Pruebas Bioquimicas

Coral Almonte 19-1641
Microbiología industrial
Pruebas Bioquímicas.
El objetivo de la identificación bacteriana es proponer un tratamiento antibiótico efectivo, por eso es

importante caracterizar los diferentes agentes nocivos presentes en los productos a analizar. Debido a
esto es necesario hacer uso de diferentes pruebas de identificación, unas de las más efectivas son las
pruebas bioquímicas.
Estas ayudan a diferenciar los distintos grupos bacterianos y así mismo, permiten identificar un
organismo en particular. Para la realización de esta prueba es necesario que el cultivo esté puro.
A continuación se mencionan algunas de las pruebas bioquímicas utilizadas.
● Prueba de la catalasa.
Esta consiste en colocar en una lámina

portaobjetos, una colonia de cultivos sobre una gota
de peróxido de hidrógeno. La prueba es positiva si
se forma espuma, la mayoría de la bacteria aerobias
y anaerobias facultativas tienen catalasa.
Esta es una prueba efectiva en el caso de la

determinación de streptococcus y staphylococcus.
Los streptococcus son catalasa negativa y los
staphylococcus son catalasa positiva.
● Prueba de oxidasa
Se fundamenta en la obtención de la enzima

oxidasa bacteriana, se usa para la identificación de
bacterias gram negativas. Una prueba positiva
consiste en la oxidación del reactivo TMFD en el
disco por la presencia del sistema de citocromo
oxidasa bacteriano. Se muestra positiva al tornarse
de un color púrpura oscuro. Una reacción negativa
no presenta cambio de coloración.
● Prueba de SIM.
Esta prueba permite detectar la presencia de

sulfuro, indol y motilidad bacteriana. El indol
resulta de la degradación del triptófano, por la
enzima bacteriana triptofanasa.
Para realizar el test de indol, agregar dos gotas
de reactivo de kovacs, la formación de un anillo
rojo cereza indica la producción de indol. La
Formación de un anillo amarillo indica indol
negativo. La formación de sulfuro se presenta
por ennegrecimiento a lo largo de la línea de
siembra o en la totalidad del medio.
Por otro lado la motilidad se representa por el crecimiento de la bacteria en zonas aledañas al
sitio de inoculación.
● Prueba de hemólisis.
Existen microorganismos con capacidad de producir hemólisis, este fenómeno se puede observar tras
la inoculación del microorganismo en agar sangre. Las bacterias se clasifican según el tipo de
hemólisis.
-En la hemólisis alfa se observan halos verdosos por una hemólisis parcial de los glóbulos rojos,
donde hay una reducción de hemoglobina a metahemoglobina en el medio.
-Hemólisis beta, se observan halos incoloros por hemolisis total de los glóbulos rojos
-Hemólisis gamma, no se observan halos porque no hay hemolisis.
● Prueba de la ureasa.
La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea dando lugar a dos moléculas de amoniaco y dióxido
de carbono. Se utiliza el agar urea al cual se le agrega una solución de urea al 20% , para
conseguir una concentración final de 2%. Se le añade también el indicador “rojo fenol”. Si la
prueba es de color rojo naranja, esta es positiva, más si resulta de color fucsia, la prueba es
negativa.
● Prueba en agar Simmons citrato.
Medio de cultivo utilizado para caracterizar bioquímicamente a diferentes géneros

bacterianos. Un test positivo es indicado por la coloración azul del medio, indicativo de la
presencia de gérmenes que utilizan el citrato como única fuente de carbono, en el caso de ser
negativo, no hay crecimiento ni cambio de color.
● Prueba de lisina descarboxilasa.
Para esta prueba se usa el agar lia, si el microorganismo produce la enzima lisina
descarboxilasa, mostrará una reacción alcalina a través del medio, el fondo del tubo y la parte
inclinada permanecen de color púrpura. Si se observa ennegrecimiento del medio, la prueba
es sulfuro positivo, la prueba es negativa cuando se observe un color amarillo en el medio.
Esta prueba es útil para la identificación de enterobacterias.
● Prueba del Manitol.
Para esta prueba se usa el agar salado manitol, este medio permite el crecimiento de un grupo
determinado de bacterias, mientras inhibe el de otras. Contiene una alta concentración de
NaCl de 7.5%. Haciéndolo selectivo para staphylococcus, además contiene manitol y rojo de
fenol como indicador de pH. Si un organismo es capaz de fermentar el manitol, un
subproducto ácido es creado, este hace que el rojo de fenol cambie a amarillo.
● Prueba de la gelatinasa.
Esta prueba determina la capacidad de un microorganismo para producir enzimas de tipo

proteolítico, ósea se trata de comprobar la capacidad del microorganismos de metabolizar la
gelatina, como la gelatinasa, licuando. En una prueba negativa no se licua el medio.
● Prueba de la desoxirribonucleasa .
También llamada Prueba de la DNasa. Es una prueba enzimática que se emplea para
diferenciar distintas especies de Staphylococcus Aureus, que normalmente produce
desoxirribonucleasas, de otros Staphylococcus. Se añade HCl al cultivo y se deja reposar
entre 2 a 4 minutos. Si no se observa ninguna zona clara es negativo. Si sale un halo claro
alrededor del crecimiento bacteriano el resultado es positivo.

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A continuación se mencionan algunas de las pruebas bioquímicas utilizadas.

Esta consiste en colocar en una lámina

Esta es una prueba efectiva en el caso de la

Se fundamenta en la obtención de la enzima

Esta prueba permite detectar la presencia de

-Hemólisis gamma, no se observan halos porque no hay hemolisis.

● Prueba en agar Simmons citrato.

Medio de cultivo utilizado para caracterizar bioquímicamente a diferentes géneros

● Prueba de lisina descarboxilasa.

● Prueba del Manitol.

Esta prueba determina la capacidad de un microorganismo para producir enzimas de tipo

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