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    Actividades para Práctica de Lípidos Ok

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    Hannya Cruz
    Este documento presenta los procedimientos y cálculos para realizar la extracción y análisis de lípidos de la yema de huevo en el laboratorio, incluyendo la preparación de reactivos, reacciones en la digestión de Kjeldahl y determinación de fósforo, y el análisis de resultados para calcular el porcentaje de fósforo en las muestras.

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    Actividades para práctica de lípidos ok

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    FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

    BIOQUÍMICA CELULAR Y DE LOS TEJIDOS I


    LABORATORIO

    Actividades para práctica EXTRACCIÓN Y ANÁLISIS DE LÍPIDOS DE


    LA YEMA DE HUEVO

    I. Realizar los cálculos para la preparación de reactivos a emplear en 5


    grupos de laboratorio de BCT I, considerando el volumen que empleará cada
    equipo y que un grupo tiene 10 equipos. Además recordar que de acuerdo a
    las concentraciones se deben emplear los materiales adecuados (pipetas,
    probetas, matraces aforados, etc).
    Presentar cálculos y procedimientos de preparación.

    - Reactivo 1: Con mucha precaución añadir 26 mL de H2SO4 concentrado en


    70 mL de agua destilada (enfriar con flujo de agua en la parte externa del
    recipiente), posteriormente agregar y disolver 2.5 g de molibdato de amonio,
    completar a 100 mL con agua destilada.

    - Reactivo 2: Disolver en agua: 14 g de bisulfito de sodio, 0.5 g de sulfito de


    sodio, 0.25 g de ácido 1 amino-2 naftol- 4 sulfónico, es importante disolver
    en ese orden y no agregar el siguiente reactivo hasta que se disuelva el
    anterior, finalmente llevar a 200 mL con agua destilada. Conservar en
    refrigeración donde es estable durante 2 semanas.

    - Solución estándar de fosfato: Disolver 0.4394 g de fosfato monopotásico en


    agua destilada y aforar a 1000 mL con agua (Solución Stock). Realizar una
    dilución 1:10 de la solución Stock.

    - Mezcla cloroformo-Metanol 2:1 V/V

    - Acetona

    - Cloruro de sodio al 1 %

    - Sulfato de sodio anhidro

    - Éter de petróleo

    - Ácido sulfúrico
    - H2O2 al 30%

    - Hidroxiquinona

    - NaOH 1N

    II Escriba las reacciones que se llevan a cabo en:


    a) Digestión de Kjeldahl
    b) Reacción de la Determinación de fósforo por el método de Fiske &
    Subbarow

    III
    Resultados
    - Graficar la curva estándar de fosfatos e interpolar las absorbancias de las
    muestras (fosforilados y no fosforilados).

    - Tomar en cuenta las diluciones de las muestras para determinar la cantidad


    de fósforo en los lípidos fosforilados y no fosforilados.

    - Calcular el porcentaje de fósforo presente en las muestras.

    Consideraciones:
    - La curva estándar se grafica con datos de Absorbancia vs Concentración
    (µg de Fósforo), tomando en cuenta la concentración de la solución
    estándar en µg/mL.

    Blanco 1 2 3 4 5

    Volumen de
    0 0.2 0.6 1.0 2.0 3.0
    solución estándar

    µg, de Fósforo 0
    - Solución estándar de fosfato: Disolver 0.4394 g de fosfato
    monopotásico en agua destilada y aforar a 1000 mL con agua (Solución
    Stock). Realizar una dilución 1:10 de la solución Stock.

    - PM del KH2PO4 = 136 Peso atómico del P = 31

    - Para obtener la concentración en µg de Fósforo de las muestras


    (Fosforilados y no Fosforilados), se puede emplear:

    a) La ecuación de la curva
    b) Interpolar el dato de absorbancia problema en la curva estándar
    (Excel o papel milimétrico)
    c) Capturando los datos en la calculadora

    - Finalmente calcular el porcentaje de fósforo presente en las muestras


    y compararlo con el valor teórico.

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