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    Bitacora Practica 1 Bioquimica

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    Nathan Ulises Reyes Jimenez
    Este documento presenta un método experimental para identificar el aminoácido alfa-amino terminal de las cadenas de la molécula de hemoglobina mediante el método de Sanger. Brevemente describe el método de Sanger, el cual involucra marcar el amino terminal con DNFB, hidrolizar la proteína para obtener aminoácidos libres y derivados de DNP, y luego separar cromatográficamente los derivados de DNP para determinar el aminoácido amino terminal comparándolo con otros estándares. El objetivo del experimento es aplicar este método para identificar el

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    Este documento presenta un método experimental para identificar el aminoácido alfa-amino terminal de las cadenas de la molécula de hemoglobina mediante el método de Sanger. Brevemente describe el método de Sanger, el cual involucra marcar el amino terminal con DNFB, hidrolizar la proteína para obtener aminoácidos libres y derivados de DNP, y luego separar cromatográficamente los derivados de DNP para determinar el aminoácido amino terminal comparándolo con otros estándares. El objetivo del experimento es aplicar este método para identificar el

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    Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

    Laboratorio de Bioquímica
    3er Semestre
    Reyes Jimenez Nathan Ulises
    Ciclo escolar 2021-2

    Practica No.1 DETERMINACIÓN DE AMINOÁCIDOS TERMINALES CON


    GRUPO ALFA AMINO LIBRE. MÉTODO DE SANGER

    Introducción:
    La determinación de la estructura primaria de una proteína suele denominarse
    secuenciación. Existen varias maneras de determinar la secuencia de aminoácidos. El
    primero en lograr esto fue Frederick Sanger, quién diseño un método, el cual consiste en el
    marcaje del amino terminal a través del uso de DNFB. Este compuesto químico color
    amarillo reacciona con los grupos amino libres en condiciones ligeramente básicas
    formando los dinitrofenil derivados (DNP-aa), también reaccionará con los grupos imidazol,
    fenólicos y epsilonamino, por lo que se dará una dinitrofenilación en la cadena lateral de la
    tirosina, histidina y lisina. Al hidrolizar el péptido o la proteína ya dinitrofenilada, se da una
    ruptura total de los enlaces peptídicos lo que nos da como resultado un hidrolizado que
    contendrá aminoácidos libres y DNP derivados que se conservan intactos, ya que su enlace
    es más difícil de romper. Los DNP de aminoácidos termina-les, a diferencia de los demás
    DNP y de los aa’s libres, son no polares por lo que se pueden extraer muy fácilmente con un
    disolvente no polar. Estos DNP son sometidos a cromatografía, y se determina al aminoácido
    amino terminal de la proteína en compa-ración con otros DNP derivados. Edman utilizó una
    técnica similar a la de Sanger, utilizando el fenilisotiocianato para marcar al grupo amino del
    aa terminal, a diferencia de Sanger, al hidrolizar la proteína únicamente rompía el enlace
    entre el aa terminal y el resto de la de la cadena, la cual permanecía intacta, por lo que la
    secuenciación se facilita.

    Objetivo:
    Identificar el aminoácido alfa-amino terminal de las cadenas de la molécula de
    hemoglobina mediante el método de Sanger.
    Diagrama de flujo:
    Bibliografía:
    • Carrillo, C. P., García, A. T., & Pacios, M. V. T. (2012). Secuenciación de
    un fragmento de DNA desconocido mediante el método de Sanger en
    electroforesis de gel de poliacrilamida. REDUCA, 4(10).
    • Lopez Medina, E. J. (2014). Suficiencia Profesional Aminoácidos y
    Proteínas.
    • Nelson D.L., Cox M.M., “Lehninger. Principios de Bioquímica”, 3a. Ed.
    Editorial Omega., pp 138,141,142 (2000).
    • Teijón, J. M. (2006). Fundamentos de bioquímica estructural. Editorial
    Tébar.

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