Fapj M 2019 1290

UNIVERSIDAD MICHOACANA DE SAN NICOLÁS DE HIDALGO
Programa Institucional de Maestría en Ciencias Biológicas
Área Temática: Interacción Planta-Microorganismo-Insecto
FACULTAD DE
AGROBIOLOGÍA
“PRESIDENTE JUÁREZ”
Tesis:
Identificación molecular y caracterización
morfológica de Sphaceloma perseae en la franja aguacatera de
Michoacán
Como requisito para obtener el grado de:
MAESTRÍA EN CIENCIAS BIOLÓGICAS
Presenta:
MARIELA CORREA SUÁREZ
Tutor:
Doctor en Ciencias Agrícolas
SALVADOR OCHOA ASCENCIO
Uruapan, Michoacán Agosto 2019
1
2
Y ciertamente llegará a ser como un árbol plantado al lado de corrientes de
agua, que da su propio fruto en su estación y cuyo follaje no se marchita, y
todo lo que haga tendrá éxito.
Salmos 1:3
3
AGRADECIMIENTOS
A Dios por bendecirme tanto.
A mis papás Efraín Correa García y Ma Carmen Suárez Medrano por su apoyo
incondicional y su amor infinito, jamás podré pagar lo mucho que me dan.
Al Dr. Salvador Ochoa mi asesor, mi maestro gracias por todo, siempre le estaré
agradecida por todo su tiempo y dedicación. Mi cariño y admiración.
A los DOCTORES. Sylvia Fernández Pavía, Guadalupe Valdovinos Ponce,

Gerardo Vázquez Marrufo y Héctor Guillén Andrade por todas las enseñanzas,
por todo el apoyo brindando, fueron pieza clave para que este proyecto fuera
posible.
A Manuela Ángel, mi compañera de laboratorio, quien se convirtió en una amiga

entrañable, gracias, Manu por siempre estar y por enseñarme tanto.
A Mariela Reyes, por todo tu invaluable apoyo. Gracias
Al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología, por las facilidades para desarrollar

esta presente investigación.
4
ÍNDICE GENERAL
Página
ÍNDICE DE CUADROS 6
ÍNDICE DE FIGURAS 7
RESUMEN 8
SUMMARY 9
I. INTRODUCCIÓN 10
HIPÓTESIS 13
OBJETIVOS 13
II. REVISIÓN DE LITERATURA 14
III. MATERIALES Y MÉTODOS 25
3.1 Área de estudio y colecta de muestras 25
3.2 Aislamiento 26
3.3 Extracción de ADN 27
3.4 Amplificación del interespaciador transcrito de rDNA (ITS) 27
3.5 PCR con iniciadores específicos para S. perseae 28
3. 6 Caracterización morfo-fisiológica de los aislados obtenidos 28
3.7 Análisis estadístico 29
IV. RESULTADOS 30
4.1 Aislamiento 30
4.2 Identificación molecular 33
4.3 Caracterización morfo-fisiológica 36
4.3.1 Crecimiento de la colonia de Sphaceloma perseae 38

4.3.2 Tasa de Crecimiento 41
4.3.3 Textura y color de Sphaceloma perseae 45
V. DISCUSIÓN 50
VI. CONCLUSIÓN 55
VII. LITERATURA CITADA 56
5
ÍNDICE DE CUADROS
Cuadro Página
1. Características climáticas de cinco zonas agroecológicas de Michoacán en donde 25

se cultiva aguacate.
2. Números de aislados y tipos de lesiones de donde de aisló S. perseae en cada 31
zona agroecológica de Michoacán.
3. Identificación molecular de aislados obtenidos a partir de síntomas de roña en 34
fruto y pedúnculo en cinco zonas agroclimáticas de la región aguacatera de
Michoacán. La identificación se realizó por PCR con los iniciadores SpF5/SpR6.
4. Efecto de dos medios de cultivo y dos temperaturas en el crecimiento (mm) de 39

26 morfotipos de Sphaceloma perseae. Los valores representan la media de tres
repeticiones. Medias con la misma letra son estadísticamente iguales (Tukey, 0.05).
5. Efecto de dos medios de cultivo y dos temperaturas en la tasa de crecimiento 43

(mm/día) de 26 morfotipos de Sphaceloma perseae. Los valores representan la
media de tres repeticiones. Medias con la misma letra son estadísticamente iguales
(Tukey, 0.05).
6. Medias de tasa de crecimiento de colonias (mm/día) de 26 morfotipos de S. 45
perseae en dos medios de cultivo y dos temperaturas. Medias con la misma letra
son estadísticamente iguales (Tukey, 0.05).
7. Características morfo-fisiológicas de 26 morfotipos de Sphaceloma perseae 46
obtenidas en dos medios de cultivo y dos temperaturas.
6
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura Página
1. Síntomas característicos de especies de Sphaceloma. (A). S. ampelina (foto Fan et 18

al., 2017), (B, C). S. fawcettii en fruto y hoja respectivamente (foto: Paul Fourie, S.
Africa), (D). S. phaseoli (foto: Deidre Fourie, South Africa), (E). S. punicae. (foto:
M. Mirabolfathy, Iran).
2. Síntomas de Sphaceloma perseae en fruto de aguacate (foto: Fan et al., 2017). 20
3. Colonias de Elsinoe spp. en EMA después de 3 semanas. (A) Elsinoe asclepiadea, 22
(B) Elsinoe australis,(C) Elsinoe veneta, (fotos: Fan et al., 2017).
4. Zonas agroecológicas determinadas para 22 municipios de la franja aguacatera de 26
Michoacán, México (Gutiérrez et al., 2010).
5. Forma y aspecto de la lesión de roña en. (A) Pedúnculo, (B) Fruto, (C) Parte apical 30
del fruto, (D) Parte frontal del fruto. Nótese el borde de la lesión, la elevación y el
color del centro.
6. Colonias de S. perseae obtenidas de cinco diferentes zonas agroecológicas (I, III, 32
VII, VIII, IX) de Michoacán, después de 21 semanas de incubación en PDA a 25 ºC.
Barra de escala: 10 mm.
7. Productos de PCR de muestras de S. perseae amplificados con los iniciadores 33
SpF5/SpR6. (MM) Marcador molecular de 100 pb. (+) Testigo positivo.
8. Morfotipos utilizados en la caracterización morfo-fisiológica de S. perseae. 37

9. Crecimiento (mm) de 26 morfotipos de Sphaceloma perseae en dos medios de 39
cultivo y dos temperaturas. Los puntos representan la media de crecimiento de tres
repeticiones. Las barras representan la desviación estándar.
10. Efecto de la interacción morfotipo:medio de cultivo:temperatura en el crecimiento 41
de colonia (mm) de 26 morfotipos de Sphaceloma perseae. Los puntos representan la
media de tres repeticiones.
11. Tasa de crecimiento (mm/día) de 26 morfotipos de Sphaceloma perseae en dos 42
medios de cultivo y dos temperaturas. Los puntos representan la media de la tasa de
crecimiento de tres repeticiones. Las barras representan la desviación estándar.
12. Efecto de la interacción morfotipo: medio de cultivo: temperatura en el 44
crecimiento de colonia (mm) de 26 morfotipos de Sphaceloma perseae. Los puntos
representan la media de tres repeticiones.
13. Texturas de Sphaceloma perseae en PDA y EMA después de 8 semanas. 46
(A) Coraloide, (B) Glutinosa, (C) Coremia, (D) Farinosa, (E) Doble textura.
14. Colonias de Sphaceloma perseae en dos medios cultivo a 21 ºC y 25 ºC después 48
de 8 semanas.
7
RESUMEN
La roña es una enfermedad que afecta los frutos y hojas jóvenes del aguacate (Persea americana
Mill). En el fruto, las lesiones son elevadas de color púrpura o marrón a casi negro y de 3 a 10
mm de diámetro, con frecuencia en patrón circular con un margen irregular. Las lesiones
aparecen inicialmente dispersas y cuando se unen forman una región corchosa con fisuras
marrones, que rompen la epidermis y producen una densa cubierta afelpada de conidióforos y
conidios hialinos. En hojas la infección ocurre en las superficies adaxial y abaxial en forma de
lesiones afelpadas circulares, que se desprenden y forman pequeñas perforaciones con borde
corchoso. La roña del aguacate es causada por el hongo Sphaceloma perseae Jenkins y está
presente en países productores de aguacate en África, Asia y América. En México, se reporta
como una enfermedad de amplia distribución y su impacto principal es sobre la apariencia del
fruto que limita su aceptabilidad en el mercado, más que en la productividad del cultivo. El
objetivo del presente trabajo fue la identificación molecular y caracterización morfológica de
Sphaceloma perseae a partir de aislados obtenidos de frutos de aguacate con síntomas de roña,
procedentes de cinco regiones agroecológicas de la franja aguacatera de Michoacán. Se
obtuvieron 450 aislados a partir de lesiones iniciales en frutos de cuatro meses de edad, de los
cuales 112 aislados fueron confirmados como Sphaceloma perseae mediante PCR con el uso de
iniciadores específicos para esta especie SpF5 (GACCGAACCAACTCTTGCAC) y SpR6
(CCACACGCCCAATACCAA). Los 112 aislados fueron agrupados por similitud morfológica
en 26 morfotipos y caracterizados bajo condiciones de crecimiento en dos medios de cultivo
(PDA y EMA) y dos temperaturas de incubación (21 y 25 ºC). Los resultados obtenidos indican
que S. perseae presenta un lento crecimiento en medio de cultivo y que los morfotipos exhiben
una amplia variación en tamaño, forma, textura y color de colonia.
Palabras clave: Elsinoe, Persea americana, roña, aislamiento, ITS.
8
SUMMARY
The avocado scab is a disease that affects young fruits and leaves of avocado (Persea americana
Mill). On fruits, the lesions have a circular pattern of 3-10 mmd diameter with an irregular
margin. These lesions have a purple-brown coloration. Initially, the lesions are scattered that
develops a corky texture resulting in the rupture of the epidermis and may produce a mass of
conidiophores and hyaline conidia. On leaves, the infection occurs on the adaxial and abaxial
surfaces in the form of circular lesions that produces small perforations with a corky edge. The
scab is caused by the fungus Sphaceloma perseae Jenkins and it is present in avocado producing
countries in Africa, Asia and America. In Mexico, it is reported as a disease with wide
distribution and the main impact is the appearance of the fruit that limits its acceptability in the
market. The main objective of this study was the molecular identification and morphological
characterization of different isolates of Sphaceloma perseae obtained from different avocado
fruits with symptoms of scab. These isolates were obtained from five agro-ecological regions of
avocado in Michoacan. Four hundred and fifty isolates were obtained from initial lesions of
four-month-old fruits, from which 112 isolates were confirmed as Sphaceloma perseae by PCR
with the use of specific primers, SpF5 (GACCGAACCAACTCTTGCAC) and SpR6
(CCACACGCCCAATACCAA), for this fungus. One hundred and twelve isolates were
grouped by morphological similarity in 26 morphotypes and characterized under growth
conditions in two culture media, PDA and EMA, and two incubation temperatures, 21 and 25
°C. The results that we obtained indicate that isolates of S. perseae has a slow growth in culture
medium and the morphotypes have a wide variation in colony size, shape, texture and color.
Key words: Elsinoe, Persea americana, scab, isolation, ITS.
9
I. INTRODUCCIÓN
La roña del aguacate (Persea americana Mill.) causada por Sphaceloma perseae es una
enfermedad de amplia distribución en las zonas productoras de aguacate de México. Afecta los
frutos y hojas jóvenes, llegando a ser un problema importante en regiones con humedad relativa
alta (Woo et al., 2004). En el fruto, la roña se presenta en forma de lesiones marrón a casi negras,
circulares de 3 a 10 mm de diámetro, con margen irregular, elevadas y que cuando se unen
forman una región corchosa con fisuras marrones (Jenkins 1925a; Jenkins 1934; Everett et al.,
2010), que deterioran su apariencia y facilitan el acceso de otros organismos como
Colletotrichum gloeosporioides (Burnett, 1974). Las lesiones aparecen dispersas en el fruto,
pero con frecuencia se unen y forman una superficie irregular extendida que puede llegar a
cubrir toda la superficie del fruto (Burnett, 1974; Palmateer, 2006). En frutos de un mes de edad,
la lesión rompe la epidermis y produce conidióforos y conidios hialinos que forman una densa
cubierta afelpada de color olivo oscuro (Jenkins, 1934). La capa afelpada se pierde poco a poco
por efecto de la intemperie hasta que sólo unos pocos conidióforos permanecen en el fruto de
hasta cuatro meses de edad (Jenkins, 1934). En las hojas, la infección ocurre en la parte superior
de la copa de los árboles, principalmente en la nervadura central de la superficie abaxial (Jenkins
1925a; Jenkins 1934); las lesiones son café-rojizas, con borde amarillo; con frecuencia el centro
de la lesión se desprende dando lugar a perforaciones con el borde suberizado (Pernezny y
Marlatt, 2007).
La roña del aguacate se reportó por primera vez en un vivero de aguacate en Florida en
1918 (Stevens, 1918). Se ha registrado en África (Guinea, Marruecos, Sudáfrica, Zambia y
Zimbabwe), Asia (Filipinas, Taiwán), Centro América y las Indias Occidentales (Antillas, Costa
Rica, Cuba, República Dominicana, El Salvador, Guadalupe, Guatemala, Haití, Honduras,
Jamaica, Nicaragua, Panamá y Puerto Rico) y en América del Sur (Argentina, Brasil, Guyana,
Perú, Venezuela), (Everett, 2008). En México, se reporta como una enfermedad de amplia
distribución (Téliz y Mora, 2007; GIIIA, 2013) y su impacto principal es sobre la apariencia del
fruto y su aceptabilidad en el mercado, más que en la producción del cultivo.
Aún cuando los síntomas de la roña se reconocen con facilidad, el aislamiento de S.
perseae no es sencillo, ya que el micelio que se desarrolla en los tejidos infectados invade solo
de forma sub-epidermal (Jenkins, 1934) y con frecuencia Colletotrichum penetra como invasor
secundario. Para obtener aislados de Sphaceloma es necesario utilizar medios de cultivo semi
10
selectivos y ser muy cuidadoso con el tipo de muestra a partir de la cual se pretenda obtener el
aislamiento (Crous et al., 2009). El crecimiento de S. perseae en medio sintético es lento y da
lugar a colonias afelpadas, elevadas, de bordes irregulares, de aspecto rugoso y color rosado a
beige claro (Everett et al., 2010). Aún y cuando la roña del aguacate se reporta con frecuencia
en Michoacán, su diagnóstico está basado únicamente en los síntomas; esto puede dar lugar a
confusiones debido a que otros factores bióticos como la raspadura de los trips o abióticos como
el rozamiento de frutos, pueden producir daños similares.
En los últimos años se han observado síntomas severos de roña tanto en aguacate Hass,
como en aguacate variedad Carmen. La severidad de estos síntomas en etapas tempranas de
desarrollo del fruto ha hecho difícil el manejo de la enfermedad. Adicionalmente, en el sector
aguacatero se presentan confusiones sobre la causa de la enfermedad, ya que en las infecciones
iniciales la enfermedad es denominada ‘mancha de chapopote’ por el aspecto de la lesión que
es oscura, pequeña y elevada. Sin embargo, con el tiempo, la lesión evoluciona hacia el típico
síntoma de roña; cuando esto sucede, el aislamiento del patógeno es difícil y el control de la
enfermedad poco efectivo. Derivado de estos síntomas, nuevos para la región, mucho se ha
especulado sobre el agente causal, sin embargo y de acuerdo con Everett (2010), la forma y
desarrollo de las lesiones corresponden claramente con los síntomas descritos por Jenkins
(1934) y resultan muy similares a los síntomas conservados en las muestras de referencia a partir
de los cuales la etiología de la enfermedad fue establecida. Partiendo de estos hechos, los
síntomas que implican la formación de lesiones corchosas y agrietadas tanto en la epidermis del
fruto como en los pedúnculos corresponden a la enfermedad denominada roña, que de acuerdo
con múltiples reportes es causada por Sphaceloma perseae.
Diferentes trabajos se han desarrollado en la franja aguacatera de Michoacán (Morales,

2000; Morales, 2017; Ávila et al., 2003; Marroquín, 1999), sin embargo, no abordan el
aislamiento del agente causal y la descripción que presentan del patógeno no corresponde con
las características descritas por Jenkins (1934), Everett (2010) y Fan et al., (2017). La ausencia
en México de un cultivo tipo que pueda ser utilizado como referencia, contribuye a la confusión
sobre la etiología de la roña del aguacate. Adicionalmente, cuando se intenta realizar aislados,
se obtienen frecuentemente cepas de otras especies de hongos, secundarios a la infección.
11
Algunos reportes incluso ponen en duda la presencia de S. perseae en Michoacán (Robles et al.,
2014; Espino et al., 2017)
Información no publicada de Ochoa y Ploetz (2014) indican que a partir de lesiones
iniciales de la llamada ‘mancha de chapopote’, se obtienen colonias del tipo Sphaceloma y que
estas muestran una tasa de crecimiento baja, siendo notoriamente visible la colonia hasta dos
meses después de la siembra
La identificación del agente causal de una enfermedad es fundamental para entender el

proceso patológico, determinar las diferencias en la expresión de síntomas y comprender las
interacciones hospedero-patógeno-ambiente. Desde el punto de vista agronómico, la etiología
de una enfermedad aporta elementos fundamentales para establecer los principios de manejo y
control. Este es el principio en donde se soporta el estudio de las enfermedades de las plantas.
El presente trabajo se realizó con los objetivos de aislar, identificar molecularmente y

caracterizar morfológicamente a Sphaceloma perseae en el cultivo de aguacate en la franja
aguacatera de Michoacán.
12
HIPÓTESIS
Sphaceloma perseae está presente en el cultivo de aguacate en la franja aguacatera de

Michoacán, asociada al síntoma de roña del fruto.
OBJETIVOS
1. Obtener aislados en cultivo axénico de Sphaceloma perseae a partir de frutos de aguacate

con síntomas iniciales de roña, procedentes de huertos comerciales de la franja
aguacatera de Michoacán.
2. Identificar molecularmente aislados de S. perseae obtenidos.
3. Determinar las características culturales de Sphaceloma perseae en distintas condiciones

de incubación.
13
II. REVISIÓN DE LITERATURA
El aguacate (Persea americana Mill.) cv. Hass, es uno de los cultivos más importantes en
México por el valor comercial que representa, derivado de la apertura de diferentes mercados
internacionales que ha permitido incrementar su exportación, principalmente hacia los Estados
Unidos de América (EUA). A nivel nacional la superficie sembrada de aguacate en 2016 fue de
203,732 ha, con 178,706 ha cosechadas, y una producción de 1.88 millones de t, de las cuales
el 77.5 % la aportó el estado de Michoacán (SIAP, 2017).
Con respecto a las exportaciones de aguacate mexicano a EUA, éstas se han

incrementado a una tasa del 21.4 % anual en los últimos 10 años. Solo en la temporada de
cosecha 2015-2016 se exportaron 859,000 ton, lo que representó un incremento del 25 %
respecto a la temporada 2013-2014 (Info Hass, 2016). Adicionalmente, el 10 % de la producción
total se destina para la exportación a otros mercados como Canadá, Japón y varios países de
Asia, Europa y Centro América (Info Hass, 2016). Para cumplir con los estándares de calidad
del fruto, la cadena productiva debe manejar adecuadamente los problemas ocasionados por
plagas y enfermedades a nivel de huerto, así como realizar una eficiente selección y manejo de
fruta a nivel de empaque.
Uno de los patógenos más importantes que afectan al fruto de aguacate es Sphaceloma
perseae, agente causal de la enfermedad conocida como roña, la cual afecta la calidad externa
de los frutos y limita su comercio internacional. La roña del aguacate fue descrita por primera
vez en Florida en 1918 (Jenkins, 1934a) y hoy día se reporta en prácticamente todas las regiones
productoras de aguacate en el mundo (Everett et al., 2010).
Sphaceloma representa la forma asexual de Elsinoe, género perteneciente al orden

Myriangiales, de la familia Elsinoaceae (Horst, 2013). Todos los miembros de Elsinoe
(anamorfo=Sphaceloma) son fitopatógenos que causan enfermedades en cultivos de
importancia económica como aguacate, yuca, cítricos, vid, flores ornamentales, entre otros. (Fan
et al., 2017). Las enfermedades causadas por especies de Sphaceloma se caracterizan por un
sobre crecimiento de tejido. Cuando se acentúa esta hiperplasia, la enfermedad generalmente se
llama sarna o roña mientras que cuando el crecimiento excesivo es apenas perceptible,
simplemente un borde ligeramente elevado alrededor de un centro necrótico, la enfermedad se
conoce comúnmente como antracnosis (Horst, 2013). Sin embargo, el uso del término
14
antracnosis para denominar enfermedades causadas por Elsinoe es confuso, debido a su empleo
mucho más amplio para las enfermedades causadas por Colletotrichum. La antracnosis puntual
fue un nombre alternativo recomendado por Jenkins (1947) para diferenciar una enfermedad
causada por Sphaceloma de la antracnosis causada por Colletotrichum y del tipo de
enfermedades de la costra que ocasiona Venturia (Horst, 2013).
Las principales enfermedades de importancia económica causadas por Elsinoe o

Sphaceloma son: la roña del aguacate por E. perseae, la roña de los cítricos causada por E.
fawcettii y E. australis, la roña del frijol causada por E. canavaliae y E. phaseoli, la antracnosis
de la uva causada por E. ampelina y la súper elongación de la mandioca causada por Sphaceloma
manihoticola (Jenkins, 1925b; Shear, 1929; Jenkins, 1931; Bruner y Jenkins, 1933; Bitancourt
y Jenkins, 1936a,b; Boedijn, 1961; Tan et al., 1996). En muchos casos, el principal impacto de
la roña es la afectación de la apariencia del producto cosechado, lo que limita su aceptabilidad
en el mercado, más que afectar la productividad del cultivo (Swart et al., 2001).
El orden Myriangiales fue introducido por Starback (1899) y está conformado por las
familias Elsinoaceae y Myriangiaceae, que representan un grupo hermano de Dothideales, el
orden tipo de los Dothideomycetes (Li et al., 2011; Hyde et al., 2013; Dissanayake et al., 2014;
Jayawardena et al., 2014). Elsinoaceae comprende actualmente 10 géneros que incluyen Beelia,
Butleria, Elsinoe, Hemimyriangium, Hyalotheles, Micularia, Molleriella, Saccardinula,
Stephanotheca y Xenodium (Lumbsch y Huhndorf 2007). La familia se caracteriza por un
ascoma inmerso, compuesto de una pared delgada y gelatinosa de hifas o células pseudo-
parenquimatosas. Las ascas están dispuestas en lóculos individuales, en una sola capa o
dispersas irregularmente, globosas, bitunicadas y funiculares. Las ascosporas son hialinas a
pardas, septadas o algunas veces muriformes (Kirk et al., 2001, 2008). Los anamorfos conocidos
en Elsinoaceae como Sphaceloma son coelomicetos acervulares con células conidiogénicas
polifialídicas (Sivanesan, 1984).
El género Elsinoe fue introducido por Raciborski (1900) con descripciones de las
especies E. antidesmae, E. canavaliae y E. menispermacearum. Inicialmente se habían
registrado más de 140 epítetos de especies llamadas Elsinoe y más de 160 epítetos de especies
asexuales de Sphaceloma en el Indice Fungorum y MycoBank, con aproximadamente 48
especies de Elsinoe y 52 especies de Sphaceloma (Kirk et al., 2008). Después de los análisis
15
filogenéticos y el examen morfológico de 119 aislamientos realizados por Fan et al. (2017)
ahora se reconocen 75 especies, de las cuales ocho están recién descritas, 13 están epitepificadas
y 26 nombres de especies se sugieren como nuevas combinaciones basadas en la iniciativa de
nomenclatura única (Wingfield et al., 2012; Crous et al., 2015a).
Las especies del género Elsinoe son fitopatógenos causantes de enfermedades como la
costra, mancha en hoja y fruto y antracnosis. Presenta ascostromas solitarios o gregarios,
similares a verrugas, o como pequeñas elevaciones de colores distintivos, sumergidos a semi-
sumergidos, globosos a subglobosos, blancos, amarillo pálido o marrón, blandos,
multilóculados, lóculos dispersos en la parte superior de ascostroma, las células del ascostroma
comprenden células pseudoparenquimatosas de textura globulosa a angular. Lóculos con ascas.
Ostiolo periférico ausente, ascas con 8 esporas, bitunicadas, globosas, con un pedicelo diminuto
y cámara ocular. Ascosporas dispuestas irregularmente, oblongas o fusiformes con extremos
ligeramente redondeados, con 2–3 septos transversales, hialino, de paredes lisas, sin una vaina.
Sphaceloma es la forma asexual; forma acérvulos o esporodoquios subepidérmicos
pseudoparenquimatosos. Conidióforos hialinos a marrón pálido, polifialídicos. Células
conidiogénicas formadas directamente de las células superiores del pseudoparenquima, mono o
polifialides hialinas a pardas pálidas, sin engrosamiento periclinal visible. Conidios hialinos,
lisos, aseptados, elipsoidales y gutulados (Hyde et al., 2013).
Las características morfológicas de las especies de Elsinoe son difíciles de observar, ya

que la morfología sexual es poco común en la naturaleza. La forma asexual de Elsinoaceae
corresponde a un hongo coelomycete acérvular con células conidíogenas polifialídicas, como el
morfotipo asexual Sphaceloma de Elsinoe (Jenkins, 1932b; Kirk et al., 2008).
Una de las especies de importancia económica de Sphaceloma es ampelina, este hongo

es comúnmente conocido como el agente causal de la antracnosis de la vid (Figura 1a) (Jenkins,
1947), es de origen europeo y causa grandes pérdidas en varios países vitivinícolas de todo el
mundo, requiere control químico, especialmente cuando las uvas se cultivan en condiciones
húmedas (de Bary, 1874; Shear, 1929; Amorim y Kuniyuki, 2005; Poolsawat et al., 2010;
Carisse y Morissette, 2013).
Elsinoe fawcettii se conoce comúnmente como el agente causal de la enfermedad de la

costra de los cítricos, causando grandes pérdidas en todo el mundo, especialmente para el
16
mercado de frutas frescas. Los síntomas incluyen lesiones ásperas en hojas y frutos, con forma
de corcho, parecidas a verrugas, translúcidas, verdes o bronceadas al principio, que se vuelven
marrones en el centro, pero que se tornan purpuras en los frutos (Figura 1b-c). Jenkins (1925)
describió la forma asexual, Sphaceloma fawcettii, tiene conidios hialinos, oblongos a
elipsoidales, 5–10 × 2–5 μm. Bitancourt y Jenkins (1936a) describieron la forma sexual de este
hongo, que se caracteriza por ascostromas dispersos que contienen ascas globosas a ovoide, 12–
16 μm de diámetro y hialinas, oblongas a elipsoidales, ascosporas septadas, 10–12 × 5 –6 μm.
Elsinoe phaseoli Jenkins es conocida por causar la roña del frijol (Phaseolus lunatus)
en Cuba (Figura 1d) (Bruner y Jenkins, 1933). Posteriormente se informó sobre Phaseolus y
Vigna en África, América y Brasil (Lasca, 1978; Phillips, 1994). Los síntomas incluyen lesiones
circulares en las hojas, que se presentan en la superficie superior de la hoja, 2–3 mm de diámetro;
lesiones en los tallos alargadas, de color blanco a gris, ligeramente hundidas en vainas verdes,
tornándose de color marrón rojizo, ligeramente elevadas, 2–3 mm de diámetro. Este hongo se
caracteriza por ascosmas ovoides a subglobosos, 14–22 × 21–27 μm, y ascosporas hialinas,
oblongas a elipsoidales, 10–15 × 4–5 μm, con 2–3 septos (Bruner y Jenkins, 1933; Phillips,
1994). Los conidios son oblongos a elipsoides, 6 × 2 μm (Phillips, 1994).
Elsinoe punicae (Bitanc. & Jenkins) se describió originalmente a partir de manchas

foliares de Punica granatum en Argentina, y luego se registró en Brasil e Italia (Figura 1e)
(Bitancourt y Jenkins, 1940a). Las manchas violetas a morado negruzco se extienden a la
nervadura central y las venas, y se vuelven más pálidas en el centro al secarse. Además, se
identificó Sphaceloma punicae a partir de lesiones similares a sarna de frutas en China (Xiao-
Hui et al., 2004) y manchas oxidadas en frutas y hojas en India (Jamadar et al., 2011).
17
B C
A D E
Figura 1. Síntomas característicos de especies de Sphaceloma. (A). S. ampelina
(foto Fan et al., 2017), (B, C). S. fawcettii en fruto y hoja respectivamente
(foto: Paul Fourie, South Africa), (D). S. phaseoli (foto: Deidre Fourie, S.
Africa), (E). S. punicae. (foto: M. Mirabolfathy, Iran).
Elsinoe piri causa antracnosis en manzana y pera, es económicamente importante en

cultivos orgánicos, pero rara vez se observa en huertos con un régimen de fungicidas
convencionales (Scheper et al., 2013). Tiene una distribución mundial y a menudo se ha
registrado incorrectamente como "Elsinoe pyri" (Jenkins, 1932a). Los síntomas incluyen
manchas de hojas de color gris blanquecino con márgenes marrones, con ascostromas visibles
de color marrón oscuro en el centro de las manchas. Las manchas en las frutas pueden variar en
color, desde el blanco hasta el marrón amarillo pálido, hasta marrón en el centro y rodeado por
un margen rojo oscuro. Este hongo se caracteriza por conidios hialinos, aseptados, 4-6 × 2.5-4
18
μm, que pueden estar presentes en acérvulos en hojas y frutos (Woronichin, 1914; Jenkins
1932a; Jenkins et al., 1946; Scheper et al., 2013).
Elsinoe rosarum Jenkins y Bitanc, Passerini (1881) describió este hongo como
Phyllosticta rosarum causando antracnosis de la rosa en Italia. Sin embargo, se confundió con
patógenos similares como Elsinoe veneta causando antracnosis en zarza y E. piri asociada con
antracnosis de manzana y pera (Jenkins, 1932a). Más tarde, Jenkins (1932b) separó las especies
como distintas según el tipo de antracnosis que causaron y trató a Phyllosticta rosarum como
Sphaceloma rosarum basándose en su morfología típica de Sphaceloma de la forma asexual.
Los síntomas incluyen manchas oscuras, púrpuras y negras de la hoja con márgenes de color
marrón lívido opaco, que aparecen en cualquier parte de las hojas, incluyendo nervadura central
y venas; las lesiones en los tallos generalmente son circulares o alargadas, de color café lívido
opaco, se vuelven blancas o cenicientas, se levantan y, a veces, se deprimen en el centro. Elsinoe
rosarum se describió originalmente en Rosa sp. recolectadas en los EE. UU. (Jenkins y
Bitancourt, 1957).
Otra especie de las especies de mayor importancia económica es Sphaceloma perseae

(Holliday, 1980). Las lesiones producidas por esta especie son de color marrón a casi negro y
hasta de 3 mm de diámetro. Los acérvulos se desarrollan en esporodoquios dispersos, oscuros o
verde pálido y de 25 a 70 μm de longitud. Los conidióforos, uni o bicelulares en una primera
etapa, miden alrededor de 12 μm de longitud por 2 a 7 μm de grosor en la base; ahusados o
agudos a truncados en el ápice, proceden de hifas hialinas, intra-epidérmicas o de un estroma
prosenquimatoso. Cuando rompen la epidermis, aumentan en longitud ya sea por crecimiento
continuo o por permanencia de conidios in situ que se desarrollan como parte del conidióforo,
alcanzando una longitud de 25 a 50 o hasta 100 μm; en esta etapa son más o menos divergentes,
continuos a pluri-septados, rectos o geniculados, generalmente simples, a veces denticulados, y
con frecuencia se vuelven más pálidas hacia el ápice.
Los conidios son hialinos o coloreados, claros o granulares, acrogenados o

pleurogenosos pueden ser esféricos a cilíndricos, midiendo de 2 a 30 por 2 a 5 μm; los conidios
hialinos son ovoides u oblongo-elípticos, a menudo de 5 a 8 por 3 a 4 μm, a veces bigutelados,
mientras que los conidios son elongados de 1 a 6 células, hasta 30 por 3 a 5 μm (a menudo uni
a bicelulares y de 12 a 20 μm de largo). A veces los conidios están muy dilatados o hinchados
19
y muriformes. La germinación se lleva a cabo por conidios hialinos de germinación o por tubos
germinales, producidos a menudo apical o sub-apicalmente, pero también lateralmente (Jenkins,
1934b). Las ascosporas son hialinas a café, septadas transversalmente o mutiformes, las cuales
son liberadas solo por rompimiento de las capas estromatales superiores (Kirk et al., 2008; Hyde
et al., 2013).
Sphaceloma perseae causa síntomas "corchosos" en la fruta y hojas del aguacate (Figura
2). En las hojas, las lesiones suelen ser de color rojo, y el centro puede desprenderse para dar
lugar a perforaciones. Las lesiones en las hojas se forman con más frecuencia en la parte superior
de la copa de los árboles y la superficie adaxial muestra una mayor susceptibilidad en
comparación con la superficie abaxial (Pernezny y Marlatt, 2007). En la superficie abaxial de
las hojas las masas de conidios son de color marrón claro oliva. La capa aterciopelada se pierde
gradualmente por la intemperie hasta que sólo quedan unos pocos conidióforos cuando la fruta
tiene 4 meses de edad (Jenkins, 1934a). Después de un mes, las hojas pueden volverse resistentes
a la infección y la fruta se vuelve resistente después de que alcanza la mitad de su tamaño final
(Pernezny y Marlatt, 2007).
Figura 2. Síntomas de Sphaceloma perseae en fruto de aguacate (foto: Fan et al., 2017).
20
Aunque en campo los síntomas de la roña se reconocen fácilmente, el diagnóstico de las
muestras recolectadas a menudo es erróneo por la falta de estructuras fértiles o debido a que el
síntoma se confunde con el de daños mecánicos o inducidos por insectos (Téliz y Mora, 2007).
Además, el aislamiento de Elsinoe en cultivo puro es muy complicado debido a su lento

crecimiento, lo que impide su desarrollo por los contaminantes (Fan et al., 2017). Existen
estudios en los que se evalúan diferentes medios de cultivos para acelerar el crecimiento de
algunas especies de Sphaceloma, sin embargo, esto aumenta la variabilidad en las características
morfológicas de las colonias (Poolsawat et al., 2009). Cheema et al. (1978) informaron
variaciones en el diámetro de la colonia de 9 aislados de S. ampelinum cultivados en diferentes
medios de cultivo. Álvarez y Molina (2000) informaron que el crecimiento de la colonia de S.
manihoticola, el patógeno causal de la súper elongación de la yuca, fue irregular y altamente
variable entre los diferentes aislamientos. Otras características morfológicas que se ven
afectadas por el tipo de medio donde se desarrollan son: color y textura de la colonia, producción
de micelio aéreo, esporulación y los pigmentos producidos por muchas especies de Elsinoe
(Weiss et al., 1957), esto es debido a que la cantidad de nutrientes en los medios de cultivo no
son las mismas (Oythip et al., 2009).
Las colonias de Sphaceloma persea en PDA son de crecimiento lento, con apariencia
abultada que con el tiempo toman forma de cerebroide. Los cultivos son oscuros en la parte
inferior de las placas, y el micelio es de color rosa a beige claro (Everett et al., 2010). Las
características morfológicas en PDA de Elsinoe anacardii son bastante distintas de la apariencia
habitual de las colonias Elsinoe, con micelio aéreo blanco algodonoso en la superficie y micelio
verde en el reverso de la placa (Wani y Thirumalachar, 1969, 1970).
Por otra parte, Elsinoe asclepiadea presenta lento crecimiento (9-12 mm diámetro,
después de 23 días), en EMA (Figura 3a), las colonias son cerebriformes y generan ruptura del
medio, algunas con micelio aéreo piloso en diferentes partes de la colonia, grupos gelatinosos y
mucilaginosa, gotas abundantes a nivel central, al reverso las colonias tienen muchas grietas en
medio visible (Fan et al., 2017). Las colonias de Elsinoe australis en EMA son irregulares,
erupientes, plegadas, de color gris oscuro a negro, con márgenes lisas y micelio aéreo blanco o
gris disperso; 25–35 mm de diámetro después de 3 semanas (Figura 3b).
21
Elsinoe veneta conocido por causar la antracnosis en frambuesa, presenta colonias
circulares, errumpentes, plegadas, rosadas de superficie afelpada color albaricoque con blanco,
márgenes lisos y micelios aéreo; 15-18 mm diámetro después de 3 semanas (Figura 3c) (Fan et
al., 2017).
A B C
Figura 3. Colonias de Elsinoe spp. en EMA después de 3 semanas. (A) Elsinoe

asclepiadea, (B) Elsinoe australis, (C) Elsinoe veneta, (fotos: Fan et al., 2017).
El crecimiento de la colonia de S. manihoticola, el patógeno causal de la súper

elongación de la yuca, es irregular y altamente variable entre diferentes aislamientos (Álvarez y
Molina, 2000). Existe gran variación de la morfología de las colonias de Sphaceloma
dependiendo la ubicación geográfica de donde se obtengan los aislados y el tipo de medio de
cultivo donde se reproduzcan, tanto el color como la producción de micelio aéreo dependen de
la cantidad de nutrientes que el hongo obtenga (Othip et al., 2009). La formación de micelio
aéreo parece estar asociada con la esporulación en este patógeno. Es posible que los medios con
alto contenido de nutrientes no sean adecuados para inducir la esporulación en algunos hongos.
En su lugar, pueden promover un alto crecimiento del micelio de la superficie, pero una baja
formación de micelio aéreo (Anonymus, 2007).
Engelkes et al. (1997) informaron que la cantidad de fuente de carbono en el medio de

cultivo es importante para el crecimiento de los hongos. Sin embargo, la proporción C:N parece
ser más influyente para la esporulación que la concentración de carbono (Goa et al., 2007). La
disminución del nitrógeno en el medio de cultivo es de suma importancia para inducir la
aparición de un metabolito secundario que da lugar a la formación del pigmento rojo (Bu’lock
22
et al., 1974). Bitancourt y Jenkins (1941) propusieron el nombre de elsinochrome A para este
compuesto.
Los elsinocromos son pigmentos rojos o naranjas producidos por diversas especies de
fitopatógenos del género Elsinoe (Weiss et al., 1987). Entre las principales especies de
Sphaceloma que producen este compuesto se encuentran: S. manihoticola (Rademacher et al.,
1982; Rave, 1980), Sphaceloma tectificae (Cheewangkoon et al., 2009), Sphaceloma randii
(Weiss et al., 1957), S. annonae y Sphaceloma fawcettii (Hui y Kuang, 2008).
Los pigmentos de Elsinochrome que contienen un cromóforo de quinona fenólica

consisten en al menos cuatro derivados. Las estructuras y propiedades químicas de los
elsinocromos A, B y C están bien establecidas (Weiss et al., 1957, 1965; Chen et al., 1966;
Lousberg et al., 1969a, b, 1970; Mebius et al., 1990). Elsinocromo D, probablemente derivado
del elsinocromo C, se identificó y caracterizó a partir de la mezcla de pigmentos de Elsinoe
annonae (Lousberg et al., 1970; Kurobane et al., 1981; Shirasugi y Misaki, 1992).
Los elsinocromos están relacionados estructuralmente con varias perileno-quinonas,

como la altertoxina I producida por Alternaria alternata, Cercosporina producida por muchos
Cercospora spp. Hipericina producida por Hypericum spp. Hipocrelina A producida por
Hypocrella bambusae, y el fleichrome producido por Cladosporium spp. (Yoshihara et al.,
1975; Assante et al., 1977; Daub, 1982a; Duran y Song, 1986; Stierle y Cardellina, 1989; Daub
et al., 2005). Todos los compuestos tienen un cromóforo de 4,9-dihidroxiperileno-3,10-quinona
común y solo difieren en las cadenas laterales unidas (Daub et al., 2005).
Estos compuestos se agrupan como fotosensibilizadores en función de su capacidad para

sensibilizar las células a la luz visible y producir especies reactivas de oxígeno (ROS)
(Yamazaki et al., 1975; Daub, 1982a). Según Hui y Kuang (2008) los elsinocromos inducen
toxicidad celular en las células vegetales al funcionar como compuestos fotodinámicos que
generan especies reactivas de oxígeno y desempeñan un papel importante en la virulencia
fúngica.
Aunque muchas especies de Elsinoe se describieron en un estudio taxonómico reciente
(Fan et al., 2017), no se proporciona una descripción morfológica general del género
probablemente debido a la falta de nuevos aislamientos. Elsinoe ha sido objeto de investigación
limitada en todo el mundo (Santos et al., 2017). Las características morfológicas de las especies
23
de este género son difíciles de observar, ya que la forma sexual es poco común en la naturaleza.
En patógenos que se reproducen solo asexualmente, se produce recombinación, se pueden
transferir genotipos completos de una población a otra, un proceso conocido como flujo de
genotipos (Agrios, 2005).
Las herramientas moleculares se han vuelto cada vez más importantes para resolver las
conexiones entre las diferentes etapas del ciclo de vida y la interpretación de la variación
morfológica (Cheewangkoon et al., 2009). Recientemente, Fan et al. (2017) combinaron
secuencias taxonómicas del interespaciador transcrito (ITS), subunidad grande (LSU), RBP2 y
TEF1-α de 119 aislados para obtener una filogenia de diferentes genes para el género Elsinoe.
Sin embargo, las secuencias de LSU generalmente no son suficientemente polimórficas para
analizar la diversidad genética intraespecífica, dando como resultado que la región ITS es la
adecuada para distinguir la mayoría de las especies del género Elsinoe, resolviendo 61 de 74
(82.4 %) de las especies incluidas en el árbol filogenético.
Bagsic et al. (2016) realizaron un análisis de AFLP en los 14 aislados de Sphaceloma

verificados por secuenciación. Utilizando cuatro combinaciones de iniciadores AFLP, se
amplificaron 178 fragmentos claramente puntuables. De estos fragmentos, 145 eran
polimórficos (81 ± 4 %), con un promedio de 36 fragmentos polimórficos por combinación del
iniciador. Diversos estudios han indicado que los marcadores de ADN polimórfico amplificado
al azar (RAPD) son útiles para la identificación y diferenciación de razas o patotipos de muchos
hongos. Hyun et al. (2001) los utilizaron para determinar el nivel de variabilidad genética entre
los aislamientos, patotipos y especies mediante el análisis de RAPD de Elsinoe fawcetti y
Elsinoe australis. Hou et al. (2014) investigaron la especificidad del hospedero y las relaciones
genéticas entre 46 aislados de E. fawcettii mediante pruebas de patogenicidad y ensayos ISSR
para separar los diferentes patotipos. Otros estudios detectaron marcadores moleculares SSR
relacionados con la resistencia de la batata dulce de pulpa naranja a la sarna causada por
Sphaceloma batatas. Este hallazgo indicó que marcadores SSR particulares se pueden utilizar
para desarrollar una variedad resistente al agente causal de la enfermedad de la costra
(Nurfitriani, 2017).
24
III. MATERIALES Y MÉTODOS
3.1 Área de estudio y colecta de muestras
El estudio se realizó en la franja aguacatera de Michoacán, en huertos comerciales de aguacate

Hass ubicados en 5 regiones agroclimáticas (Gutiérrez et al., 2010) que comprendieron los
municipios de Ario de Rosales, Táncitaro, Tingambato, Uruapan y Ziracuaretiro (cuadro 1,
Figura 4). En cada municipio se seleccionaron huertos con presencia de la enfermedad y se
utilizó un muestreo dirigido a árboles y frutos con síntomas evidentes de roña. Para cada muestra
se seleccionaron de la parte media del árbol, frutos de entre 2 y 10 cm de longitud, con lesiones
iniciales tanto en la epidermis como en el pedúnculo. Los muestreos se llevaron a cabo durante
los meses de octubre 2017 a marzo de 2018. En total se colectaron 150 frutos. Los frutos se
colocaron en bolsas plásticas ziplocÒ y se trasladaron al laboratorio de Fitopatología II de la
Facultad de Agrobiología.
Cuadro 1. Características climáticas de cinco zonas agroecológicas de Michoacán en donde se

cultiva aguacate.
Zona Temperatura Precipitación Humedad

agroecológica Clima Superficie (ha)
(ºC) (mm) relativa
I (A)C(m)(w)* 16-20 1200-1500 70-90 % 23,107,91
III (A)C(w2)(w)* 18-22 1000-1500 70-90 % 15,674,83
VII (A)C(w1)(w)* 18-22 1000-1200 70-90 % 3,720,7
VIII A w0(w)* 22-26 800-1000 45-70 % 2,550,66
IX C(w2)(w)* 18-22 1000 70 % 1,421,75
*(A)C = Semicálido, (m)(w)= Húmedo con lluvias intensas de verano que compensan la sequía de invierno;
precipitación del mes más seco inferior a los 60 mm; % de lluvia invernal menor a 5, (w2)(w)= Los más húmedos
de los subhúmedos con un cociente P/T(precipitación total anual en mm, sobre temperatura media anual ºC) mayor
de 55.3. (w1)(w)= Los intermedios en cuanto a grado de humedad con un cociente P/T entre 43.2 y 55.3, A= Cálido,
(w0)(w)= Los más secos de los subhúmedos, con un cociente P/T menor de 43.2, C= Templado, (w2)(w)= Los más
húmedos de los subhúmedos con un cociente P/T (precipitación total en mm, sobre temperatura media anual ºC)
mayor de 55.0. (Gutiérrez et al., 2010, INEGI)
25
Figura 4. Zonas agroecológicas determinadas para 22 municipios de la franja aguacatera
de Michoacán, México (Gutiérrez et al., 2010).
3.2 Aislamiento
Los frutos se lavaron con agua destilada estéril y se dejaron secar dentro de la campana de flujo
laminar. De cada fruto, se tomaron lesiones frescas de roña de diferentes diámetros, tanto de la
epidermis del fruto como del pedúnculo. El tejido se desinfestó por 90 s en una solución de
hipoclorito de sodio al 6 % seguido por un lavado de 30 s con agua destilada estéril, después se
sumergió en una solución de alcohol al 70 % durante 60 s y se finalizó con un segundo lavado
de 30 s con agua destilada estéril; el tejido se secó en papel filtro esterilizado y se sembró en
placas Petri con medio de cultivo papa-dextrosa-agar (PDA, Difco) adicionado con 100 mg de
sulfato de estreptomicina (Sigma). Las placas se incubaron a 25 ºC en condiciones de oscuridad
y se revisaron a intervalos de 24 h hasta observar crecimiento de micelio. Una vez que el
crecimiento de micelio fue evidente, se realizaron transferencias de punta de hifa a placas Petri
conteniendo PDA para obtener cultivos puros. Estas placas se mantuvieron en incubación a 25
ºC en condiciones de oscuridad durante cuatro semanas.
26
3.3 Extracción de ADN
A partir de los cultivos puros de punta de hifa, se realizó la extracción de ADN total de acuerdo
con el protocolo de DNAzolÒES (MRC). Con una espátula se tomaron por raspado
aproximadamente 40 mg de micelio y se colocaron en un mortero esterilizado. El micelio se
maceró en nitrógeno líquido con la ayuda de un pistilo, hasta obtener un polvo fino. El macerado
obtenido fue transferido a un tubo Eppendorf de 1.5 mL al que se añadieron 300 μL de Plant
DNAzol ReagentÒ (Invitrogen). La mezcla se homogenizo por inversión y se incubó a 25 ºC
por cinco minutos. A continuación, se adicionaron 300 μL de cloroformo, se mezcló
vigorosamente y se incubó nuevamente a 25 ºC por cinco minutos. La extracción se continúo de
acuerdo con las instrucciones del fabricante. La concentración y calidad del ADN se determinó
con un Nano DropÒ (Thermo Fisher Scientific) y por electroforesis en gel de agarosa al 1 %
teñido con RedGel (Biotium Inc.) en buffer TAE 1X y visualizados bajo luz ultravioleta en un
fotodocumentador (DNR Bio-Imaging-Systems MiniBis Pro®).
3.4 Amplificación del interespaciador transcrito de rDNA (ITS)
Las regiones ITS1 e ITS2 y el gen 5.8S, del ADN ribosomal de cuatro aislados seleccionados,
se amplificaron por PCR utilizando los iniciadores ITS1/ITS4 (White et al., 1990). Las
reacciones de PCR se calcularon para un volumen final de 25 µL conteniendo 1 µL (20 ng) de
ADN templado, 0.50 μL (1 μM ) de cada uno de los iniciadores, 0.50 μL de dNTP (200 μM),
0.05 μL de Taq ADN polimerasa (5U/μL), 2.50 μL del buffer 10X (-MgCl2), 1.250 μL de MgCl2
(50 mM) y 17.65 μL de agua mili Q. Las condiciones en el termociclador (MultiGene™
OptiMax Thermal Cycler) fueron una desnaturalización inicial a 95 ºC durante 5 min, seguida
de 30 ciclos de desnaturalización a 94 °C durante 30 s, alineación a 52 °C durante 30 s y
extensión a 72 °C por 80 s; se terminó con una extensión final a 72 °C durante 10 min (Crous
et al., 2009). Los productos de la PCR fueron analizados por electroforesis en gel de agarosa al
1 % teñido con RedGel (Biotium Inc.) en buffer TAE 1X y visualizados bajo luz ultravioleta
para verificar la pureza y el tamaño del fragmento amplificado. Los productos de la PCR fueron
purificados y secuenciados por Macrogen Inc. Las secuencias directa y reversa obtenidas de
cada aislado, fueron editadas con el programa ChromasPro (Technelysium Ltd.) y comparadas
con secuencias depositadas en el GenBank utilizando el programa Mega BLAST. Las
27
secuencias con mayor homología fueron descargadas en formato FASTA y alineadas utilizando
el programa MEGA v. 6 (Tamura et al., 2013).
3.5 PCR con iniciadores específicos para S. perseae
Para confirmar la identidad de S. perseae, el ADN de 124 aislados se sometió a PCR con los
iniciadores específicos para Sphaceloma perseae SpF5 (GACCGAACCAACTCTTGCAC) y
SpR6 (CCACACGCCCAATACCAA), que amplifican una región parcial del ITS de
aproximadamente 250 pares de bases (Everett, 2010). Se incluyó como testigo positivo el ADN
de uno de los aislados confirmado por secuenciación del ITS como S. perseae. La reacción de
PCR se llevó a cabo en un volumen final de 12.5 μL compuesta por 1 μL (20 ng) de ADN, 0.25
μL del iniciador SpF5 (52.40 nmol), 0.25 μL del iniciador SpR6 (45.63 nmol), 0.25 μL de dNTP
mix (10 nM), 0.05 μL de Taq ADN polimerasa (5U/μL), 1.250 μL del buffer 10X (-MgCl2),
0.625 μL de MgCl2 (50 mM) y 8.825 μL de agua mili Q. Las condiciones del termociclador
(MultiGene™ OptiMax Thermal Cycler) incluyeron una desnaturalización inicial a 95 °C
durante 4 min, seguida de 35 ciclos de desnaturalización a 95 °C durante 30 s, alineamiento a
55 °C durante 30 s y elongación a 72 °C por 45 s y una extensión final a 72 °C durante 10 min
(Everett, 2010). Los productos de amplificación se analizaron por electroforesis en geles de
agarosa al 1 % teñido con RedGel (Biotium Inc.) en buffer TAE 1X y se visualizaron en un
fotodocumentador (DNR Bio-Imaging-Systems MiniBis Pro®).
3.6 Caracterización morfo-fisiológica de los aislados obtenidos
Para llevar a cabo la caracterización morfológica de Sphaceloma perseae, los ciento doce
aislados obtenidos de la identificación molecular se agruparon por similitud de colonia en 26
morfotipos. Un aislado de cada morfotipo fue sub cultivado en PDA y se incubaron por 30 días
a 25 ºC. A partir de las colonias puras de los morfotipos, se cortaron segmentos de 3 mm de
diámetro de los bordes en crecimiento activo y se transfirieron a cajas Petri (SYMLabratorios
S.A DE C.V.Ò de 90 x 15 mm) conteniendo 20 mL de medio de cultivo; los morfotipos se
inocularon en dos medios de cultivo, papa-dextrosa-agar (PDA, Difco) y extracto de malta-agar
(EMA, Difco) y se incubaron a 21 y 25 ºC con un ciclo de 12 h de luz y 12 h oscuridad durante
8 semanas. Cada morfotipo se inoculó por triplicado para cada condición de medio de cultivo y
28
temperatura de incubación. Se evaluó la tasa de crecimiento, el color y textura de colonia y la
producción de pigmentos en el medio de cultivo. El crecimiento de la colonia se midió
semanalmente con un calibrador digital de 0.01 mm de resolución (Surtek), sobre dos líneas
perpendiculares trazadas en el fondo de la placa; con el crecimiento final de colonia se determinó
la tasa promedio de crecimiento (TPC/día) para cada morfotipo, de acuerdo con Jahan et al,
(2013).
𝐶𝑓 − 𝐶0
𝑇𝑃𝐶(𝑚𝑚/𝑑𝑖𝑎) =
𝑇
donde, Cf es el crecimiento de la colonia después de 8 semanas de inoculación y C0 es el tamaño

inicial de la colonia al momento de la inoculación. T es el número de días transcurridos entre la
primer y última medición.
El color las colonias se determinó utilizando las tablas de color de Rayner (1970). La
textura de las colonias se determinó tomando como referencia las texturas descritas para otras
especies de Sphaceloma (Santos et al., 2018; Li et al., 2018; Tormo 2014; Fan et al., 2017).
3.7 Análisis estadístico
Se determinaron los valores de media y desviación estándar para el crecimiento de

colonia y para la tasa de crecimiento de colonia de los 26 morfotipos. Los datos de crecimiento
y de tasa de crecimiento fueron representados en gráficos de cajas. Se realizó análisis de varianza
para examinar la significancia (p<0.05) de los dos parámetros y la prueba de Tukey (0.05) para
comparar las medias de crecimiento y de tasa de crecimiento de los 26 morfotipos. Todos los
análisis se realizaron con el lenguaje estadístico R (R Development Core Team, 2014).
29
IV. RESULTADOS
4.1 Aislamiento
En los 150 frutos colectados, se encontraron lesiones de roña que mostraron variaciones
de forma, aspecto y tamaño dependiendo el tiempo de desarrollo que tenía la lesión (Figura 5).
De estos frutos se obtuvieron un total de 450 aislados (Cuadro 2), los cuales se caracterizaron
por un lento crecimiento que solo fue evidente después de 15 días, tiempo en el que alcanzaron
un diámetro de 3 mm. Los aislados obtenidos presentaron un patrón de crecimiento común,
desarrollando colonias elevadas en el centro y con bordes irregulares; pero con diferencias
notables en la textura y color (Figura 6). En su mayoría las colonias fueron de color rosa (1, 4,
58), algunos aislados mostraron colonias de color amarillo (11), verde (67, 13, 68) y tonalidades
de naranja (7, 42). El micelio en contacto directo con el medio de cultivo presentó extensiones
miceliales limitadas y con las puntas ramificadas. A medida que la colonia aumentó de diámetro,
algunos aislados desarrollaron pigmentos que tiñeron el medio de cultivo y en ocasiones
llegaron a causar rupturas del medio. De las lesiones empleadas para realizar los aislamientos,
también se obtuvieron de manera eventual aislados de Colletotrichum y Cladosporium.
A B C D
Figura 5. Forma y aspecto de la lesión de roña en. (A) Pedúnculo, (B) Fruto, (C) Parte
apical del fruto, (D) Parte frontal del fruto. Nótese el borde de la lesión, la
elevación y el color del centro.
30
Cuadro 2. Números de aislados y tipos de lesiones de donde de aisló S. perseae en cada zona
agroecológica de Michoacán.
Número
Zona Altitud
Municipio Tipo de lesión de Morfotipos
agroecológica (msnm)
aislado
San Andres C. San
Lesión inicial 1,10,13,15,17,18,
I Angel Z. Ziracuaretiro 1400-1600 90
pedúnculo 19,20,21,22,23
Uruapan
Uruapan Lesión inicial
III 1400-1800 90 1,2,3,4,5
Arrollo Colorado lesión avanzada
3,4,6,7,8,9,10,11,
VII Ario de Rosales 1801-2000 Lesión inicial 90
12
Lesión inicial 7,9,10,11,15,17,2
VIII Táncitaro 1400-1800 90
pedúnculo 4,25,26
Tingambato Lesión avanzada
IX 2001-2200 90 3,13,14,15,16
Ario de Rosales pedúnculo
31
I
III
VII
VIII
IX
Figura 6. Colonias de S. perseae obtenidas de cinco diferentes zonas agroecológicas

(I, III, VII, VIII, IX) de Michoacán, después de 21 semanas de incubación en
PDA a 25 ºC. Barra de escala: 10 mm.
32
4.2 Identificación molecular
De los 124 aislados tipo sometidos a identificación molecular por PCR con el empleo de los
iniciadores específicos SpF5 y SpR6, 112 aislados amplificaron para la banda esperada de 250
pares de bases, lo que permite de acuerdo con Everett (2010), confirmar que éstos 112 aislados
tipo corresponden a Sphaceloma perseae (Figura 7, Cuadro 3). El testigo positivo
correspondiente a ADN de un aislado confirmado por secuenciación como S. perseae, también
amplificó para dicha banda. En 10 aislados no se obtuvo producto de amplificación. Estos
aislados se conservaron para futuros estudios de identificación.
Figura 7. Productos de PCR de muestras de S. perseae amplificados con los iniciadores

SpF5/SpR6. (MM) Marcador molecular de 100 pb. (+) Testigo positivo.
33
Cuadro 3. Identificación molecular de aislados obtenidos a partir de síntomas de roña en fruto
y pedúnculo en cinco zonas agroclimáticas de la región aguacatera de Michoacán. La
identificación se realizó por PCR con los iniciadores SpF5/SpR6.
Aislado Tejido Lugar de origen Zona agroecológica Especie
G1 Fruto San Andrés Corú I S. perseae
G8 Pedúnculo San Andrés Corú I S. perseae
URU Fruto Uruapan I S. perseae
A1 Pedúnculo San Ángel Z. I S. perseae
A2 Fruto San Ángel Z. I S. perseae
R1 Fruto Arrollo Colorado III S. perseae
R2 Pedúnculo Arrollo Colorado III *
R3 Fruto Arrollo Colorado III *
R14 Fruto Arrollo Colorado III *
CO1 Fruto Las Yacas VII S. perseae
34
Cuadro 3. Continuación

CO5 Pedúnculo Las Yacas VII S. perseae
CO6 Pedúnculo Las Yacas VII S. perseae
CO7 Fruto Las Yacas VII *
CO13 Fruto Ario de Rosales VII S. perseae
CO15 Fruto Ario de Rosales VII *
CO18 Fruto Ario de Rosales VII *
CO22 Pedúnculo Ario de Rosales VII S. perseae
cO28 Fruto Ario de Rosales VII S. perseae
V1 Fruto El Palmito VIII S. perseae
V5 Pedúnculo El Palmito VIII S. perseae
V6 Pedúnculo El Palmito VIII S. perseae
V7 Fruto El Palmito VIII *
V10 Fruto El Palmito VIII *
V12 Fruto Juntas de Erandiro VIII S. perseae
35

V13 Pedúnculo Juntas de Erandiro VIII S. perseae
V23 Pedúnculo Juntas de Erandiro VIII *
V24 Fruto Juntas de Erandiro VIII *
TN1 Fruto Tingambato IX S. perseae
1C Fruto Ario de Rosales IX S. perseae
* No amplificó
4.3 Caracterización morfo-fisiológica

Los 112 aislados tipo confirmados como Sphaceloma perseae, se agruparon por características
similares de color y textura obteniendo 26 morfotipos diferentes (Figura 8) que fueron utilizados
para la caracterización morfológica.
36
1 2 3 4
5 6 7 8
9 10 11 12
13 14 15 16
17 18 19 20
Figura 8. Morfotipos utilizados en la caracterización morfo-fisiológica de S. perseae.
37
21 22 23 24
25 26
Figura 8. Continuación.
4.3.1 Crecimiento de la colonia de Sphaceloma perseae

El crecimiento de todos los morfotipos de Sphaceloma en medio de cultivo se caracterizó por
ser muy lento, sin embargo, se observó variación en el tamaño de colonia en función del medio
de cultivo y la temperatura de incubación (Figura 9). El análisis de varianza de una vía para la
variable crecimiento total de los morfotipos en cada una de las combinaciones medio de cultivo-
temperatura indicó diferencias estadísticas significativas en EMA 21 ºC, EMA 25 ºC y PDA 21
ºC, pero no en PDA 25 ºC. La comparación de medias (Tukey, 0.05) indicó que existen
variaciones importantes en el crecimiento de los 26 morfotipos y que los morfotipos 5, 7 y 26
presentaron el mayor crecimiento en los dos medios de cultivo y en las dos diferentes
temperaturas (Cuadro 4), en tanto que el morfotipo 16 fue el de menor crecimiento. El resto de
los morfotipos se comportaron de manera similar.
38
EMA 21C EMA 25C
40
40
a EMA 21 ºC b EMA 25 ºC
35
35
Crecimiento (mm)
Crecimiento (mm)
30
30
25
25
20
20
15
15
10
10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
Morfotipos Morfotipos
PDA 21C PDA 25C

40
40
c PDA 21 ºC d PDA 25 ºC
35
35
Crecimiento (mm)
Crecimiento (mm)
30
30
25
25
20
20
15
15
10
10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
Figura 9. Crecimiento (mm) de 26 morfotipos de Sphaceloma perseae en dos medios

de cultivo y dos temperaturas. Los puntos representan la media de crecimiento
de tres repeticiones. Las barras representan la desviación estándar.
Cuadro 4. Efecto de dos medios de cultivo y dos temperaturas en el crecimiento (mm) de 26

morfotipos de Sphaceloma perseae. Los valores representan la media de tres repeticiones.
Medias con la misma letra son estadísticamente iguales (Tukey, 0.05).
Morfotipo EMA21ºC EMA25ºC PDA21ºC PDA25ºC
1 27.46 abcd 24.18 abcde 28.37 abc 26.01 a
2 25.25 abcdefg 23.24 abcde 23.43 abc 22.93 a
3 24.71 abcdefg 27.94 a 27.07 abc 27.12 a
4 25.44 abcdefg 27.43 a 28.05 abc 26.15 a
5 27.41 abcd 27.25 a 30.74 abc 27.93 a
6 24.43 abcdefg 25.44 abcd 27.74 abc 25.93 a
7 26.01 abcdefg 26.80 a 31.22 ab 27.51 a
8 26.92 abcdef 23.88 abcde 25.13 abc 24.87 a
9 22.32 defg 19.88 bcde 24.65 abc 22.83 a
10 22.07 efg 18.47 e 26.23 abc 20.23 a
12 25.87 abcdefg 26.28 ab 29.26 abc 28.25 a
13 28.97 ab 25.58 abc 26.05 abc 24.09 a
14 29.22 a 23.84 abcde 25.61 abc 25.40 a
39
16 20.93 g 18.67 de 21.32 bc 23.80 a
17 23.21 cdefg 19.10 cde 29.35 abc 21.24 a
18 23.95 bcdefg 26.04 ab 28.99 abc 29.50 a
20 22.14 efg 23.49 abcde 23.66 abc 23.37 a
21 25.64 abcdefg 22.67 abcde 32.54 a 23.57 a
22 27.67 abc 25.64 abc 28.64 abc 28.54 a
23 27.67 abc 27.95 a 29.58 abc 24.45 a
24 21.74 fg 22.24 abcde 23.43 abc 26.76 a
25 22.13 efg 22.55 abcde 19.85 c 22.05 a
26 27.01 abcde 26.66 a 29.42 abc 28.71 a
Cuando se sometió a análisis de varianza el crecimiento de los 26 morfotipos en función

de los dos medios de cultivo y las dos temperaturas, se encontró que existía diferencia estadística
significativa entre medios de cultivo-temperatura de incubación y que en PDA 21 ºC se registró
el mayor crecimiento de colonia para 12 de los 26 morfotipos incluidos en el ensayo. El extracto
de malta es uno de los medios de cultivo más empleados para la obtención de aislados de
Sphaceloma, sin embargo, en este estudio el medio de cultivo PDA resultó más efectivo en el
crecimiento de los morfotipos evaluados, destacando los morfotipos 5, 7 y 21 como los de mayor
crecimiento en PDA 21 ºC. En EMA 25 ºC se obtuvieron los crecimientos más bajos,
correspondiendo a los morfotipos 9, 10, 16 y 17 (Figura 10).
40
32
30
28
Crecimiento de colonia (mm)
26
24
Tratamientos
22
PDA 21 ºC
PDA21C
PDA 25 ºC
PDA25C
20
EMA 21 ºC
EMA21C
EMA 25 ºC
EMA25C
18
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26
Morfotipos
Figura 10. Efecto de la interacción morfotipo: medio de cultivo: temperatura en el

crecimiento de colonia (mm) de 26 morfotipos de Sphaceloma perseae.
Los puntos representan la media de tres repeticiones.
1 13 15 17 19 21 23 25
Morfotipos
4.3.2 Tasa de crecimiento

La velocidad de crecimiento de las colonias de S. perseae expresada como tasa de crecimiento
(mm/día) registró valores promedio bajos, más o menos constantes durante las ocho semanas en
que se mantuvieron en crecimiento los 26 morfotipos. No se registró en ningún caso picos de
crecimiento o fases estacionarias definidas; por el contrario, de manera lenta pero regular todos
los morfotipos presentaron avances en el tamaño de colonia observándose diferencias entre
morfotipos en función de la combinación medio de cultivo:temperatura (Figura 11).
41
0.7
0.7
EMA 21C EMA 25C
Tasa de crecimiento (mm/dia) a EMA 21 ºC b EMA 25 ºC
Tasa de crecimiento (mm/dia)

0.6
0.6
0.5
0.5
0.4
0.4
0.3
0.3
0.2
0.2
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
0.7
0.7
PDA 21C PDA 25C
c PDA 21 ºC d PDA 25 ºC

0.6
0.6
0.5
0.5
0.4
0.4
0.3
0.3
0.2
0.2
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
Figura 11. Tasa de crecimiento (mm/día) de 26 morfotipos de Sphaceloma perseae en

dos medios de cultivo y dos temperaturas. Los puntos representan la media
de la tasa de crecimiento de tres repeticiones. Las barras representan la
desviación estándar.
El análisis de varianza para la variable tasa de crecimiento de los morfotipos en cada una
de las combinaciones medio de cultivo-temperatura indicó diferencias estadísticas significativas
en EMA 21 ºC, EMA 25 ºC y PDA 21 ºC, pero no en PDA 25 ºC. La comparación de medias
(Tukey, 0.05) indicó que existen variaciones en la tasa de crecimiento de los 26 morfotipos y
que incluso un mismo morfotipo puede presentar diferencias en la tasa de crecimiento
dependiendo de las condiciones de cultivo, por ejemplo, los morfotipos 13 y 14 presentaron la
mayor tasa de crecimiento en EMA 21 ºC, sin embargo, las tasas de crecimiento más altas en
EMA 25 ºC las obtuvieron los morfotipos 3, 4, 5, 7, 23 y 26 (Cuadro 5).
42
Cuadro 5. Efecto de dos medios de cultivo y dos temperaturas en la tasa de crecimiento
(mm/día) de 26 morfotipos de Sphaceloma perseae. Los valores representan la media de tres
repeticiones. Medias con la misma letra son estadísticamente iguales (Tukey, 0.05).
1 0.46 abcd 0.40 abcde 0.48 abc 0.44 a
3 0.41 abcdefg 0.47 a 0.46 abc 0.45 a
4 0.42 abcdefg 0.46 a 0.47 abc 0.44 a
5 0.46 abcde 0.46 a 0.52 abc 0.47 a
6 0.40 abcdefg 0.43 abc 0.46 abc 0.43 a
7 0.44 abcdefg 0.45 a 0.53 ab 0.46 a
8 0.45 abcdef 0.40 abcde 0.42 abc 0.41 a
9 0.37 cdefg 0.32 bcde 0.41 abc 0.37 a
10 0.36 efg 0.30 e 0.44 abc 0.33 a
12 0.43 abcdefg 0.44 ab 0.49 abc 0.47 a
13 0.49 a 0.42 abcd 0.43 abc 0.40 a
14 0.49 a 0.40 abcde 0.43 abc 0.42 a
16 0.34 g 0.30 de 0.35 bc 0.40 a
17 0.39 bcdefg 0.31 cde 0.49 abc 0.35 a
18 0.40 abcdefg 0.44 ab 0.49 abc 0.50 a
20 0.36 efg 0.39 abcde 0.39 abc 0.39 a
21 0.43 abcdefg 0.37 abcde 0.55 a 0.39 a
22 0.46 abc 0.43 abc 0.48 abc 0.48 a
23 0.47 ab 0.47 a 0.50 abc 0.41 a
25 0.37 defg 0.37 abcde 0.33 c 0.36 a
26 0.45 abcde 0.45 a 0.50 abc 0.48 a
En el caso de PDA 21 ºC el morfotipo 21 presentó la mayor tasa de crecimiento y 22

morfotipos presentaron una tasa de crecimiento muy similar. En el caso de PDA 25 ºC
estadísticamente todos los morfotipos presentaron tasas de crecimiento similares.
Cuando se sometió a análisis de varianza la tasa de crecimiento de los 26 morfotipos en

función de los dos medios de cultivo y las dos temperaturas, se encontró que existía diferencia
estadística significativa y que las mayores tasas de crecimiento se presentaron en PDA 21 ºC en
donde 11 de los morfotipos registraron su mayor tasa de crecimiento, destacando los morfotipos
5, 7 y 21, en tanto que en PDA 25 ºC, 10 morfotipos mostraron tasas de crecimiento altas. Por
43
otra parte, los morfotipos 2, 3, 8, 12 y 14 presentaron las mayores tasas de crecimiento en EMA
21 ºC y solo el morfotipo 3 creció más rápido en EMA 25 ºC (Figura 12). En términos generales
se puede observar que nuevamente PDA 21 ºC resultó más adecuado para el crecimiento de S.
perseae.
0.55
0.50
Tasa de crecimiento de colonia (mm/dia)
0.45
0.40
Tratamientos
0.35
PDA 21 ºC
PDA21C
PDA 25 ºC
PDA25C
EMA 21 ºC
EMA21C
EMA 25 ºC
EMA25C
0.30
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26
Morfotipos
Figura 12. Efecto de la interacción morfotipo: medio de cultivo: temperatura en el

crecimiento de colonia (mm) de 26 morfotipos de Sphaceloma perseae. Los puntos
representan la media de tres repeticiones.
1 13 15 17 19 21 23 25
La prueba de medias (Tukey, 0,05) indicó que los morfotipos 5, 26 y 7 fueron los que en
Morfotipos
general presentaron mejor tasa de crecimiento independientemente del medio de cultivo en que
se desarrollaron, seguidos por los morfotipos 22, 23, 12 y 18. El resto de morfotipos se
agruparon en cinco grupos diferentes, correspondiendo al morfotipo 16 la tasa de crecimiento
más baja (Cuadro 6).
44
Cuadro 6. Medias de tasa de crecimiento de colonias (mm/día) de 26 morfotipos de S. perseae
en dos medios de cultivo y dos temperaturas. Medias con la misma letra son estadísticamente
iguales (Tukey, 0.05).
Morfotipo Tasa de Crecimiento Std Min Max Tukey (0.05)

5 0.480 0.036 0.43 0.56 a
26 0.473 0.040 0.42 0.54 a
7 0.470 0.041 0.42 0.56 a
22 0.466 0.055 0.38 0.54 ab
23 0.464 0.063 0.35 0.62 ab
12 0.462 0.051 0.41 0.59 ab
18 0.459 0.051 0.37 0.52 ab
4 0.450 0.027 0.40 0.50 abc
3 0.450 0.033 0.40 0.50 abc
1 0.446 0.052 0.32 0.51 abcd
13 0.440 0.074 0.28 0.57 abcd
21 0.439 0.102 0.34 0.72 abcd
14 0.437 0.050 0.35 0.56 abcd
6 0.435 0.029 0.38 0.48 abcd
15 0.425 0.055 0.37 0.56 abcd
8 0.421 0.037 0.35 0.47 abcd
19 0.419 0.062 0.34 0.54 abcd
11 0.410 0.041 0.36 0.51 abcd
24 0.395 0.050 0.33 0.48 abcd
2 0.395 0.043 0.31 0.47 abcd
17 0.388 0.078 0.28 0.57 abcd
20 0.386 0.026 0.35 0.43 abcd
9 0.372 0.042 0.29 0.45 bcd
10 0.360 0.057 0.28 0.45 cd
25 0.360 0.047 0.28 0.43 cd
16 0.351 0.096 0.26 0.64 d
4.3.3 Textura y color de Sphaceloma perseae
Las variables como textura, color, pigmento en el medio de cultivo se evaluaron al finalizar el
experimento de caracterización, esto es a los 56 días posteriores al establecimiento. Las texturas
de los aislados fueron coraloide o cerebroide, glutinosa, coremia y farinosa, sin embargo,
algunos aislados presentaron dos texturas diferentes en la misma colonia (Figura 13). El color
de las colonias de Sphaceloma perseae en PDA resultó ser más homogéneo que en MEA, todos
los aislados presentaron una ausencia de esporas y escaso o ausente micelio aéreo (Cuadro 7,
Figura 14).
45
A B C E D
Figura 13. Texturas de Sphaceloma perseae en PDA y EMA después de 8 semanas.

(A) Coraloide, (B) Glutinosa, (C) Coremia, (D) Farinosa, (E) Doble textura.
Cuadro 7. Características morfo-fisiológicas de 26 morfotipos de Sphaceloma perseae

obtenidas en dos medios de cultivo y dos temperaturas.
Medio de Crecimiento
Morfotipo Color (código) Textura Pigmentación
cultivo radial (mm)
EMA 21ºC 27.46 Canela (62) Coraloide Amarillo
EMA 25ºC 24.18 Policromatico (128) Coremia Amarillo
1
PDA 21ºC 28.37 Gris humo (105) Farinoso Sin pigmentación
PDA 25ºC 26.01 Rosa buff (61) Coremia Sin pigmentación
EMA 21ºC 25.25 Beige (87) Farinoso Amarillo
EMA 25ºC 23.24 Naranja (7) Coremia Sin pigmentación
2
PDA 21ºC 23.43 Rosa buff (61) Farinoso Sin pigmentación
PDA 25ºC 22.93 Rosa buff (61) Coremia Rojo
EMA 21ºC 24.71 Melocoton (4) Coremia Sin pigmentación
EMA 25ºC 27.94 Policromatico (128) Glutinosa Sin pigmentación
3
EMA 21ºC 25.44 Melocoton (4) Coremia Amarillo
EMA 25ºC 27.43 Naranja (7) Farinoso Sin pigmentación
4
PDA 25ºC 26.15 Ambar (47) Coraloide Amarillo
EMA 21ºC 27.41 Carne (37) Coremia Sin pigmentación
5
PDA 21ºC 30.74 Policromatico (128) Dos texturas Amarillo
EMA 21ºC 24.43 Melocoton (4) Dos texturas Amarillo
EMA 25ºC 25.44 Laud (12) Coraloide Sin pigmentación
6
EMA 25ºC 26.80 Carne (37) Glutinosa Sin pigmentación
7
PDA 21ºC 31.22 Gris olivaceo palido (120) Coraloide Amarillo
PDA 25ºC 27.51 Avellana (88) Coremia Sin pigmentación
EMA 21ºC 26.92 Melocoton (4) Dos texturas Sin pigmentación
EMA 25ºC 23.88 Rosa buff (61) Glutinosa Sin pigmentación
8
46
cultivo radial (mm)
9
EMA 25ºC 18.47 Policromatico (128) Dos texturas Sin pigmentación
10
PDA 21ºC 26.23 Azafran (10) Farinoso Sin pigmentación
PDA 25ºC 20.23 Rosa buff (61) Coremia Amarillo
EMA 21ºC 25.21 Naranja (7) Dos texturas Sin pigmentación
EMA 25ºC 23.40 Policromatico (128) Coremia Sin pigmentación
11
PDA 21ºC 26.12 Beige (87) Farinoso Sin pigmentación
EMA 21ºC 25.87 Azafran (10) Glutinosa Sin pigmentación
12
PDA 21ºC 29.26 Policromatico (128) Coraloide Sin pigmentación
PDA 25ºC 28.25 Beige (87) Coremia Sin pigmentación
EMA 21ºC 28.97 Gris olivaceo (107) Dos texturas Amarillo
EMA 25ºC 25.58 Ladrillo (59) Coraloide Amarillo
13 PDA 21ºC 26.05 Beige (87) Dos texturas Amarillo
EMA 21ºC 29.22 Policromatico (128) Coremia Sin pigmentación
EMA 25ºC 23.84 Rosa buff (61) Coraloide Sin pigmentación
14
PDA 21ºC 25.61 Melocoton (4) Farinoso Sin pigmentación
PDA 25ºC 25.40 Beige (87) Farinoso Sin pigmentación
EMA 21ºC 24.89 Carne (37) Dos texturas Amarillo
EMA 25ºC 23.40 Policromatico (128) Coraloide Amarillo
15
PDA 21ºC 24.77 Melocoton (4) Farinoso Sin pigmentación
PDA 25ºC 28.31 Beige (87) Coraloide Rojo
EMA 21ºC 20.93 Rosa vinaceo (58) Glutinosa Sin pigmentación
EMA 25ºC 18.67 Rosa buff (61) Farinoso Sin pigmentación
16
PDA 21ºC 21.32 Azafran (10) Farinoso Sin pigmentación
PDA 25ºC 23.80 Negro fuscous Farinoso Sin pigmentación
17
PDA 21ºC 29.35 Melocoton (4) Farinoso Rojo
PDA 25ºC 21.24 Rosa buff (61) Farinoso Amarillo
EMA 21ºC 23.95 Carne (37) Coremia Amarillo
EMA 25ºC 26.04 Naranja (7) Farinoso Sin pigmentación
18
PDA 21ºC 28.99 Melocoton (4) Farinoso Amarillo
EMA 21ºC 26.15 Policromatico (128) Coraloide Amarillo
19
PDA 21ºC 26.71 Melocoton (4) Coraloide Sin pigmentación
EMA 25ºC 23.49 Policromatico (128) Coraloide Rojo
20
PDA 21ºC 23.66 Melocoton (4) Farinoso Amarillo
47
cultivo radial (mm)
21
PDA 21ºC 32.54 Oxido (39) Coraloide Rojo
PDA 25ºC 23.57 Rosa buff (61) Glutinosa Sin pigmentación
EMA 21ºC 27.67 Policromatico (128) Dos texturas Amarillo
EMA 25ºC 25.64 Azafran (10) Glutinosa Sin pigmentación
22 PDA 21ºC 28.64 Rosa buff (61) Farinoso Amarillo
PDA 25ºC 28.54 Rosa (1) Farinoso Sin pigmentación
EMA 21ºC 27.67 Gris olivaceo (107) Coraloide Amarillo
EMA 25ºC 27.95 Laud (12) Coremia Sin pigmentación
23 PDA 21ºC 29.58 Rosa buff (61) Farinoso Rojo
PDA 25ºC 24.45 Rosa buff (61) Farinoso Amarillo
EMA 21ºC 21.74 Beige (87) Farinoso Amarillo
EMA 25ºC 22.24 Policromatico (128) Dos texturas Sin pigmentación
24 PDA 21ºC 23.43 Azafran (10) Farinoso Sin pigmentación
PDA 25ºC 26.76 Policromatico (128) Coraloide Amarillo
EMA 25ºC 22.55 Ladrillo (59) Dos texturas Amarillo
25 PDA 21ºC 19.85 Rosa buff (61) Farinoso Sin pigmentación
PDA 25ºC 22.05 Coral (38) Coraloide Rojo
EMA 21ºC 27.01 Azafran (10) Coremia Amarillo
26 PDA 21ºC 29.42 Policromatico (128) Coraloide Amarillo
La columna de color esta determinada por los códigos de color de las tablas de Rayner (1970).
1 2 3 4
5 6 7 8
Figura 14. Colonias de Sphaceloma perseae en dos medios cultivo a 21 ºC y 25 ºC

después de 8 semanas.
48
9 10 11 12
13 14 15 16
17 18 19 20
21 22 23 24
25 26
Figura 14. Continuación.
49
V. DISCUSIÓN
La roña del aguacate es una enfermedad de importancia económica con impacto en el precio de
venta del producto. La enfermedad ha sido tema de estudio en México por diversos
investigadores (Morales, 2000; Morales, 2017; Robles et al., 2014; Espino et al., 2017) que han
tratado temas sobre distribución (Ávila et al., 2003), epidemiología (Téliz y Mora, 2007), y
control (Marroquín, 1999; Vidales et al., 2005; Tamayo, 2007; López et al., 2017). Sin embargo,
desde el primer reporte por Jenkins (1934), son pocos los estudios sobre el agente causal
Sphaceloma perseae, destacando los trabajos de Everett (2008 y 2010) quien desarrolló
iniciadores específicos basados en la región ITS para la detección de S. perseae en Nueva
Zelanda; así como el trabajo de Fan et al. (2017) que presenta una descripción de la especie, así
como sus relaciones filogenéticas con otras especies del género Sphaceloma y diferentes
aspectos sobre patogenicidad. La ausencia de trabajos basados en el agente causal ha dado lugar
a confusiones de diagnóstico ya que otros factores biológicos y físicos pueden generar lesiones
en los frutos de aspecto similar a los síntomas de la roña. Así mismo, y como queda demostrado
en este trabajo, aislar y obtener cultivos puros de S. perseae en medios sintéticos no es tarea
fácil, debido al hábito semi biotrófico del hongo y a su localización en el tejido infectado. La
obtención de aislados en cultivo axénico ha permitido en este trabajo confirmar la presencia de
S. perseae en la región productora de aguacate de Michoacán y determinar algunas
características morfológicas descriptivas de la especie. Se ha logrado obtener una colección de
450 aislados procedentes de 5 regiones agroclimáticas del estado de Michoacán.
Las especies de Elsinoe han sido reportadas en los diferentes continentes, sin embargo,
se ha logrado obtener un limitado número de cepas por especie, la mayoría de las especies de
este género parecen ser específicas del hospedero (Fan et al., 2017). El problema filogenético
más común relacionado con la taxonomía de Elsinoe es que muchas especies como E. ampelina,
E. australe, E. fawcettii y E. perseae, se basan en especímenes muy antiguos y no cuentan con
acompañamiento de datos de secuenciación (Jenkins 1925, 1932a, b; Bitancourt y Jenkins,
1936a). Hasta 2014 solo se contaba con 12 cepas disponibles en GenBank para estudios
filogenéticos (Jayawardena et al., 2014).
El aislamiento de estos hongos en cultivo axénico ha jugado un papel importante para el
conocimiento de la etiología y la taxonomía de Elsinoe. En 1939 Bitancourt y Jenkins
50
describieron el primer procedimiento para aislar a Elsinoe, con un gran número de especies
aisladas exitosamente. Sin embargo, este protocolo se inicia con ascosporas, las cuales son muy
difícil de obtener, por tal motivo este método difícilmente puede ser reproducible (Fan et al.,
2017). Los reportes existentes no proporcionan descripciones de los procedimientos para aislar
estos microorganismos.
El método de aislamiento descrito en el presente estudio se logró después de varias
pruebas utilizando diferentes tiempos de desinfestación y distintos tipos de lesiones de las cuales
se debía realizar la siembra. La técnica se perfeccionó hasta lograr aislar a Sphaceloma más de
cuatro mil veces de frutos sintomáticos procedentes de las diversas zonas productoras de
aguacate en Michoacán. Con esto se puede confirmar la hipótesis del presente trabajo y
corroborar que el agente causal de la roña del fruto del aguacate es causado por Sphaceloma
perseae, contrario a lo publicado en los últimos estudios de la roña del aguacate en México, los
cuales reportan diversos agentes causales de esta enfermedad en Michoacán. Esto
probablemente debido a que en dichos estudios no se dio el tiempo suficiente durante el proceso
de aislamiento para que se presentara el desarrollo del micelio de Sphaceloma en el medio de
cultivo, ya que este presenta una tasa de crecimiento muy baja en comparación con otras
especies fúngicas secundarias que se encuentran en este tipo de lesión (Morales, 2000; Morales,
2017; Ávila et al., 2003; Marroquín, 1999).
A pesar de que existen varios estudios sobre algunas especies de Sphaceloma y Elsinoe
asociadas con enfermedades de plantas en diversos países (Jenkins 1932a,b; Bitancourt y
Jenkins 1936a; Narasimhan et al., 1969 a,b; Wani y Thirumalachar 1969), los análisis
filogenéticos basados en materiales tipo no se llevan a cabo por la falta de colonias y datos de
ADN. En el Diccionario de hongos, Kirk et al. (2008) reconocieron alrededor de 50 especies en
el género Elsinoe, aunque hasta la fecha se han descrito más de 140 especies. Elsinoaceae y
Myriangiaceae son las dos familias del orden Myriangiales, que acomodan dos y 10 géneros,
respectivamente (Dissanayake et al., 2014; Jayawardena et al., 2014). Fan et al. (2017)
reportaron mediante datos moleculares y morfológicos que se tienen más miembros recientes
de la familia Elsinoaceae, dentro del género Elsinoe (forma asexual Sphaceloma). Los datos
moleculares de los géneros en Myriangiaceae son aún incipientes (Swart et al., 2001; Summerell
et al., 2006; Crous et al., 2015b, 2016).
51
En el primer estudio filogenético taxonómico de Elsinoe se utilizaron datos de secuencia
de la región ITS (Swart et al., 2001). El ITS es una región útil para distinguir la mayoría de las
especies de Elsinoe (Tan et al., 1996; Swart et al., 2001; Hyun et al., 2007). Everett et al. (2010)
diseñaron los iniciadores SpF5⁄R6 que son específicos para la identificación de Sphaceloma
perseae, los cuales se utilizaron en este estudio como herramienta para confirmar la identidad
de los aislados obtenidos de la zona productora de aguacate en Michoacán. Se sometieron a
amplificación ciento veinticuatro morfotipos utilizando los iniciadores SpF5⁄R6 de los cuales,
ciento doce dieron como resultado una banda de 250 pb, lo cual permitió́ confirmar que
corresponden a Sphaceloma perseae, tal como lo señala Everett et al. (2010). Es importante
mencionar que los aislados que no amplificaron se conservaron para próximos estudios de
identificación.
Este trabajo constituye el primer estudio que evalúa las características morfológicas de
poblaciones de S. perseae. Aunque muchas especies de Elsinoe se describieron en un estudio
taxonómico reciente (Fan et al., 2017), no se proporcionó una descripción morfológica de esta
especie de Sphaceloma. En los resultados aquí obtenidos, las características de la colonia de S.
perseae variaron entre los aislados, especialmente por los diferentes medios utilizados (PDA y
EMA). El mayor crecimiento de las colonias se presentó en el medio de cultivo PDA, a pesar
de ser menos utilizado para el aislamiento de Sphaceloma. Cheema et al. (1978) informaron
sobre una variación en el diámetro de la colonia de nueve aislados de S. ampelinum sembrados
en diferentes medios de cultivo, mientras que Álvarez y Molina (2000) reportaron que el
crecimiento de colonias de S. manihoticola, el agente causal de la súper elongación de la yuca,
era irregular y muy variable entre los diferentes aislamientos.
La tasa de crecimiento es una herramienta fisiológica útil para predecir la habilidad de
biocontrol de las cepas de hongos (Uzunovic y Webber, 1998) por lo que es utilizada como una
primera referencia al caracterizar cepas nuevas de antagonistas (Hermosa et al., 2000). En
microorganismos como Sphaceloma perseae es importante conocer la tasa de crecimiento que
desarrolla en los diferentes medios de cultivo, para obtener más información acerca de la
biología de esta especie, dado que se conoce muy poco. También es importante para realizar
técnicas de aislamiento efectivas, ya que está es una de las razones por las cuales no se había
logrado aislar con éxito y por tanto no se contaba con material para su estudio.
52
Los aislados obtenidos en esta investigación mostraron diferentes texturas; coraloide o
ceribriforme, tal como se reportó para otras especies del género Elsinoe (Bagsic et al., 2016;
Fan et al., 2017; Tan et al., 2015), pero también se presentaron texturas glutinosas, farinosas y
coremias. Esta última textura no se había reportado en ninguna especie de Sphaceloma y se
denominó así por los sinemas que presenta la colonia. En otros aislados se pudieron apreciar
dos texturas diferentes en una misma colonia, contrario a los resultados obtenidos por Li et al.
(2018), quienes obtuvieron morfologías idénticas entre aislados de Sphaceloma ampelina, en un
ambiente cerrado, justificando que la humedad del ambiente cerrado podría influir en la
concentración de oxígeno de las placas de PDA. Papagianni (2004) informó sobre resultados
similares, y descubrió que la formación de colonias está influenciada por una concentración
reducida de oxígeno. Todos estos datos sugieren que la morfología de Sphaceloma puede ser
sensible a la concentración de oxígeno.
EL aumento de oxígeno también puede favorecer la producción de conidios (Issaly et
al., 2005; Tlecuitl et al., 2010). Probablemente esta es la razón por la que no se encontraron
conidios de Sphaceloma perseae en nuestro estudio, ya que las cajas Petri se mantuvieron
cerradas sin incluir ninguna tasa de aireación. La temperatura fue otro factor que quizá no
favoreció la producción de conidios de S. perseae. Según Houston y Oswald (1946), la
producción de conidios a bajas temperaturas en más abundante en otros hongos. Sin embargo,
Brook (1973) encontró que la esporulación de E. ampelina a 21 °C es favorecida en la
naturaleza, dado que se requiere un tiempo mínimo para la producción de conidios en hojas de
uva inoculadas.
La relación entre la luz y la esporulación varía con las especies de hongos. Algunos
hongos requieren exposición a la luz para la esporulación (Trione y Leach, 1969), otros hongos
esporulan mejor en la oscuridad (Cohen et al., 2013). La mayoría de las especies de Elsinoe
tienen una mayor esporulación en la oscuridad, sin embargo, pueden producir elsinocromos
(Weiss, Merlini y Nasini, 1987). Algunos aislados de S. perseae tuvieron una producción de
elsinocromos pero no fue significativa debido a que los aislados no se mantuvieron en oscuridad
constante. Sphaceloma perseae resultó tener una variación muy marcada de colores, no se
observó ningún patrón de color de colonias entre las diferentes regiones muestreadas y los
morfotipos evaluados. Esta parece ser una característica del género, ya que Li y colaboradores
(2018) coinciden con estos resultados. Otras características morfológicas de Sphaceloma
53
perseae es que algunas colonias pueden romper el medio y teñirlo, producen micelio aéreo y el
micelio contiene gútulas.
En resumen, este trabajo presenta información sobre la caracterización morfológica y
fisiológica de S. perseae. La técnica de aislamiento presentada aquí también proporciona un
protocolo mejorado y sobre todo reproducible que puede ser útil para otras especies de Elsinoe.
El resultado más significativo de este estudio fue el aislamiento e identificación molecular de
Sphaceloma perseae, agente causal de la roña del aguacate, confirmando así su presencia en la
zona productora de aguacate de Michoacán. Se estudió el efecto de la temperatura, la luz y dos
diferentes medios de cultivo sobre el crecimiento y la morfología de las colonias de Sphaceloma
perseae, encontrando que existe alta variabilidad entre aislados, lo que sugiere una estructura
poblacional diversa. Hacen falta, sin embargo, estudios adicionales para inducir la esporulación
de esta especie y abundar en estudios morfológicos y fisiológicos que contribuyan a la
tipificación de aislados y a la epidemiología de la enfermedad.
54
VI. CONCLUSIÓN
De acuerdo con los procedimientos y condiciones experimentales utilizados en la presente

investigación, se concluye lo siguiente:
Sphaceloma perseae es el agente causal de la roña del aguacate y está presente en las
diferentes zonas productoras de aguacate de Michoacán.
Sphaceloma perseae en medio sintético muestra una variación morfológica muy

marcada, tanto de color, textura, formación de estructuras y pigmentos.
55
VII. LITERATURA CITADA
Agrios, G. N. 2005. Plant pathology, 5th edn. Burlington. MA: Elsevier Academic Press.
Alvarez E., Molina ML. 2000. Characterizing the Sphaceloma fungus, causal agent of
superelongation disease in cassava. Plant Dis 84:423–428.
Amorim L, Kuniyuki H. 2005. Doenças da videira. In: Manual de Fitopatologia (Kimati H,

Amorim L, Rezende JAM, Bergamim Filho A, Camargo LEA, eds); vol. 2. Ceres, São
Paulo: 639–651.
Anguiano C.J., Alcántar R.J., Toledo B.R., Tapia V.L., Ruíz C.J., Rodríguez C.Y. 2006.
Caracterización edafo–climática del área productora de aguacate de Michoacán. INIFAP,
Libro Tecnico no. 4. pp 98-195.
Anonymus. 2007. Growth of hyphae & development of fungi. Available from: bugs.bio.
usyd.edu.au/Mycology/Growth_Dev/ hyphalGrowth.shtml.
Assante G., Locci L., Camarda L., Merlini L., Nasini G. 1977. Screening of the genus
Cercospora for secondary metabolites. Phytochemistry 16: 243–247.
Ávila Q.G.D., Téliz O.D., Mora A.G., Vaquera H.H., Tijerina C.L. 2003. Spatial and temporal
dynamic of scab (Sphaceloma perseae jenk.) on avocado (Persea americana mill). Revista
Mexicana de Fitopatología, Sociedad Mexicana de Fitopatología, A.C. 21(002):152-160.
Ciudad Obregón, México. https://www.researchgate.net/publication/242627052.
Bagsic, I., Linde, M., y Debener, T. 2016. Genetic diversity and pathogenicity of Sphaceloma
rosarum (teleomorph Elsinoë rosarum) causing spot anthracnose on roses. Plant
Pathology, 65, 978–986. https://doi. org/10.1111/ppa.12478.
Bitancourt A.A., Jenkins A.E. 1936a. Elsinoe fawcettii the perfect stage of the Citrus scab
fungus. Phytopathology 26: 393–395.
Bitancourt A.A, Jenkins A.E. 1936b. Perfect stage of the Sweet Orange fruit scab fungus.
Mycologia 28: 489–492.
Bitancourt AA, Jenkins AE. 1940. New discoveries of Myriangiales in the Americas.
Proceedings of the 8th American Scientific Congress 3:149 – 172.
56
Bitancourt AA, Jenkins AE. 1941. Treze novas especies de “Elsinoe” do Brasil. Arquivos do
Instituto Biologico de Sao Paulo 12: 1–20.
Boedijn K.B. 1961. Myriangiales from Indonesia. Persoonia 2: 63–75.
Brook, P. J. 1973. Epidemiology of grapevine anthracnose caused by Elsinoe ampelina. New

Zealand Journal of Agricultural Research, 16, 333– 342.
https://doi.org/10.1080/00288233.1973.10421113.
Bruner S.C., Jenkins A.E. 1933. Identity and host relations of the Elsinoe of lima bean. Journal
of Agricultural Research 47: 783–789.
Burnett, H. 1974. Avocado scab. Florida Department of Agriculture and Consumer Services
Plant Pathology Circular 141: pp2.
Bu’lock J.D., Detroy R.W., Hostalek Z. y Munim A.1974. Regulation of secondary biosynthesis
in Gibberella fujikuroi. Tram Brit Mycology Sot 62: 77-389.
Carisse O., Morissette-Thomas V. 2013. Epidemiology of grape anthracnose: factors associated

with defoliation of grape leaves infected by Elsinoe ampelina. Plant Disease 97: 222–230.
Cheema, S.S., Kapur, S.P., Chohan, J.S., and Jeyarajan, R. 1978. Studies on the cultural and
pathogenic variations of Sphaceloma ampelinum, the causal organism of the anthracnose
disease of grape. Indian Phytopathol., 31:163-166.
Cheewangkoon R., Groenewald J.Z., Summerell B.A.2009. Myrtaceae, a cache of fungal

biodiversity. Persoonia 23: 55–85.
Chen C.T., Nakanishi K., Natori S. 1966. Biosynthesis of elsinochrome A, the perylenequinone
from Elsinoë spp. Chemical and Pharmaceutical Bulletin (Tokyo) 14: 1434–1437.
Cohen Y., Vaknin M., Ben-Naim, Y., y Rubin A.E. 2013. Light suppresses sporulation and
epidemics of Peronospora belbahrii. PLoS ONE, 8, e81282.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0081282.
Crous P.W., Verkley G.J.M., Groenewald J.Z. 2009. Fungal biodiversity. CBS laboratory
manual series 1. CBS-KNAW Fungal Biodiversity Centre, Utrecht, the Netherlands.
57
Crous PW, Hawksworth DL, Wingfield MJ. 2015a. Identifying and naming plant-pathogenic
fungi: past, present, and future. Annual Review of Phytopathology 53: 247–267.
Crous P.W., Wingfield M.J., Guarro J. 2015b. Fungal Planet description sheets: 320–370.
Persoonia 34: 167–266.
Crous P.W., Wingfield M.J., Burgess T.I. 2016. Fungal Planet description sheets: 469–557.
Persoonia 37: 218–403.
De Bary A. 1874. Über den sogenannten Brenner der Reben (Pech) der Reben. Annalen
Oenologie 4: 165–167.
Daub, M.E. 1982. Cercosporin, a photosensitizing toxin from Cercospora species.

Photopathology, 72, 370–374.
Daub, M.E., Herrero, S. and Chung, K-R. 2005. Photoactivated perylenequinone toxins in
fungal pathogenesis of plants. FEMS Microbiol. Lett. 252, 197–206.
Dissanayake A.J., Jayawardena R.S., Boonmee S.2014. The status of family Myriangiaceae
(Dothideomycetes). Phytotaxa 176: 219–237.
Duran N., Song P.S. 1986. Hypericin and its photodynamic action. Photochemistry and
Photobiology 43: 677–680.
Engelkes, C.A., Nuclo, R.L., y Fravel, D.R. 1997. Effect of carbon, nitrogen, and C:N ratio on
growth, sporulation, and biocontrol efficacy of Talaromyces flavus. Phytopathology,
87:500-505.
Espino, A.E., Morales G.J.L., Pedraza S.M.E., Chávez B.A.T. Morales M.K.L. 2017. Hongos
asociados al síndrome de la roña del aguacate en el estado de Michoacán, México.
Memorias del V Congreso Latinoamericano del Aguacate. Ciudad Guzmán, Jalisco,
México.p.181.
http://www.avocadosource.com/Journals/Memorias_VCLA/2017/Memorias_VCLA_20
17_PG_181.pdf. Consultado mayo 2019.
Everett, Kerry. 2008. "Pathogen of the Month - July 2008". Australian Plant Pathology Society
Inc. Retrieved 20 October 2015.
58
Everett, K. R., Rees-George, J., Pushparajah, I. P. S., Manning, M. A., and Fullerton, R. A.
2010. Molecular identification of Sphaceloma persea (Avocado Scab) and its Absence in
New Zealand. J. Phytopatholy. Doi: 10.1111/j.1439-0434-2010.01739. x.
Fan, X.L., Barreto, R.W., Groenewald, J.Z., Bezerra, J.D.P., Pereira, O.L., Cheewangkoon,
Mostert L., Tian C.M., Crous, P.W. 2017. Phylogeny and taxonomy of the scab and spot
anthracnose fungus Elsinoë (Myriangiales, Dothideomycetes). Studies in Mycology, 87,
1–41.
GIIIA. 2013. El aguacate en Michoacán. Plagas y enfermedades. APEAM A.C.
Goa L., Sun, M.N., Liu, X.Z., and Che, Y.S. 2007. Effects of carbon concentration and carbon
to nitrogen ratio on the growth and sporulation of several biocontrol fungi. Mycology.
Res. III, p. 87-92.
Gutiérrez C.M, Lara C.M.B.N., Guillén A.H., y Chávez B.A.T. 2010. Agroecología de la franja
aguacatera en Michoacán, México. Interciencia. 35: 647-653.
Hermosa MR.., Grondona I., Iturriaga E.A., Diaz–Minguez, J.M., Castro, C., Monte, E., and
Garcia–Acha, I. 2000. Molecular characterization and identification of biocontrol isolates
of Trichoderma spp. Applied Environmental Microbiology 66:1890–1898.
Holliday P. 1980. Fungal diseases of tropical crops. Cambridge University Press, Cambridge,
UK.
Hou X., Huang F., Zhang T., Xu J., Hyde D.K., and Li H. 2014. Pathotypes and genetic diversity
of Chinese collections of Elsinoë fawcettii causing citrus scab. Journal of Integrative
Agriculture. 13: 1293-1302.
Houston B.R., y Oswald J.W. 1946. The effect of light and temperature on conidium production
by Helminthosporium gramineum in culture. Phytopathology, 36, 1049–1055.
Horst R.K. 2013 Spot Anthracnose. In: Westcott's Plant Disease Handbook. Springer,
Dordrecht. pp 385-388.
59
Hui-Ling L. and Kuang-Ren C. 2008. Cellular toxicity of elsinochrome phytotoxins produced
by the pathogenic fungus, Elsinoë fawcettii causing citrus scab. New Phytologist 177:
239–250.
Hyde K.D., Jones E.B.G., Liu J.K., et al. 2013. Families of Dothideomycetes. Fungal Diversity
63: 1–313.
Hyun, J.-W., Timmer, L. W., Lee, S.-C., Yun, S.-H., Ko, S.-W., and Kim, K.-S. 2001.
Pathological characterization and molecular analysis of Elsinoe isolates causing scab
diseases of citrus in Jeju Island in Korea. Plant Disease 85:1013-1017.
Hyun J.W., Peres N.A., Yi S.Y., Timmer L.W., Kim K.S., Kwon H.M., Lim H.C. 2007
Development of PCR assays for the identification of species and pathotypes of Elsinoe
causing scab on citrus. Plant Dis 91:865–870.
Info Hass. 2016. Información al servicio del aguacatero. URL: http://www.infohass.net.
Issaly N., Chauveau H., Aglevor F., Fargues, J., y Durand, A. 2005. Influence of nutrient, pH
and dissolved oxygen on the production of Metarhizium flavoviride Mf189 blastospores
in submerged batch culture. Process Biochemistry, 40, 1425–1431.
https://doi.org/10.1016/j. procbio.2004.06.029.
Jahan, N., S. Sultana, S.K. Adhikary, S. Rahman and S. Yasmin, 2013. Evaluation of the
growth performance of Trichoderma harzianum (Rifai.) on different culture media.
IOSR J. Agric. Vet. Sci., 3: 44-50.  
Jamadar M.M., Sataraddi A.R., Patil P.V.2011. Status of pomegranate diseases of Northern
Karnataka in India. Acta Horticulturae 890: 501–507.
Jayawardena R.S., Ariyawansa H.A., Singtripop C.2014. A re-assessment of Elsinoaceae

(Myriangiales Dothideomycetes). Phytotaxa 176: 120–138.
Jenkins, A. E. 1925a. A species of Sphaceloma on avocado. Phytopathology 24: 84-85.
Jenkins A.E. 1925b. The Citrus scab fungus. Phytopathology 15: 99 – 104.
Jenkins A.E. 1931. Lima bean scab caused by Elsinoe. Journal of Agricultural Research 42: 13–
23.
60
Jenkins AE. 1932a. Elsinoe on apple and pear. Journal of Agricultural Research 44: 689–700.
Jenkins AE.1932b. Rose anthracnose caused by Sphaceloma. Journal of Agricultural Research

45: 321–337.
Jenkins, A. E. 1934a. Sphaceloma perseae the cause of avocado scab. J. Agric. Res. 49: 859-
869.
Jenkins, A. E. 1934b. A species of Sphaceloma on Avocado. Phytopathology 24: 84-85.
Jenkins A.E. 1947. A specific term for diseases caused by Elsinoe and Sphaceloma. Plant
Disease Reporter 31: 71.
Jenkins, A.E. and Bitancourt A.A. 1941. A revised description of the genera Elsinoe and
Sphaceloma. Mycologia, 33:338-340.
Jenkins A.E., Bitancourt A.A. 1957. Studies in the Myriangiales. VII. Elsinoaceae on evergreen
Euonymus, rose and English ivy. Mycologia 49: 95–101.
Jenkins A.E., Bitancourt A.A., Pollack F.G. 1946. Spot anthracnoses in the United States.
Journal of the Washington Academy of Sciences 36: 416–421.
Kirk P.M., Cannon P.F., David J.C., Stalpers J.A. 2001. Ainsworth & Bisby ́s dictionary of the
fungi. 9th edn. CAB International, Wallingford, UK.
Kirk P.M., Cannon P.F., David J.C. 2008. Ainsworth and Bisby's dictionary of the fungi, 10th
edn. CAB International Mycological Institute, Wallingford, Oxfordshire, UK.
Kurobane I., Vining L., McInnes A.G., Smith D.G., Walter J.A. 1981. Biosynthesis of
elsinochromes C and D. Pattern of acetate incorporation determined by 13C and 2H NMR.
Canadian Journal of Chemistry 59: 422– 430.
Lasca CC. 1978. Estudos sobre a flora fúngica de sementes de feijao (Phaseolus vulgaris L.).
Biologico 44: 125–134.
López E.M.E., Noriega C.D.H., Damián N.A., González M.R., Pereyda H.J., Domínguez
M.V.M., Martínez A.U, Cruzaley S.R., Cruz L.B., Salas A.E. 2017. Guía para el manejo
integrado del aguacate en altas densidades en el estado de Guerrero. Comité sistema
61
producto aguacate de Guerrero, A.C. http://promepca.sep.gob.mx/archivosCA/7186-
UAGRO-CA-117-2017-1-57663.pdf consultado junio 2019.
Lousberg R.J.J.C, Salemink C.A., Weiss U. 1969a. Pigments of Elsinoë species II. Structure of
elsinochrome D. Journal of the Chemical Society (C): 1259– 1262.
Lousberg R.J.J.C., Salemink C.A., Weiss U., Batterham T.J. 1969b. Pigments of Elsinoë species
II. Structure of elsinochromes A, B and C. Journal of the Chemical Society (C): 1219–
1227.
Lousberg R.J.J.C, Paolillo L., Kon H., Weiss U. 1970. Pigments of Elsinoë species IV.
Confirmatory evidence for the structure of elsinochrome A and its ethers from studies of
nuclear magnetic resonance (solvent and Overhauser effects) and electron spin resonance.
Journal of the Chemical Society (C): 2154–2159.
Lumbsch H.T., Huhndorf S.M. 2007. Outline of Ascomycota –2007. Myconet 13: 1–58.
Li Y., Wu H., Chen H. 2011. Morphological studies in Dothideomycetes: Elsinoe (Elsinoaceae),

Butleria, and three excluded genera. Mycotaxon 115: 507–520.
Li Z, Dang H, Yuan X, He J, Hu Z, Wang X. 2018. Morphological characterization and

optimization of conditions for conidial production of Elsinoë ampelina, the causal
organism of grapevine anthracnose. J Phytopathol. 166:420–428. DOI:
10.1111/jph.12702.
Marroquín P.F.J. 1999. Factores que favorecen la incidencia de roña (Sphaceloma perseae jenk.)
en el cultivo del aguacate (Persea americana mill.) ‘hass’, en tres regiones agroclimáticas
de Michoacán, México. Revista Chapingo Serie Horticultura 5: 309-312.
http://www.avocadosource.com/WAC4/WAC4_p309.pdf.
Mebius H.J., Krabbendam H., Duisenberg A.J.M. 1990. Structure of elsinochrome A. Acta
Crystallographica C46: 267–271.
Morales G.J.L. 2000. La antracnosis (Colletotrichum gloeosporioides Penz) y la roña

(Sphaceloma perseae Jenk) del aguacate en Michoacán, México: Epidemiología,
predicción y caracterización. Tesis doctoral. Colegio de Postgraduados en Ciencias
agrícolas. Texcoco, México.
62
Morales G.J.L. 2017. Estado actual de las enfermedades del fruto del aguacate en México: roña
y antracnosis. Memorias del V Congreso Latinoamericano del Aguacate. Ciudad Guzmán,
Jalisco, México. p. 114.
http://www.avocadosource.com/Journals/Memorias_VCLA/2017/Memorias_VCLA_20
17_PG_114.pdf. Consultado mayo 2019.
Narasimhan M.J., Wani D.D., Thirumalachar M.J. 1969a. Studies on Elsinoe and Sphaceloma
diseases of plants in Maharashtra (India) – II. Sydowia 23: 242 – 246.
Narasimhan M.J., Wani D.D., Thirumalachar M.J. 1969b. Studies on Elsinoe and Sphaceloma
diseases of plants in Maharashtra (India) – III. Sydowia 23: 247 – 251.
Nurfitriani R., Fitri W., Anna A.R., Endah Y., and Agung K. 2017. Simple Sequence Repeats
(SSR) Marker Screening Related to Orange Fleshed Sweet Potato F1 Genotype Resistance
against Scab (Sphaceloma batatas Saw.). in 2nd International Conference on Sustainable
Agriculture and Food Security: A Comprehensive Approach, KnE Life Sciences, pages
279–286. DOI 10.18502/kls.v2i6.1050.
Palmateer, A. 2006. Description of disease: Avocado scab. In: Evans EA. (ed) Avocado
Technical Assistance Curriculum. Homestead, FL, USA, Institute of Food and
Agricultural Sciences, University of Florida, pp 77.
Papagianni, M. 2004. Fungal morphology and metabolite production in submerged mycelial

processes. Biotechnology Advances, 22, 189–259.
https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2003.09.005
Passerini G. 1881. Erbario crittogamico italiano 2. JStor Plant Science, Italy.
Pernezny, K., Marlatt, R. 2007. Diseases of avocado in Florida. Bulletin Florida Cooperative
Extension Service PP21:3.
Phillips AJL. 1994. A comparison of methods for inoculating bean plants with Elsinoe phaseoli
and some factors affecting infection. Annals of Applied Biology 125: 97–104.
Poolsawat O., Tharapreuksapong A., Wongkaew S., y Tantasawat T. 2009. Cultural

characteristics of sphaceloma ampelinum, causal pathogen of grape anthracnose on
different media. Suranaree J. Sci. Technol. 16(2):149-157.
63
Poolsawat O., Tharapreuksapong A., Wongkaew S. 2010. Genetic diversity and pathogenicity
analysis of Sphaceloma ampelinum, causing grape anthracnose in Thailand. Journal of
Phytopathology 158: 837–840.
Raciborski M. 1900. Parasitische Algen und Pilze Java's I. Botanischen Institut zu Buitenzorg,
Batavia.
Rademacher W., Jung J., Laatsch H., Rave-Frank M., Hedden P and Graebe JE. 1982.
Production of gibberellin A4 and other GAS by the fungus Sphaceloma manihoticola. In:
Abstracts of the Eleventh International Conference on Plant Growth Sub-stances,
Aberystwyth, July 12-16.1982, p. 8.
Rave-Frank M. 1980. Gibberellinproduktion bei Sphaceloma manihoticola. Diploma Thesis,

University of Gbttingen.
Rayner RW. 1970. A mycological colour chart. Commonwealth Mycological Institute, Kew,
UK.
R Core Team. 2014. R: a languaje and environment for statistical computing. R Foundation for
Statistical Computing, Vienna, Austria. URL http://www.R-project.org/.
Robles Y.L., Téliz O.D., Nieto Á.D., Nava D.C., y Marroquín P.F.J. 2014. Hongos asociados al
síntoma de roña en frutos de aguacate en el estado de Michoacán. Memorias del XVI
Congreso Internacional y XLI Congreso Nacional de la Sociedad Mexicana de
Fitopatología. Revista Mexicana de Fitopatología. Ixtapan de la Sal, Estado de México,
México. 32: S65.
http://rmf.smf.org.mx/suplemento/docs/Volumen322014/Integrado/SUPLEMENTOINT
EGRADO_32_2014.pdf. Consultado mayo 2019.
Santos R.F., Ciampi-Guillardi M., Amorim L., Massola Júnior, N.S., Spósito, M.B. 2017.
Aetiology of anthracnose on grapevine shoots in Brazil. Plant Pathology, 67, 692–706.
https://doi.org/10.1111/ ppa.12756.
Santos R.F., Spósito M.B., Ayres M.R., Sosnowski M.R. 2018. Phylogeny, morphology and
pathogenicity of Elsinoë ampelina, the causal agent of grapevine anthracnose in Brazil
and Australia. J Phytopathol. 166:187–198. DOI: 10.1111/jph.12675.
64
Scheper R.W., Wood P.N., Fisher B.M. 2013. Isolation, spore production and Koch's postulates
of Elsinoe pyri. New Zealand Plant Protection 66: 308–316.
Shear C.L. 1929. The life-history of Sphaceloma ampelinum de Bary. Phytopathology 19: 673–
679.
Shirasugi N., Misaki A. 1992. Isolation, characterization, and antitumor activities of the cell
wall polysaccharides from Elsinoë leucospila. Bioscience, Biotechnology and
Biochemistry 56: 29–33.
SIAP. 2017. Producción Agrícola. URL: https://www.gob.mx/siap/acciones-y-

programas/produccion-agricola-33119. Consultado junio 2018
Sivanesan A. 1984. The bitunicate Ascomycetes and their anamorphs.
Starback K., 1899. Ascomyceten der ersten Regnellschen Expedition 1. Bihang till Kungliga
Svenska Vetenskaps-Akademiens Handlingar 25: 1–68.
Stevens H. 1918. Avocado scab. Florida Agricultural Experiment Station Bulletin 289:2.
Stierle A.C., Cardellina J.H. 1989. Phytotoxins from Alternaria alternata, a pathogen of spotted
knapweed. Journal of Natural Products 52: 42–47.
Summerell B.A., Groenewald J.Z., Carnegie A. 2006. Eucalyptus microfungi known from
culture. 2. Alysidiella Fusculina and Phlogicylindrium genera nova with notes on some
other poorly known taxa. Fungal Diversity 23: 323–350.
Swart, L., Crous, P.W., Kang, J.C., Mchau, G.R.A., Pascoe, I. & Palm, M.E. 2001.
Differentiation of species of Elsinoё associated with scab disease of Proteaceae based on
morphology, symptomatology, and ITS sequence phylogeny. Mycologia 93: 366–379.
http://dx.doi.org/ 10.2307/3761658.
Tamayo M.P.J. 2007. Enfermedades del Aguacate. Politécnica No4. Medellín. pp. 51-70.
Tamura K, Stecher G, Peterson D, et al. 2013. MEGA6: molecular evolutionary genetics

analysis version 6.0. Molecular Biology and Evolution 30: 2725–2729.
65
Tan M.K., Timmer L.W., Broadbent P., et al. 1996. Differentiation by molecular analysis of
Elsinoe sp. causing scab disease of Citrus and its epidemiological implications.
Phytopathology 86: 1039–1044.
Téliz, D. Mora, A. 2007. El aguacate y su manejo integrado. Editorial Mundiprensa, México

2da edición. 219-321 p.
Tlecuitl B.S., Viniegra G.G., Díaz G., y Loera, O. 2010. Medium selection and effect of higher
oxygen concentration pulses on Metarhizium anisopliae var. lepidiotum conidial
production and quality. Mycopathologia, 169, 387–394. https://doi. org/10.1007/s11046-
009-9268-7.
Tormo M.R. 2014. Plantas y hongos. Universidad de Extremadura. Recuperado de

http://www.plantasyhongos.es/referencias/autor.htm.
Trione E.J., y Leach C.M. 1969. Light-induced sporulation and sporogenic substances in fungi.
Phytopathology, 59, 1077–1083.
Uzunovic A. and Webber J.F. 1998. Comparison of bluestain fungi grown in vitro and in fresiiiy
cut pine biiiets. European Journal of Forestal Pathology. 28: 323–334.
Vidales J.A., Contreras J.A., Coria V.M., Alcántar J.J. 2005. Control de la roña del aguacate.
Uruapan: Sagarpa.
Wani D.D., Thirumalachar M.J. 1969. Studies on Elsinoe and Sphaceloma diseases of plants in
Maharashtra (India)-IV. Sydowia 23: 252–256.
Wani D.D., Thirumalachar M.J. 1970. Studies on Elsinoe and Sphaceloma diseases of plants in
Maharashtra State (India)-VII. Sydowia 24: 317 – 321.
Weiss, U., Flon, H. and Burger, W.C. 1957. The photodynamic pigment of some species of
Elsinoë and Sphaceloma. Arch. Biochem. Biophys. 69, 311– 319.
Weiss, U., Ziffer, H., Batterham, T.J., Blumer, M., Hackeng, W.H.L., Copier, H. and Salemink,
C.A. 1965. Pigments of Elsinoë species I. Pigment production by Elsinoë species:
isolation of pure elsinochromes A, B, and C. Can. J. Microbiol. 11, 57–66.
66
Weiss, U., Merlini, L. y Nasini, G. 1987. Naturally occurring perylenequinones. In: Progress in
the Chemistry of Organic Natural Products (Herz, W., Grisebach, H., Kirby, G.W. and
Tamm, C., eds), pp. 2–71. New York: Springer- Verlag.
White TJ, Bruns T, Lee S, et al.1990. Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal
RNA genes for phylogenetics. PCR Protocols: a Guide to Methods and Applications 18:
315–322.
Wingfield MJ, De Beer ZW, Slippers B, et al. 2012. One fungus, one name promotes progressive
plant pathology. Molecular Plant Pathology 13: 604 – 613.
Woo, K. K., Wook, H. J., Woo, P. E. 2004. Cytology of cork layer formation of citrus and
limited growth of Elsinoe fawcettii in scab lesions. European Journal of Plant Pathology
110: 129-138.
Woronichin NN. 1914. Plectodiscella piri, der Vertreter einer neuen Ascomyceten-Gruppe.
Mykologisches Zentralblatt 4: 225–233.
Xiao-Hui Z., Yan-Yu Y., Biao X. 2004. Pathogen of pomegranate Sphaceloma scab. Journal of
Yunnan Agricultural University 19: 498–499 (translated from Manderin).
Yamazaki, S., Okube, A., Akiyama, Y. and Fuwa, K. 1975. Cercosporin, a novel photodynamic
pigment isolated from Cercospora kikuchii. Agric. Biol. Chem. 39:287–288.
Yoshihara T., Shimanuki T., Araki T., Sakamura S. 1975. Phleichrome, a new phytotoxic
compound produced by Cladosporium phlei. Agricultural and Biological Chemistry 39:
1683–1684.
67

Fapj M 2019 1290

Cargado por

Información del documentohacer clic para expandir la información del documento

Información del documentohacer clic para expandir la información del documento

Copyright:

Formatos disponibles

Fapj M 2019 1290

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Fapj M 2019 1290

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

UNIVERSIDAD MICHOACANA DE SAN NICOLÁS DE HIDALGO

Programa Institucional de Maestría en Ciencias Biológicas

Área Temática: Interacción Planta-Microorganismo-Insecto

Como requisito para obtener el grado de:

MAESTRÍA EN CIENCIAS BIOLÓGICAS

SALVADOR OCHOA ASCENCIO

Uruapan, Michoacán Agosto 2019

A Dios por bendecirme tanto.

A los DOCTORES. Sylvia Fernández Pavía, Guadalupe Valdovinos Ponce,

A Manuela Ángel, mi compañera de laboratorio, quien se convirtió en una amiga

A Mariela Reyes, por todo tu invaluable apoyo. Gracias

Al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología, por las facilidades para desarrollar

3.4 Amplificación del interespaciador transcrito de rDNA (ITS) 27

3.5 PCR con iniciadores específicos para S. perseae 28

3. 6 Caracterización morfo-fisiológica de los aislados obtenidos 28

3.7 Análisis estadístico 29

4.2 Identificación molecular 33

4.3 Caracterización morfo-fisiológica 36

4.3.1 Crecimiento de la colonia de Sphaceloma perseae 38

1. Características climáticas de cinco zonas agroecológicas de Michoacán en donde 25

4. Efecto de dos medios de cultivo y dos temperaturas en el crecimiento (mm) de 39

5. Efecto de dos medios de cultivo y dos temperaturas en la tasa de crecimiento 43

1. Síntomas característicos de especies de Sphaceloma. (A). S. ampelina (foto Fan et 18

8. Morfotipos utilizados en la caracterización morfo-fisiológica de S. perseae. 37

Palabras clave: Elsinoe, Persea americana, roña, aislamiento, ITS.

Key words: Elsinoe, Persea americana, scab, isolation, ITS.

Diferentes trabajos se han desarrollado en la franja aguacatera de Michoacán (Morales,

La identificación del agente causal de una enfermedad es fundamental para entender el

El presente trabajo se realizó con los objetivos de aislar, identificar molecularmente y

Sphaceloma perseae está presente en el cultivo de aguacate en la franja aguacatera de

1. Obtener aislados en cultivo axénico de Sphaceloma perseae a partir de frutos de aguacate

2. Identificar molecularmente aislados de S. perseae obtenidos.

3. Determinar las características culturales de Sphaceloma perseae en distintas condiciones

Con respecto a las exportaciones de aguacate mexicano a EUA, éstas se han

Sphaceloma representa la forma asexual de Elsinoe, género perteneciente al orden

Las principales enfermedades de importancia económica causadas por Elsinoe o

Las características morfológicas de las especies de Elsinoe son difíciles de observar, ya

Una de las especies de importancia económica de Sphaceloma es ampelina, este hongo

Elsinoe fawcettii se conoce comúnmente como el agente causal de la enfermedad de la

Elsinoe punicae (Bitanc. & Jenkins) se describió originalmente a partir de manchas

Elsinoe piri causa antracnosis en manzana y pera, es económicamente importante en

Otra especie de las especies de mayor importancia económica es Sphaceloma perseae

Los conidios son hialinos o coloreados, claros o granulares, acrogenados o

Además, el aislamiento de Elsinoe en cultivo puro es muy complicado debido a su lento

Figura 3. Colonias de Elsinoe spp. en EMA después de 3 semanas. (A) Elsinoe

El crecimiento de la colonia de S. manihoticola, el patógeno causal de la súper

Engelkes et al. (1997) informaron que la cantidad de fuente de carbono en el medio de

Los pigmentos de Elsinochrome que contienen un cromóforo de quinona fenólica

Los elsinocromos están relacionados estructuralmente con varias perileno-quinonas,

Estos compuestos se agrupan como fotosensibilizadores en función de su capacidad para

Bagsic et al. (2016) realizaron un análisis de AFLP en los 14 aislados de Sphaceloma

3.1 Área de estudio y colecta de muestras

El estudio se realizó en la franja aguacatera de Michoacán, en huertos comerciales de aguacate

Cuadro 1. Características climáticas de cinco zonas agroecológicas de Michoacán en donde se

Zona Temperatura Precipitación Humedad

I (A)C(m)(w)* 16-20 1200-1500 70-90 % 23,107,91

III (A)C(w2)(w)* 18-22 1000-1500 70-90 % 15,674,83