/A++ A/K-- A/K--
8 7 PAULINA 186
Agar Lisina Hierro (LIA) + + + +
Medio para Sulfuro Indol y Motilidad (SIM) + + - -
Agar Citrato de Simmons + +
Agar Hierro Tres Azucares (TSI) A/K+- A/K+-
9 5ta. 8 LILI 6092
Agar Lisina Hierro (LIA) + C C +
Medio para Sulfuro Indol y Motilidad (SIM) - -
Agar Citrato de Simmons + + + +
Agar Hierro Tres Azucares (TSI) A/K++ A/K++ A/K++ A/K++
10 13 NELLY 200
Agar Lisina Hierro (LIA) + + + +
Medio para Sulfuro Indol y Motilidad (SIM) - - - -
Agar Citrato de Simmons - + + +
Agar Hierro Tres Azucares (TSI) A/A+- A/K-- A/A++ A/K+-
11 18 ROCIO 192
Agar Lisina Hierro (LIA) + + + +
Medio para Sulfuro Indol y Motilidad (SIM) + - + +
Agar Citrato de Simmons - - - -
Agar Hierro Tres Azucares (TSI) A/A-- A/A-- A/A-- A/A--
12 4 ROSALINA 158
Agar Lisina Hierro (LIA) + + + +
Medio para Sulfuro Indol y Motilidad (SIM) - - - -
Agar Citrato de Simmons - - + +
Agar Hierro Tres Azucares (TSI) A/A++ A/A+- A/K++ K++
13 6ta. 14 ALICIA 182
Agar Lisina Hierro (LIA) + + + +
Medio para Sulfuro Indol y Motilidad (SIM) + + + +
Agar Citrato de Simmons + + + +
Agar Hierro Tres Azucares (TSI) A/K++ K++ A/K+- A/K--
14 17 PERICA 20510
Agar Lisina Hierro (LIA) + + + +
Medio para Sulfuro Indol y Motilidad (SIM) - - + -

68
Cuadro 1

CUADRO PARA LA INTERPRETACION DE LOS GRADOS DEL CALIFORNIAN MASTITIS TEST

CODIGO SIGNIFICADO RANGO DE CELULAS SOMATICAS INTERPRETACION

C Pezon Cerrado 0 Sin presencia de leche
R Pezon Reprimido 0 Sin presencia de leche
S Pezon seco 0 Sin presencia de leche
N Negativo 0 - 200.000 Cuarto sano

T Trazas 150.000 - 500.000 Cuarto con Mastitis Subclinca

1 Ligeramente positivo 400.000 - 1.500.000 Cuarto con Mastitis Subclinca
2 Positivo 800.000 - 5.000.000 Cuarto con infeccion seria
3 Muy Positivo > 5.000.000 Cuarto con infeccion seria

LEYENDA

T = Trazas : Hay principios de mastitis sibclinica en el cuarto

1 = Ligeramente positivo : Hay presencia de mastitis sibclinica en el cuarto

69
 Anexo D
TABLA 10
Estadística pecuaria sobre el número de cabezas de vacuno en la Región Huancavelica

RESUMEN DE LA PRODUCCION PECUARIA

REGION HUANCAVELICA
AÑO: 2015

SACA TOTAL PRODUCCION RENDIMIENTO PRECIO CHACRA

CRIANZA
Nº DE ANIMALES TM KG/CABEZA S/KG
CARNES 2,340,570.00 11,678.45
ALPACA 36,037 927.01 25.72 4.46
GALLINA 180,940 306.90 1.70 7.06
CAPRINO 35,143 437.25 12.44 5.44
CUY 1,840,029 1,047.26 0.57 7.88
EQUINO 2,404 311.43 129.54 2.87
LLAMA 17,015 449.40 26.41 4.38
OVINO 146,988 1,702.17 11.58 5.47
PORCINO 40,681 1,437.23 35.33 5.35
VACUNO 41,333 5,059.80 122.42 5.08

SUB PRODUCTOS 433,586 26,621.46

FIBRA DE ALPACA 79,107 212.64 2.69 4.34

FIBRA DE LLAMA 8,583 16.27 1.90 2.83
HUEVO 44,804 477.33 10.65 4.73
LANA DE OVINO 279,072 1,702.17 6.10 1.44
LECHE DE CAPRINO 3,683 1,629.47 0.44 0.99
LECHE DE VACUNO 18,337 22,583.58 1.23 1.12

POBLACION DE GANADOS
Nº DE CABEZAS
ALPACA 362,104.00
GALLINA 380,324.00
CAPRINO 232,542.00
CUY 1,617,855.00
EQUINO 63,847.00
LLAMA 172,071.00
OVINO 1,172,238.00
PORCINO 144,165.00
VACUNO 247,801.00
VICUÑA 14,938.00

FUENTE.: Dirección Regional Agraria Huancavelica

70
 Anexo E
TABLA 11
Estadística pecuaria sobre el número de cabezas existente en el distrito de Huancavelica

DISTRITO DE HUANCAVELICA
POBLAC.1/ Unidades 4,500 4,550
Unid. (Saca) 3,500 2,090 170 160 180 190 195 200 180 175 180 165 155 140
(T.M.) 6.95 3.48 0.28 0.27 0.30 0.32 0.33 0.34 0.31 0.29 0.29 0.27 0.25 0.23
Precio en Ch.
6.27 6.15 6.14 6.17 6.20 6.23 6.28 6.29 6.30 6.33 6.35 6.37 6.38
(S/.x kg.)
Rendimiento 1.66 1.64 1.67 1.68 1.68 1.68 1.71 1.70 1.63 1.63 1.64 1.64 1.65
Aves Post. 1,100 603 680 650 630 610 580 510 650 620 600 585 570 550
(T.M.) 10.32 5.22 0.49 0.47 0.45 0.44 0.42 0.37 0.47 0.45 0.43 0.42 0.41 0.40
Precio en Ch.
3.65 3.60 3.61 3.65 3.60 3.67 3.67 3.67 3.67 3.67 3.67 3.67 3.67
(S/.x kg.)
Rendimiento 8.66 0.72 0.72 0.72 0.72 0.72 0.72 0.72 0.72 0.72 0.72 0.72 0.72
POBLAC.1/ Unidades 4,880 5,440
Unid. (Saca) 800 924 85 80 88 95 100 70 60 75 70 65 70 66
(T.M.) 85.57 110.95 10.20 9.48 10.56 11.47 12.13 8.52 7.16 8.97 8.37 7.78 8.39 7.92
Precio en Ch.
4.96 4.95 4.96 4.90 4.92 4.91 4.93 4.98
(S/.x kg.)

Cantidad de vacunos en
el distrito de
Huancavelica

FUENTE: Dirección Regional Agraria Huancavelica

71
FOTOGRAFIAS

72
FOTO 01: Letrero de la Estación Experimental Agraria “Callqui”

FOTO 02: Vacas dispuestas para la obtención de muestras,

Previamente al Inicio de ordeño.

73
FOTO 03: Obteniendo muestras de leche para evaluar mediante
la prueba de CMT in situ.

FOTO 04: Aplicando la solución CMT. a las muestras de leche para

Evaluarlos.

74
FOTO 05: Realizando el análisis de reacción de las muestras de leche

FOTO 06: Resultados de la reacción de la leche a la aplicación de la

solución del CMT.

75
 FOTO 07: Muestras obtenidas en los viales para su traslado al
laboratorio de sanidad animal de la UNH.

FOTO 08: Soluciones bioquímicas para la realización de las pruebas

en laboratorio.

76
FOTO 09: Algunos resultados de las colonias que se obtuvieron
Previamente como prueba.

FOTO 10: Resultados de colonias obtenidas mediante la

prueba de Agar Mac conkey; expuestas en
forma general, para su evaluación

77
FOTO 11: Resultados de colonias obtenidas con la prueba
de Agar Macconkey de la vaca Nancy, en sus 4 flancos
(ubre) expuesta como detalle regional

78
FOTO 12: Medios bioquímicos listos para ser utilizados

FOTO 13: Prueba bioquímica TSI. En tubos de ensayo

79
 FOTO 14: Prueba bioquímica LIA. En tubos de ensayo

FOTO 15: Prueba bioquímica de Citrato de Simmons en tubos

de ensayo.

80
 FOTO 16: Prueba bioquímica del Medio SIM. en tubos de
Ensayo.

FOTO 17: Protocolo para establecer las pruebas bioquímicas

en el desarrollo de la investigación.

81
FOTO 18: Resultados de las pruebas bioquímicas expuestas
en forma general para su respectiva interpretación

FOTO 19: Resultados obtenidos en forma regional (ubre) de

la vaca Alicia con la prueba en medios bioquímicos

82
FOTO 20: Resultados obtenidos de pezón anterior derecho
de la vaca Epifania.

FOTO 21: Resultados obtenidos de pezón anterior derecho

de la vaca Rufina

83
FOTO 22: Equipo de investigación y asesor en pleno

FOTO 23: Tesistas investigadores

84