LACTATO DESHIDROGENASA (IFCC)

Reactivo líquido para la determinación de la enzima

Lactato Deshidrogenasa en suero o plasma.

Para uso en el diagnóstico in Vitro. Apto para usar en autoanalizador.

SIGNIFICANCIA CLINICA MATERIAL NECESARIO NO INCLUIDO

La enzima Lactato deshidrogenasa se encuentra concentrada en el Espectrofotómetro o fotocolorímetro de filtros con cubeta
corazón, riñón, hígado, músculo y otros tejidos corporales. El daño a termoestabilizada, capaz de medir absorbancia a 340 nm, baño
alguno de estos tejidos resulta en un aumento de los niveles séricos de termoregulado, cronómetro, pipetas, calibrador y sueros controles.
LDH. Niveles elevados de LDH están asociados con infarto del
miocardio, daño renal, hepatitis, enfermedades musculares y otras TECNICA
patologías. Existen a lo menos cinco isoenzimas de LDH dependiendo de
su origen tisular. Llevar el reactivo a la temperatura de reacción (30° ó 37° C.) y poner el
espectrofotómetro en cero contra blanco de agua destilada.
FUNDAMENTOS DEL METODO
Calibrador Muestra
La enzima LDH cataliza la reacción reversible de lactato a piruvato,
Muestra (mL) -- 0.05
pudiendo utilizarse ambos como sustrato. Este reactivo se basa en el
método de Wacker & Amador, y las modificaciones posteriores de Gay, Calibrador (mL) 0.05 --
Mc.Comb y Bowers, tendientes a mejorar la linealidad del método y la Reactivo de Trabajo (mL) 1.00 1.00
duración del reactivo. Mezclar y transferir a la cubeta del espectrofotómetro. Incubar 30
LDH segundos a la temperatura de reacción. Leer la absorbancia inicial (A1)
L-Lactato+NAD+ Piruvato +NADH + H+
a 340 nm. Repetir las lecturas a intervalos de 60 segundos, hasta por
En este caso, la enzima cataliza la oxidación de lactato a piruvato tres minutos.
reduciendo el NAD a NADH. La concentración de LDH se determina Adaptaciones para la aplicación de este reactivo en autoanalizadores
midiendo el aumento de absorbancia a 340 nm. a medida que se están disponibles a solicitud. Es responsabilidad del laboratorio validar
produce NADH. esta aplicación.

REACTIVOS CALIBRACION

Conservados entre 2° y 8°C. y protegidos de la luz, estables hasta la  En la calibración se recomienda utilizar calibrador sérico VALTROL-
fecha de caducidad indicada en la etiqueta. C (código 210-130), proceder de igual forma que con las muestras.
 Se recomienda recalibrar en cualquier momento que se evidencie
Composición de los Reactivos: alguno de estos acontecimientos:
Reactivo 1:  El lote de reactivo cambia
Tris Buffer ph 8.9 100 mM  Se realiza un mantenimiento preventivo del equipo
L-Lactato 60 mM  Los valores de control han cambiado o se encuentran fuera
KCl 180 mM de escala.
Estabilizantes no reactivos c.s.
CALCULOS
Reactivo 2:
Tris Buffer ph 8.9 50 mM Determine el cambio de Absorbancia por minuto A/min)
NAD 39 mM
Factor = Concentración Calibrador
Preparación del Reactivo de Trabajo: Mezclar 1 mL. de Reactivo 1 con A/min. Calibrador
200 ul. de Reactivo 2 o preparar el volumen requerido manteniendo la Actividad LDH (UI/L) = Factor x A/min. Muestra
proporción. Estabilidad del reactivo de trabajo: 4 días entre 2° y 8°C.
Descartar el reactivo si su absorbancia es mayor de 0.6 a 340 nm. contra O bien se puede utilizar el siguiente factor:
blanco de agua y paso de luz de 1 cm o presenta turbidez.
Actividad LDH (UI/L) = A/min x 3376
MUESTRA

Utilizar de preferencia suero libre de hemólisis obtenido por Factor = Vt x 1000 = 3376
centrifugación. La hemólisis eleva falsamente la concentración de LDH. NADH 340 x P x Vm
En lo posible desechar el uso de plasma debido a la interferencia de los
anticoagulantes, de otra forma, utilizar solamente plasma heparinizado. Vt= Volumen total de reacción
No se requiere una preparación especial del paciente. La LDH es estable NADH 340= Coeficiente de extinción del NADH a 340 nm.
por 7 días entre 2° y 8°C. No congelar las muestras ya que se destruye P= Espesor del paso de luz en la cuveta
la isoenzima de origen hepático. Vm= Volumen de muestra utilizado

Valtek S.A. Av. Marathon 1943, Ñuñoa, Santiago de Chile / Tel. + (562) 654 1100
Fax + (562) 654 1199 / www.valtekdiagnostics.com / info@valtek.cl
CONTROL DE CALIDAD

 Es conveniente analizar junto con las muestras sueros controles -Exactitud: Los reactivos VALTEK no muestran diferencias sistemáticas
valorados para Lactato Deshidrogenasa por este método. Se significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales. Los
recomienda la utilización de los sueros controles VALTROL-N detalles del estudio comparativo están disponibles bajo solicitud.
(código 210-100) y VALTROL-P (código 210-110).
 Si los valores obtenidos para los controles se encuentran fuera del -Repetibilidad intraserie: n=20
rango de tolerancia, revisar el instrumento, el reactivo y el
calibrador. Nivel Media (U/L) C.V.
 Cada laboratorio debe disponer de su propio Control de Calidad y Normal 141 0,82%
establecer las correcciones necesarias en caso de que no se Patológico 222 0,85%
cumpla con las tolerancias permitidas para los controles.
-Reproducibilidad interserie: n=20
ADVERTENCIAS Y MEDIDAS DE PRECAUCION:
Nivel Media (U/L) C.V.
 Los volúmenes indicados pueden ser alterados proporcionalmente Normal 141 1,05 %
sin alterar los resultados. Patológico 222 0,89 %
 El factor podría variar en autoanalizadores por diferencia en el
espesor de paso de luz. En este caso utilizar un calibrador sérico Estos datos han sido obtenidos utilizando un autoanalizador MINDRAY
VALTROL-C (código 210-130) para obtener el factor. de la serie BS. Los resultados pueden variar al cambiar de instrumento o
 Los rangos normales deben informarse de acuerdo a la al realizar el procedimiento manualmente.
temperatura a la cual se realiza el ensayo.
 Consultar en nuestra página WEB la ficha de seguridad de este -Certificado de Conformidad y Trazabilidad disponible a solicitud
reactivo y observar todas las medidas de precaución necesarias
para la manipulación y eliminación de residuos. RANGOS DE REFERENCIA
 Contiene Azida de Sodio 0.05% (Nº CAS 26628-22-8) No peligroso
a esta concentración. No ingerir. En contacto con metales Cada laboratorio debe establecer sus propios rangos de referencia en
pesados, como tuberías de cobre o plomo, podría formar azida función de la población de pacientes. Los rangos de referencia que se
metal que es explosiva, elimine los residuos con grandes enumeran a continuación están tomados de la bibliografía existente.
volúmenes de agua y/o de conformidad con las regulaciones
locales. 60 a 140 UI/L a 30°C 115 a 240 UI/L a 37°C
 En autoanalizadores debe utilizarse contenedores de reactivos
nuevos. PRESENTACIONES DISPONIBLES

ESPECIFICACIONES DE DESEMPEÑO: CODIGO CONTENIDO

130-150 Reactivo 1 3 x 50 mL
-Linealidad: 1000 U/L. Reactivo 2 1 x 31 mL
Para valores superiores 1000 U/L, diluir la muestra con suero fisiológico 300160 Reactivo 1 4 x 40 mL
y el resultado obtenido se multiplica por el factor de dilución. Reactivo 2 2 x 16 mL
200160 Reactivo 1 4 x 40 mL
-Límite de detección: 4 U/L. Reactivo 2 2 x 16 mL

- Sensibilidad analítica: 1 U/L = 0,0003  Abs/min BIBLIOGRAFIA

-Interferencias: Anticoagulantes (exceptuando heparina), hemólisis, 1. Tietz, N.W. (ed) Fundamentals of Clinical Chemistry W.B. Saunders
bilirrubina sobre 20 mg/dL, y la lipemia (triglicéridos sobre 1000 mg/dL) Co., Philadelphia, 1976.
pueden interferir en la técnica. Otros medicamentos y sustancias 2. Gay, R.J., Mc Comb, R.B., and Bowers, G.H. Jr. Clin Chem 14, (740)
podrían interferir (3). 1978.
3. Young D.S., effects of drugs on clinical laboratory tests,
th
4 ed. AACC Press, 1995.

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