Orden de Reacción

1. La enzima Glicerol-3 fosfato deshidrogenasa se inactiva irreversiblemente en presencia de ciclohehanediona con una c

[CHD] (mM) 0.2 1

t (min) Enzima remanente activa ln(ERA)

(%)
0 100.0 100.0 4.60517019 4.60517019
10 92.2 77.8 4.52396013 4.35414143
20 93.9 56.8 4.54223039 4.03953633
30 88.4 46.3 4.48187197 3.83514196
40 76.2 36.6 4.33336146 3.60004824
60 72.1 20.4 4.27805404 3.0155349
90 60.8 9.10 4.10758979 2.20827441
120 54.6 4.30 4.00003388 1.45861502

120.0 5
4.5 f(x) = − 0.0263639
0.0052218
100.0 0.999359944
R² = 0.973553438
100.372575309941 exp( − 0.005221885872125
f(x) = 99.5386691137798 0.026363917956255 x ) 4
0.999359944600631
R² = 0.973553438330406
3.5
80.0
3
60.0 2.5
2
40.0
1.5
1
20.0
0.5
0.0 0
0 20 40 60 80 100 120 140 0 20

0.03

0.025 f(x) = 0.026384615384615 x

R² = 0.999991500212495 Conclusión:
0.02

0.015

0.01

0.005

0
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 1.1
 0.005

0
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 1.1

Ensayo actividad d

2. La enzima málico deshidrogenasa cataliza la reducción de oxaloacetato con NADH, a malato y NAD+. En el siguiente e

t Absorbancia
(min) (nm) 1.6
0.00 1.34
0.10 1.28 1.4
0.20 1.26 f(x) = 0.092415277935468 x² − 0.348424921445195 x + 1.3235635
1.2 R² = 0.993031044928666
0.30 1.22
0.50 1.16 1
0.85 1.10 0.8
1.50 1.02
2.00 0.99 0.6

0.4

0.2

0
0.00 0.50 1.00 1.50 2.00

1.6

1.4
f(x) = −0.092415277935468
0.345945945945946x²x−+0.348424921445195
1.32810810810811 x + 1.3235635
1.2 R² = 0.979669935422148
0.993031044928666
1

0.8

0.6

0.4

0.2

0
0.00 0.50 1.00 1.50 2.00

Efecto de la concentración de enzima

3. En el siguiente experimento con la enzima fosfatasa ácida de semillas de trigo germinadas se varió la concentración d

[enz] (ml) [FP] 0.1 mM [FP] 10 mM

Vel. Vel.
(nmol/min) (nmol/min)
 0 0.000 0.0000
5 1.920 6.3070
10 4.059 13.169
15 5.956 19.145
20 7.766 25.694
25 9.479 32.282
30 11.844 37.882

40.000
f(x) = 1.27229285714286 x + 0.12689285714286
35.000 R² = 0.999592397114046

30.000

25.000

20.000

15.000

10.000 f(x) = 0.388264285714286 x + 0.036607142857145

R² = 0.998770907941175
5.000

0.000
0 5 10 15 20 25 30 35

1.4

1.2

0.8

0.6

0.4

0.2

0
1 2 3 4 5 6

Cinética de una enzima

4. La actividad de la Acetil-CoA carboxilasa, medida con tres diferentes concentraciones de enzima y a diferentes concen

[Enz] 0.1 0.2 0.5

(mg de proteína)

[AcetilCoA] Vel (mmol/min)

(mM)
 0.05 0.275 0.546 1.373
0.14 0.482 1.001 2.502
0.23 0.580 1.185 2.891
0.32 0.642 1.385 3.463
0.50 0.755 1.494 3.656
0.59 0.766 1.497 3.810

4.500

4.000

3.500 f(x) = − 11.3575837742504 x² + 11.4092901234568 x + 0.937300881834215

R² = 0.979927115842803
3.000

2.500

2.000

1.500
f(x) = − 4.96017048794826 x² + 4.82224720752499 x + 0.354983303938859
1.000 R² = 0.988223681110189

0.500 f(x) = − 1.88756613756614 x² + 2.06760582010582 x + 0.196681481481481

R² = 0.987551974460723
0.000
0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0.70

8
f(x)
f(x) == −− 0.164285714285714 x²
x² ++ 2.10314285714286
f(x) = − 0.202107142857143
0.228571428571428 x² + 2.34155 x xx+ ++0.768199999999997
2.51914285714286 0.964000000000002
0.573000000000004
7 R²
R² == 0.985043674362004
R² = 0.987326549896803
0.991695169843756
6

0
0 1 2 3 4 5 6 7

3.5 f(x) = 0.126306305475122 x + 1.13065649129169

R² = 0.997372636641469
3

2.5

2
f(x) = 0.064276650854375 x + 0.545212683293329
1.5 R² = 0.998813141543636

0.5 f(x) = 0.025387881950584 x + 0.221007604726011

R² = 0.997713201432659
 2.5

2
f(x) = 0.064276650854375 x + 0.545212683293329
1.5 R² = 0.998813141543636

0.5 f(x) = 0.025387881950584 x + 0.221007604726011

R² = 0.997713201432659
0
0 5 10 15 20 25

Problema sobre un ensayo de actividad e

5. Problema sobre un ensayo de actividad enzimática. Considere a la enzima Invertasa, que cataliza la hidrólisis de Sacar

𝑣=(𝑉_𝑚𝑎𝑥
.𝑆)/(𝐾_𝑚+𝑆
)

𝑣/𝑉_𝑚𝑎𝑥 𝑣/𝑉_𝑚𝑎𝑥 =
=𝑆/(𝐾_𝑚+𝑆)

S 0.25
Km 0.5

¿qué velocidad de catálisis se observará?

𝑉_𝑚𝑎𝑥=𝑘_𝑐𝑎𝑡 𝑥 𝑉_𝑐𝑎𝑡= 1.46E-04 mmol min-1

𝐸_𝑇
𝑘_𝑐𝑎𝑡 175 min-1
𝐸_𝑇 2.50E-06 mmol

¿qué fracción representa esto de la Vmax que se podría calcular en esta reacción si se variase la cantidad de sacarosa?

𝑣/𝑉_𝑚𝑎𝑥 = 0.33333333

¿Cuánto sustrato habría que añadir para que la velocidad observada alcanzase 0.95% de la Vmax?

𝑉_𝑚𝑎𝑥=𝑆/((𝑘_𝑚+𝑆))

𝑆=(0,95 S 9.5 mM sacarosa

0,95=𝑆/((𝑘_𝑚+𝑆)) 𝑘_𝑚)/((1−0,95
))

¿Qué importancia podría tener esto para la posible aplicación industrial de la enzima?
Este problema sugiere que la cantidad de sustrato es uno de los factores importantes a considerar cuando se desea emplea

Problema sobre una reacción con dos sustratos

6. La enzima Aspartato transaminasa, que cataliza la reacción:

se realizaron los siguientes tres experimentos el siguiente experimento:

[Asp]  = 1 mM [OxG] = 0,02 mM

[OxG] Vel 1/[OxG] 1/Vel [Asp] Vel 1/[Asp]

(mM) (mmol/min) (mM) (mmol/min)
0.002 0.444 500 2.25225225 0.007 0.411 142.857143
0.018 2.031 55.5555556 0.49236829 0.048 1.268 20.8333333
0.037 2.781 27.027027 0.35958288 0.171 1.722 5.84795322
0.063 3.336 15.8730159 0.29976019 0.335 1.85 2.98507463
0.094 3.756 10.6382979 0.26624068 0.547 1.983 1.82815356
0.493 4.324 2.02839757 0.23126735 1.016 2.031 0.98425197

5
4.5 a) Calcule Km y Vmax para ca
f(x)
f(x) == 0.744879868908388
0.815287879384954 ln(x)
ln(x) ++ 5.18278582783657
4.57440289476066
R²
R² == 0.968174353420292
0.98680905104731
4
3.5
3
2.5 b) ¿Cambian las Vmax? Expli

2 f(x) = 0.332942486828982 ln(x) + 2.17928492425534

R² = 0.965866204498476
1.5
1
0.5 c) Explique que pasó en el se
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2

3
d) ¿Cúantos y cuáles valores
2.5
f(x) = 0.013598507338267 x + 0.492557044029396
f(x)R²==0.004031855431742
0.999775790616448x + 0.239585817661356
f(x) = 0.013424019060535 x + 0.218796179059565
R²2= 0.999515788820015
R² = 0.999990881970881

1.5 e) ¿Qué conclusión se podría

0.5

0
-100 0 100 200 300 400 500 600
 Problema sobre la energía de activación

7. Para la enzima catalasa se realizó un experimento en el que se determinó la velocidad de descomposición del peróxido

T T vel(sin catalasa) vel(con catalasa)

(ºC) (K) (mol/s) (mol/s con 10nM·Et)
1/T (K) Ln (Vel)
4 277 0.00361011 4.00E-09 -1.93E+01 0.0410
10 283 0.00353357 7.74E-09 -1.87E+01 0.0464
15 288 0.00347222 1.31E-08 -1.82E+01 0.0476
20 293 0.0034130 2.09E-08 -1.77E+01 0.0497
25 298 0.0033557 3.52E-08 -1.72E+01 0.0530
30 303 0.00330033 5.74E-08 -1.67E+01 0.0598
Suponiendo que la concentración de peróxido de hidrógeno fue suficiente para garantizar la saturación de la enzima, ca

Sin enzima
7.00E-08 -1.50E+01
0.00325
-1.55E+01
6.00E-08
f(x) = 2.74487361456208E-09 exp( 0.101901323391761 x ) -1.60E+01
5.00E-08 R² = 0.999415393955322
-1.65E+01

4.00E-08 -1.70E+01
-1.75E+01
3.00E-08
-1.80E+01
2.00E-08
-1.85E+01

1.00E-08 -1.90E+01
-1.95E+01
0.00E+00
0 5 10 15 20 25 30 35 -2.00E+01

Con enzima
0.0700 -2.6
0.00325 0.00
0.0600 -2.7
f(x) = 0.000643884892086 x + 0.038422661870504
0.0500 R² = 0.942514582192855
-2.8

0.0400 -2.9

0.0300
-3

0.0200
-3.1
0.0100
-3.2
0.0000
0 5 10 15 20 25 30 35 -3.3
 𝑚=ln⁡(𝑘_2/𝑘_1 ) 𝑚=𝑙𝑛 𝑚=𝑙𝑛(𝑣_2/𝑣_1 )
𝑚=∆𝑦/∆𝑥 𝑚=(∆ ln⁡ 𝑚=(𝑙𝑛𝑘_2−𝑙𝑛𝑘_1) /(∆ 1/𝑇) (((𝑘_2.𝑅)/(𝑘_1. /(∆ 1/𝑇)
〖 (𝑘) 〗 )/(∆ /(1/𝑇_2 −1/𝑇_1 ) 𝑅)))/(∆ 1/𝑇)
1/𝑇)

𝐸_𝑎=𝑚 𝑥 𝑅 𝑥 −1

Sin enzima m -8556.3 Ea 17.0013681

Con enzima m -1086.1 Ea 2.1580807
R 1.987 cal/mol K

Efecto de temperatura sobre una en

8. Los valores de Km y Vmax siguientes se determinaron midiendo la hidrólisis de bromuro de acetilcolina catalizada por

T T Km Kcat
 (ºC) (K) (mM) (mmol min-1 pmol_[E]t-1)
1/T (K)
20 293 0.00341297 0.403 0.307
25 298 0.0033557 0.375 0.322
30 303 0.00330033 0.335 0.340
35 308 0.00324675 0.305 0.362
45 318 0.00314465 1.500 0.013

1.6

1.4 f(x) = 0.0002724654 x³ − 0.0223298383 x² + 0.589555885 x − 4.6420350404

1.2

1 Importante
0.8

0.6

0.4
f(x) = − 8.61257862E-05 x³ + 0.007114743935 x² − 0.187916262354 x
0.2 + 1.91063881402

0
15 20 25 30 35 40 45 50

0
0.0031 0.00315 0.0032 0.00325 0.0033 0.00335 0.0034 0.00345 𝐸_𝑎=𝑚 𝑥 𝑅 𝑥 −
-0.5
-1
f(x) = − 989.423624225362 x + 2.19147320378555
-1.5 R² = 0.9942418813915

-2
-2.5
-3
-3.5
-4
-4.5
 -2
-2.5
-3
-3.5
-4
-4.5
-5

Este punto presenta una mezcla de los efectos de la temperatura sobre la velocidad de catálisis y sobre la velo

Efecto del pH sobre la Vmax

9. Los siguientes valores de velocidad inicial de enzimas fueron obtenidos para la alfa-Quimotripsina actúando sobre un

pH Vel
5.4 10
5.6 19
5.8 32
6.4 99
6.5 112
6.6 141
6.8 192
7.2 260
7.4 280
7.8 300
8.0 328
8.4 331
9.0 327

350
a) Determine los valores de p
f(x) = 10.701694 x⁴ − 327.27361 x³ + 3682.2115 x² − 17956.333 x + 32043.073
300
A partir de la curva dibujada,
250
b) Diga que residuos de amin
200

150 Lo anterior nos indica que pod

100 c) Si el experimento se exten

50 Finalmente, la línea punteada

0
5 5.5 6 6.5 7 7.5 6,71
8 8.5 9 9.5 Importante Consecuentemente, se espera

pKa

Problemas sobre inhibi

10. Se realizaron estudios de inhibición para dos enzimas diferentes presentes en el suero bovino. Se varió la concentraci
Enzima: Fosfatasa alcalina de suero bovino, inhibidor: Oxalato de Bromolevamisol

a) [Bromolevamisol] 0 8
(mM)
[Sustrato] [FP]
(mM) Ve locidades iniciales (
1/[FP]
0.1 10 0.231 0.210
0.3 3.33333333 0.431 0.369
0.7 1.42857143 0.607 0.488
1.3 0.76923077 0.751 0.599
1.8 0.55555556 0.811 0.657
2.6 0.38461538 0.912 0.657
4.1 0.24390244 0.957 0.688
5.8 0.17241379 0.981 0.741

1.2

1 f(x) = 0.195199693948842 ln(x) + 0.683009946557969

R² = 0.990817738529057
0.8
f(x) = 0.13174240786445 ln(x) + 0.532824753941405
R² = 0.978160430755103
0.6
f(x) = 0.096442054724811 ln(x) + 0.434978301393455 3
R² = 0.95834757522538
0.4 f(x) = 0.04658
f(x) = 0.046297344489476 ln(x) + 0.283568868143896 2.5 R² = 0.999998
R² = 0.96032162626732
0.2
2
0
0 1 2 3 4 5 6 7 1.5

7 1

6 f(x) = 0.344283533218011 x + 2.94227777964594

R² = 0.990350776654396 0.5
5 f(x) = 0.35455675145809 x + 1.7839295471149
R²
f(x)==0.987976835296905
0.342272159929166 x + 1.40719428011574 0
4 R² ==0.991902653163242
f(x) 0.334933038422027 x + 1.04572605785566 0 5
R² = 0.992653741339562
3

0
0 2 4 6 8 10 12

Enzima: Transaminasa Glutámico Pirúvica.

b)
[2hidroxisuccínico] 0.0 1.0
(mM)
[Sustrato] [Glu]
(mM) Ve locidades iniciales (
1/[Glu]
0.60 1.66666667 0.59 0.48
1.40 0.71428571 1.12 0.91
2.90 0.34482759 1.63 1.43
5.20 0.19230769 1.94 1.70
8.00 0.1250000 2.19 1.94
10.3 0.09708738 2.28 2.06
16.0 0.0625000 2.32 2.33
25.1 0.03984064 2.62 2.53

2.5 f(x) = 0.538539102546274 ln(x) + 0.96475519419334

f(x)
R² ==0.979700887344011
0.556676979843836 ln(x) + 0.771653442800645
f(x)
R² ==0.997513012132882
0.548345620517096 ln(x) + 0.663885725413427
R² = 0.97952900064661
2 f(x) = 0.529730511396765 ln(x) + 0.404009760662099
R² = 0.984949413887941
1.5

0.5

0
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00

4.5

4 f(x) = 2.26826677629855 x + 0.3732036921291

R² = 0.999708280833216
3.5

2.5 f(x) = 1.3516946068386 x + 0.361210125800754

R² = 0.99904243815481
2
f(x) = 1.02493762262445 x + 0.37146704936323
R² = 0.999177189184087
1.5 f(x) = 0.794566218590812 x + 0.356033899493989
R² = 0.998401501566645
1

0.5

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8
11. El siguiente experimento fué realizado con la fosfoenolpyruvato:pyruvil tranferasa de streptococcus sp. Esta enzima

[PEP]  75 200
(mM)
Velocidades
[FSM] (nmol min-1 mgProt-1)
(mM) 1/V
0 0.73 2.49 1.3698630
5 0.53 2.29 1.88679245
10 0.42 2.15 2.38095238
25 0.26 1.78 3.84615385
50 0.16 1.40 6.2500000
100 0.09 0.98 11.1111111

2.5
f(x) = 0.000141875495397 x² − 0.028782177915981 x + 2.44646058167185
R² = 0.996723021220254
2
𝐼_ 13
5
1.5 0
2,5/2 𝐼_ 62
5
1 0

0.5 f(x) = 0.000108722029145 x² − 0.016246372172429 x + 0.639373971099323

R² = 0.933816399139056
0,72/2
0
0 20 40 60 80 100 120

12.0000000

f(x) = 1210.8843537415 x − 5.03401360544218

10.0000000 R² = 1

8.0000000

6.0000000 f(x) = 664.285714285714 x − 2.60714285714286

R² = 1
4.0000000
f(x) = 394.122731201383 x − 1.40881590319793
R² = 1
2.0000000 f(x) = 229.900332225914 x − 0.684385382059801
f(x)
R² ==1174.013347614732 x − 0.433385515366235
f(x)
R² ==1116.190790559498 x − 0.17934752709468
0.0000000 R² = 1
0.004 0.005 0.006 0.007 0.008 0.009 0.01 0.011 0.012 0.013 0.014
 Orden de Reacción

ciclohehanediona con una cinética aparente de primer orden. Sin embargo, cuando se varía la concentración del agente inactivante

1/t 1/E

0.00000000 0.01 0.01

0.10000000 0.01084599 0.01285347
0.05000000 0.01064963 0.01760563
0.03333333 0.01131222 0.02159827
0.02500000 0.01312336 0.0273224
0.01666667 0.01386963 0.04901961
0.01111111 0.01644737 0.10989011
0.00833333 0.01831502 0.23255814

5
4.5 f(x) = − 0.026363917956255
0.005221885872125 x + 4.60888901566075
4.60054620297514
0.999359944600631
R² = 0.973553438330406 [CHD] (mM) 0.2
4 [CHD] (mM) 1
3.5
3 v = k2 [CHD][E]
2.5
k2 0.0264
2
k2 0.44
1.5
1
0.5
0
0 20 40 60 80 100 120 140

Las constantes aparentes calculadas varían linealmente con la cantidad de CHD empleada en el experimento y la línea cruz
En condiciones en las que [CHD] es mucho mayor que [E], la enzima se agota sin que la [CHD] disminuya apreciablemente
 Ensayo actividad de una enzima

to y NAD+. En el siguiente experimento se siguió la desaparición del NADH, midiendo su absorbencia a 340 nm (e = 6220 M-1 cm-1).

1.6

1.4
424921445195 x + 1.32356354225955 f(x) = 0.084590880472055 x² − 0.335960141741379 x + 1.3268733615706
1.2 f(x) = − 0.32857142857143 x + 1.32285714285714
R² = 0.995567366157458
R² = 0.994360902255639
1

0.8

0.6

0.4

0.2

0
1.50 2.00 2.50 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50

Ley de Lambert-Beer

𝐴=𝜀𝑐𝑙
∆𝐴=𝜀∆𝑐𝑙
∆𝑐/∆𝑡=(∆𝐴
810810810811
424921445195 x + 1.32356354225955 ∆𝑐=∆𝐴/𝜀𝑙 = /∆𝑡)/𝜀𝑙 = 𝑚=∆𝐴/∆𝑡

m -0.3286 Uabs/min-1
l 1 cm
V 0

1.50 2.00 2.50

oncentración de enzima

se varió la concentración de la enzima en cubeta a dos concentraciones de sustrato y se obtuvieron los resultados siguientes:

V/E V/E
 0.384 1.2614
0.4059 1.3169
0.39706667 1.27633333
0.3883 1.2847
0.37916 1.29128
0.3948 1.26273333

40.000
f(x) = 1.26721714285714 x + 0.23686666666667
35.000 R² = 0.999385492331834

30.000

25.000

20.000

15.000

10.000 f(x) = 0.3868 x + 0.068333333333335

R² = 0.998058091383656
5.000

0.000
30 35 0 5 10 15 20 25 30 35

a) ¿Como varia la velocidad de la reacción en función de la cantidad de enzima añadida?

La velocidad aumenta linealmente con la concentración de proteína, esto es lo que cabría esperar, debido a q

b) ¿Qué pasa si dividimos la velocidad registrada por la cantidad de enzima añadida al ensayo?

c) ¿Utilizando la ecuación de Michelis-Menten explique sus respuestas a las preguntas anteriores?

5 6

nzima y a diferentes concentraciones de sustrato fué la siguiente

 V/[E] V/[E] V/[E] 1/V 1/V 1/V 1/Ac-CoA
2.75 2.73 2.746 3.63636364 1.83150183 0.72833212 20
4.82 5.005 5.004 2.0746888 0.999001 0.39968026 7.14285714
5.8 5.925 5.782 1.72413793 0.84388186 0.34590107 4.34782609
6.42 6.925 6.926 1.5576324 0.72202166 0.28876697 3.125
7.55 7.47 7.312 1.32450331 0.66934404 0.27352298 2
7.66 7.485 7.62 1.30548303 0.66800267 0.26246719 1.69491525

a) Calcular para cada experimento el valor de Km y el valor de Vmax.

b) ¿Son los valores de Km y Vmax iguales o diferentes?

c) Explique si lo que observó es lo que esperaba obtener

d) Sabiendo que la enzima pesa 220 000 grs/mol, haga una gráfica de Vmax vs mmol de enzima.

e) ¿Qué represnta la pendiente de esta gráfica?

f) ¿En qué se parece el valor anterior a la Actividad específica = Vmax/mg de proteína en mmol min-1 mg de enzima-1?

g) ¿Qué pasa con la medida de actividad específica cuando la enzima no está pura?
re un ensayo de actividad enzimática

ataliza la hidrólisis de Sacarosa a fructosa y glucosa. Esta enzima posee una Km para sacarosa de 0.5 mM y una constante catalítica

𝑣/𝑉_𝑚𝑎𝑥 = 0.333333

mM
mM

e la cantidad de sacarosa?

mM sacarosa

erar cuando se desea emplear una enzima para aplicaciones industriales. En otras palabras, si el producto a tratar, que en este caso po

ción con dos sustratos

 [OxG] = 0,5 mM

1/Vel [Asp] Vel 1/[Asp] 1/Vel

(mM) (mmol/min)
2.43309002 0.007 0.468 142.857143 2.13675214
0.78864353 0.048 2.017 20.8333333 0.49578582
0.58072009 0.171 3.317 5.84795322 0.30147724
0.54054054 0.335 3.866 2.98507463 0.25866529
0.50428643 0.547 4.123 1.82815356 0.24254184
0.49236829 1.016 4.324 0.98425197 0.23126735

) Calcule Km y Vmax para cada sustrato

) ¿Cambian las Vmax? Explique su respuesta

) Explique que pasó en el segundo experimento, con respecto al tercero.

) ¿Cúantos y cuáles valores de Km debo considerar para describir la afinidad de la enzima por sus substratos?

) ¿Qué conclusión se podría sacar de esos datos?

de activación

descomposición del peróxido de hidrógeno en ausencia ó en presencia de 10 nM de enzima en el ensayo

vel(con catalasa)
(mol/s con 10nM·Et)
Ln (Vel)
-3.19418321
-3.07045582
-3.04492252
-3.001750
-2.93746337
-2.816750
saturación de la enzima, calcular la energía de activación de la reacción con o sin enzima y discuta sus resultados. (R=1.987 cal/mol

-1.50E+01
0.00325 0.0033 0.00335 0.0034 0.00345 0.0035 0.00355 0.0036 0.00365
-1.55E+01
-1.60E+01
-1.65E+01
-1.70E+01 f(x) = − 8556.26128140873 x + 11.5503318754267
R² = 0.999721559689236
-1.75E+01
-1.80E+01
-1.85E+01
-1.90E+01
-1.95E+01
-2.00E+01

-2.6
0.00325 0.0033 0.00335 0.0034 0.00345 0.0035 0.00355 0.0036 0.00365
-2.7

-2.8

f(x) = − 1086.13444418447 x + 0.733510204401762

-2.9 R² = 0.951913011000131

-3

-3.1

-3.2

-3.3
 𝑚=𝑙𝑛(𝑣_2/𝑣_1 )
𝑅)/(𝑘_1. /(∆ 1/𝑇)
∆ 1/𝑇)

kcal/mol
kcal/mol

temperatura sobre una enzima

e acetilcolina catalizada por la esterasa bovina a diferentes temperaturas:

Kcat
mmol min-1 pmol_[E]t-1)
Ln (Kcat)
-1.18090753
-1.13320373
-1.07880966
-1.01611107
-4.34280592

a) ¿Qué intervalo de termperaturas deberían emplearse como datos para calcular la energía de activación de la reacción

Al cambiar la temperatura las constantes de velocidad cambián y esto afecta el valor de Km. Esto es lógico, ya que la temp
En las temperaturas más altas se observa un claro efecto de desnaturalización de la proteína y por tanto una caida en la c

b) Para ralizar el cálculo anterior: ¿debería emplearse los valores de Km o de kcat?

Dado que la energía de activación que deseamos medir es la del proceso catalítico, debemos considerar sólamente los pun

c) ¿Por qué varía Km con la temperatura?

𝐸_𝑎=𝑚 𝑥 𝑅 𝑥 −1

R 1.987 cal/mol K
m -989.42
Ea 1.96597754 kcal/mol
ad de catálisis y sobre la velocidad de desnaturalización de la proteína.

tripsina actúando sobre un sustrato artificial (ester etílico de acetil-L-triptofano):

) Determine los valores de pKa(s) del (los) grupo(s) involucrado(s) en este comportamiento.

partir de la curva dibujada, se puede ver que el punto de inflexión de la curva es paroximadamente de 6.7, lo que se da a un valor de a

) Diga que residuos de aminoácido podrían responsables de esta respuesta.

o anterior nos indica que podría tratarse de algún aminoácido como la histidina. Menos probables, pero no se pueden descartar, serían

) Si el experimento se extendiera hacia la región más alcalina de la escala de pH que cabría esperar (explique su respuesta).

nalmente, la línea punteada de la figura anteríor indica de manera aproximada lo que se espera observar a valores de pH mucho más

onsecuentemente, se espera a que un pH superior a 10 u 11, la actividad comenzará a disminuir abruptamente y para un pH de 12 o 13

Problemas sobre inhibición

vino. Se varió la concentración de sustrato a en ausencia y en presencia de tres concentraciones diferentes de inhibidores de cada en
 16 40 0 8 16 40

s iniciales (mmol min-1mgProt-1) 1/ Ve locidades iniciales (mmol min-1mgProt-1)

0.191 0.158 4.32900433 4.76190476 5.23560209 6.32911392

0.309 0.239 2.32018561 2.71002710 3.23624595 4.18410042
0.425 0.277 1.64744646 2.04918033 2.35294118 3.61010830
0.467 0.304 1.33155792 1.66944908 2.14132762 3.28947368
0.53 0.319 1.23304562 1.52207002 1.88679245 3.13479624
0.546 0.328 1.09649123 1.52207002 1.83150183 3.04878049
0.561 0.351 1.04493208 1.45348837 1.78253119 2.84900285
0.558 0.344 1.01936799 1.34952767 1.79211470 2.90697674

Interceptos [Bromolevamisol]
(mM)
0.956 0
1.330 8
1.700 16
2.820 40

3
f(x) = 0.046589285714286 x + 0.956071428571429
2.5 R² = 0.999998016716727

1.5

0.5

0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
 2.0 5.1 0.0 1.0 2.0 5.1

s iniciales (mmol min-1mgProt-1) 1/ Ve locidades iniciales (mmol min-1mgProt-1)

0.38 0.24 1.69491525 2.08333333 2.63157895 4.16666667

0.78 0.51 0.89285714 1.0989011 1.28205128 1.96078431
1.19 0.87 0.61349693 0.6993007 0.84033613 1.1494253
1.64 1.19 0.51546392 0.58823529 0.6097561 0.84033613
1.94 1.56 0.4566210 0.51546392 0.51546392 0.64102564
1.99 1.74 0.43859649 0.48543689 0.50251256 0.57471264
2.24 1.89 0.43103448 0.42918455 0.44642857 0.52910053
2.25 2.09 0.38167939 0.39525692 0.4444444 0.4784689

Interceptos [2hidroxisuccínico]
(mM)
0.73 0.0
1.03 1.0
1.34 2.0
2.28 5.1

2.5

f(x) = 0.304193051514633 x + 0.729009070682869

2 R² = 0.99998655352909

30.00 1.5

0.5

0
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0

1.6 1.8
 Problema sobre inhibición

eptococcus sp. Esta enzima participa en la síntesis de la pared celular de las bacterias y cataliza la transferencia de un grupo piruvilo

1/V 1/[PEP] 
0.40160643 0.01333333
0.43668122 0.0050000
0.46511628
0.56179775
0.71428571
1.02040816

a) Identifique el tipo de inhibición que se presenta

Para identificar el tipo de inhibidor que actúa, se pueden emplear diversas estrategias, por ejemplo, se puede
mM
Importante Dado que las medidas de actividad se realizan sin añadir producto, una velocidad negativa carec
mM
El resultado anterior nos indica que la cinética de esta enzima no es hiperbólica, por lo que no podemos traza

b) Calcule el valor de la I50 para este inhibidor a la concentraciones más baja y más alta de sustrato emplea

Como puede observarse el valor de I50 decrese cuando hay menor cantidad de sustrato.

El valor de I50 nos indica cuanto inhibidor requerimos para inhibir la actividad de la enzima a la mitad en una

b-1) ¿Qué diferencias observa entre este parámetro calculado con diferentes concentraciones de sustrato?

Importante Es evidente que el resultado nos dice que si hay más sustrato disponible el inhibidor será menos

c) Suponga que encuentra reportados en la literatura otros inhibidores de esta enzima que actúan por un m

Como puede verse, si otros inhibidores se quisieran comparar con este, primero habría que asumir que el mec

En segundo término, los valores de I50 tendrán que haber sido determinados con la enzima ensayada en cond

Importante La respuesta a la pregunta que se plantea en el problema es NO. (no es posible comparar los va
ción del agente inactivante en la cubeta se observa que la cinética se modifica. Explique este resultado calcule el valor real de la con

Pendiente
-0.0052 0.0052
-0.0264 0.0264

mM-1 min-1
M-1 s-1

l experimento y la línea cruza el punto x,y (0,0). Esto nos indica que el orden de reacción para la CHD es también de 1 y la pendiente d
disminuya apreciablemente
40 nm (e = 6220 M-1 cm-1). Si se emplearon 35 ng de proteína de la preparación enzimática, en una cubeta de 3 mL, para este exper

1.3268733615706

2.00 2.50

=∆𝐴/∆𝑡

esultados siguientes:
e cabría esperar, debido a que, si tomamos como referencia la ecuación de Michaelis-Menten, notaremos que la velocidad es proporcio

dida al ensayo?

guntas anteriores?
mol min-1 mg de enzima-1?
M y una constante catalítica de 175 min-1. Si se mide su actividad en presencia de 0.25 mM de sacarosa con 25 pmol de enzima en la

a tratar, que en este caso podría ser un almibar hecho a base de sacarosa, posee una concentración de sustrato muy baja, o sea que nu
sultados. (R=1.987 cal/mol ºK)
de activación de la reacción catalizada por la enzima?

sto es lógico, ya que la temperatura también puede afectar la unión del sustrato a la proteína y este proceso se refleja en el valor de Km
y por tanto una caida en la catálisis.

onsiderar sólamente los puntos que reflejan el efecto de la temperatura sobre la reacción catalizada.
 lo que se da a un valor de actividad de aproximadamente la mitad del máximo observado a un pH entre 8.5 y 9

se pueden descartar, serían los carboxilatos de Asp y Glu o el grupo SH de una cisteína libre (es decir que no esté formando puente de

que su respuesta).

a valores de pH mucho más alcalinos. En esas condiciones, la desprotonación masiva de muchos aminoácidos, es decir casi todas las his

ente y para un pH de 12 o 13 la enzima presentará una actividad nula. Esto es casi siempre cierto, pero cabe aclarar que algunas prote

es de inhibidores de cada enzima. En cada caso encontrar:

erencia de un grupo piruvilo a un precursos del péptidoglicano, liberando fosfato. La fosfomicina (FSM) es un antibiótico sintetizado

egias, por ejemplo, se pueden ordenar los datos de manera que se tienen dos valores de velocidad y dos concentraciones de sustrato pa

una velocidad negativa carece de sentido, porque tendría que generarse sustrato en lugar de desaparecer.

or lo que no podemos trazar rectas, sino que deberíamos trazar curvas en esta figura. Por lo que lo único que podemos decir del tipo d

más alta de sustrato empleadas en el experimento.

la enzima a la mitad en una cierta condición.

ncentraciones de sustrato?

ible el inhibidor será menos efectivo y refleja la existencia de un componente competitivo en la inhibición, lo que no significa que la inh

enzima que actúan por un mecanismo semejante a este compuesto, pero descubre que en varios casos los autores emplearon diferen

abría que asumir que el mecanismo de inhibición es el mismo. Esto suele hacerse en la investigación farmacológica, ya que a menudo lo

la enzima ensayada en condiciones idénticas, excepto por la adición del inhibidor en estudio.

o es posible comparar los valores puesto que no fueron medidos bajo las mismas condiciones)
alcule el valor real de la constante de velocidad de la reacción

mbién de 1 y la pendiente de esta gráfica nos indica el valor de la constante de 2do orden.
ta de 3 mL, para este experimento, determine la actividad de la enzima en unidades internacionales y la actividad específica de esta
que la velocidad es proporcional a la Velocidad máxima y a su vez la Vmax es proporcional a la concentración total de enzima añadida
on 25 pmol de enzima en la cubeta

rato muy baja, o sea que nuestro jarabe está muy diluído, deberemos añadir mucha más enzima, puesto que ésta estaría trabajando m
o se refleja en el valor de Km.
o esté formando puente de disulfuro. Aunque los pKa de los grupos R de estos últimos 3 aminoácidos en su forma libre se encuentran r

os, es decir casi todas las histidinas, los tioles y la gran mayoría de lisinas, así como muchas argininas, perderán su carga positiva provo

e aclarar que algunas proteínas de bacterias alcalofílicas y que se encuentran en medios extremos pueden soportar pH cercanos a 14 s
s un antibiótico sintetizado por ciertas bacterias del grupo streptomyces que inhibe a esta enzima. Usando el fosfoenolpiruvato (PEP

ncentraciones de sustrato para diferentes concentraciones de inhibidor.

ue podemos decir del tipo de inhibición con estos datos es que podría ser complejo y que se necesita más información para determinar

o que no significa que la inhibición sea realmente competitiva.

s autores emplearon diferentes concentraciones de PEP para estudiar el efecto del inhibidor. ¿Sería válido comparar los valores de K

cológica, ya que a menudo los compuestos a ensayar son iguales en su estructura química, excepto por uno o dos substituyentes.
actividad específica de esta preparación.
ón total de enzima añadida
ue ésta estaría trabajando muy por debajo de su capacidad máxima. Por otro lado, una alternativa para ahorrar enzima, sería tratar el
 forma libre se encuentran relativamente alejados de 7 (4.7 para los carboxilatos y 8 para el tiol), en el interior de las proteínas y espec

derán su carga positiva provocando la desestabilización de numerosos puentes de sal en la proteína, con lo que la estructura se verá sev

soportar pH cercanos a 14 sin perdida de la actividad.

 o el fosfoenolpiruvato (PEP) como sustrato a dos diferentes niveles de concentración, se estudió la inhibición de esta enzima por fos

nformación para determinarlo.

o comparar los valores de KI reportados? Explique su razonamiento.

o dos substituyentes.
horrar enzima, sería tratar el jarabe concentrado y luego añadir el agua y los otros componentes de su almibar, para tener el producto
rior de las proteínas y especialmente en el sitio activo de las enzimas, se pueden observar desviaciones impertantes de los pKa, causada

que la estructura se verá severamente afectada

ción de esta enzima por fosfomicina.
bar, para tener el producto final.
ertantes de los pKa, causadas por las características de polaridad del sitio activo, que son casi seimpre muy diferentes a las del medio a
y diferentes a las del medio acuoso puro.