Micro-Ciencia 8 2019

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MICRO-CIENCIA

Investigación, Desarrollo e
Innovación.

UNIVERSIDAD LIBRE
PEREIRA, BARRANQUILLA, SOCORRO.

ISSN: 2323-0320
Edición No. 8 - 2019

¡Unidos por la Ciencia!


MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

MICRO-CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación
UNIVERSIDAD LIBRE
PEREIRA / BARRANQUILLA / SOCORRO

REVISTA MICRO-CIENCIA

• Facultad de ciencias de la salud Universidad Libre


Pereira.
Programa de microbiologia.
• Facultad de ciencias de la salud Universidad Libre
Barranquilla.
Programa de bacteriología.
• Facultad de ciencias exactas y naturales Universidad
Libre Barranquilla.
Programa de microbiología.
• Facultad de ingeniería y ciencias agropecuarias
Universidad Libre Socorro.
Programa de zootecnia.

Correo electrónico:
mentejoven.pei@unilibre.edu.co.
Teléfonos: (6) 340 1043 Ext.6901 Pereira, Colombia (5) 385
1057 Ext.5920 Barranquilla, Colombia

DIRECTIVAS NACIONALES

José Orlando Alarcón Niño


Presidente Nacional
Jorge Gaviria Liévano
Vicepresidente
Fernando Enrique Dejanón Rodríguez
Rector Nacional
Floro Hermes Pineda
Secretario Nacional
Elizabeth Villarreal Correcha
Directora Nacional de Investigaciones

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Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

DIRECTIVAS SECCIONAL PEREIRA

Miguel Hernando González Rodríguez


Presidente Seccional
Fernando Uribe de los Ríos
Rector Seccional
Carmen Helena Aragón Villa
Secretaria General
Luis Alfonso Sandoval Perdomo
Director Secciona de investigaciones
María Teresa Rodríguez Lugo
Decana Facultad de Ciencias de la Salud

DIRECTIVAS SECCIONAL BARRANQUILLA

Beatriz Tovar Carrasquilla


Presidente seccional
Salvador Rada Jiménez
Rector Seccional
Natalia Castellanos Medina
Secretaria Seccional
Wendy Rosales Rada
Directora Seccional de Investigaciones
Ema Acosta de Guevara
Decana Facultad de Ciencias exactas y naturales
Salvador Rada Jiménez
Decano (E) Facultad de Ciencias de la Salud.

DIRECTIVAS SECCIONAL SOCORRO

Nelson Omar Mancilla Medina.


Presidente y Rector Seccional
Haimar Ariel Vega Serrano.
Director Seccional de Investigaciones

Órgano de difusión de la Facultad de Ciencias de la Salud Universidad Libre Pereira,


Facultad de Ciencias naturales y exactas y Facultad de Ciencias de la Salud Universidad
Libre Barranquilla y Facultad de Ingeniería y Ciencias Agropecuarias Universidad Libre
Socorro.

Correspondencia:
Centro de investigaciones de la Facultad de Ciencias de la Salud
Universidad Libre Pereira, Sede Belmonte.

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COMITÉ EDITORIAL

Juan David Sánchez Calderón


Microbiólogo
Magister en Ciencias biológicas
Profesor Universidad Libre Barranquilla
Programa de Microbiología

Adalucy Álvarez Aldana


Bacterióloga y laboratorista clínica
Magister en Biología molecular y Biotecnología
Doctora en Ciencias biomédicas
Profesora de planta con dedicación a la investigación
Universidad Libre Pereira

Olga María Henao Trujillo


Enfermera
Especialista en Administración de la Salud
Magister en Pedagogía
Directora Centro de Investigaciones
Facultad de Ciencias de la Salud.
Universidad Libre Pereira

Liliana Carranza López.


Bacterióloga
Magister en Pedagogía
Doctora en Toxicología ambiental
Profesora de planta con dedicación a la investigación
Universidad Libre Barranquilla
Programa de Bacteriología

Paola Andrea Aguirre Fernández


Zootecnista
Magister en Ciencias agrarias
Coordinadora del laboratorio
Universidad Libre Socorro

Los textos reproducidos en esta revista han sido digitados por sus autores.
Pueden ser reproducidos citando las fuentes.

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RELACION DE ARTICULOS MICROCIENCIA. Pág.


EDICION 8 - 2019

Editorial 10

1. “Actividad Celulolítica de Hongos Aislados del Jardín Botánico de la 12


Universidad Tecnológica de Pereira”. PhD. Ramírez A Luz Stella, Isaza B
María Camila. (Universidad Libre Pereira).

2. “Evaluación Ambiental del Plan de Gestión Integral de Residuos de la 20


Universidad Libre Pereira 2018”. Buriticá Herrera Héctor Mario, Ceballos
Toro Valeria. (Universidad Libre Pereira).

3. “Determinación Cualitativa de la Actividad Antimicrobiana de 28


Sustancias Antibióticas, Bactericidas y fungicidas en Antibiograma”.
Camacho S. Ana I., Pérez M. Valeria, León Rodríguez Daniel A. (Universidad
Libre Pereira).

4. “El Papel del Microbioma de la Leche Materna Humana en la Modulación 41


Del Sistema Inmune Del Neonato”. Valencia Castillo Sandra, Arbeláez
Mendoza Leidy, Panesso Cortés Daniela. (Universidad Libre Pereira).

5. “Biorremediación de Aguas Residuales Mediante Eicchornia crassipes 56


y Lemma minor”. Alfaro Herrera Dila Patricia, Blanco Morales Maryzel
Omayra, Germy Moreno Claudia Jennifer, Orozco Alzate Jamy Vanesa.
Asesor: Clara Gutierrez Castañeda. (Universidad Libre Barranquilla).

6. “Modelado predictivo de Escherichia Coli O157:H7 en Alimentos”. 64


Redondo, Alejandra, Torres Elvira, Sánchez Juan David. (Universidad Libre
Barranquilla).

7. “Preliminares en aislamiento de microorganismos solubilizadores de 82


fósforo en suelo del Jardín Botánico de la Universidad Libre Pereira”.
Álvarez María del Mar, Ceballos Valeria, López Franco Rodolfo. (Universidad
Libre Pereira).

8. ARTICULO DE REVISIÓN: “Efecto del Campo Magnético Sobre El 90


Crecimiento Microbiano”. Barona Duque Kerynd, Salgado Rivera Juanita,
Guzmán Jojoa David M, Alvarez Aldana Adalucy. (Universidad Libre Pereira).

9. A
RTICULO DE REVISION: “Microalgas y Cianobacterias: ¿qué son? 107
¿dónde encontrarles? ¿cómo cultivarles?
Salgado Rivera Juanita, Barona Duque Kerynd, Guzmán Jojoa David M,
Alvarez Aldana Adalucy. (Universidad Libre Pereira).

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10. ARTÍCULO DE REVISIÓN “El agua como ruta de transmisión de 118


helicobacter pylori”. Ceballos Toro Valeria, Álvarez Quintero María del
Mar, Álvarez Aldana Adalucy, Siller López Fernando. (Universidad Libre
Pereira)..

11. ARTICULO DE REVISIÓN: “Características y Beneficios del Kéfir 132


Como Probiótico: Una Revisión Para El Mejoramiento de la Salud”.
Eder Jair Salazar, Juan Diego Sánchez, Lina María Londoño Giraldo
(Universidad Libre, Seccional Pereira)

12. ARTÍCULO DE REVISIÓN “Cultivo y métodos fenotípicos para 148


determinar el perfil de susceptibilidad en Helicobacter pylori”. María
Alejandra Buitrago Gómez, Laura Díaz Ramírez, Michelle Mejía Romero,
Adalucy Álvarez Aldana. (Universidad Libre, Seccional Pereira).

13. Instrucciones para los autores. 162

Revista Micro-Ciencia

Facultad de ciencias de la salud Universidad Libre Pereira.


Programa de microbiologia.
Facultad de ciencias de la salud Universidad Libre Barranquilla.
Programa de bacteriología.
Facultad de ciencias exactas y naturales Universidad Libre Barranquilla.
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Correo electrónico: mentejoven.pei@unilibre.edu.co.


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EDITORIAL

EL SANTO GRIAL
Laura Marcela Carrillo-García1

“Si la naturaleza es la respuesta ¿Cuál es la pregunta?”


Jorge wagensberg

En diversas épocas los seres humanos miento que a pesar de ser muy basto aún
han tratado de resolver múltiples pregun- está aprendiendo a caminar.
tas que distintos grupos poblacionales que
han habitado la tierra se han formulado, No es hasta el siglo xx, cuando se da uno
preguntas que van desde ¿De dónde ve- de los debates más relevantes de la his-
nimos? Hasta ¿Para dónde vamos? Y es toria de la biología y la genética, ese bum
que son esas mismas preguntas que han del gen tomaba más fuerza, esa hipótesis
hecho que el ser humano se encamine en de algo llamado gen que empezó a pisar
la búsqueda de respuestas de algo tan fuerte en el mundo científico, comenzó a
cotidiano como su propio ser ¿De qué es- concretarse, a darse un lugar entre los
tamos hechos? ¿Cómo llegamos a hacer- hasta el momento escépticos científicos, a
nos?, esa búsqueda incesante de saber dar un lugar espacial o de ubicuidad en la
ha encaminado al hombre a adentrarse en célula, justo en el núcleo, fue identificado
las profundidades de la genética, del gen, bajo el microscopio en hebras que podían
que a lo largo del tiempo va desenros- teñirse y con segmentos de ácido desoxi-
cando numerosos enigmas que ayudan a rribonucleico y es por tanto un nuevo nom-
comprender nuestra propia naturaleza, sin bre empezó a surgir <<cromosoma>> y
embargo, el hallazgo de nuevas respues- este en toda las especies vivas del pla-
tas nos va adentrando a múltiples desarro- neta, además se dijo que todos esos ge-
llos a nivel de ciencia enfocada a lo más nes enhebrados eran los encargados de
curioso que tiene nuestro planeta, la vida. determinar el desarrollo de un organismo,
La reestructuración de algunos fundamen- es por tanto que después de ese gran
tos científicos antes considerados como bum, distintas posturas se empezaron a
únicos y verdaderos llevaron a demostrar escuchar en aquel mundo entusiasmado
una vez más que en la ciencia, aunque con un nuevo hallazgo, aquel debate de
hay mucho redactado no hay nada escrito, la existencia del gen paso a ser sofocado
cada día hay pequeñas cosas que ayudan por la vehemencia con la que era ataca-
a ensamblar nuevas ideas en un conoci- do el reduccionismo al considerar que el

1.
Estudiante del Programa de Microbiología, Facultad de Ciencias Básicas y Biomédicas, Universidad
Simón Bolívar Seccional Barranquilla.
lcarrillo13@unisimon.edu.co

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simple determinismo genético era ingenuo prendiendo procesos que ayudan a la pro-
y era más que lógico entender que para ducción, expresión y transcripción del gen
sus defensores fue difícil reducir todo lo tumbando así lo que se consideraba an-
que sabía de fisiología, medicina, biolo- teriormente del modelo informacional del
gía del desarrollo y del comportamiento a libro de la vida, en el que ese código era el
unos simples genes enhebrados, ¿Cómo responsable de todo lo que se daba en el
comprender que ellos eran los responsa- ser humano.
bles de toda una vida? ¿De sus ventajas y
desventajas? Sin embargo en los últimos En ese mundo de redes en el que se teje
cuarenta años del siglo xx una gran refor- la vida hay una serie de procesos que no
mulación de la concepción del gen se ter- se limitan a la secuencia de bases involu-
minó de enhebrar, era el “libro de la vida” cradas en la herencia, la naturaleza mis-
un despampanante proyecto llamado ge- ma como respuesta a nuestras pregun-
noma humano, en el que narraba con có- tas básicas sobre nuestra composición y
digos genéticos el conjunto de genes pre- existencia nos demuestra que a través de
sentes en los cromosomas, un libro digno múltiples procesos basados en modelos
de saborear para la comunidad científica y de complejidad es que se debe empezar
es por tanto que se seguían tejiendo ideas a entretejer respuestas tanto científicas
de que no todo estaba dado, el determinis- como filosóficas, al abandonar el modelo
mo volvió a aparecer, esta vez advirtiendo reduccionista de la vida nos abrimos a nue-
gracias a Gilbert quien trató de explicar vas hipótesis basadas en el entendimiento
que más allá de aquellas “instrucciones de las distintas interacciones, llevándonos
digitales” para formar un ser humano ha- a comprender que esa complejidad de in-
bían involucrados diversos procesos que teracciones que se dan, se encuentra el
se deberían considerar, las funciones ce- desarrollo de la vida y del conocimiento.
lulares y la síntesis proteica, a pesar de
interesante y osada la visión de Gilbert, no
tardó mucho tiempo en volverse bastante Referencias bibliográficas
efímera ya que el consorcio internacional
para la secuencia del Genoma Humano • Rose, N. (2012). Políticas de la vida:
y el equipo creado por Celera Genomics biomedicina, poder y subjetividad en el
descubriera que la cantidad de secuencias siglo XXI. Unipe.
que codificaban proteínas era muy inferior,
sin embargo era momento para empezar a
abandonar el modelo reduccionista y em-
pezar a verlo como un todo y a favor de los
modelos de complejidad, aterrizándolo a
la genética contemporánea, comprendien-
do que una secuencia codificante puede
intervenir en la síntesis de varias proteínas
y que una proteína puede entrañar la inte-
racción de varias secuencias codificantes
diversas de diferentes secciones del geno-
ma, por tal motivo se empezó a cambiar la
concepción antigua del gen y se empieza
a aplicar el modelo de complejidad, com-

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Actividad celulolítica de hongos aislados del jardín botánico de


la Universidad Tecnológica de Pereira.
Ramírez A Luz Stella. PhD1, Isaza B Maria Camila 2

Abstract derma spp revealed the highest enzymatic


activity values. Overall, the qualitative and
Cellulose is the most abundant biopolymer
quantitative assays revealed the presence
on earth, as it’s considered a natural resou-
of cellulolytic activity, nevertheless, when
rce with great potential in the biofuel and
comparing the results there were certain
biotechnology industry. However, it is esti-
variations considering that both assays
mated that approximately 40.000.000 tons
were carried out with different variables
of cellulose are produced annually by the
that can differ when obtaining the total ce-
agroindustry around the world, meaning
llulose concentration.
that this agro waste accumulates in diffe-
rent environments, causing severe conta- Keywords:cellulose, cellulase, enzyme
mination due to the inadequate manage- assays, fungi, Congo red.
ment it is being given. Currently, the best
Resumen
alternative for agro waste management
involves a biological degradation process La celulosa es un polímero abundante en
carried out by cellulolytic microorganisms. la tierra y es considerado un recurso natu-
Among these microorganisms, cellulolytic ral de gran importancia con un alto poten-
fungi are known to produce specific enzy- cial para ser empleado en la biotecnología.
mes that catalyze the degradation of ligno- Se estima que anualmente se producen
cellulose into several byproducts. Therefo- 40.000.000 t de desechos industriales de
re, the main purpose of this investigation celulosa, los cuales se acumulan en el me-
was to evaluate the cellulolytic activity of dio ambiente debido al manejo incorrecto
4 endophytic fungi isolated from the bota- que se les está dando. Una de las mejores
nical garden located at the Technological alternativas para el manejo de residuos
University of Pereira. The qualitative cellu- agroindustriales involucra un proceso de
lolytic activity was evaluated by inoculating degradación biológica llevado a cabo por
the 4 fungi in Czapek´s solid medium, fo- microorganismos celulolíticos. Entre estos,
llowed by staining the fungal colonies with los hongos celulolíticos son reconocidos
1% Congo red; the results showed that por su capacidad de producir enzimas es-
all 4 fungal genera had cellulolytic activi- pecíficas que catalizan la degradación de
ty, which was later determined by measu- la lignocelulosa a diversos subproductos.
ring the total cellulase activity, using filter Por tal motivo, el objetivo de esta investi-
paper as a substrate; out of the 4 genera gación fue evaluar la actividad celulolítica
evaluated, Phanerochaete spp and Gano- de 4 hongos endófitos aislados del jardín

1 Profesora Universidad Tecnológica de Pereira; luramire@utp.edu.co; Grupo de investigación Polife-


noles; Línea de investigación Actividad Biológica de Productos Naturales.
2 Universidad Libre Pereira; estudiante de Microbiología. mariac-isazab@unilibre.edu.co.

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botánico de la Universidad Tecnológica de Introducción


Pereira. La actividad celulolítica cualitativa
La celulosa es uno de los biopolímeros
fue evaluada mediante la siembra de los
más abundantes a nivel mundial y es con-
hongos en medio sólido Czapek, seguido
siderada una fuente con gran potencial en
de una tinción de las colonias fúngicas con
la industria para la producción de materia-
rojo Congo 1%; los resultados mostraron
les como combustibles y químicos. Se es-
actividad celulolítica en los 4 géneros fún-
tima que la producción anual de celulosa
gicos evaluados; la actividad cuantitativa
es de 40.000.000 t, indicando que la ma-
de celulasa total se midió empleando el
yoría de los desechos industriales están
papel filtro como sustrato; de los 4 hongos
conformados por residuos de celulosa, los
estudiados, Phanerochaete spp y Gano-
cuales se acumulan de manera excesiva
derma spp mostraron los valores más al-
debido a que no se les da un uso adecua-
tos de actividad enzimática. Los ensayos
do. Por esto, en los últimos años ha sur-
cualitativos y cuantitativos arrojaron la pre-
gido la necesidad de aislar y estudiar los
sencia de actividad celulolítica.
microorganismos celulolíticos, entre ellos
Palabras Clave: celulosa, celulasa, prue- los hongos lignocelulolíticos, fundamenta-
bas de enzimas, hongos, rojo congo. les para la transformación de la celulosa
en azucares que son nutrientes esencia-
les para diversos microorganismos; estos
hongos producen diversas enzimas (celu-
lasas, amilasas, proteasas, xilanasas, lig-
nasas, entre otras); dichas enzimas tienen
un amplio rango de aplicación en la agri-
cultura, biotecnología y bioenergía y son
consideradas de gran utilidad para la con-
servación del medio ambiente. (1–6)

Por tal motivo, se pretende evaluar la ac-


tividad celulolítica de 4 hongos endófitos
presentes en el Jardín Botánico de la Uni-
versidad Tecnológica de Pereira, con la
finalidad de determinar el potencial que
tienen dichos hongos para degradar re-
siduos agroindustriales. Este proyecto se
desarrolla con el fin de generar informa-
ción acerca de hongos endófitos con acti-
vidad celulolítica, y se espera que sirva de
apoyo para futuros proyectos dirigidos a la
implementación de estos hongos en pro-
cesos de aprovechamiento de subproduc-
tos y en otros procesos biotecnológicos.

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Metodología lización, se inoculó en cada Erlenmeyer


5mm de muestra del hongo por triplica-
1. Cultivo De Hongos En Medio Sólido
do; las siembras se incubaron por 5 días
Se sembraron los hongos (Phanerochae- a 28ºC en shaker a 125 rpm y cumplidos
te spp., Stereum spp., Ganoderma spp., estos días, los cultivos fueron filtrados utili-
Xylaria spp.) por punción central en el me- zando papel filtro Whatman No. 1. (8)
dio de cultivo Czapek’s Dox, compuesto
3. Actividad Celulolítica
por: carboximetilcelulosa 1% extracto de
levadura 0,25%, sulfato de amonio 0,05%, La actividad enzimática de la FPasa y
peptona 0,25%, cloruro de calcio 0,05%, CMCasa fue estudiada en conjunto con
fosfato monobásico de potasio 0,01%, fos- la actividad celulolítica. Dicha actividad
fato dibásico de potasio y agar 1,5%; el pH fue medida determinando la cantidad de
del medio se ajustó a 7,0 y posterior a la azúcares reductores liberados, utilizando
siembra, se incubaron los inóculos a 30ºC el método del ácido dinitrosalicílico (DNS).
por 72 h; pasadas las 72 h, se agregaron Una unidad de papel filtro, glucosidasa y
20 ml de rojo Congo al 1% (p/v) al interior carboximetilcelulosa se definió como la
de las cajas de Petri y se dejó actuar por cantidad de enzima y fue medido en μmol/
15 minutos; pasado este tiempo, se retiró min de azúcar reductor (glucosa). (8)
el exceso y se realizó un lavado dos veces
4. Actividad De La Enzima Fpasa
con una solución de NaCl 1N, dejándose
en reposo por 15 minutos. (7) En un tubo de ensayo (por triplicado) se
adicionaron: 0.5 mL del filtrado, 1mL de
La actividad celulolítica se determinó por
buffer de citrato de sodio al 0.05 M pH 4.8
la presencia o ausencia de halos de inhibi-
y una tirilla de papel filtro Whatman No.1
ción, indicando la hidrólisis de la celulosa;
(1 x 6 cm; 50 mg). La mezcla se incubó a
los halos de inhibición fueron medidos en
45ºC por 45 min; pasado este tiempo, se
milímetros.
retiraron las tirillas de papel filtro del tubo
2. Cultivo De Hongos En Medio Líquido de ensayo; como paso siguiente, se pipe-
teó 1mL de reactivo DNS a cada tubo; a
Los hongos que se encontraron capaces
continuación, se sellaron los tubos y se lle-
de degradar la celulosa, fueron sembra-
varon a baño maría a una temperatura de
dos en el medio líquido Mandel; Se prepa-
95-100ºC por 10 minutos; pasados los 10
ró en frascos Erlenmeyer de 250mL, cada
min, los tubos se transfirieron a un baño
uno conteniendo 100 mL del medio com-
frío por 10 minutos; el cambio de color en
puesto por (g/L): urea, 0.3 g; (NH4)2SO4,
cada tubo se midió por espectrofotometría
1.4g; KH2PO4, 2.0 g; CaCl2.2H2o, 0.3 g;
a 540 nm. (8)
MgSO4.7H20, 0.3 g; extracto de levadura,
0.25g; proteasa peptona, 1.0 g y 10 g de
CMC y los siguientes minerales en (mg/L):
FeSO4.7H2O, 5 mg; MnSO4.4H2O, 16
mg; ZnCl2.7H2O, 17 mg; CoCl2.6H2O, 2
mg. El pH del medio se ajustó a 4.8 y se
esterilizó. Posterior al proceso de esteri-

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Resultados y Discusión

Actividad Celulolítica Cualitativa

Los 4 géneros evaluados (Phanerochae-


te spp, Stereum spp, Ganoderma spp y
Xylaria spp) mostraron actividad celulolíti-
ca con halos de transparencia de 12 mm,
8.5 mm, 6 mm y 9 mm respectivamente.
(Tabla 1)

Tabla 1. Determinación de actividad ce-


lulolítica de los hongos en medio sólido
Czapek’s Dox.

Género fúngico Diámetro de halo


de hidrólisis (mm) Figura 2. Halo de transparencia por Ste-
Phanerochaete spp 12 reum spp en medio de cultivo Czapek’s
Stereum spp 8.5 Dox con rojo congo 1%.
Ganoderma spp 6
Xylaria spp 9

DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD
CELULOLÍTICA CON ROJO CONGO 1%

Figura 3. Halo de transparencia por Gano-


derma spp en medio de cultivo Czapek’s
Dox con rojo congo 1%.

Figura 1. Halo de transparencia por


Phanerochaete spp en medio de cultivo
Czapek’s Dox con rojo congo 1%.

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ran un diámetro de actividad celulolítica


mayor a 6 mm fueron seleccionados. (7)

Según diversos autores mencionados


anteriormente, las diferencias entre los
diámetros de actividad celulolítica pro-
bablemente estén ligadas a los tipos de
suplementos de nitrógeno y carbono que
se adicionan a los medios de cultivo y las
condiciones de agitación y aireación.

El género fúngico Phanerochaete spp es


estudiado con frecuencia debido a su sis-
tema de enzimas que le permiten llevar a
cabo procesos de degradación de lignoce-
lulosa. Al ser cultivado en un medio que
contenga celulosa como fuente de carbo-
Figura 4. Halo de transparencia por Xyla-
no, este produce 2 enzimas extracelulares
ria spp en medio de cultivo Czapek’s Dox
que oxidan los extremos reductores de la
con rojo congo 1%.
celobiosa oxiadasa y la celobiosa quinona
oxidorreductasa.(10) Por esta misma ra-
De acuerdo al artículo publicado por Awa-
zón, exhibe los mayores halos de hidróli-
dalla et al., 2017, diversas especies fúngi-
sis cuando es estudiado en conjunto con
cas fueron evaluadas para actividad celu-
otros géneros fúngicos.
lolítica siguiendo el método de Teather y
Wood, en donde identificaron que los ma-
Medición de la actividad celulasa total
yores diámetros de hidrólisis fueron dados
(fpasa)
por Aspergillus terreus (90 mm), Aspergi-
llus flavipes (86 mm) y Aspergillus sydawi
Se midió la actividad de celulasa total
(80 mm).(8) Sin embargo, los diámetros
(celobiohidrolasa, endo 1,4 β-glucanasa
de hidrólisis identificados en este estudio
y β-glucosidasa) utilizando el papel filtro
son inferiores a los previamente mencio-
como fuente de sustrato. De los 4 géneros
nados, siendo el mayor halo de hidrólisis
evaluados, Phanerochaete spp y Gano-
perteneciente al género Phanerochaete
derma spp mostraron los máximos valores
spp (12 mm).
para actividad enzimática. (Tabla 2)

De manera similar, se reportaron resulta-


dos de actividad celulolítica obtenidos por
Campuzano et al. 2017, en donde el ma-
yor diámetro de hidrólisis se identificó en
el género Conidiobolus spp (24.9 mm). (9)

En otra investigación realizada por Guz-


mán et al., 2014, los hongos que obtuvie-

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Tabla 2. Actividad celulasa total (FPasa) pende de la especie y del sustrato; adicio-
de los 4 géneros fúngicos evaluados. nalmente, algunas especies de hongos
no producen enzimas complementarias

Absorbancia
necesarias para mediar el proceso de de-

enzimática
reductores
Azúcares

Actividad
(540nm)
Género

(U/mL)
gradación de lignina y celulosa, por lo que

(g/L)
fúngico es necesario tener conocimiento de la es-
pecie fúngica para obtener resultados más
precisos.
Phanerochaete
0.048 0.678 0.167
spp Adicionalmente, los resultados obtenidos
Stereum spp 0.031 0.384 0.094 de la actividad celulolítica cualitativa y
Ganoderma cuantitativa presentaron diferencias; para
0.055 0.799 0.197
spp el ensayo cualitativo, se utilizó CMC al 1%,
Xylaria spp 0.023 0.246 0.06 considerado un sustrato soluble, mientras
que para el ensayo cuantitativo se empleó
Un estudio llevado a cabo por Rodríguez papel filtro Whatman No. 1, clasificado
et al., 2007, enfocado en la producción de como sustrato insoluble. Estas diferencias
enzimas celulasas por Trichoderma viride podrían estar relacionadas con el tipo de
T12 identificó un valor máximo de 0.374 sustrato empleado para cada prueba, ya
U/mL para la actividad de FPasa; los au- que, de acuerdo con Zhang et al., 2006, la
tores concluyeron que el valor obtenido solubilidad o insolubilidad de dichos sus-
era muy bajo comparado a otros valores tratos en agua es el parámetro que deter-
reportados previamente debido a que el mina los factores para tener en cuenta al
microorganismo utilizado para el estudio realizar el ensayo.
había sido modificado genéticamente. (11)
Otra investigación por Cedillo et al., encar- Dado que los dos sustratos utilizados te-
gada de medir la producción de xilanasas nían diferentes solubilidades, la accesibi-
y celulasas por Phanerochaete chrysospo- lidad de las enzimas al sustrato y el grado
rium, determinó que la mayor actividad de de polimerización presentaron diferencias.
las FPasa (1.4 U/mL) fue dada al utilizar Los autores mencionados anteriormente
el xilano como única fuente de sustrato; plantean que es casi imposible comparar
concluyeron que esto podría suponer que los resultados de ensayos enzimáticos que
es un sustrato capaz de inducir tanto las impliquen diferentes sustratos debido a las
enzimas xilanolíticas como celulolíticas en variaciones que pueden darse en la con-
P. chrysosporium. (12) centración total de celulasa, la proporción
de endo/exocelulasas, tiempo de reacción
En el presente estudio, los valores regis- y las características del sustrato. (13)
trados para la actividad de FPasa no son
comparables con otros estudios debido a Conclusiones
que la especie de los 4 géneros fúngicos Ganoderma spp (0.197 U/mL) y Phanero-
evaluados aún no ha sido determinada. chaete spp (0.167 U/mL) registraron los
La habilidad de los hongos de la pudrición valores más altos de actividad enzimática,
blanca para degradar la lignocelulosa de- indicando el gran potencial que pueden te-

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ner estos hongos en cuanto a la actividad 5. Phitsuw|an P, Laohakunjit, N. Kerd-


celulolítica. choechuen O, Kyu KL, Ratanakha-
nokchai K. Potential applications of
A pesar de que la especie de los 4 géneros cellulases in agriculture, biotechno-
fúngicos evaluados aún no ha sido deter- logy, and bioenergy. Folia Microbiol
minada, los resultados obtenidos en este (Praha). 2013;58(2):163–76.
trabajo podrían servir de apoyo para futu- 6. Nathan VK, Rani ME, Rathinasamy
ros proyectos dirigidos a implementar di- G, Dhiraviam KN, Jayavel S. Pro-
chos hongos en procesos de degradación cess optimization and production
de celulosa. kinetics for cellulase production by
Trichoderma viride VKF3. Springer-
El género fúngico Phanerochaete spp ob- plus. 2014;3:92.
tuvo el mayor halo de hidrólisis (12mm), 7. Guzmán Cedeño ÁM, Zambrano
comprobando que es un hongo de interés Pazmino DE, Rondón AJ, Lauren-
debido a la gran capacidad que tiene para cio Silva M, Perez Quintana M,
producir enzimas celulolíticas. Leon Aguilar R, et al. Aislamiento,
selección y caracterización de hon-
Referencias Bibliográficas gos celulolíticos a partir de muestras
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18
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

11. Rodríguez G. I, Piñeros C. Y. Pro- 13. Percival Zhang YH, Himmel ME,
ducción de complejos enzimáticos Mielenz JR. Outlook for cellulase
celulolíticos mediante el cultivo en improvement: Screening and se-
fase sólida de Trichoderma sp. so- lection strategies. Biotechnol Adv.
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aceite como sustrato. Rev La Fac
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12. Cedillo Aguilar A, Peralta Pérez MR,
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lulosa: hemicelulosa sobre la pro-
ducción por phanerochaete chrysos-
porium A594. Soc Mex Biotecnol y
Bioingeniería.

19
UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

Evaluación del Plan de Gestión Integral de Residuos Sólidos de


la Universidad Libre Seccional Pereira, 2018.
Buriticá Herrera Héctor Mario1, Ceballos Toro Valeria2

Resumen: Abstract:
Introducción: Mediante el Plan de Ges- Introduction: Through the Comprehensi-
tión Integral de Residuos sólidos, se es- ve Solid Waste Management Plan, prin-
tablecen principios bajo los cuales las di- ciples are established under which the
ferentes organizaciones direccionan sus different organizations direct their institu-
metas y objetivos institucionales, en cuan- tional goals and objectives, regarding so-
to al manejo de los residuos sólidos, dismi- lid waste management, thus reducing the
nuyendo así el impacto ambiental y evitan- environmental impact and avoiding social
do problemas sociales como afectaciones problems such as impacts on the workers’
en la salud de los trabajadores. Metodo- health. Methodology: The objective was
logía: El objetivo fue garantizar la gestión to guarantee the integral management of
integral de los residuos en la Universidad waste at the Pereira Free University, in ac-
libre Pereira, de acuerdo con la normati- cordance with current environmental regu-
vidad ambiental vigente, especialmente lo lations, especially related to the waste ge-
relacionado con los residuos generados nerated and its management by staff. The
y su manejo por parte del personal. Tam- generating units, signaling, internal move-
bién se evaluó las unidades generadoras, ment, operators and the final disposal of
la señalización, el movimiento interno, los solid waste at the Pereira Free University
operarios y la disposición final de residuos were also evaluated. Results: It was found
sólidos en la Universidad Libre seccional that the surveyed personnel adequately
Pereira. Resultados: Se encontró que el classify the waste, but do not know the
personal encuestado clasifica adecuada- schedules and frequency of collection by
mente los residuos, pero desconoce los the contracted company; the vaccination
horarios y frecuencia de recolección de scheme against hepatitis B and tetanus
éstos por parte de la empresa contratada; must be completed in 36.8% of workers,
se debe completar el esquema de vacuna- the greatest amount of hazardous waste
ción contra hepatitis B y tétano en el 36,8% generated is bio sanitary. Conclusions:
de los trabajadores, la mayor cantidad de the internal route of waste movement must
residuos peligrosos generados son biosa- be made visible, with its respective signa-
nitarios. Conclusiones: se debe visibilizar ge and commissioning of the University’s
la ruta interna de movimiento de residuos, environmental management committee.
con su respectiva señalización y puesta en
marcha el comité de gestión ambiental de Keywords: Solid waste, management, en-
la Universidad. vironment, organizations.

Palabras clave: Residuos sólidos, ges-


tión, medio ambiente, organizaciones.

1 Universidad Libre Pereira. Profesor Programa de Microbiología. Grupo de investigación Microbiotec,


2 Universidad libre Pereira. Estudiante Programa de Microbiología. Grupo de investigación Microbiotec,

20
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

Introducción chaza o entrega y que es susceptible de


aprovechamiento o transformación en un
La Universidad libre, en su compromiso nuevo bien, con valor económico o de dis-
con el cumplimiento de la normatividad posición final (4).
ambiental legal vigente formuló el plan de
gestión integral de residuos sólidos que Según la Resolución 1164 de 2002, los
contiene los lineamientos para el manejo residuos se clasifican de acuerdo a sus
ambientalmente seguro de éstos, se trata características físicas, químicas y biológi-
de un instrumento de planeación institucio- cas en peligrosos; infecciosos o de riesgo
nal que contiene un conjunto ordenado de biológico, químicos y radioactivos, y no
objetivos, metas, proyectos, actividades y peligrosos; biodegradables, reciclables,
recursos definidos para el manejo de los inertes, ordinarios o comunes (5).
residuos sólidos, el cual se ejecutará du-
rante un período determinado, basándose El objetivo de este estudio fue garantizar la
en un diagnóstico inicial, en su proyección gestión integral de los residuos en la Uni-
hacia el futuro y en un plan financiero via- versidad libre seccional Pereira, de acuer-
ble que permita garantizar el mejoramien- do con la normatividad ambiental vigente,
to continuo del manejo de residuos sólidos especialmente lo relacionado con los re-
(1). siduos generados y su manejo por parte
del personal. También se buscó evaluar
Según el Decreto 351 de 2014, el Plan de las unidades generadoras, la señalización,
Gestión Integral de Residuos (PGIRS) es el movimiento interno, los operarios y la
el instrumento de gestión diseñado e im- disposición final de residuos sólidos en la
plementado por los generadores que con- Universidad Libre seccional Pereira.
tiene de una manera organizada y cohe-
rente las actividades necesarias que ga-
ranticen la gestión integral de los residuos Materiales y Métodos
generados en la atención en salud y otras
actividades (2). Tipo de estudio: Investigación de enfo-
que cuantitativa descriptivo de corte trans-
Por medio del PGIRS se tiene como meta versal.
establecer los principios bajo los cuales
los diferentes tipos de industrias organi- Población y muestra: Universo de los
zan sus metas y objetivos ambientales en empleados de servicios generales con-
cuanto al manejo de los residuos sólidos, tratados por la Universidad Libre seccio-
teniendo como fin un logro ambiental que nal Pereira para el manejo de residuos
apoye el crecimiento económico y social sólidos, correspondiente a 28 empleados;
de la industria, disminuyendo los proble- sede centro y sede Belmonte, personal de
mas ambientales y evitando problemas Aservi.
sociales como afectaciones en la salud de
Criterios de inclusión: Personal encar-
los seres humanos (3).
gado del manejo de residuos sólidos en la
El residuo sólido se define como cualquier Universidad Libre seccional Pereira.
objeto, material, sustancia o elemento só-
Criterios de exclusión: Personal que
lido resultante del consumo o uso de un
realice labores diferentes al manejo de
bien en actividades domésticas, indus-
residuos sólidos en la Universidad Libre
triales, comerciales, institucionales o de
seccional Pereira.
servicios, que el generador abandona, re-

21
UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

Técnicas e instrumentos de recolec- Se observó desconocimiento en el 84.2%


ción de información del personal que maneja los residuos só-
lidos en la Universidad Libre seccional
La técnica de recolección de la informa- Pereira respecto a la sigla PGIRS (Plan
ción fue una encuesta realizada y aplicada de Gestión Integral de Residuos Sólidos).
por el investigador y el auxiliar de investi- Solo el 15.8% mostro conocer el significa-
gación, la cual contempló aspectos como: do de la sigla (Gráfica 1).
Conocimiento del PGIRS, contrato vigente
con la empresa recolectora de residuos Tabla 1. Conocimiento acerca del horario
(EMDEPSA), clasificación de residuos, y días de recolección de residuos.
horario de recolección de residuos, ruta de
movimiento interno de residuos, caracte-
rísticas del depósito central de almacena-
miento, esquema de vacunación del per-
sonal encargado del manejo de residuos,
uso de elementos de protección personal,
empleo del vehículo para el movimiento
interno de residuos, características de las
canecas y bolsas utilizadas, conocimien- Fuente: Elaboración propia
to sobre el uso adecuado del formulario
RH1,presencia de Comité de Gestión Am- Se observa que el 94,7 % del personal de
biental en la Universidad Libre seccional Aservi no tiene claro los horarios de reco-
Pereira. lección de los residuos en la Universidad
libre seccional Pereira
Aspectos éticos
Según la Resolución 08430 del Ministerio
de Salud de 1993, la presente investiga- Gráfica 2. Dificultades presentadas en el
ción se considera de riesgo mínimo para manejo de residuos de acuerdo a las ca-
la población. pacitaciones realizadas al personal encar-
gado de su manejo en la Universidad Libre
Análisis estadístico seccional Pereira.
Se realizó tabulación, análisis univariado
y bivariado de la información utilizando el
software estadístico SPSS versión 22.0.
Fuente: Elaboración propia.
Resultados
De las personas capacitadas, 10 no pre-
Gráfica 1. Conocimiento acerca del signi- sentan dificultad en el manejo de residuos,
ficado de la sigla PGIR lo que indica que se encuentran bien ca-
pacitados.
15,8%

84,2%

Fuente: Elaboración propia.

22
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

Tabla 2. Exposición al riesgo de las personas de acuerdo al uso de EPP y según esque-
ma de vacunación.

Fuente: Elaboración propia

El 36.8% de las personas encuestadas no Discusión:


poseen el esquema de vacunación para El riesgo que representan los residuos
Hepatitis B y Tétano. El 28.6% de las per- para el medio ambiente y la salud de las
sonas que no están vacunadas utilizan personas, es una preocupación mundial
todos los elementos de protección perso- que ha promovido la generación de es-
nal. El 57,9% de las personas si poseen trategias y planes; en este caso se hace
el esquema de vacunación para hepatitis referencia al Plan de Gestión Integral de
b y tétano. Residuos Sólidos PGIRS, que es un ins-
trumento diseñado e implementado por
El 63,6 % del personal encuestado conoce los entes generadores de residuos que
la ruta interna de movimiento de residuos, contiene las actividades necesarias para
pero solamente 1 sabe que la recolección garantizar la gestión integral de los resi-
de realiza1 vez por semana. duos generados en la atención en salud y
otras actividades.

23
UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

Tabla 3. Conocimiento por parte del personal de la ruta interna y los días de recolec-
ción de residuos.

Fuente: Elaboración propia

La última actualización del manejo de resi- que la mayor cantidad de residuos genera-
duos sólidos se hizo en el 2013, encontrán- dos son corrientes de cafetería y salones
dose que la mayor cantidad de residuos principalmente. En el estudio mencionado
generados son biosanitarios y corrientes, de la empresa de energía de Pereira, clasi-
se diferencia del estudio de generación de ficaron como residuos especiales material
residuos realizado en la Universidad de La vegetal, madera y escombros; de los cuá-
Salle en Bogotá, dónde se encontró que les el material vegetal fue el mayor pesaje
la mayor cantidad de residuos genera- al año, está de acuerdo con la generación
dos fueron residuos tóxicos, inflamables, de residuos sólidos en la Universidad libre
corrosivos y biosanitarios (13), además seccional Pereira, dónde hayamos que el
si tienen una ruta interna de movimiento mayor pesaje de residuos sólidos corres-
de residuos, la cual no se tiene en la Uni- ponde a pasto y frutas. De los residuos
versidad libre seccional Pereira y ambas peligrosos generados por la mencionada
instituciones tienen un vehículo para mo- empresa, la mayor cantidad fueron acei-
vimiento interno de residuos, avalado de tes dieléctricos (transformadores, cane-
acuerdo a la normatividad vigente. cas de aceite usado), baterías de plomo
y rezagos tecnológicos, los cuáles no se
En el año 2012 se diseñó el programa de generan en la Universidad libre. En menor
gestión para el manejo de residuos sóli- cantidad dicha empresa genera lámparas
dos en la empresa energía de Pereira S.A. y tóner; los cuáles también son generados
E.S.P, se encontró que la mayor cantidad en la presente investigación, acompaña-
de residuos corrientes generados en el dos de metales pesados, reactivos, balas-
año son piezas metálicas, papel de archi- tros y pilas alcalinas. Finalmente, la Uni-
vo y en menos cantidad papel periódico y versidad libre genera residuos con riesgo
plástico; en nuestro estudio encontramos biológico, principalmente los biosanitarios,

24
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

contrastando con la empresa de energía • En cuanto al diagnóstico de mane-


de Pereira, que por su carácter misional jo de residuos, se encontró un alto
no son producidos (6). desconocimiento del significado de
la sigla PGIRS en los encuestados,
En la Universidad de la Salle (sede cen- clasifican adecuadamente los resi-
tro), se generaron en el año 2015 en ma- duos; pero desconocen los horarios
yor medida residuos con características y frecuencia de recolección de ellos
tóxicas, principalmente residuos de solu- por parte de la empresa contratada,
ciones acidas y básicas; en menor propor- se debe completar el esquema de
ción residuos biosanitarios; contrasta con vacunación contra hepatitis B y téta-
el estudio hecho en la Universidad libre, no en el 36,8% de los trabajadores.
dónde se encontró que la mayor cantidad La mayor cantidad de residuos peli-
de residuos peligrosos generados son bio- grosos generados son biosanitarios
sanitarios y los no peligrosos ordinarios y y la universidad se clasifica como
corrientes (13). gran generador de residuos.
• Se debe visibilizar la ruta interna
En el estudio relacionado, metodología de movimiento de residuos, con su
para la segregación de residuos químicos respectiva señalización y puesta en
generados en el laboratorio de bioquímica marcha el comité de gestión am-
y nutrición animal del Politécnico Colom- biental de la Universidad libre, con
biano Jaime Isaza Cadavid; se observó reuniones el último jueves de cada
que no existe una disposición adecuada mes de 4 a 6 pm.
de residuos químicos, pues se almace- • Se hizo una sensibilización al perso-
nan en un mismo recipiente sin importar nal de Aservi encargado del manejo
su composición y grado de reacción entre de residuos, sobre la responsabili-
ellos, situación ésta que también debe re- dad ambiental de su clasificación,
plantearse en el PGIRS que la Universi- tratamiento y disposición final y se
dad libre. En dicho instituto no se clasifican observó un aumento del compromi-
adecuadamente los residuos biosanitarios so institucional frente al tema de ma-
en bolsa roja, situación ésta que, si está nejo de residuos sólidos en la sede
muy bien direccionada en los laboratorios centro y Belmonte, de la Universidad
de biología y microbiología de la Universi- libre seccional Pereira, por parte de
dad libre, de otro lado en dicho instituto el todos los asistentes.
100% de los estudiantes encuestados ma-
nifiesta que no han recibido capacitaciones
y actualizaciones en manejo de residuos; Referencias Bibliográficas:
en la encuesta aplicada a los funcionarios
de Aservi se encontró que el 100% de los 1. Ministerio de Vivienda, Ciudad y
funcionarios si han sido capacitados en la Territorio. Decreto 1077 de 2015.
temática analizada (14). [Internet] República de Colombia.
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Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

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27
UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

Determinación cualitativa de la actividad antimicrobiana de


sustancias antibióticas, bactericidas y fungicidas en
antibiograma.
Camacho S. Ana.1, Pérez M. Valeria,1 León Rodríguez Daniel A.2

Resumen Abstract
Introducción: En la actualidad resulta At present it is common to use various
común emplear diversas sustancias que substances that inhibit the growth of micro-
inhiban el crecimiento de los microorga- organisms, this can occur in inert surfaces
nismos, ello se puede dar en superficies or living tissues, so there are inorganic and
inertes o tejidos vivos, por lo cual existen organic chemicals that carry out microbio-
sustancias químicas inorgánicas y orgá- cidal or microbiostatic functions. Under
nicas que llevan a cabo funciones micro- this context, the effectiveness of different
biocidas o microbiostáticas. Metodología: substances against different microorgan-
Bajo este contexto se procedió a evaluar isms (bacteria and yeast) was evaluated.
la efectividad que tienen diferentes sus- To do this, we proceeded to analyze the
tancias ante diversos microorganismos susceptibility of these microorganisms to
(bacterias y levaduras). Para ello se pro- the different substances, in two ways; One
cedió a analizar la susceptibilidad de di- of these was to use three substances in
chos microorganismos ante las diferentes two different concentrations and the oth-
sustancias, de dos maneras; una de estas er consisted of using eight different sub-
consistió en emplear tres sustancias en stances using sensidiscs. Both expected
dos concentraciones diferentes y la otra and surprising results were obtained, de-
consistió en emplear ocho sustancias dife- pending on the efficiency of the substance
rentes mediante sensidiscos. Resultados: used, so the reasons why this could have
Se obtuvieron resultados tanto esperados happened were investigated, concluding
como sorpresivos, dependiendo de la efi- that the efficiency of the antimicrobial sub-
ciencia de la sustancia empleada, por lo stances depends on several factors.
cual se indagó los motivos por los cuales
esto pudo haber sucedido, Conclusión: la
eficiencia de las sustancias antimicrobia- Key words: susceptibility, effectiveness,
nas depende de diversos factores. microorganisms, antimicrobial substances.
Palabras clave: susceptibilidad, efectivi-
dad, microorganismos, sustancias antimi-
crobianas.

1 Semillero de investigación MGB. Universidad Libre, Seccional Pereira


2 Docente del programa de Microbiología, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad Libre Pereira

28
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

Introducción dos por la inhibición a la peptidiltransfera-


Los microorganismos son caracterizados sa del ribosoma, en algunos casos pueden
por tener un tamaño que comúnmente afectar las células del huesped. También
oscila entre los 3 y 10 micrómetros y por existen las quinolonas, antibióticos de los
tanto manifiestan mayor sensibilidad a di- cuales por un lado se han desarrollado cu-
versas sustancias que afectan su ciclo de atro generaciones que inhiben la acción
vida (1); en ese sentido se han desarrolla- de las topoisomerasas, que al ser impre-
do los agentes antimicrobianos, definidos scindibles en la síntesis del DNA tienen un
como sustancias naturales, sintéticas o efecto bactericida, por otro lado están las
semisintéticas con la capacidad de matar fluoroquinolonas que ingiben a las DNA
o inhibir el crecimiento de los diferentes girasa, por lo cual también impiden la sín-
microorganismos como las bacterias, hon- tesis del DNA y tiene el mismo efecto que
gos y algas (2). las otras quinolonas; ambos tipos pueden
ser empleados para tratar infecciones
Algunos ejemplos de antimicrobianos son causadas por diversas cepas bacterianas
los antibióticos, los cuales se han desar- Gram-positivas o Gram-negativas. Otro
rollado para actuar contra las bacterias y modo de acción es afectar la pared bac-
son empleados en caso de infección. De teriana, en ese sentido los glucopeptidos
los antibióticos se puede decir que están inhiben su síntesis al impedir la formación
clasificados en diferentes grupos como los del complejo D-alanina, por su naturale-
betalactámicos, los cuales a su vez con- za son empleados principalmente contra
tienen subgrupos, tales son: penicilinas, cepas Gram-positivas. Finalmente están
cefalosporinas y carbapenémicos, los cu- las sulfoamidas que tienen un efecto bac-
ales tienen la capacidad de actuar contra teriostatico generado por el antoganismo
bacterias Gram-positivas; algunos se han competitivos que generan al secuestrar el
continuado desarrollando para lograr ac- ácido paraaminobenzoico, imprescindible
tuar incluso contra algunas cepas Gram- para la síntesis del ácido fólico por lo cual
negativas o bien no perder su capacidad se puede emplear contra bacterias y algu-
terapéutica por la resistencia haya gen- nos protozoos (3-12).
erado. También están las tetraciclinas,
estas han tenido tres generaciones de de- Los biocidas definidos como sustancias
sarrollo, tienen un efecto bacteriostático y químicas tóxicas para los microorganis-
actúan sobre la subunidad 30S del ribo- mos; son dosificados a un sistema con el
soma, inhibiendo la síntesis de proteínas; objetivo de reducir rápida y eficazmente
motivo por el cual se pueden emplear en la población microbiana, se subclasifican
diversas infecciones bacterianas o proto- en agentes oxidantes como el hipoclorito
zoarias. Los aminoglucósidos, un grupo de sodio y no oxidantes como las aminas;
compuesto únicamente de cuatro antibióti- generalmente se emplean como desinfec-
cos en el que se incluye la gentamicina, se tantes y conservantes (13-14).
caracterizan por inhibir la síntesis proteica
al bloquear la elongación en diferentes Según lo anterior se tiene que los agentes
grupos y especies bacterianas dado que antimicrobianos actúan de maneras dife-
se une a la subunidad 30S, específica- rentes lo cual lleva a su clasificación en
mente en la posición 16S. Los antibióticos según su tipo de acción en microbicida, re-
macrolidos tienen un efecto bacteriostitico firiéndose a aquellos con la capacidad de
y bactericida sobre Gram-positivos dado eliminar los microorganismos y microbios
que impiden la sintesis de nuevos pepti- tatico a los que inhiben o hacen más lento

29
UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

el crecimiento microbiano; Su acción de- Referente a lo anterior, se puede afirmar


pende de la concentración de dicha sus- que se debe elegir entonces el agente ap-
tancia y del tiempo durante el que actúa ropiado (el más activo contra el patógeno,
(15). el menos tóxico para el huésped, con las
características farmacológicas apropiadas
Partiendo de los conceptos anteriores se y el más económico (23).
tiene que las sustancias antimicrobianas
según su modo de acción pueden actuar El antibiograma generalmente define la
como agentes esterilizantes con capa- actividad in vitro de un antibiótico frente a
cidad de destruir microorganismos o cu- un microorganismo específico, reflejando
alquier tipo de sustancia sobre el material así su capacidad para inhibir el crecimien-
de interés, agentes desinfectantes con un to de una bacteria o población bacteriana
fin microbicida o microbiostático aplicado (24).
a superficies inanimadas o bien agentes
antisépticos aplicado a superficies vivas Los ensayos de sensibilidad a microor-
(16-18). ganismos, han de estar convenientemente
normalizados y sujetos a procesos de con-
Debido a su fácil acceso dada su dis- trol que aseguren su reproducibilidad (24-
ponibilidad generalizada, a su costo gen- 25).
eralmente bajo y a su relativa seguridad,
los antimicrobianos se encuentran entre Para hacer un antibiograma exitoso, pu-
los métodos más usados (19); sin embar- eden existir diferentes métodos y deriva-
go, sus propiedades y por tanto acción se ciones, entre ellos los comunes, tales son
puede ver afectada por la concentración el método de disco en placa, el cual fue
en que se emplee el agente y el tiempo el de interés y consiste básicamente en
en que se deje actuar, pH, temperatura, emplear un seriado de discos de papel
el microorganismo contra el cual se está secante impregnado con diferentes anti-
empleando y/o la presencia de otras sus- bióticos un medio de cultivo previamente
tancias. (20) preparado e inoculado con la cepa de
interés, de igual manera existen los mé-
Por otra parte, los estudios llevados a cabo todos de suspensión directa de colonias,
hacia la sensibilidad que componen los Epsilon test y método de dilución en agar
microorganismos con respecto a los an- (24, 26-28)
timicrobianos se desarrollan mediante las
pruebas de sensibilidad o antibiograma, Para llevar a cabo un análisis empleando
cuyo principal objetivo es evaluar la respu- antibiograma es común emplear agar nu-
esta de un microorganismo a uno o vari- tritivo (AN) o Mueller-Hinton (MH) dadas
os antimicrobianos, traduciendo, en una sus características.
primera aproximación, su resultado como
factor predictivo de la eficacia clínica (21). AN: Se caracteriza por permitir el creci-
Teniendo en cuenta que no se puede pre- miento de microorganismos poco exigen-
decir la susceptibilidad de las bacterias, tes en cuanto a su nutrición; lo cual hace
hongos, virus y demás microorganismos que su uso sea común, principalmente
ante un agente antimicrobiano, se forja la para realizar el aislamiento y recuento de
necesidad de estudiar la sensibilidad in- colonias dado el crecimiento satisfactorio
dividual de cada patógeno a este tipo de que normalmente presentan las cepas
medicamentos o barreras (22). inoculadas en este. En microbiología es

30
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Investigación, Desarrollo e Innovación

común su uso por sus características po- se requerirían en concentraciones de 1:1


livalentes que permiten realizar variados y 1:10.
análisis. (30)
Teniendo el material listo, se procedió a
MH: Es comúnmente utilizado en micro- realizar la siembra por agotamiento (figura
biología para determinar la sensibilidad 1) de cada uno de los inóculos en 6 cajas
de las cepas, generalmente aisladas en de Petri que contenían el AN y que super-
ambientes clínicos, de microorganismos aron la prueba de esterilidad; acto seguido
aerobios a antimicrobianos. Ello dado su se depositaron 2 mL de las sustancias an-
buena productividad y método Bauer-Kirby timicrobianas en el estado en que se com-
en que a través de un gel se difunden las ercializan en uno de los medios ya inocu-
sustancias antimicrobianas, impregnadas lados; luego se realizó el mismo proced-
en papeles (sensidiscos). La técnica de- imiento empleando las sustancias diluidas.
sarrollada en la década de 1960 por Bauer, Una vez los medios fueron inoculados y
Kirby y otros se ha ido perfeccionando, lo contenían cada uno 2 mL de la sustancia
que permite que la evaluación e interpre- antimicrobiana, fueron llevados a incuba-
tación de resultados se realice con base dora durante 3 días a una temperatura de
en el diámetro de las zonas de inhibición 37°C. Finalmente se realizó el respectivo
(ZOI), generadas por acción de las sustan- análisis que constaba en evaluar cada una
cias antimicrobianas, comparándolas con de las líneas de los cuadrantes (figura 1)
las concentraciones mínimas de inhibición teniendo en cuenta que cada una tenía
(CMI) y determinando si el organismo es un valor equivalente a 0,2 si se registraba
sensible o susceptible (S), intermedio (I) o buen crecimiento microbiano; teniendo
resistente (R) y la efectividad de la sustan- así un valor máximo de 1 por cuadrante
cia para inhibir el crecimiento microbiano. y una pequeña línea en el medio que se
(31-32)Con fundamento en la información realizaba en el medio después de sembrar
anterior se llevó a cabo la práctica que todos los cuadrantes tendría valor de 1 si
permitiera evaluar la susceptibilidad anti- registraba crecimiento, completando así el
microbiana (AST, por sus siglas en inglés) valor máximo por caja de 5.
de Escherichia coli, Lactococcus lactis,
Staphylococcus aureus y Saccharomy- Antibiograma: En primera instancia se
ces cerevisiae, caracterizando de manera procedió a preparar los medios correspon-
cualitativa la actividad antimicrobiana de dientes, MH y AN, según las indicaciones
diversas sustancias, tales son: solución de la casa comercial. Se realizó control
salina (cloruro de sodio), hipoclorito de de esterilidad. También se activaron las
sodio, butanol, amoxicilina, café, vinagre cepas que iban a ser empleadas; se cor-
balsamico, norfloxacina y gentamicina. taron los sensidiscos a partir de papel fil-
tro, los cuales fueron esterilizados en au-
Metodología toclave. De igual manera se prepararon
las disoluciones necesarias, tal fue el caso
Antimicrobianos: Para comenzar se pro- del hipoclorito de sodio que se llevó a una
cedió a preparar el material necesario, concentración del 5% y la amoxicilina que
para ello por un lado se organizó AN según fue disuelta en 10 ml de agua. Teniendo
las indicaciones de la casa comercial; por los sensidiscos estériles se procedió a
otro lado, se realizaron las diluciones de impregnarlos con las sustaancias respec-
las sustancias a emplear (butanol, hipoclo- tivas (figura 2) de manera tal que los prim-
rito de sodio y solución salina) puesto que eros 6 correspondieron a agua destilada,

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amoxicilina, café, vinagre, solución salina zona de inhibición generada por las dife-
e hipoclorito de sodio dado que el 7 y 8 rentes sustancias.
ya contenían antibióticos desde su fabri-
cación (gentamicina y norfloxacina), se Es de destacar que las diluciones, siem-
procedió a realizar la siembra masiva de bras y procedimientos de adición de las
los inóculos en cada uno de los medios sustancias antimicrobianas a los medios
para depositarlos en su superficie (figura se realizaron cerca a mechero y al concluir
9). Para finalizar fueron las cajas fueron con las prácticas se procedió a descartar
llevadas a incubación a 37°C durante 3 el material, inactivando las cepas en au-
días. El análisis se realizó evaluando la toclave.

Tabla 1. Evaluación de la inhibición de diferentes microorganismos respecto a sustan-


cias antimicrobianas.

Presencia : SI
Ausencia: -
Sustancias Crecimiento Contaminació
Bacteria antimicrobianas microbiano n por hongos
no
caracterizados
Staphylococcu Hipoclorito 1% - -
s 10% - SI
aureus Cloruro de 1% SI SI
sodio 10% - SI
Butanol 1% - SI
10% - SI
Lactococcus Hipoclorito 1% - -
lactis 10% - SI
Cloruro de 1% - SI
sodio 10% - SI
Butanol 1% SI SI
10% SI SI
Escherichia Hipoclorito 1% - -
coli 10% - SI
Cloruro de 1% - SI
sodio 10% - SI
Butanol 1% - SI
10% SI SI
Saccharomyce Hipoclorito 1% - -
s 10% - SI
cerevisiae Cloruro de 1% - SI
sodio 10% - SI
Butanol 1% SI -
10% - SI

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Resultados Discusión
Según las figuras 14-18 se puede eviden- A pesar de que en las imágenes (figuras
ciar la susceptibilidad de los diferentes in- 10-13) no sea muy claro el crecimiento
óculos a diversas sustancias antimicrobi- microbiano que pudo haber en cada una
anas, como se muestra en las tablas 3, 4, de las cajas, al realizar el análisis de los
5 y 6, donde: resultados en laboratorio (tabla 1), se evi-
denció que en muchos casos se desarrolló
● -- → Inhibición nula crecimiento microbiano a pesar de haber
● - → Poca inhibición empleado sustancias en diferentes con-
● + → Inhibición centraciones que hipotéticamente lo inhi-
● ++ → Alta inhibición birían.
Tabla 2. Susceptibilidad de las diferentes cepas ante los diferentes antimicrobianos.

Presencia : SI
Ausencia: -
Sustancias Crecimiento Contaminació
Bacteria antimicrobianas microbiano n por hongos
no
caracterizados
Staphylococcu Hipoclorito 1% - -
s 10% - SI
aureus Cloruro de 1% SI SI
sodio 10% - SI
Butanol 1% - SI
10% - SI
Lactococcus Hipoclorito 1% - -
lactis 10% - SI
Cloruro de 1% - SI
sodio 10% - SI
Butanol 1% SI SI
10% SI SI
Escherichia Hipoclorito 1% - -
coli 10% - SI
Cloruro de 1% - SI
sodio 10% - SI
Butanol 1% - SI
10% SI SI
Saccharomyce Hipoclorito 1% - -
s 10% - SI
cerevisiae Cloruro de 1% - SI
sodio 10% - SI
Butanol 1% SI -
10% - SI

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A pesar de lo anterior se logró evidenciar Finalmente, respecto al butanol se puede


la efectividad del hipoclorito de sodio en decir que a pesar de ser un antimicro-
su presentación comercial para inhibir el biano, dado que restringió el crecimiento
crecimiento microbiano o bien generar la de S. aureus, debido que al ser un alco-
lisis de las células bacterianas dado que hol altera la fluidez de las membranas, las
no hubo crecimiento de los inóculos ni deshidrata e interactúan directamente con
de otros organismos contaminantes en las proteínas presentes en ellas, razones
ninguno de los medios tratados con esta por las cuales la estructura es degradada
sustancia. También se constató que en y es inducida la lisis de la célula bacteriana
los medios tratados con hipoclorito diluido (36). Sin embargo no restringió el creci-
hubo crecimiento microbiano de hongos miento de Lactococcus lactis ni el de E. coli
no caracterizados y en ninguno se pre- en la concentración 1:10 ni el de S. cere-
sentó crecimiento de los inóculos lo cual visiae en la concentración comercial (1:1);
permite inferir que si bien pueden tener un lo cual lleva a deducir que pudo haber fac-
efecto bactericida y no poseen un efecto tores que afectaran su efectividad como la
bacteriostático que inhibe el crecimiento volatilidad que esta sustancia tiene puesto
microbiano. que a 36°C tiene la capacidad de alcanzar
la temperatura mínima requerida para co-
Respecto a los medios tratados con solu- menzar a evaporarse; teniendo en cuenta
ción salina, se evidenció la capacidad que que todo se realizó cerca a mechero y la
tiene S. aureus de crecer en entornos sa- temperatura alrededor de este es superior
linos (con una concentración de NaCl de a 36°C (37-38) se puede afirmar que ello
hasta 7.5%) (33) dado que al realizar el afectó su concentración y características
análisis eco métrico se obtuvo un valor de químicas y por tanto antimicrobianas.
3 pero por complicaciones que hubo como
la contaminación no se pudo realizar un Según la información suministrada en la
análisis completo, por tanto, se observó tabla 2 y observada en las imágenes cor-
que tuvo un rendimiento bajo en el trata- respondientes (figuras 14-17), se eviden-
miento con la solución salina comercial, es cia que el realizar la siembra en MH o AN
decir de 1%. De igual manera se observó genera una variación en los resultados,
la efectividad bactericida donde los antimi- además se evidencia que la eficiencia de
crobianos polares se pegan a las proteínas cada una de las sustancias varía respecto
membranales de los microorganismos la al microorganismo. En ese sentido, resul-
cual puede verse afectada al bloquear me- ta curioso haber observado inhibición en
canismos de acción, afectando la síntesis AN por el sensidisco de control negativo,
de proteínas o en su metabolismo como lo que conlleva a inferir que el sensidisco
tal (34-35) que puede tener esta sustan- de gentamicina, ubicado al lado de este
cia al ser empleada como antimicrobiano tuvo una inhibición tan alta y efectiva con-
dado que la solución salina de concen- tra Lactococcus lactis y E. coli que logró
tración comercial en general restringió el restringir en lugares vecinos, siendo evi-
crecimiento de los microorganismos in- dente en el espacio del control negativo.
oculados, sin embargo, no tiene un efecto
bacteriostático que restrinja el crecimiento Respecto a la amoxicilina, dadas las
microbiano dado que todos los medios ZOI, se pudo comprobar que resulta más
tratados con esta sustancia presentaron efectiva contra bacterias Gram-negativas
contaminación por demás organismos no dada la inhibición que presentó contra E.
caracterizados. coli además se observó que en algunas

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ocasiones puede resultar efectiva contra (38). Sin embargo no se observó la misma
cepas Gram-positivas y en otras no; ello efectividad contra S. aureus por parte de
debido a la susceptibilidad que presentó la norfloxacina cuando debió haberlo sido
S. aureus y la resistencia de L. lactis a su puesto que su método de acción actúa in-
acción. De igual manera se demostró que diferentemente entre cepas Gram-positiva
puede restringir el crecimiento de levadu- y Gram-negativas ya que su blanco es
ras. Respecto al café se evidenció que en restringir la acción de la DNA girasa(39),
ningún caso resultó ser una sustancia in- dado que la ZOI no era clara a pesar de
hibidora del crecimiento microbiano; esto que se observaba cierta inhibición, el que
se pudo deber a la poca cantidad que se no haya sido clara y definida la ZOI se pu-
empleó y que la concentración de las sus- ede deber a que el medio fue dejado en in-
tancias antimicrobianas que este contiene cubación por 3 días y el efecto antibiótico
depende de la cantidad de café que se pudo haber vencido. A pesar se observó
emplee. la efectividad de ambos antibióticos con-
tra las diferentes cepas empleadas puesto
De la actividad antimicrobiana que tuvo que las ZOI de ambos era considerable-
el vinagre balsámico se puede decir que mente grande.
resulta inefectivo dado que sólo restringió
el crecimiento microbiano de S. cerevisiae Conclusiones
en AN y E. coli en MH; ello, al igual que en Se logró determinar de manera cualitativa
el caso del café, se pudo deber a la poca la actividad antimicrobiana de diversas
cantidad de vinagre empleada y por tanto sustancias, evidenciando que los antibióti-
poca concentración de las moléculas anti- cos resultan más efectivos que los demás
microbianas que este pueda contener (5). antimicrobianos empleados, demostrando
la susceptibilidad que presenten las cepas
Se evidenció que la solución salina pu- al efecto antimicrobiano que pueden tener
ede disminuir su efectividad al inhibir el diferentes sustancias además de que ex-
crecimiento microbiano al ser empleada a isten diversos factores con capacidad de
través de los sensidiscos en lugar de hac- afectar la efectividad de los agentes an-
erlo directamente, dado que se observó timicrobianos como la concentración en
una efectividad nula contra los diferentes que se emplee y sus propiedades fisico-
inóculos puesto que no se observó alguna químicas.
ZOI.
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BD Mueller Hinton II Agar 150 Mm BD
Mueller Hinton II Agar, Square APPLI-

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Figura 3. Medio inoculado con la bacteria


Figura 1. Representación esquemática Staphylococcus aureus, a: dilución de
del método de siembra empleado, con butanol C4H10O) al 1%v/v; b: dilución
el fin de evaluar el posible crecimiento de Cloruro de sodio (NaCl) al 1% v/v;
microbiano mediante análisis ecométrico. C4H10O) c: dilución de hipoclorito de
Imagen propia. sodio (NaClO) al 1% v/v; d: dilución de
butanol (C4H10O) al 10% v/v; e: dilución
de Cloruro de sodio (NaCl) al 10% v/v; f:
dilución de hipoclorito de sodio (NaCl) al
10%; g: control negativo. Imagen propia.

Figura 2. Representación esquemática Figura 4. Medio inoculado con la bacteria


del antibiograma realizado, con los res- Lactococcus spp, a: dilución de butanol
pectivos sensidiscos y las sustancias em- C4H10O) al 1%v/v; b: dilución de Cloruro
pleadas. Imagen propia. de sodio (NaCl) al 1% v/v; C4H10O) c:
dilución de hipoclorito de sodio (NaClO) al
1% v/v; d: dilución de butanol (C4H10O)
al 10% v/v; e: dilución de Cloruro de sodio
(NaCl) al 10% v/v; f: dilución de hipoclo-
rito de sodio (NaCl) al 10%; g: control ne-
gativo. Imagen propia.

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Investigación, Desarrollo e Innovación

Figura 7. Medios MH (a la izquierda) y


Figura 5. Medio inoculado con la leva- AN (a la derecha) inoculados con S.
dura Saccharomyces cerevisiae , a: di-
lución de butanol C4H10O) al 1%v/v; b:
dilución de Cloruro de sodio (NaCl) al 1%
v/v; C4H10O) c: dilución de hipoclorito de
sodio (NaClO) al 1% v/v; d: dilución de
butanol (C4H10O) al 10% v/v; e: dilución
de Cloruro de sodio (NaCl) al 10% v/v; f:
dilución de hipoclorito de sodio (NaCl) al
10%; g: control negativo. Imagen propia.

Figura 8. Medios MH (a la izquierda) y


AN (a la derecha) inoculados con S. cere-
visiae.

Figura 6. Medio inoculado con la bacteria


Escherichia coli, a: dilución de butanol
C4H10O) al 1%v/v; b: dilución de Cloruro
de sodio (NaCl) al 1% v/v; C4H10O) c:
dilución de hipoclorito de sodio (NaClO) al
1% v/v; d: dilución de butanol (C4H10O) Figura 9. Inóculo de Lactobacillus spp
al 10% v/v; e: dilución de Cloruro de en medios MH (a la izquierda) y AN (a la
sodio(NaCl) al 10% v/v; f: dilución de hi- derecha)
poclorito de sodio (NaCl) al 10%; g: con-
trol negativo. Imagen propia.

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Figura 10. Inóculo de E. coli en medios


MH (a la izquierda) y AN (a la derecha)

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El papel del microbioma de la leche materna humana en la


modulación del sistema inmune del neonato.
Valencia Castillo S Y1 Arbeláez Mendoza L2, Panesso Cortés D2

Resumen Abstract
La leche materna humana es una fuente Human breast milk is an optimal source of
óptima de nutrición para los bebés, dado nutrition for infants, since it is a food rich
que es un alimento rico en sustancias bio- in bioactive substances such as carbohy-
activas como carbohidratos, lípidos, vita- drates, lipids, vitamins, among others, as
minas, entre otros, así como una abundan- well as an abundance of microorganisms,
cia de microorganismos, oligosacáridos,
oligosaccharides, immunoglobulins and
inmunoglobulinas y demás, que permiten
un correcto desarrollo del infante y el es- others, that you are right Development of
tablecimiento de una microbiota intestinal information and healthy intestinal microbio-
sana. Con base en esto, antiguamente se ta. Based on this, formerly it was believed
creía que la leche materna humana era that human breast milk was a body fluid,
un fluido corporal estéril, por lo que la pre- the presence of bacteria in this genera-
sencia de bacterias en esta generó debate tion debate about the scientific community,
entre la comunidad científica, acerca de about the possible source and function of
cuál era el posible origen y función de esta this microbiota in the health and modu-
microbiota en la salud y modulación del lation of the immune system of the baby.
sistema inmune del bebé. Por ende, gra- Therefore, thanks to the development of
cias al desarrollo de herramientas bioin- bioinformatic tools such as metagenomics,
formáticas como la metagenómica, se ha
the study of microorganisms in the world,
logrado el estudio de microorganismos
en el mundo, en ambientes naturales, en in natural environments, in unexplored or-
organismos y lugares inexplorados. Este ganisms and places has been achieved.
tipo de herramientas permite, por tanto, This type of tools allows, therefore, to ob-
obtener muestras de ADN del gen 16s del tain DNA samples of the rRNA 16s gene
ARNr de forma rápida y obtener resulta- quickly and obtain results about the com-
dos acerca de la composición completa plete composition of the sample in terms
de la muestra en cuanto a microorganis- of microorganisms. For this reason, the
mos. Por esta razón, el principal objetivo main objective of this review is to collect
de esta revisión es recopilar información information in order to demonstrate the im-
con el fin de demostrar la importancia de la portance of human breast milk as the food
leche materna humana como alimento que that allows the modulation of the system in
permite la modulación del sistema inmune
babies throughout their lives thanks to the
de los bebés a lo largo de su vida gracias
al microbioma presente en esta y otros da- microbiome present in this and other data
tos de gran interés. of great interest

Palabras Clave: leche humana, microbio- Key words: human milk, microbiome,
ma, metagenómica, oligosacáridos, siste- metagenomics, oligosaccharides, inmune
ma inmune. system.

1 Profesora Investigadora, Universidad Libre. Grupo de Investigación NutriOma, Línea Nutrigenética


y Nutrigenómica
2 Estudiantes programa Microbiología Universidad Libre. Grupo de Investigación Microbiotec.

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UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

Introducción mientas bioinformáticas es de gran utili-


La relación que comparten los humanos dad, ya que esta es la fuente recomendada
con los microorganismos es una de las de nutrición para los bebés por su balance
relaciones más importantes, ya que gra- óptimo de nutrientes como son: (6) carbo-
cias a esta interacción se logra con éxito hidratos, lípidos, aminoácidos, proteínas,
la supervivencia. Es bien conocido que vitaminas y minerales indispensables para
los seres humanos conviven en un mun- el desarrollo del bebe, así como células
do dominado por los microorganismos (1) inmunocompetentes, inmunoglobulinas,
(2). Sin embargo, un porcentaje de estos ácidos grasos, poliaminas, oligosacári-
microorganismos no se puede cultivar in dos, lisozima, lactoferrina y otras glico-
vitro debido a la imposibilidad de replicar proteínas, además de microorganismos y
en laboratorio las condiciones ambientales péptidos antimicrobianos (7)(8) los cuales
de sus ecosistemas naturales; de tal ma- ayudan al desarrollo de la inmunidad inna-
nera que no poseer los medios nutriciona- ta del neonato. Así mismo, es de resaltar
les adecuados de aislamiento microbiano los oligosacáridos, dado que proporcionan
o no comprender o lograr las condiciones nutrientes para el metabolismo microbia-
ambientales en las que se deben aislar, ha no, permitiendo que se dé con éxito una
puesto límites al conocimiento de los mi- relación simbiótica entre el microorganis-
crobiomas. Se estima que el 99% de las mo y el huésped (9,10).
comunidades microbianas ambientales no
es accesible por métodos tradicionales de En particular en cuanto a los microrganis-
aislamientos microbiológicos, tales como mos presentes en la leche materna, se
cultivo en medios artificiales y caracteriza- han reportado especies como Weisella,
ción bioquímica (3) Leuconostoc, Staphylococcus, Strepto-
coccus, Lactococcus, Veillonella, Lepto-
Actualmente el desarrollo de herramien- trichia y Prevotella (11) apoyando el argu-
tas y tecnologías bioinformáticas como la mento de la LMH como fuente optima de
metagenómica, mejoran el conocimiento nutrición (12), por ser especies necesarias
de los microorganismos en el mundo, en para la maduración del intestino del neo-
ambientes naturales, en los organismos y nato. Diferentes estudios sugieren que los
lugares inexplorados (4). Esta herramienta microrganismos presentes en la glándula
molecular permite el diagnóstico rápido de mamaria provienen del intestino mediante
los microorganismos sin la necesidad de monocitos intestinales que se desplazan
realizar cultivos. En otras palabras, la me- durante el embarazo y la lactancia (6). Un
tagenómica se fundamenta en el análisis bebe consume aproximadamente 1x105
genómico de una matriz, la cual contiene a 1x107 bacterias diariamente, las cuales
más de un microorganismo y permite dar han sido encontradas en la microbiota in-
a conocer la composición completa de la testinal del recién nacido y coinciden con
muestra, permitiendo así detectar diversi- el tiempo de destete en donde poco a poco
dad de bacterias, archaeas, hongos y pro- se va evidenciando disminución de la mi-
tistas. El método más usado para lograr crobiota en la glándula mamaria, gracias
este fin es la secuenciación del gen 16S a la apoptosis resultado en la involución
rRNA que brinda información de los taxo- mamaria (11).
nes y especies de un entorno (5).
Por esta razón el principal objetivo de esta
Con base en lo anterior, el estudio de la revisión es recopilar información con el fin
leche materna humana (LMH) con herra- de demostrar la importancia de la leche

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materna humana como alimento que per- te prevenir problemas de salud como aler-
mite la modulación del sistema inmune de gias, inflamaciones, obesidad, diabetes y
los bebés a lo largo de su vida gracias al enfermedades autoinmunes, durante los
microbioma presente en esta. primeros años de vida (Gimeno-Alcañiz &
Collado, 2019)(17).
Metodología
El presente trabajo es de tipo documental Microbioma de la leche materna huma-
que se basa en una búsqueda descriptiva na
sobre el microbioma de la leche materna. Como se dijo anteriormente, la LMH en el
Esto se logró gracias al rastreo, sistemati- siglo pasado era considerada estéril y sin
zación, organización y análisis de los da- microorganismos (2)(8). Sin embargo, es-
tos electrónicos obtenidos sobre el tema tudios realizados con técnicas dependien-
especificado, entre 2014 y 2019. Este tes de cultivos han logrado demostrar la
conjunto de documentos fueron encontra- presencia de bacterias comensales y pro-
dos en las bases de datos ScienceDirect bióticas en la leche, especialmente bacte-
y PUBMED. Como criterios de búsqueda rias ácido lácticas del género Lactobacillus
se emplearon las palabras clave “human y Bifidobacterium. La presencia de estos
milk”, “microbiome”, “oligosaccharides”, microorganismos ha permitido deducir su
“metagenomics”, “breast milk”, junto con función como una estrategia evolutiva que
el conector Booleano “AND”. Estos térmi- permite una adecuada nutrición del neo-
nos fueron combinados de distintas for- nato. Se ha informado por ende, que un
mas en el buscador con el fin de ampliar bebé puede consumir en promedio 104 y
los resultados. Las bases de datos arroja- 106 bacterias comensales en 800 ml de
ron 1,219 y 558, de los cuales 118 y 317 leche materna (25).
eran de acceso libre respectivamente. Fi-
nalmente se filtró la información, seleccio- A partir de esto, gracias al desarrollo de
nando aquellos artículos publicados en los técnicas independientes de cultivo, como
últimos 5 años. la piro-secuenciación o secuenciación de
próxima generación (NGS) se ha logrado
Desarrollo y Discusión caracterizar otros géneros bacterianos.
La leche materna humana (LMH) es una En el calostro, los géneros más comunes
sustancia muy completa y enriquecida que encontrados incluyen: Weisella, Leuco-
contiene diferentes componentes muy im- nostoc, Staphylococcus, Streptococcus,
portantes que ayudan al correcto desarro- Lactococcus. El calostro muestra diferen-
llo neurológico, motor e inmunológico del tes patrones de diversidad microbiana en
bebe, e incluso permite establecer una mi- comparación con la leche madura. Por su
crobiota intestinal infantil (10) (13). Pero, lado, la leche madura en diferentes estu-
por otro lado, el hecho de no lactar puede dios ha mostrado una gran abundancia
tener algunos efectos nocivos en el bebé de: Staphylococcus, Pseudomonas, Ente-
haciendo que este sea propenso a pade- robacteriaceae, Streptococcus, Lactoba-
cer ciertas patologías, sin embargo, esto cillus, Enterococcus y Bifidobacterium. A
está relacionado directamente con la fisio- nivel de filos, se encuentra Proteobacteria
logía de la madre, su alimentación, y otros y Firmicutes como los más abundantes,
factores (14) Es claro entonces que la die- y Actinobacteria y Bacteroides en bajas
ta del neonato no solo es importante para cantidades. Sin embargo, se debe tener
prevenir afecciones patógenas después en cuenta que los porcentajes de estos
de su nacimiento, sino que además permi- microorganismos varían de una madre

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a otra, ya que se deben tener en cuenta - Primera hipótesis: contaminación o


factores que afectan el establecimiento de flujo retrógrado
esta microbiota en la LMH (26) (27). Esta contaminación se pensaba que po-
día provenir de la microbiota de la piel
Por ende, la composición microbiana de la de la madre lactante, o por la microbiota
LMH varía entre las madres en la diversi- presente en la cavidad oral del neonato.
dad beta por el momento siguiente al naci- Estas bacterias en el bebé proceden del
miento hasta los seis meses. En contraste, intestino de la madre y de la vagina en
la diversidad alfa varía entre las madres el momento del parto, por lo que los be-
en función a los estilos de vida de estas, bes la transfieren de la boca a la piel del
como ejemplo la vida rural o urbana puede seno materno y una vez allí, estas bacte-
afectar, y esto se ha observado en estu- rias se introducen en la glándula mamaria
dios donde demuestran que la diversidad en el momento de la lactancia. Todo este
microbiana es mayor en la leche materna proceso se da como consecuencia de un
de madres rurales en comparación a las flujo retrógrado sustancial de leche que
madres urbanas. Por tanto, esta diversi- tiene lugar en los conductos mamarios en
dad alfa dada por los estilos de vida permi- el evento de la succión. Con esta hipó-
te una población microbiana diferente en tesis se podría entender la presencia de
el tracto gastrointestinal de los bebés (28). microorganismos en la leche como son:
Staphylococcus spp. y Streptococcus spp,
Origen del microbioma de la leche ma- siendo bacterias características de la piel
terna humana y de la saliva respectivamente (10) (24).
En la última década se ha dado un pro- Esta teoría fue estudiada por Ramsay y
ceso de cambio en cuanto al paradigma colegas por medio de imágenes de ultra-
de la esterilidad de la LMH. Múltiples es- sonido, donde demostraron la existencia
tudios han logrado demostrar la presencia de un flujo retrógrado de la leche desde
de bacterias activas en la LMH durante la boca del neonato hacia los conductos
aproximadamente medio siglo, sin embar- mamarios en el proceso de la lactancia, lo
go, existía el dogma de que los fluidos hu- que permite el intercambio de microorga-
manos que derivan de la sangre son esté- nismos (25).
riles, por lo que se pensaba que el origen
de estos microorganismos podía deberse Vía entero – mamaria:
a contaminación por la piel o por bacterias Esta teoría se fundamenta en que algunas
ambientales (24) (29). bacterias propias del intestino materno tie-
Gracias a los estudios metagenómicos nen la posibilidad de pasar por un proceso
realizados, se ha logrado comprobar que de translocación, para así llegar a las glán-
existe por tanto una transmisión de bac- dulas mamarias por medio de una ruta en-
terias desde la madre hasta su hijo por dógena (30). Sin embargo, no se conoce
medio de la leche materna. Pero, no se con exactitud cómo tiene lugar este proce-
conoce con exactitud cuáles son los me- so, ya que las bacterias deben atravesar el
canismos que permiten que esta microbio- epitelio intestinal, evadir el sistema inmu-
ta llegue hasta la glándula mamaria, por nológico y arribar a la glándula mamaria.
lo que esto ha generado un gran debate y Por ende, se cree que este mecanismo
como resultado se han obtenido diversas involucra células mononucleares como las
hipótesis que pretenden dar respuesta a células dendríticas (CD) y células CD18+,
esta incógnita (25). que son tipos celulares que permiten cap-
tar los microorganismos no patógenos del

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intestino materno y conducirlos hasta las zado por Kumar y colaboradores, se


glándulas mamarias por medio de una vía demostró que la composición de la
línfatica (10). La translocación de estas microbiota de la LMH fue significa-
bacterias se facilita por ciertos cambios fi- tivamente distinta entre las madres
siológicos y hormonales que se dan en la según su ubicación. Las mujeres es-
etapa tardía del embarazo y gracias ade- pañolas presentaron niveles más al-
más a la permeabilidad del revestimiento tos de Bacteroides. Por su lado, las
epitelial intestinal (25). mujeres sudafricanas presentaron
mayor cantidad de Proteobacterias.
Factores que afectan la microbiota de Así mismo, las madres de Finlandia
la leche materna humana presentaron una abundancia relati-
vamente mayor de Firmicutes y ni-
Gracias a los diversos estudios realiza- veles bajos de Proteobacterias (15).
dos en torno a la caracterización del mi- - Alimentación: En el estudio realiza-
crobioma de la leche materna humana, do por Savage, et al. y Shively, et al.
se ha logrado demostrar la influencia de determinaron que la ingesta elevada
ciertos factores en la variabilidad de la po- de verduras por parte de las madres,
blación bacteriana presenten en la leche y asimismo la ingesta baja de car-
(31). Estos factores afectan entre distintas nes procesadas y alimentos fritos se
mujeres, y de igual modo en una misma asoció inversamente con Bacteroi-
mujer, debido a las diferentes condiciones des spp y Clostridium spp en la LMH
fisiológicas, hormonales y patológicas que (33)(34). De igual modo el consumo
puedan presentar (25). Especialmente la de ciertas bacterias en la dieta, du-
salud de la madre y la ubicación geográ- rante el embarazo afecta el micro-
fica son los factores más influyentes en bioma de la LMH (24).
la composición del microbioma de la LMH - Edad gestacional: En el estudio de
(9). Valentine, et al. informaron la pre-
- Tipo de parto: Este factor, aun pre- sencia de anaerobios estrictos como
senta controversias en cuanto a si Bifidobacterium, Bacteroides y Ato-
afecta o no a la composición bacte- pobium en mayor abundancia en la
riana de la leche materna humana. leche de bebés a término, en con-
Esto se ve reflejado en el estudio de traste con la abundancia de anae-
(26), en donde lograron demostrar robios facultativos presentes en la
que ni las cesáreas de emergencia, leche materna de bebés prematuros
ni las cesáreas electivas, afectaron (23). Por otro lado, en otro estudio
la microbiota de la leche materna en se habla sobre la presencia también
comparación a un parto vaginal. Sin de Bifidobacterium en leche término,
embargo, ellos citan otro estudio, en en comparación con mayor cantidad
donde el autor concluye que el modo de Enterococcus en leche pretérmi-
de parto si afecto significativamente no (9).
el microbioma de la leche, pero se - Uso de antibióticos: Los antibióticos
basó solo en gráficas sin estudios son los medicamentos que causan
estadísticos. Sin embargo, (32) tam- alteraciones en los microbiomas
bién concluyeron en su estudio que (30). Estos pueden hacer que dismi-
el microbioma se podía ver afectado nuya la diversidad bacteriana de la
por el tipo de parto. LMH, creando un ambiente propicio
- Área geográfica: En el estudio reali- para una disbiosis, en donde la can-

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tidad de Clostridium difficile se ve ya que permiten crear un microambiente


aumentada, a pesar de que después ácido por la síntesis de ácidos grasos los
se logre reestablecer la comunidad cuales cumplen un papel protector y nu-
bacteriana presente antes al uso de tritivo a nivel intestinal (10)(17)(13). Estu-
estas moléculas, esto tiene efectos dios recientes han demostrado que el mi-
negativos en la salud del neonato crobioma de la leche materna y los anti-
(35). cuerpos de esta, permiten la transferencia
- Etapa de lactancia: En diversos es- de bacterias no infecciosas al feto, y estas
tudios se ha observado la estabili- a su vez ceban el sistema inmunitario in-
dad de la comunidad bacteriana en nato del infante, para que de este modo
la LMH, y como resultados se ha de- el neonato esté preparado para recibir los
terminado que el calostro, presenta microorganismos patógenos y no patóge-
mayores cantidades de bacterias nos, que finalmente colonizaran su intesti-
como Weissella, Leuconostoc, Sta- no después del nacimiento (23). Por otro
phylococcus, Streptococcus y Lac- lado, sin embargo, los bebes que nacen
tococcus. En contraste, la LMH ma- de forma prematura se ven afectados a la
dura presenta mayor presencia de hora de desarrollar una microbiota intes-
Veillonella, Prevotella y Leptotrichia tinal sana, ya que pasan por un proceso
(8). retrasado de colonización de bacterias co-
mensales sanas y se tornan propensos a
Papel de la leche materna humana en la albergar bacterias patógenas, lo que tie-
modulación del sistema inmune ne como consecuencia que los neonatos
La LMH más allá de los componentes nu- prematuros puedan desarrollar enterocoli-
tricionales, cuenta con otras sustancias tis necrotizantes u otro tipo de infecciones
como: lisozima, lactoferrina, oligosacári- (23).
dos, microorganismos, citoquinas, quimio-
cinas y ciertos factores de crecimiento que Con base en esto, es de suma importancia
permiten el desarrollo del sistema inmune el estudio de las funciones que cumplen
del infante (31)(16) (36). Por ende, la lac- las moléculas bioactivas de la leche ma-
tancia materna tiene la capacidad de mo- terna, al igual que los microorganismos, en
dificar el desarrollo de la microbiota intes- cuanto a la modulación del sistema inmu-
tinal del infante, ya que esta permite que ne del infante. Gracias a moléculas como
se module la programación metabólica e el factor de crecimiento transformante β2
inmunológica que está estrechamente re- (TGF-β2), presentan la capacidad de mo-
lacionada con la salud del bebé. Por lo que dular la expresión de citoquinas en las
la leche materna junto con los microorga- células epiteliales del intestino lo que da
nismos maternos intestinales y vaginales como resultado la reducción de la inflama-
que el infante ingiere en su paso por el ca- ción intestinal, y por ende previene enfer-
nal de parto ayudan a dar forma a la micro- medades como la enfermedad de Crohn
biota intestinal (8)(23). pediátrica (16). Un ejemplo de estudio es
el de Gimeno-Alcañiz, et al. donde logra-
Esto se da debido a que la LMH, gracias ron demostrar que la leche materna apli-
a sus componentes, permite el desarrollo cada a la línea celular FHs 74 int (modelo
de bacterias como Bifidobacterium spp. y celular intestinal inmaduro), logró producir
Lactobacillus spp. Estos microorganismos cambios en la expresión de genes en el
son los más importantes en el intestino, intestino que podrían ayudar a la modula-
y a su vez son considerados probióticos, ción del sistema inmune del recién nacido.

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Uno de estos genes es el CD69 que pre- del tejido epitelial es crucial para mante-
sentó un alza en su expresión, permitien- ner el correcto funcionamiento de la barre-
do resultados positivos, ya que este gen ra epitelial, evitar la invasión de patógenos
codifica para un receptor de membrana y de igual modo prevenir posibles inflama-
de las células T, como resultado permite ciones intestinales. Es por esta razón que
establecer un sistema inmune innato en el la LMH es de gran interés para reducir en
recién nacido, teniendo en cuenta que por gran medida la aparición de disbiosis mi-
defecto, la deficiencia en la expresión de crobiana y de una disfunción de la barrera
este gen produce efectos negativos como epitelial del intestino, que puedan agravar
el desarrollo de enfermedades inflamato- los estados de infección por culpa de res-
rias autoinmunes y crónicas. puestas inmunes desequilibradas (19)

Por otro lado, la LMH contiene inmunoglo- Microbiota intestinal infantil


bulinas, presentes en grandes concentra- La microbiota intestinal del neonato se
ciones como es el caso de la IgA, que per- comienza a desarrollar en diferentes mo-
mite proteger el intestino del infante, mien- mentos, como puede ser antes o después
tras este madura (31). De igual forma, los del nacimiento y esta colonización puede
factores de crecimiento presentes en la progresar gradualmente en las etapas si-
LMH, ayudan al correcto funcionamiento guientes al parto (22). El establecimiento
de la barrera epitelial; esto se observa en de la microbiota intestinal se puede ver
los factores de crecimiento epidérmicos afectada por factores ambientales (37),
que permiten una adecuada proliferación por lo que la cercanía a estas circunstan-
y diferenciación de las células epiteliales cias y las alteraciones del microbioma in-
intestinales, con el fin de lograr la madu- testinal, están estrechamente relaciona-
ración intestinal. Alcanzar la maduración dos con cambios en el establecimiento del
intestinal de los infantes, por medio de la sistema inmune, afectando gravemente la
alimentación, y por ende por medio de la salud del infante (36)(33) (38).
lactancia, resulta de gran relevancia des-
de el momento del nacimiento tanto para El colon humano desde un primer instante,
bebés prematuros como para bebés a tér- se coloniza por una diversidad microbia-
mino, que han experimentado infecciones na muy amplia, conformada por bacterias,
intestinales u otro tipo de afecciones a ni- virus, levaduras y hasta parásitos. Con
vel del tracto gastrointestinal (19)(35). ayuda de la secuenciación del gen 16s del
rRNA se ha descubierto que puede haber
El tejido epitelial que se encuentra en todo más de 1000 especies de microorganis-
el tracto gastrointestinal, es aquella barrera mos que colonizan el intestino (39)(32).
física que permite separar la luz intestinal De igual modo, distintos estudios han lo-
del tejido subyacente y como función per- grado demostrar que los infantes alimen-
mite proteger al organismo contra antíge- tados con leche materna, presentan un
nos patógenos. Después del nacimiento, microbiota intestinal dominada por filos
la filtración de macromoléculas a través de como: Actinobacterias, Bacteroidetes, Fir-
esta barrera ocurre en tan solo pocos días. micutes, Proteobacteria (37); presentando
Ya en la etapa de la infancia, las funciones además géneros abundantes de Bifido-
de esta barrera epitelial se ven afectadas bacterium spp. y Lactobacillus spp (20).
por episodios de infecciones que pueda En contraste con los bebés alimentados
sufrir el infante, por lo que asegurar una con leche de fórmula que presentan una
correcta maduración del sistema inmune y variedad más elevada de microorganis-

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mos dentro de los cuales se encuentran biota intestinal sana (36)(28)(44)(22), por
Escherichia-Shiguella y Clostridium diffici- ende se consideran moléculas protecto-
le, Enterococcus, Enterobacter y Citrobac- ras para el recién nacido, con funciones
ter (19) (38)(40)(41). Por lo tanto, la nutri- prebióticas (27). Estos componentes son
ción desempeña un papel clave, dado que carbohidratos complejos presentes en la
la introducción de fórmula infantil en lugar leche materna en grandes cantidades,
de la leche materna, afecta en la composi- aproximadamente 10-15 g/L, los cuales
ción del microbioma neonatal (19). presentan un extremo reductor de lactosa
alargado que contiene unidades de N-ace-
Así mismo, según el tipo de parto ya sea tillactosamina fucosiladas y/o sialiladas, lo
parto natural o cesárea, afecta el estable- que da como resultado, hasta más de 200
cimiento del microbioma intestinal infan- estructuras distintas de HMO, presentan-
til, como lo demuestra Dong, et al. en su do tamaños, cargas y secuencias diferen-
estudio, donde logran comprobar que los tes (19)(31). En particular, estas moléculas
bebés que habían nacido por parto natu- no son captadas por las enzimas intestina-
ral presentaban una prevalencia mayor de les del neonato, si no que por el contrario,
Escherichia coli la cual se cree que puede sirven de sustrato para una gran variedad
provenir del recto de la madre, dado que de microorganismos presentes en el intes-
en el momento del parto, algunas madres tino infantil (45).
suelen defecar y Bacteroides spp; mien-
tras que los bebés nacidos por cesárea Así mismo, los HMO presentan motivos
mostraban prevalencia de bacterias como estructurales comunes a los glicanos del
Staphylococcus spp (encontrando S. epi- epitelio intestinal infantil, los cuales son
dermis, especie conocida por pertenecer receptores de patógenos, por lo que es
a la microbiota normal de la piel), Clostri- evidente que además de servir como sus-
dium spp y Enterobacter spp (42). trato para los microorganismos benéficos
del intestino, ayudan a la defensa estra-
Sin embargo, es claro que el microbio- tégica, evitando la unión de patógenos vi-
ma intestinal del recién nacido presentará rales, bacterianos y protozoarios a las cé-
variaciones en cuanto al número y diver- lulas epiteliales, evitando el desarrollo de
sidad de microorganismos a medida que enfermedades infecciosas en el bebé (40).
envejece. Se cree, que aproximadamente Incluso los HMO pueden evitar la invasión
a los tres años, esta microbiota del infante por VIH, ya que evitan la unión del virus al
se parecerá más en cuanto a diversidad y receptor de entrada DC-SIGN (23) (9).
complejidad de composición a la microbio-
ta intestinal de un adulto (28) (43)(41)(37). Con relación al microbioma intestinal in-
fantil, se dijo que Bifidobacterium es uno
Oligosacáridos dirigidos a los microor- de los géneros que coloniza el intestino
ganismos del neonato, que cumple funciones probió-
Los oligosacáridos de la leche humana ticas (14). Con base en esto, este género
(HMO, por sus siglas en inglés “Human es el blanco de muchos HMO como la inu-
Milk Oligosaccharides”), representan el lina, fructo y galactooligosacaridos, por su
tercer grupo prevalente e importante, ya habilidad de prevenir la colonización por
que estos componentes tienen propieda- parte de patógenos, además que permite
des no solo nutricionales para el infante regular la respuesta inmune del hospede-
sino que cumplen funciones únicas que ro (45)(46)(47). Como ejemplo, se ha de-
permiten el establecimiento de una micro- mostrado que HMO α1,2 fucosiladas, es-

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timulan el crecimiento de Bifidobacterium entre otros (49). Con base en esto, solo el
longum, B. bifidum y B. breve (27). Sin em- 0,2% de las especies procarióticas se han
bargo, Bai, et al. mostró en su estudio que logrado aislar e identificar, lo que dificul-
la abundancia de la mayoría de grupos de ta en gran medida la comprensión de cuál
HMO presentes en la leche materna dis- es el papel que cumplen estas bacterias
minuyó gradualmente a medida que trans- dentro de nuestro organismo, en la salud y
curría la lactancia, y además no presento cuál es su relación en cuanto al desarrollo
cambios significativos en etapas posterio- de enfermedades humanas (50).
res. No obstante, los HMO como H3N1 y
H31F1, si presentaron un crecimiento des- Por ende, con el fin de superar las distintas
pués de 42 días de lactancia. limitaciones y dificultades asociadas a las
pruebas de laboratorio, como los medios
La presencia de este tipo de moléculas en de cultivo para el aislamiento de microor-
la LMH han permitido confirmar por medio ganismos, se han desarrollado distintos
de estudios, que la microbiota intestinal métodos moleculares que permiten el es-
de los lactantes amamantados con LMH tudio del ADN. Esta tipo de tecnologías se
presenta mayor cantidad de bifidobac- conocen con el nombre de Secuenciación
terias, en contraste con la baja cantidad de Próxima Generación o NGS (por sus
presente de estas bacterias en lactantes siglas en inglés “Next Generation Sequen-
alimentados con leche de fórmula, los cua- cing”); y presentan dos enfoques: el prime-
les a pesar de consumir oligosacáridos no ro se conoce como metagenómica dirigida
consumen los HMO (36). En efecto estos al gen 16S del rRNA, la cual proporciona
prebióticos permiten la reducción del pH, gran información acerca de los taxones y
viéndose reflejado en mayor suavidad de especies que forman parte de un entorno
las heces, aumentando la frecuencia de en particular; la segunda se conoce como
evacuación y aumentando el conteo de Bi- metagenómica de escopeta, la cual permi-
fidobacterium y Lactobacillus en muestras te amplificar todas las secuencias en una
fecales (19)(28)(48)(44). muestra dada, en donde no hay hipótesis
acerca de cuál puede ser su contenido.
Metagenómica Específicamente los estudios metagenó-
Como se ha nombrado anteriormente, los micos son una gran herramienta bioinfor-
seres humanos hemos compartido la vida mática, que permite sustituir el aislamien-
con poblaciones microbianas, las cuales to de los microorganismos por medio de
han permitido que se siga dando la evo- técnicas dependientes de cultivos, por
lución de la especie humana. Se calcula una extracción directa de ADN genómico
que aproximadamente la Tierra alberga de una muestra ambiental o de una ma-
alrededor de 1030 células microbianas, triz de interés. Por último, seguido a esto
siendo entre 106 y 108 especies procario- se realiza la construcción de bibliotecas de
tas separadas. Sin embargo, hasta hace ADN por medio de vectores de clonación
algunos años resultaba difícil el estudio de adecuados, permitiendo construir grandes
estas poblaciones microbianas a partir de bases de datos con información acerca de
muestras ambientales, por medio de mé- distintas especies microbianas presentes
todos de laboratorio, dada la imposibilidad (49)(5).
de replicar sus condiciones ambientales:
niveles de oxígeno, condiciones osmóti- Con respecto a esto, la metagenómica es
cas, nutrientes necesarios para su desa- una herramienta óptima para el estudio de
rrollo, condiciones de pH, temperatura, poblaciones microbianas (44), no obstante

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se debe realizar una correcta interpreta- Por otro lado, como se nombró en esta re-
ción de resultados, pues estos pueden va- visión, antes se creía que la LMH era es-
riar dependiendo del tipo de muestra ana- téril pero gracias a toda la literatura que
lizada. A pesar de esto, el uso de esta he- se encuentra en la actualidad en las di-
rramienta ha permitido identificar todas las ferentes bases de datos y que en la pre-
poblaciones de ADN presentes de un or- sente revisión logramos recopilar, se de-
ganismo dado, especialmente cuando se mostró que esta teoría es falsa y que el
usa en microbiotas humanas complejas, número de microorganismos identificados
como es el caso de la leche materna hu- hasta ahora en la leche sigue creciendo
mana. En donde gracias a estas técnicas cada vez más. Sin embargo, es importan-
independientes de cultivo se ha logrado te seguir estudiando más sobre esta ma-
aislar en esta matriz hasta 200 especies triz, dado que aún hay aspectos que no se
de bacterias, dentro de las cuales, solo de han logrado verificar de forma adecuada,
2 a 18 especies se pueden cultivar en la- o se siguen presentando controversias.
boratorio, por tanto, es claro que con esta Es por esta razón, que las herramientas
nueva tecnología se ha logrado una mejor bioinformáticas, son esenciales para se-
evaluación, y a su vez más completa com- guir estudiando no solo la metagenómica
prensión, de la diversidad bacteriana en la de la LMH, sino además permite el estudio
leche materna humana (5)(50). de aspectos como la proteómica, metabo-
lómica, y demás disciplinas que permiten
Conclusiones un mejor entendimiento de esta sustancia
La leche materna humana es un alimento que aporta tantos beneficios a los bebés.
con grandes beneficios para el recién na- Es evidente que gracias a estas herra-
cido, su importancia radica en la capaci- mientas, se ha podido observar que exis-
dad de ayudar en la maduración del siste- ten una relación directa entre la leche ma-
ma inmune, donde por medio de la ingesta terna y la microbiota intestinal, mostrando
de leche se transmiten un sinnúmero de alteraciones benéficas en la composición
compuestos como proteínas, lípidos y car- de esta, favoreciendo el crecimiento de
bohidratos, además de algunos microor- Bifidobacterium spp. y Lactobacillus spp.,
ganismos que son clave para un buen de- los cuales se caracterizan por ser probióti-
sarrollo neurológico y motor del bebé. En cos universales. Todo esto ha sido posible
contraste, los bebés que no son alimenta- gracias a la metagenómica la cual permite
dos con LMH por distintos factores, como tener resultados de la composición com-
aspectos sociales, trabajo, u otros, hace pleta de los microrganismos de una forma
que estos sean muy propensos a tener rápida y sencilla, evitando así el uso de
problemas de salud, desarrollando enfer- procedimientos tradicionales dependien-
medades como alergias, obesidad, dia- tes de cultivos, que hacen que la investi-
betes y enfermedades autoinmunes, las gación sea más complicada.
cuales son las más comunes durante los
primeros años de vida del bebé, y es por En definitiva, la LMH es un matriz que ne-
eso que se recomienda que la LMH sea cesita seguir siendo estudiada, ya que to-
administrada al infante de forma exclusiva davía en muchos países no se hacen es-
mínimo durante sus primeros 6 meses de tos estudios, como es el caso de Latinoa-
vida, según lo recomendado por la OMS mérica, donde se observa un gran déficit
para así, gracias a su composición, permi- en información al respecto, y solo algunos
tir un correcto desarrollo del infante. países de Europa, China y Estados Uni-
dos son los más pioneros en investigar la

50
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

metagenómica de la leche materna y su from: http://dx.doi.org/10.1016/j.


implicación en el desarrollo de la microbio- cca.2015.02.021
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Biorremediación de aguas residuales mediante


Eicchornia crassipes y Lemma minor
Alfaro Herrera Dila Patricia1, Blanco Morales Maryzel Omayra2,
Germy Moreno Claudia Jennifer3, Orozco Alzate Jamy Vanesa4, Clara Gutiérrez Castañeda 5

Resumen Abstract
El objetivo de este estudio fue identificar The objective of this study was to identify
el papel de las macrófitas flotantes en la the role of floating macrophytes, in biore-
biorremediación de las aguas residuales. mediation of wastewater through literature
Metodología: revisión bibliográfica. Las review. The species Eicchornia crassipes
especies Eicchornia crassipes y Lemna and Lemna minor are the most used spe-
minor son las especies más utilizadas en cies in bioremediation processes of waste-
procesos de biorremediación de aguas water, among the main biological mecha-
residuales, entre los principales mecanis- nisms involved in the ability to remove
mos biológicos involucrados en la capa- nutrients and metals are biosorption and
cidad de remover nutrientes y metales phytovolatilization. Its use is recommend-
se encontraron la biosorción y fitovolatil- ed under controlled conditions as an alter-
ización. Se recomienda bajo condiciones native for bioremediation of heavy metals
controladas su uso como alternativa para in wastewater.
la biorremediación de metales pesados en
aguas residuales. Key Words: Bioremediation, macro-
phytes, heavy metals.
Palabras clave: Biorremediación, macró-
fitas, metales pesados.

1-2-3-4 Estudiantes de Microbiología. Universidad Libre Barranquilla. dilaalfaro@yahoo.es, mary_190@


hotmail.com , klauhermith@hotmail.com, jamy125@hotmail.com
5 Microbióloga Agrícola y Veterinaria. MSc. profesor Investigador Universidad Libre Barranquilla.
clarag.gutierezc@unilibre.edu.co

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MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

Introducción puestos menos persistentes y estables en


Garantizar la disponibilidad de agua, su el ambiente(3) Los procesos de biorreme-
gestión sostenible y saneamiento es un diación se clasifican en dos métodos: “Ex
reto de agenda mundial(1). El manejo y situ e in situ” en la primera se trata de usar
disposición de los vertidos producidos por tecnologías como biorreactores, biofiltros
actividades antropogénicas especialmen- y algunos métodos de compostaje los
te las relacionadas con el uso del agua cuales se realizan en el lugar de la conta-
con destino para el consumo humano e minación, mientras que en la segunda se
industrial, que son vertidas frecuentemen- incluyen la bioestimulación, sistema de su-
te a los cuerpos de aguas superficiales, ministro de líquidos y algunos métodos de
generan la contaminación del recurso hí- compostaje que se realizan fuera del lugar
drico. Por tal razón, el Plan Nacional de de contaminación(5-6).
Manejo de Aguas Residuales Municipales
en Colombia (2004), afirma que debido La fitotecnología es otro método de biorre-
a la incorrecta recolección, tratamiento y mediación, es considerada como una tec-
disposición de las descargas generadas nología rentable y alternativa(7) que utiliza
por actividades como la agropecuaria, la plantas y microorganismos, según el tipo
industrial y las aguas residuales domés- de contaminante las condiciones del lugar
ticas, se ha generado en el país proble- pueden ser utilizadas como medio de con-
mas de sanidad y de calidad del agua en tención o eliminación de metales(8). La fi-
varias regiones. El escenario comienza a torremediación tiene la ventaja de que las
ser insostenible, en la medida en que los plantas llevan a cabo reacciones quími-
cuerpos de aguas a donde llegan estos cas, utilizando luz solar, ya sea para meta-
residuos ya se saturan y sobrepasan la bolizar o mineralizar moléculas orgánicas.
capacidad de asimilar por si solos los di- Las plantas y los microorganismos que se
ferentes contaminantes, lo que nos deja la encuentran en la zona adyacente a la raíz
consecuencia de tener que remediarlos lo de la planta (rizósfera) tienen la habilidad
que conlleva un gran costo(2). de degradar estos contaminantes o limitar
su distribución(9-11).
Las macrófitas flotantes se han propues-
to como estrategia para la remediación de La utilización de plantas acuáticas se ha
aguas residuales, a pesar de ello, existen implementado como tratamiento para
algunas contradicciones en el uso de las aguas residuales y se ha evidenciado que
mismas, en este sentido se hace necesa- tienen gran capacidad de remoción de
rio realizar una revisión exhaustiva sobre sustancias así como nutrientes o metales
los principales mecanismos biológicos, las pesados(12-13). Estas plantas cumplen
ventajas o desventajas en la utilización de un papel importante en los ecosistemas
macrófitas para consideraciones posterio- acuáticos, brindan directa o indirectamen-
res en su implementación en sistemas de te alimentos, protección y gran número
biorremediación. de hábitats para muchos organismos de
estos ecosistemas. Estas plantas pueden
Biorremediación ser utilizadas como materia prima en la in-
La biorremediación es una tecnología dustria o se utilizan en procesos de biorre-
donde se utiliza el potencial metabólico mediación(14).
de organismos especialmente microorga-
nismos y plantas para transformar conta- Las plantas acuáticas, tienen la capacidad
minantes orgánicos y metales, en com- de almacenar y eliminar sustancias tóxi-

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cas mediante sus procesos metabólicos, Macrófitas


principalmente metales pesados, por lo Las macrófitas acuáticas representan alre-
que son llamadas plantas hiperacumula- dedor del 1% de la flora vascular, constitu-
doras. Las plantas realizan la captación yen la forma macroscópica de vegetación
de los elementos tóxicos como hidrocar- acuática, en conjunto con el fitoplancton y
buros aromáticos polinucleares, hidro- perifiton, las macrófitas acuáticas son los
carburos totales del petróleo, plaguicidas productores primarios en sistemas lacus-
(herbicidas, insecticidas y fungicidas), tres, son de gran importancia por su alto
compuestos clorados, explosivos y surfac- grado de especificad, simpleza corporal,
tantes (detergentes), esto sucede a través uso en alimentación animal, producción
de transportadores específicos que están de biogás y en la depuración de aguas re-
presentes en las raíces con alta capacidad siduales contaminadas con metales pesa-
para absorber los diferentes contaminan- dos(15).
tes(15). En la fitorremediación se identifi-
can diversos tipos de técnicas teniendo en Las macrófitas flotantes se han descrito
cuenta qué parte de la planta es utilizada como un grupo cosmopolita, su distribu-
o qué microorganismos contribuyen a la ción está determinado por diferentes fac-
degradación de los contaminantes. tores tales como topografía, la geología y
el clima, además tienen un eficiente me-
• Fitoextracción o fitoacumulación: canismo de propagación debido a su tole-
algunas plantas acumulan contami- rancia ecología(15). El uso de estas planta
nantes en sus raíces, tallos o folla- acuáticas en la remoción de metales pe-
je, las cuales pueden ser fácilmente sados es un método efectivo, de fácil im-
cosechadas, por lo general metales plementación y particularmente económi-
pesados. co con posibilidad de utilización en zonas
• Rizofiltración: las raíces absorben, rurales dispersas(16).
precipitan y concentran los com-
puestos contaminantes a partir de Remoción de metales pesados
líquidos contaminados y los degra- La contaminación por metales pesados,
da a compuestos orgánicos. es una de las más comunes en los siste-
• Fitoestabilización: consiste en redu- mas acuáticos (17). Dependiendo en las
cir la biodisponibilidad de metales y concentraciones que se encuentren pue-
otros contaminantes en el ambiente den ser toxicas para los humanos y para el
por medio de mecanismos de se- medio ambiente, algunos de esos metales
cuestración, lignificación o humidifi- pueden ser necesarios, otros no pueden
cación a través de las raíces de las ser asimilados por algunos organismo y
plantas. por ende se convierten en un peligro(18).
• Fitoestimulación: los exudados ra-
diculares, estimulan el crecimiento Los metales pesados son aquellos ele-
de microorganismos degradadores mentos químicos que tienen una densi-
de compuestos contaminantes dad mayor o igual a 5g/cm3 cuando se
• Fitovolatilización: las plantas libe- encuentran en una forma elemental(19).
ran en la atmosfera por medio de su Estos se forman naturalmente por ciertos
transpiración los compuestos orgá- procesos meteorización y también llegan a
nicos y los contaminantes(16). los ecosistemas por la mala manipulación
de los desechos industriales, los vertidos
de aguas residuales(20).

58
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

Las plantas pueden acumular metales, y luego sedimentan por gravedad(26). Va-
siendo potenciales para fitorremediación rios de estos metales se convierten en for-
las especies tolerantes. La tolerancia es ma volátil y son liberados a la atmosfera
evaluada mediante los coeficientes de por medio de un proceso llamado fitovola-
translocación y bioacumulación, el pri- tilización(27). Este proceso ha sido utiliza-
mero determina la capacidad de la planta do para la extracción de algunos metales
para translocar los metales desde la raíz y pesados como mercurio de aguas conta-
hacia el tallo o las hojas sin considerar la minadas(28).
concentración de los metales externos a
la planta; el coeficiente de bioacumulación La absorción de metales se lleva a cabo
mide la capacidad de la planta para acu- por la unión entre la proteínas de trans-
mular metales del medio(21). porte intracelular y sitios de unión de alta
afinidad median la absorción de metales a
Las técnicas de absorción de metales se través de la membrana plasmática, exis-
dan en dos etapas, durante las dos prime- ten dominios específicos en las proteínas
ras horas de contacto con el agua, ocu- transportadoras, que enlaza y transporta
rre la remoción de la mayor cantidad de iones metálicos desde el espacio extrace-
metales; la segunda etapa involucra ma- lular, varias clases de proteínas han sido
yor tiempo de adsorción y menor cantidad implicadas en el transporte de metales pe-
de extracción(22). Un estudio evaluó la sados en las plantas; como proteínas de
capacidad de remoción de metales por la familia de las ATP-asas, CPX y NRAMP
Eichhornia crassipes, los resultados mos- (Natural resistance-associated macropha-
traron que la máxima adsorción del metal ge protein), estas proteínas están involu-
se da en las primeras 24 horas durante el cradas en la homeostasis de iones metá-
proceso de fitorremediación(23). Una de licos en general y la tolerancia general de
las más grandiosas ventajas de utilizar la las plantas a los metales(29).
biorremediación es que no genera conta-
minantes secundarios peligrosos para el Dentro de las macrófitas más utilizadas
ambiente ni para la comunidad (24). para procesos de biorremediación de
aguas, se encuentra Eichornia crassi-
Mecanismo de absorción de metales pes, conocido también como buchón de
Las macrófitas tienen varios mecanismos agua. Esta una planta acuática vascular
para llevar a cabo el proceso de depura- de flotación libre con raíces sumergibles y
ción del agua, estos son la filtración, la fibrosas, es la octava plata con crecimien-
sedimentación de sólidos, la incorporación to más rápido en todo el mundo, lo que le
de nutrientes a la planta y la de degrada- permite extenderse y sobrevivir en mu-
ción de materia orgánica por un grupo de chos ambientes. Esta planta en sus raíces
microorganismo asociados a las raíces de tiene bacterias que actúan en los procesos
las plantas(25). de nitrificación, desnitrificación y amonifi-
cación(15).
En cuanto a los metales se cree que el me-
canismo de acción es la formación de un Las raíces de estas plantas absorben el
complejo entre metales y los aminoácidos metal por un proceso de difusión en el me-
presentes en la célula de las plantas. Otro dio y por intercambio de cargas, los meta-
mecanismo vincula la interacción microor- les son transportados por vía apoplástica
ganismo y raíces de las plantas, a través o simplástica. Estos dos procesos tienen
de la producción de sólidos que floculan ventajas debido a que no producen con-

59
UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

taminantes secundarios, es poco perjudi- 100%, 100% y 85% respectivamente(45).


cial para el ambiente y se puede reciclar La máxima remoción fue en las primeras
el agua(30). 24 horas en las menores concentraciones.
En otros estudios L. minor fue expuesta
Estudios realizados con E. crassipes, de- a 2.5 y 5.0 mg /l, bajo estas condiciones
terminaron que la concentración óptima en se eliminó el 82% de níquel en la solu-
agua para la absorción de Cadmio (II) y ción(46). Esta a su vez tiene la capacidad
Mercurio (II) es de 5mg/L a pH 5,0 siendo de disminuir la concentración de cromo
los porcentajes de absorción de 16.56% y hexavalente y cromo total en agua resi-
15,60% respectivamente a los siete días duales pasando de concentraciones de
de ensayo(31). Otros estudios determina- 4.089 mg/L a 0.038 mg/L en 24 horas(47).
ron porcentajes de remoción de níquel del
100% y 93% a concentraciones de 1,3 y 6 Conclusión
mg/l-1(32). En condiciones de pH neutro La macrófitas tiene gran capacidad de bio-
y exposición de 90mg/L de Cr E. crassi- rremediación de aguas contaminadas con
pes acumuló cantidades significativas de metales pesados como el cromo, cadmio,
Cr (67.3 mg Cr/g) en su biomasa(33). Los níquel y el mercurio entre otros contami-
resultados mencionados indican que esta nantes. El uso de macrófitas para la reme-
especie es promisoria para la remoción de diación de aguas residuales es una buena
metales de los cuerpos de agua. alternativa para obtener y potenciar los
mecanismos de depuración de los metales
Lemna minor cuyo nombre común es len- presentes en el agua.
teja de agua, es una macrófita acuática, su
cuerpo es en forma de taloide, estructura Referencias Bibliográficas
plana y verde con una sola raíz delgada
que realiza la recolección de los nutrientes 1 Agua y saneamiento Desarrollo Sos-
del medio acuático. Su tamaño es peque- tenible. [Internet]. Available from:
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La lenteja de agua es capaz de adaptarse mente compatible.
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Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

Modelado predictivo de Escherichia Coli O157:H7


en alimentos.
Redondo Alejandra, Torres Elvira1, Sánchez Juan David2

Resumen (ERRC) en la descripción de E. coli sp. a


Introducción: Escherichia coli O157:H7 es diferentes temperaturas. Conclusiones:
un patógeno asociado diarrea inespecífica, Este texto busca mostrar una perspec-
diarrea sanguinolenta, Síndrome Urémico tiva a las aplicaciones informáticas que
Hemolítico (SUH) y la Enfermedad Diar- faciliten el modelado predictivo de E. coli
reica Aguda (EDA), responsable de com- O157:H7 en alimentos, su importancia y la
plicaciones intestinales, sistémicas y otra aplicabilidad los mismos.
serie de Enfermedades Transmitidas por
Alimentos (ETA). Metodología: Su iden- Palabras clave: Modelos Predictivos,
tificación se realiza mediante pruebas bio- Patógeno, Carne, ETA, O157:H7
químicas, serológicas y moleculares. Se
encuentra distribuido en diversos países Abstract
industrializados a nivel mundial, donde se O157:H7 is a pathogen associated with
han llevado a cabo estudios previos sobre nonspecific diarrhea, bloody diarrhea,
su identificación en heces, agua y alimen- Hemolytic Uremic Syndrome (HUS) and
tos. La transmisión se produce principal- Acute Diarrheal Disease (ADD), respon-
mente a través de agua contaminada y sible for intestinal systemic complications
otros alimentos como la carne picada, veg- and another series of Foodborne Dis-
etales, leche cruda y fruta. Aplicar modelos eases (FBD). E. coli O157:H7 identifica-
predictivos resulta una manera adecuada tion includes biochemical, serological and
para predecir el comportamiento de E. coli molecular tests. It is distributed in several
O157:H7 en diferentes matrices alimen- industrialized countries worldwide, where
tarias, permitiendo tomar medidas para previous studies on its identification in fe-
controlar su desarrollo y reducir su inci- ces, water and foods have been carried
dencia como causante de ETA. Ejemplos out. Transmission occurs mainly through
de modelos predictivos de otros países contaminated water and other foods such
son el propuesto por el Departamento de as minced meat, vegetables, raw milk
Agricultura de los estados Unidos (USDA), and fruit. Predictive models are therefore
MicroHibro de la Universidad de Córdoba a suitable way to predict the behavior of
(España) y @Risk® (USA). En Colombia, E. coli O157:H7 in different food matrices,
no se han desarrollado modelos predicti- allowing measures to control its develop-
vos para describir el comportamiento de E. ment and reduce its incidence as a cause
coli O157: H7 en los alimentos, pero si se of FBD. Examples of predictive models
ha empleado el software Pathogen Model- from other countries are the proposed by
lig Program (PMP) Versión 6.0 de USDA the United States Department of Agricul-
con el Eastern Regional Reseach Center ture (USDA), MicroHibro of the University

1 Estudiantes Programa de Microbiología de la Universidad Libre. Barranquilla. alejandraelenaredro-


cha@hotmail.com- elvi0910@hotmail.com
2 Profesor Asociado Programa de Microbiología de la Universidad Libre. Barranquilla.

64
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

of Córdoba (Spain) and @ Risk® (USA). In se producen por la ingestión de alimen-


Colombia, no predictive models have been tos que contienen microorganismos vivos
developed to describe E. coli O157: H7 perjudiciales para la salud, que en la luz
behavior inside food, but if USDA’s Patho- intestinal puedan multiplicarse o lisarse al-
gen Modellig program (PMP) Version 6.0 canzando otros sistemas, y cuyo factor de
software in conjuction with the Eastern virulencia es diferente a una exotoxina(7).
Regional Reseach Center (ERRC) has Macroorganismos causantes de ETA para
been used in the description of E. coli at destacar son Salmonella Enteritidis, Sal-
different temperatures. This text seeks to monella Typhimurium, Campylobacter
show a computer applications perspective spp., Clostridium botulinum, Shigella spp.,
that facilitate E. coli O157: H7 predictive Vibrio cholerae, Staphylococcus aureus,
modeling in food, its importance and its ap- Clostridium perfringens y Escherichia coli
plicability. serotipo O157:H71. Este último patóge-
no, perteneciente al patotipo de las cepas
Keywords: Predictive Models, Pathogen, de Escherichia coli enterohemorrágicas
Meat, FBD, O157:H7 (EHEC), probablemente el grupo más viru-
lento de las E. coli diarreogénicas debido
a las dos verotoxinas (denominada así ya
Introducción que se les descubrió por primera vez en
Las Enfermedades Transmitidas por los las células Vero, cuyo origen es del riñón
Alimentos (ETA) se definen como un con- del mono verde africano Chlorocebus)8 o
junto de síntomas originados por la inges- toxinas similares a las de Shigella, por lo
tión de alimentos y/o agua, que contengan que también es llamada Escherichia coli
agentes etiológicos en cantidades tales verotoxigénica (VTEC) o Escherichia coli
que afecten la salud del consumidor a ni- productora de toxinas tipo Shiga (STEC).
vel individual o grupos de población(1-4).
Éstas constituyen un problema de salud E. coli O157:H7 se caracteriza por ser un
pública mundial que aumenta con el pasar bacilo gram negativo, anaerobio faculta-
de los años. Entre los factores responsa- tivo, catalasa positivo oxidasa negativo,
bles se destacan el crecimiento de la po- no fermenta el sorbitol, ni la ramnosa y no
blación, la pobreza, la urbanización en los produce β-glucuronidasa, perteneciente a
países subdesarrollados, el comercio in- la familia Enterobacteriaceae9. La deter-
ternacional de alimentos y la aparición de minación del grupo patógeno al que este
nuevos agentes causantes de ETA o nue- microorganismo pertenece se realiza uti-
vas variantes de estos agentes con mayor lizando un esquema de serotipificación
resistencia y patogenicidad(5,6). desarrollado por Kauffman, éste tiene 176
antígenos somáticos (O), 112 flagelares
Las ETA se clasifican en intoxicaciones, (H) y 60 capsulares (K). El antígeno «O»
toxiinfecciones e infecciones. Las intoxi- es el responsable del serogrupo; la deter-
caciones, se producen por la ingestión minación del antígeno somático y flagelar
de toxinas o venenos que se encuentran (O:H) indica el serotipo, el cual en ocasio-
presentes en el alimento ingerido, y que nes se asocia con un cuadro clínico en
han sido producidas por hongos o bacte- particular (10).
rias, aunque éstos ya no se hallen en el
alimento; las toxiinfecciones se producen E. coli O157:H7, se asocia con diversas
al ingerir un microrganismo que dentro del enfermedades cuyo espectro clínico en
cuerpo produce la toxina; y las infecciones, seres humanos incluye diarrea inespecí-

65
UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

fica, Diarrea Sanguinolenta (DS), Enfer- miología de cada variedad es diferente se-
medad Diarreica Aguda (EDA) y Síndrome gún el reservorio de la infección, niveles
Urémico Hemolítico (SUH)(6). de sanidad e higiene en la comunidad y
sistemas de producción agrícola y de los
La capacidad toxigénica de las cepas es alimentos (13).
necesaria para que el paciente desarrolle
los síntomas, ya que la citotoxina Stx es Actualmente se reconoce la existencia de
el principal mecanismo de patogenicidad distintas fuentes y vías de transmisión.
de STEC y su síntesis está relacionada Los rumiantes, y en particular el ganado
con la presencia del bacteriófago Stx, que bovino, son el principal reservorio y datos
está insertado en el genoma. Una vez que obtenidos durante los brotes y las infec-
la toxina Stx (subunidad B) se ha fijado a ciones esporádicas indican que la fuente
su receptor Gb3, es endocitada la subu- más frecuente de toxiinfección por E. coli
nidad A, transportada al aparato de Golgi O157:H7 son los alimentos de origen bo-
y posteriormente hasta el retículo endo- vino, especialmente la carne de vacuno
plásmico rugoso, para inhibir luego la sín- poco cocida y los productos cárnicos de
tesis proteica. La StxA, en ambas toxinas vacuno(13-17). La contaminación se pro-
shiga, son N-glucosidasa altamente selec- duce como resultado de malas prácticas
tivas, que depurinan un residuo especifico de faenado de los animales, su manipula-
de adenina de la subunidad ribosomal 60S ción y la higiene de los mataderos(13). La
de la célula eucariótica, esto bloquea la segunda causa más importante por la cual
síntesis de proteína y conduce a la muerte se propaga esta patología es la ingesta de
celular de las células intestinales o rena- vegetales crudos(18,19), contaminación
les del hospedero(9). En las cepas EHEC que se produce al ser E. coli O157:H7 libe-
aisladas, se han encontrado las variantes rada por los animales y los seres humanos
Stx1 y Stx2 que son inmunológicamente en sus heces he ingresar a los agroeco-
diferentes. Además de la toxina, las EHEC sistemas a través del estiércol, aguas de
tienen otros mecanismos de patogenici- riego, semillas contaminadas, plagas de
dad como el fenómeno de adherencia y insectos y animales silvestres, o vectores
esfacelación (A/E), y presentan el gen cro- nematodos(13). Entre otras matrices ali-
mosomal eae que codifica para la proteína mentarias relacionadas con la transmisión
de membrana externa de 94 kilodaltones de este microorganismo se encuentran la
(kDa), llamada intimina, cuya expresión sidra fresca no pasteurizada y la leche cru-
es regulada por genes plasmídicos. Otro da y sus derivados como el queso fresco y
factor de patogenicidad es el plásmido el yogurt (20- 23).
pO157, de 60 megadaltones (MDa), que
codifica para la enterohemolisina (10,11). El análisis retrospectivo de los alimentos
relacionados con brotes causados por
Este microorganismo es el serotipo más este serotipo ha revelado que menos de
reconocido en este grupo y es conside- 10 UFC/g o ml pueden ser suficientes para
rado como un patógeno de gran impacto causar la enfermedad. Dosis infectivas ba-
en la salud pública, ya que ha sido iden- jas, de 2 a 2000 UFC, han sido asociadas
tificado como una cepa causante de ETA con brotes (22,24).
a nivel mundial. Su transmisión se lleva
a cabo por vía fecal–oral(12) y la fuente De acuerdo a la Organización Mundial de
de contaminación de los alimentos son las la Salud (OMS), un número creciente de
heces humanas y de animales. La epide- brotes se asocian al consumo de estos ali-

66
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mentos contaminados durante su cultivo, Las estrategias de control de los riesgos


manipulación o cualquier etapa de la ca- asociados a E. coli O157:H7 se pueden
dena, desde la producción primaria hasta aplicar en diferentes etapas de la cadena
la preparación para su consumo final, y de alimentaria y su efectividad dependerá del
ahí, la necesidad de analizar cada proble- conocimiento que se tenga sobre el im-
mática con una visión integral del tipo “de pacto que cada etapa posee sobre la pro-
la granja a la mesa”(19-26). También se babilidad de aparición de la toxiinfección
ha aislado en masas de agua (estanques, (32).
arroyos), pozos y abrevaderos, y se ha
observado que puede sobrevivir durante Con respecto a la etiología bacteriana de
meses en el estiércol y en los sedimentos la EDA, E. coli O157:H7 es uno de los
de recipientes de agua. Se ha informado principales que se aíslan en los cultivos de
de casos de transmisión por el agua, tan- heces de personas con esta patología. En
to por agua de bebida contaminada como Colombia no se tenían informes de la pre-
por aguas de recreo(19,27,28). sencia de este patógeno, sin embargo, en
1996, se reportó por primera vez, aunque
La principal etiología del SUH es la toxiin- con probabilidad de ser un caso no endé-
fección gastrointestinal por cepas de Es- mico, lo que indica la importancia de resal-
cherichia coli O157:H7, que da origen a tar su intervención y estudio como agente
un cuadro diarréico prodrómico (SUH-D+), causal de la EDA en el país como patóge-
generalmente de características hemorrá- no emergente (33).
gicas o disentéricas. La incidencia de este
síndrome a nivel global se estimó en (2,1) Según lo reportado por el Instituto Nacio-
casos cada 100.000 personas por año. En nal de Salud (INS) en el 2016, la tasa de
Latinoamérica, existen zonas endémicas mortalidad nacional de EDA es de 26,3
como Argentina, que presenta el registro casos por 1.000.000 de menores de cinco
más alto de SUH, con aproximadamente años y la incidencia es de 59,1 casos por
420 casos nuevos declarados anualmen- 1.000 habitantes, en donde las entidades
te(28-30), esto posiblemente debido a la territoriales con incidencia mayor a la na-
elevada frecuencia de enfermedades dia- cional son Bogotá, Valle del Cauca, Quin-
rréicas agudas producidas por toxinas tipo dío, Amazonas, Risaralda, Meta, Antioquia
Shiga en este país. Aunque actualmente y Barranquilla (34).
se conoce que puede aparecer en cual-
quier lugar del mundo y que su frecuencia La comprensión de los riesgos de las en-
está aumentando; en Colombia, en la ciu- fermedades bacterianas transmitidas por
dad de Bogotá, durante el período de junio los alimentos depende del conocimiento
1992 a junio 2002, se demostró mediante de las condiciones ambientales especí-
la realización de un estudio a 63 pacientes ficas que afectan el comportamiento de
con diagnóstico de SUH que entre los mi- los patógenos (es decir, el crecimiento,
croorganismos causantes de la enferme- la supervivencia y la disminución). Esta
dad sólo el 9,5% de los niños la desarrolló información puede traducirse en modelos
por E. coli, sin identificar el serotipo al que matemáticos que permitan estimar cómo
pertenecía (31). Debido a la severidad del los patógenos específicos reaccionarán a
SUH y la carencia de un tratamiento espe- condiciones ambientales únicas (35).
cífico, la prevención primaria de toxiinfec-
ciones por E. coli O157:H7 es fundamen- Realizar una evaluación de riesgos aso-
tal para disminuir su impacto sanitario. ciada a peligros microbiológicos resulta

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complejo por el potencial de las poblacio- llan más que todo en carne vacuna y en
nes bacterianas para crecer o disminuir derivados cárnicos (ej. hamburguesas,
en función del microambiente generado jamón), aunque también se han realiza-
desde la producción hasta el consumo, lo do en productos vegetales (ej. lechuga).
cual obliga además a considerar las incer- Los tipos de modelo que se emplean para
tidumbres, es decir, la falta de conocimien- estos estudios son en su mayoría mode-
to sobre una propiedad medible de un sis- los primarios: de transferencia, modelos
tema (un ejemplo es el momento en que de crecimiento e inactivación(38), siendo
alimento contaminado entra en la línea de el último el tipo de modelo que estudia la
procesamiento ya que se desconoce con muerte de los microorganismos bajo con-
qué frecuencia un lote de alimento conta- diciones especiales o la inactivación de
minado ingresa a la fábrica) y variabilidad estos o de sus toxinas (39).
propias de dicho proceso biológico (36).
Actualmente, con el fin de facilitar el mode-
Los modelos de crecimiento microbiano in- lado predictivo de microorganismos pató-
tegrados a un modelo cuantitativo de ries- genos en diferentes matrices alimentarias,
gos tratan de representar el incremento en en otros países se han desarrollado soft-
la población microbiana durante diferentes ware como los que ofrece el Departamen-
etapas del proceso (ej. procesamiento, to de Agricultura de los Estados Unidos
distribución, almacenamiento, etc.). De (USDA)40, MicroHibro desarrollado por el
esta forma, se debe modelar el fenómeno equipo de investigación HIBRO de la Uni-
mediante el cual un número inicial de bac- versidad de Córdoba (España)(41) y otros
terias (Ni) se multiplica para dar como re- que aplican para diferentes áreas como @
sultado un número final de microorganis- Risk® desarrollado por Palisade Corpora-
mos (Nf), debiendo considerar los factores tion, New York, Estados Unidos de Améri-
que regulan y condicionan el crecimiento ca(42). En Colombia, no se han desarro-
bacteriano (ej. pH, temperatura, actividad llado herramientas informáticas conocidas
de agua, etc.) (18). para dicho fin, de igual manera, no se han
encontrado referencias bibliográficas en
Para lo anterior existen diferentes modelos las que se evalúe el crecimiento de E. coli
que sirven como herramientas para mode- O157:H7 utilizando programas de modela-
lar el crecimiento microbiano, pudiéndolos do predictivo de otros países. Sin embar-
dividir en tres tipos: a) primarios (describen go, estas herramientas informáticas si han
la evolución de la población de microorga- sido utilizadas por investigadores como
nismos a lo largo del tiempo bajo deter- los de la Universidad de la Sabana, Bogo-
minadas condiciones que son asumidas tá, quienes utilizan el software, Pathogen
como constantes), b) secundarios (tienen Modeling Program (PMP) versión 6.0, que
en consideración la variabilidad que pue- ofrece el Departamento de Agricultura de
de ocurrir en el período bajo análisis en los Estados Unidos (USDA), para describir
cuanto a sus condiciones ambientales) y el crecimiento de E. coli sp. a diferentes
c) terciarios: aplicaciones informáticas que temperaturas (43).
calculan el desempeño microbiano bajo
condiciones ambientales específicas (37). Debido la presencia de éste patógeno en el
país y a la mortalidad de las manifestacio-
A nivel mundial, en países como Argentina nes clínicas que puede desarrollar, resulta
y España los estudios para el modelado importante tener un mayor conocimien-
predictivo de E. coli O157:H7 se desarro- to del comportamiento de este patógeno

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en alimentos para lograr un mejor control ca de PRC en tiempo real principalmente


en la mitigación de su impacto como pro- se basa en la detección de una señal fluo-
ductor de ETA, por tanto, nos planteamos rescente emitida durante la amplificación,
como objetivo describir las aplicaciones con lo que se dispone del resultado en
informáticas que faciliten el modelado pre- tiempo real. La detección automatizada de
dictivo de E. coli O157:H7 en alimentos, su la señal fluorescente evita la electrofore-
importancia y la aplicabilidad los mismos. sis posterior de la PCR convencional(47),
además, los procesos de amplificación y
Aislamiento De E. Coli O157:H7 detección se producen de manera simul-
Para el aislamiento de E. coli O157:H7 se tánea en el mismo vial cerrado, sin necesi-
emplea el agar MacConkey sorbitol, me- dad de ninguna acción posterior. Mediante
dio en el cual es reemplazada la lactosa detección por fluorescencia se puede me-
por sorbitol. Las colonias sorbitol negativo dir durante la amplificación la cantidad de
(transparentes) se confirman por ensayos ADN sintetizado en cada momento, ya que
bioquímicos, serológicos, de verotoxici- la emisión de fluorescencia producida en
dad, y técnicas moleculares(37). la reacción es proporcional a la cantidad
de ADN formado (48).
Debido a las bajas concentraciones de
E. coli O157:H7 halladas en alimentos Los primers o cebadores son moléculas
responsables de brotes, se ha visto la cortas (entre 10 y 30 bases) de DNA de
necesidad de utilizar métodos altamente cadena sencilla que delimitan el fragmento
sensibles. La técnica de Separación Inmu- a amplificar. En el caso de E. coli el gen
nomagnética (SIM), en la que anticuerpos uidA que codifica para la β-glucoronidasa
anti-E.coli O157 purificados, adsorbidos es común a todos los serotipos de este
y unidos covalentemente a la superficie microorganismo, pero se ha descrito una
de partículas esféricas paramagnéticas mutación en la posición +93 en el serotipo
de poliestireno, reaccionan con el antí- O157:H7, en el que para su uso en PCR
geno somático O157, recuperándose el convencional, así como en PCR en tiempo
microorganismo cuando las partículas uni- real la utilización del cebador PT2 cubre
das al O157, son atraídas magnéticamen- esta mutación. Para la detección por PCR
te y sembradas posteriormente en placas en tiempo real en modo TaqMan, esta mu-
de aislamiento. En medios selectivos, tación es reconocida por una sonda MGB
como el agar MacConkey sorbitol suple- que cubre la posición +93 (47,49).
mentado con cefixima y telurito de potasio
(CT-SMAC) o medios cromogénicos, es E. Coli O157:H7 A Nivel Mundial Y En
un procedimiento sensible y eficaz para la Colombia
detección de Escherichia coli O157:H7 en Se han presentado reportes de E. coli
alimentos de origen animal (44,45). O157:H7 en alimentos en Estados Uni-
dos, Alemania, España y en otros lugares
Por otra parte, el Instituto Nacional de Sa- a nivel mundial, excepto en la Antártida
lud de Colombia indica que para la identifi- 22,50-52. Los últimos datos disponibles
cación de E. coli O157:H7, se recomienda en la Agencia Europea de Seguridad Ali-
el método de PCR en tiempo real, el cual mentaria (EFSA) aportados por los países
recientemente fue validado por la FDA de la Unión Europea correspondientes al
(Food Drug Administration, USA) y que año 2006, recogen un total de 4.916 ca-
mostró mejor recuperación al compararlo sos de toxiinfecciones asociadas a E. coli
con el método microbiológico46. La técni- 0157:H7, de los cuales 13 se produjeron

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en España47. Otra recopilación reciente cuya prevalencia es del 4.7%, en pacien-


estableció que en el período comprendido tes pediátricos, que aunque aparentemen-
entre 1990-2006, se presentaron 83 bro- te baja, está entre los límites de otros es-
tes asociados al consumo de leche líquida tudios realizados en otros países, y pre-
de los cuales 37 estaban asociados con sentándose además con una alta tasa de
leche pasteurizada y 46 con leche no pas- incidencia en bovinos sanos (6.5%) (33).
teurizada siendo causante de ello los mi-
croorganismos más frecuentemente aisla- En Colombia en el 2010 se reportó que el
dos como Campylobacter spp.c y E. coli 30% de los productos alimentarios dispo-
patógenas (46). nibles en supermercados en Bogotá esta-
ban contaminados con E. coli enteropa-
En 1998, se observó en Estados Unidos tógenas. Los agentes más comunes ais-
una incidencia de 2,3 por cada 100. 000 lados de vegetales y carne de res fueron
habitantes, pero luego descendió a 1,1 ECTS (E. coli productora de toxina Shiga)
por cada 100.000 habitantes en el 2003. y ECEA (E. coli enteroagregativa). No se
Sin embargo, esta incidencia se mantuvo detectaron ECET (E. coli enterotoxigéni-
en los últimos años e incluso en el 2006 ca), ECEP clásica ni ECEI (E. coli ente-
reportaron 29 brotes de toxiinfecciones roinvasora), las cuales están más asocia-
por E. coli productores de toxina “shiga” das a aguas contaminadas. Más estudios
(ECTS) contra 24 que se reportaron en son necesarios para encontrar las fuentes
promedio entre 2001 y 2005, de los cuales más comunes de dicha contaminación y
27 fueron causados por O157. En Alema- para evaluar si la contaminación de pro-
nia demostraron el aislamiento de cultivos ductos alimentarios varía de acuerdo con
de E. coli portadores de toxina “shiga” que la región y a la época del año. El primer
correspondía a varios serotipos, siendo el estudio sobre las ECTS en Colombia re-
más frecuente el O157:H750. También la portó la presencia en 0,87% de muestras
presencia de este patógeno ha sido infor- de carne molida de res y en 6,5% de fecas
mada en diversos países de Latinoamé- de ganado vacuno (51).
rica como Argentina, Colombia, Uruguay
y Costa Rica, variando de acuerdo a su En 2013, se identificó el serotipo O157:H7
posición geográfica (asociándose a casos en carne de cerdo comercializada en di-
de diarrea y SUH)(7,41,50,53) en el que ferentes supermercados de la ciudad de
Colombia informó de su hallazgo por pri- Cartagena de Indias, durante agosto y
mera vez solo hasta el año de 1996, lo que Septiembre de 2008. De 60 muestras ana-
resultó de gran importancia a nivel epide- lizadas se obtuvo 36 con E. coli sp.  en
miológico ya que anteriormente no se te- niveles no aceptables según las exigen-
nía documentado etiológicamente la pre- cias del Instituto Nacional de Vigilancia
sencia de este germen en el país(33). Este de Medicamentos y Alimentos (INVIMA)
hecho desde entonces propició la realiza- para productos cárnicos, identificándose
ción de estudios en diferentes zonas del el serotipo O157:H7 en 17 muestras; sin
país donde se ha identificado a la bacte- embargo, en el caso de este estudio, esta
ria a partir de diversos tipos de alimentos, caracterización debe considerarse como
agua y materia fecal(33,46). Situación que presuntiva de acuerdo al método utiliza-
destaca la importancia de buscarlo como do, debido a que en el estudio no se de-
agente causal de EDA por consumo de ali- muestra su confirmación por otros méto-
mentos contaminados (37), con un 7.2% dos como los moleculares, que además
de los casos de diarrea en Colombia, y pueden permitir la identificación de genes

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productores de toxinas(37,54). En el Cono La primera clasificación agrupa los mo-


Sur de América, la toxiinfección por E. coli delos de acuerdo con su funcionamiento
O157:H7 son endémicas, y esto obedece matemático, en modelos empíricos y me-
fundamentalmente a la falta de programas canicistas. Los modelos empíricos son
de vigilancia de brotes de toxiinfecciones aquellos modelos matemáticos que son
alimentarias en toda esta región (24). desarrollados a partir de datos obtenidos
experimentalmente. Dichos modelos son
Modelos Predictivos y su Clasificación. utilizados para describir la velocidad de
El estudio del crecimiento microbiano en crecimiento (Nmax), la fase de latencia
función del medio que le rodea (el alimen- (LDP) y otros parámetros en función de
to), es considerado una de las bases de condiciones experimentales como la tem-
la microbiología de alimentos. Cada uno peratura, el pH, entre otras (59). En cuanto
de los factores intrínsecos de un alimen- a los modelos mecanicistas se diferencian
to influye sobre el desarrollo microbia- de los empíricos, debido a que estos par-
no y hace que favorezca el desarrollo de ten de una base teórica biológica, la cual
unos microorganismos en detrimento de obliga al modelo a adaptarse a la realidad
otros(55). La microbiología predictiva, de- biológica mediante una hipótesis deter-
finida científicamente, como la disciplina minada, en consecuencia, estos modelos
que combina elementos de matemáticas, explican con más exactitud los datos ex-
estadística, sistemas informáticos, inge- perimentales aunque no se ajusten con
niería, química y ecología microbiana para tanta exactitud como los modelos empíri-
desarrollar modelos que describen y pre- cos a los datos utilizados para la genera-
dicen el comportamiento de los microor- ción del modelo. Dentro de estos modelos
ganismos bajo factores específicos como: se destacan los que predicen la tasa de
pH, Temperatura, actividad de agua (aw), crecimiento en función de la temperatura
entre otros(56). A partir del conocimiento o aquellos que describen la velocidad de
de las respuestas microbianas ante los catálisis enzimática a bajas temperaturas,
elementos del entorno se formulan ecua- entre otros (60).
ciones matemáticas que describen un
comportamiento, ya sea de crecimiento, La segunda clasificación de los modelos
supervivencia o inactivación; las cuales, predictivos se fundamenta en la finalidad y
se identifican como modelos predictivos agrupan los modelos en cinéticos y proba-
microbiológicos (39). bilísticos. Los modelos cinéticos estiman
la respuesta de crecimiento específica,
En Microbiología Alimentaria, los modelos con respecto a diferentes variables como
predictivos constituyen un método rápido, la temperatura, pH, aw, la concentración
relativamente económico y no invasivo gaseosa, el potencial de oxidoreducción,
para la determinación objetiva de la cali- humedad relativa, contenido de nutrientes
dad de los alimentos(57). Existen diferen- y propiedades antimicrobianas. Los mode-
tes criterios para clasificar los modelos los cinéticos pueden utilizarse para pre-
predictivos del crecimiento microbiano, decir cambios en el número de microor-
los cuales pueden ser agrupados según ganismos con respecto al tiempo, incluso
su funcionamiento matemático, según su cuando una variable que puede afectar
finalidad o el esquema propuesto por Whi- al crecimiento esté cambiando. Los mo-
ting y Buchanan en 1993, que los ordena delos cinéticos han sido empleados con
en modelos primarios, secundarios y ter- mayor frecuencia que los probabilísticos,
ciarios (58, 59). para modelar los efectos de variables in-

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trínsecas y extrínsecas, particularmente de estimar la vida útil de los productos o


la temperatura, en el crecimiento micro- el riesgo de pérdida de la inocuidad que
biano. Los modelos probabilísticos han atente contra la seguridad alimentaria,
sido extendidos para definir los límites de sin recurrir a las técnicas tradicionales de
crecimiento de microorganismos en am- recuento en placa de los microorganis-
bientes específicos, donde un único factor mos(64); esta integración de modelos pri-
no es limitante pero en conjunto con otros marios y secundarios se denomina mode-
sí previenen o inhiben el crecimiento mi- los terciarios (59).
crobiano. La probabilidad de crecimiento
microbiano puede ayudar al productor de Modelos Predictivos para Describir el
alimentos a la hora de tomar decisiones Comportamiento de E. Coli O157:H7 En
sobre de la formulación, procesamiento, Alimentos
envasado y almacenamiento de un pro- Cada año mueren en el mundo varias de-
ducto(58). cenas de personas a causa de la infección
alimentaria por cepas de E. coli O157:H7.
Finalmente, según la clasificación pro- Por tanto, su control es prioridad para go-
puesta por Whiting y Buchanan en 1993, biernos de la mitad de los países a nivel
en los modelos primarios el crecimiento mundial en especial en Norteamérica(5).
de los microorganismos es descrito por los Se ha despertado un interés internacional
parámetros cinéticos; que son representa- por la microbiología predictiva particular-
dos en tres etapas. La primera es la fase mente en Estados Unidos y Reino Unido,
de latencia (LDP), la fase de crecimiento también en Australia y los países del este
exponencial (µmax) y finalmente, la fase de Europa (56). Los gobiernos, los insti-
estacionaria donde se alcanza la pobla- tutos de investigación y la industria están
ción máxima (Nmax)(61). El crecimiento trabajando, independientemente o en co-
de los microorganismos se ve afectado laboración, en programas para generar las
por las condiciones ambientales, la com- bases de datos necesarias para el desa-
posición del alimento y por el estado fisio- rrollo de modelos predictivos que ayuden
lógico de las células (62). a describir la respuesta microbiana frente
a factores extrínsecos e intrínsecos al ali-
Los modelos secundarios consisten en mento, con el fin de minimizar el riesgo de
prever el comportamiento de la población ETA y controlar la aparición de la bacteria
microbiana (parámetros cinéticos de creci- en diferentes matrices alimentarias (65).
miento) mediante el uso de modelos ma-
temáticos, los cuales se encuentra en fun- Un ejemplo de los proyectos internacio-
ción de los factores propios del producto nales desarrollados con este fin, es el
y condiciones de almacenamiento(63, 64). propuesto por el equipo de investigación
Dentro de esta categoría se encuentran HIBRO de la Universidad de Córdoba, Es-
el modelo de Arrhenius, modelos de raíz paña, en el año 2011, que buscaba con-
cuadrada, modelos de superficie de res- trolar la aparición de E. coli O157:H7 en
puesta, modelos probabilísticos y modelos productos vegetales mínimamente proce-
obtenidos mediante redes neuronales arti- sados, mediante el diseño de un modelo
ficiales entre otros (59). matemático integrado en una aplicación
informática que podría ser utilizada tanto
Los modelos secundarios pueden ser in- por autoridades sanitarias como los agen-
corporados a un software, el cual con la tes de evaluación de riesgos (66).
tecnología de monitoreo adecuada pue-

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Concretamente los equipos científicos cocida con o sin nitritos, carne, carne de
de las Universidades de Córdoba (UCO), cerdo, carne curada lista para el consumo
Georgia y Clemson, el Instituto de tecno- y salchichas) y vegetales (Acelga, vegeta-
logía de Illinois, la Universidad estatal de les de hoja, lechuga, lechuga MAP, perejil
Michigan (UEM) y Consultores del Servi- y espinacas) bajo diferentes condiciones
cio de Investigación en Agricultura del De- ambientales (pH, NaNO2, Temperatura,
partamento de Agricultura de los Estados Aw, NaCl, Lactato K, RH y Diacetato Na);
Unidos (USDA-ARS), la Administración de las bacteria utilizadas para las realización
Alimentos y Medicamentos (por sus siglas de los modelos predictivos de crecimiento
en inglés FDA) y el Consorcio de Investi- y muerte microbiana son Salmonella spp.,
gación de seguridad de los alimentos (por Listeria monocytogenes y E. coli O157:H7,
sus siglas en inglés FSRC), trabajan en di- siendo esta última la bacteria con más mo-
ferentes aspectos: en la inactivación de E. delos descritos, especialmente en los mo-
coli sp. sobre el compost; en el estudio de delos de crecimiento en vegetales donde
la contaminación superficial en vegetales sólo se modela este patógeno (65,66).
de hoja; en la transferencia de la bacte-
ria durante operaciones de procesamien- También, se permite realizar estimaciones
to; en el análisis del agua de tratamiento de los parámetros cinéticos como tasa
como un indicador de contaminación; en máxima de crecimiento, tiempo de latencia
las intervenciones de proceso para reducir y densidad máxima de población, basadas
E. coli O157:H7 en productos vegetales en la combinación de modelos secundarios
de hoja y en el efecto del almacenamien- de tipo Gamma, Ratkowsky o raíz cuadra-
to post-cosecha. Todos los datos deriva- da y tipo Cardinal y primarios como el mo-
dos de estas líneas de investigación son delo de Gompertz y el modelo de Baranyi
empleados por investigadores de la UCO y Robert en 1994, contenidos en esta base
y la UEM en el desarrollo de un modelo de datos. Igualmente, reproducen la cur-
matemático de riesgo con el fin de identifi- va de crecimiento, proporcionando el nivel
car estrategias de mitigación de la bacteria de microorganismo a diferentes intervalos
(66).
de tiempo 30. El segundo módulo, incluye
un sistema de validación, cuyo propósito
Actualmente el grupo cordobés, cuenta
es comparar las predicciones de un mo-
con una herramienta en-línea desarrollada
delo seleccionado con valores reales pro-
por ellos, llamada MicroHibro (http://www.
porcionados por el usuario, se encuentra
microhibro.com/), un espacio virtual de tra-
basado en diferentes índices estadísticos
bajo, de carácter integrado y personaliza-
y una representación gráfica, se puede
do que permite evaluar el riesgo microbia-
evaluar si el modelo realiza predicciones
no en vegetales y productos cárnicos. Ésta
certeras para un alimento dado sobre el
posee un sistema de control y cuentas de
que el usuario ha realizado la validación.
usuarios con el objeto de restringir el acce-
El tercer módulo es una herramienta para
so a personas del ámbito empresarial, pú-
el desarrollo de modelos probabilístico del
blico y académico interesadas en realizar
riesgo, éste permite diseñar su propio mo-
estudios de evaluación del riesgo. Micro-
delo de riesgo basado en la combinación
Hibro, se encuentra estructurada en tres
de diferentes procesos básicos que des-
módulos. En el primer módulo, cuenta con
criben los cambios de concentración y pre-
un sistema de predicción del crecimiento
valencia de un determinado microorganis-
microbiano en productos cárnicos (carne
mo a lo largo de una cadena alimentaria

73
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específica. En cada proceso, se pueden estas predicciones no se puede garantizar


definir las variables fundamentales a tra- para otras cepas bacterianas y/o ambien-
vés de valores puntuales o distribuciones tes, sin estudios de validación adecuados.
de probabilidad. Así mismo, los resultados Específicamente para E. coli O157:H7
pueden ser analizados mediante la utiliza- esta herramienta describe modelos de
ción de escenarios o herramientas de aná- crecimiento (en medio de cultivo aerobio
lisis de sensibilidad (65). y anaerobio), supervivencia e inactivación
en alimentos como carne molida con aditi-
En esta aplicación, el usuario puede reali- vos, jamón cocido y salchichas, pudiendo
zar simulaciones “in silico” para condicio- ajustar las variables de temperatura, pH,
nes específicas, proporcionando una es- NaCl, Nitrito de sodio, Lactato de sodio,
timación del riesgo asociado al alimento, Aw, y pirofosfato de sodio dependiendo
proceso y patógeno objeto de estudio. El del modelo (40,67).
enfoque estocástico de la aplicación per-
mite considerar todos los posibles escena- Existe otro programa informático que ayu-
rios de riesgo, ayudando a tener una visión da a predecir el comportamiento de mi-
más completa del caso analizado (41). croorganismos bajo determinadas situa-
ciones, si así se quiere. Dicho programa
Con el propósito de garantizar la seguridad fue desarrollado por Palisade Corporation,
alimentaria el Servicio de Investigación en denominado @Risk®, un software que se
Agricultura del Departamento de Agricul- incorpora a Microsoft Excel, asegurando
tura de los Estados Unidos (USDA), en flexibilidad, facilidad de uso y gran atracti-
conjunto con el Eastern Regional Reseach vo en una amplia gama de sectores de la
Center (ERRC) y complementado con es- industria, desde las áreas financieras has-
tudios independientes de diversas fuentes ta las científicas (finanzas, gestión de pro-
de investigación, han desarrollado un Pro- yectos, energía, manufacturación, inge-
grama de Modelado de Patógenos (PMP niería, investigación y desarrollo, seguros,
Versión 6.0) (39-43), puesto a disposición petróleo y gas, transporte y medio ambien-
de la comunidad científica gratuitamente, te) (68), cualquiera que tenga incertidum-
el cual consiste en un paquete de modelos bre en sus análisis cuantitativos, utilizando
terciarios (combina los modelos primarios simulación de Monte Carlo(69). La aplica-
y secundarios) que se pueden utilizar para ción debe ser comprada para ser utilizada
predecir el crecimiento, supervivencia, en- indefinidamente, sin embargo cuenta con
friamiento, transferencia e inactivación por una versión gratuita de prueba por quince
calor de 15 bacterias transmitidas por los días disponible para todo usuario en http://
alimentos, principalmente patógenas, bajo www.palisade-lta.com/trials.asp. Este pro-
diversas condiciones ambientales intrínse- grama permite realizar análisis de riesgo
cas y extrínsecas(18). Estas predicciones utilizando la simulación para mostrar múl-
son específicas de ciertos ambientes (por tiples resultados posibles en un modelo de
ejemplo, medios de cultivo, alimentos, etc.) hoja de cálculo, y le indica qué probabili-
y cepas bacterianas específicas (entre las dad hay de que se produzcan. Computa y
que se encuentra Bacillus cereus, Salmo- controla matemática y objetivamente gran
nella enteritidis, Listeria monocytogenes, número de escenarios futuros posibles, y
Escherichia coli O157:H7, Clostridium bo- luego le indica las probabilidades y riesgos
tulinum y otras), que se utilizan para gene- asociados con cada uno. Es decir, que el
rar los modelos, por lo que la precisión de programa permite decidir los riesgos que
se desean tomar y cuáles se prefieren evi-

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MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

tar, tomando la mejor decisión en situacio- Conclusiones


nes de incertidumbre (42,70). Escherichia coli O157:H7 es un patógeno
con gran importancia a nivel mundial en
Ejemplo del uso de este software a nivel los alimentos y en la salud pública, debido
científico, es el que nos ofrece Olvera A, a que es transmitido a los seres humanos
et. al 2010, quienes desarrollaron un pro- principalmente por alimentos básicos de la
yecto de investigación en Argentina, que canasta familiar (agua, carne y vegetales)
tuvo como objetivos cuantificar la frecuen- y que por presentar dosis infectiva baja,
cia y la magnitud de la contaminación por aumentando el riesgo en el consumidor
E. coli O157:H7 en las canales de ganado a desarrollar enfermedades asociadas no
bovino y generar estimaciones de exposi- sólo a cuadros clínicos típicos de las to-
ción en tres escenarios probables: la vacu- xiinfecciones alimentarias, sino hasta sín-
nación de las reses, la descontaminación tomas severos como el Síndrome Urémico
de las canales y el sistema de engorde. Hemolítico (SUH) y la Enfermedad Diarrei-
Para esto, se modeló la frecuencia y la ca Aguda (EDA).
concentración de la contaminación por E.
coli O157:H7 desde la producción prima- Si bien la prevalencia de este patógeno
ria de bovinos hasta la canal a la salida en Latinoamérica es aún incierta, lo que
del frigorífico, a partir de la información es claro es que varía según la localización
científica publicada y datos epidemiológi- geográfica, por lo que predecir el com-
cos y de expertos locales. El modelo de portamiento de dicho patógeno en los ali-
simulación estocástico se creó en Micro- mentos es un gran reto, donde confluyen
soft Excel 2007 y @Risk® (versión 4.0, diversidad de factores. Aplicaciones dise-
Palisade Corporation, New York, Estados ñadas con base a modelos predictivos del
Unidos), donde se realizaron 5,000 itera- crecimiento o inactivación del desarrollo
ciones con la técnica de simulación Monte microbiano pueden ser una herramienta
Carlo(31,37). Las dos variables de interés de mucha ayuda para lograr este objetivo.
(medidas de resultado) del modelo fueron El modelo de E. coli O157:H7 se basa en
la proporción de canales contaminadas el principio general de todo modelo pre-
con E. coli O157:H7 y la magnitud de esa dictivo para comprender los riesgos de las
carga bacteriana a la salida del frigorífico. enfermedades bacterianas transmitidas
Teniendo en cuenta los resultados obte- por los alimentos.
nidos se llegó a la conclusión de que la
vacunación de los animales resultó el es- En Colombia, actualmente no se han desa-
cenario más eficaz para reducir el ingreso rrollado modelos predictivos para describir
de la bacteria en la cadena agroindustrial el comportamiento de E. coli O157:H7 en
de la carne bovina(6). alimentos, por tanto en los estudios pre-
dictivos pueden ser utilizadas aplicaciones
Teniendo en cuenta este estudio, no es como Modelado Predictivo de Patógenos
necesario contar con una aplicación ex- (PMP) propuestos por el Departamento de
clusiva para el modelado predictivo de Agricultura de los Estados Unidos (USDA),
microorganismos, sino que existen otras, MicroHibro de España y software como @
de tipo “genérico”, que nos permiten tomar Risk® de New York. Predecir el comporta-
decisiones de situaciones futuras teniendo miento de este microorganismo en las dis-
en cuenta datos reales que nos arrojen re- tintas matrices alimentarias ayudaría en
sultados confiables. la mitigación de su impacto como agente

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UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

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Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

Preliminares en aislamiento de microorganismos


solubilizadores de fósforo en suelo del Jardín Botánico
de la Universidad Libre, Pereira.
Álvarez María del Mar1, Ceballos Valeria1, López Franco Rodolfo2
Resumen: Palabas clave: Suelo, agentes de control
de microorganismos.
Introducción: El fósforo es uno de los
elementos más críticos para la producción Abstract
agropecuaria; pero su disponibilidad
es cada vez más limitada debido a la Introduction: Phosphorus is one of the
progresiva insuficiencia de fuentes most critical elements for agricultural pro-
naturales, su relativa escasez edáfica, duction; but its availability is increasingly
la elevada retención por parte del suelo, limited due to the progressive insufficien-
la falta de reposición natural y su baja cy of natural sources, its relative edaphic
movilidad. Como mecanismo para scarcity, the high retention by the soil,
aumentar la disponibilidad y solubilidad the lack of natural replacement and its
del fósforo inorgánico en el suelo, los low mobility. As a mechanism to increase
vegetales y microorganismos que habitan the availability and solubility of inorgan-
en él, liberan enzimas fosfatasas capaces ic phosphorus in the soil, the plants and
de liberar y solubilizar el fósforo; lo cual se microorganisms that inhabit it, release
logra al liberar protones, iones OH, CO2 y phosphatase enzymes capable of releas-
aniones de ácidos orgánicos. Metodología: ing and solubilizing phosphorus; This is
aislar microorganismos solubilizadores achieved by releasing protons, OH ions,
de fósforo a partir de muestras de suelo CO2 and anions of organic acids. Meth-
del Jardín Botánico de la Universidad odology: isolate phosphorus solubilizing
Libre, Pereira. Las muestras de suelo microorganisms from soil samples from
se llevaron a condiciones de laboratorio, the Botanical Garden of the Free Univer-
donde inicialmente de homogenizaron sity, Pereira. The soil samples were taken
para mayores posibilidades de éxito to laboratory conditions, where they were
en el aislamiento. Allí se realizaron initially homogenized for greater chances
diluciones seriadas hasta 10-8. La of success in isolation. There serial dilu-
inoculación se realizó en medio de cultivo tions were made up to 10-8. The inocu-
SMRS1, selectivo para microorganismos lation was carried out in SMRS1 culture
solubilizadores de fósforo. Conclusiones: medium, selective for phosphorus solubi-
Luego de tres semanas de cultivo, se lizing microorganisms. Conclusions: After
tomaron las cajas que presentaron cambio three weeks of cultivation, the boxes were
de color característico del medio, producto taken that presented a characteristic color
de la acción de bacterias solubilizadoras change of the medium, product of the ac-
de fósforo; de ellas se obtuvieron colonias tion of phosphorus solubilizing bacteria;
pequeñas y puntiformes de color naranja, from them small, punctilous orange colo-
características de presuntas bacterias nies were obtained, characteristic of pre-
solubilizadoras de fósforo. sumed phosphorus solubilizing bacteria.

1 Auxiliares de Investigación- Semillero MEFIS (Microorganismos Eficientes del Suelo).


2 Profesor Investigador, Programa de Microbiología, Universidad Libre Pereira.

82
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

Keywords: Soil, microorganism control protozoos y algunos nematodos (2). En


agents. general, los microorganismos del suelo
dinamizan el ciclo del P a través de pro-
Introducción cesos de mineralización, inmovilización
El fósforo (P) es un macronutriente esen- y solubilización, los cuales están relacio-
cial para el crecimiento y desarrollo de to- nados con su metabolismo nutricional. A
dos los seres vivos, ya que forma parte de partir del año 2000, el conocimiento sobre
la composición de las moléculas orgáni- los microorganismos solubilizadores de
cas esenciales para la vida. Las mayores fosforo ha aumentado significativamente.
reservas en el suelo son las rocas y los Dentro de este grupo funcional se encuen-
depósitos como las apatitas primarias y tran las bacterias solubilizadoras de fosfa-
otros minerales formados durante otras to (BSF) que incluyen algunos géneros de
eras geológicas que se encuentran for- actinomicetos (3).
mando parte de un estrato rocoso cuya
principal característica es la insolubilidad. La solubilización del P como una capaci-
La disponibilidad de P para las plantas dad bacteriana se reconoció ya hace más
está relacionada con su concentración de un siglo. Varios estudios reportan la
en la disolución de suelo. La mayoría de capacidad solubilizadora de fosfatos de
los suelos tropicales y subtropicales son algunas bacterias, como: Erwinia, Pseu-
deficientes en P biodisponible por lo que domonas, Bacillus, Rhizobium, Klebsiella,
éste elemento debe ingresarse al agro- Burkholderia, Serratia, Achromobacter,
ecosistema como fertilizante. Sin embar- Agrobacterium, Microccocus, Aereobacter,
go, este no es un recurso renovable y las Flavobacterium, Enterobacter, Klebsiella,
reservas mundiales se agotan rápidam- Arthrobacter, Rhodobacter, Pantotea y
ente. Se estima que las reservas actuales Klebsiella, entre las bacterias (4). Pero
de P disminuirán a la mitad entre los años también se reportan hongos con capa-
2040 y 2060, lo que, unido al hecho de cidad solubilizadora de P: Aspergillus, Fu-
que los precios de los fertilizantes fosfóri- sarium, Mucor, Paecillomyces, Penicillium,
cos se incrementan constantemente, hace Rhizopus, Sclerotium, Sytalidium, Tricho-
necesaria la búsqueda de estrategias sos- cladium (5).
tenibles de fertilización (1).
Debido a que las fuentes orgánicas no son
Algunos microorganismos, especialmente utilizadas directamente para la nutrición
los asociados con las raíces, tienen la ha- microbiana, éstas deben primero hidroli-
bilidad de incrementar el crecimiento de zarse por la acción de enzimas fosfatasas,
las plantas y su productividad; estos son producidas y secretadas al suelo por los
reconocidos como PGPM por sus siglas microorganismos. La revisión de Nannip-
en inglés (Plant growth promoting microor- ieri et al. (2011) analiza la naturaleza y
ganisms). Los microorganismos solubiliza- roles de las fosfatasas en el suelo. Entre
dores de fosfato (MSF) constituyen un gru- los factores que influyen la mineralización
po importante de PGPM, pues están invo- e inmovilización del Po en el suelo se in-
lucrados en un amplio rango de procesos cluyen la naturaleza química de la mate-
que afectan la transformación del fósforo, ria orgánica y su reactividad asociada, la
siendo componentes integrales del ciclo cantidad de Po, la proporción C: P y N: P
edáfico de este nutriente. Los organismos de los materiales orgánicos, la tempera-
involucrados en las transformaciones del tura, la humedad, la aireación, el pH, la
P en el suelo incluyen bacterias, hongos, intensidad de cultivo y la fertilización con

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UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

P. Es importante considerar que, además Las BSP pueden ser de vida libre en el
de mediar varios procesos clave en el ciclo suelo o establecer relaciones de asocia-
biogeoquímico del P, los microorganismos ción con las plantas; en este último caso,
constituyen en sí mismos una importante son capaces de colonizar y persistir en la
reserva de P en el suelo (6). rizósfera del vegetal y favorecer su creci-
miento y desarrollo, al tiempo que se be-
Los mecanismos más ampliamente acep- nefician con las sustancias de carbono li-
tados como responsables de la solubili- beradas por las raíces como exudados. En
zación microbiana del P mineral son: tal sentido es que se las identifica como
a) la producción de ácidos orgánicos. bacterias promotoras del crecimiento ve-
b) la producción de protones (normal- getal o PGPB, por sus siglas en inglés (7).
mente asociada a la asimilación de Las bacterias solubilizadoras de fosfatos
NH4+ y/o a los procesos respiratorios). inorgánicos desempeñan un importante
c) la producción de ácidos inorgánicos y papel en el suplemento de fósforo para las
CO. plantas. Este hecho despierta la atención
para la utilización de esos microorganis-
Se ha demostrado que algunos microorga- mos como inoculante comercial, o el ma-
nismos pueden solubilizar fosfatos insolu- nejo de sus poblaciones como forma de
bles, sin producir cualquier tipo de ácidos promover una mejor utilización del fósforo
orgánicos En estos casos, se ha propues- existente en el suelo o el adicionado como
to que el mecanismo principal responsa- fertilizante (8).
ble de la solubilización es la producción de
protones durante la asimilación del NH4+, Metodologías de aislamiento
o resultantes de las actividades respirato- Para el aislamiento y selección de Bacte-
rias, pues la reducción concomitante del rias Solubilizadoras de fosforo (BSP), se
pH de la solución del suelo favorece la han informado en la literatura diferentes
solubilización de los fosfatos precipitados. medios de cultivos que incluyen en su
En otro estudio se demostró que la pro- composición variadas fuentes de P, tan-
ducción de exopolisacáridos por los aisla- to de origen orgánico como inorgánico.
dos Enterobacter sp. Hy-401, Arthrobacter Uno de los más antiguos es el Pikovskaya
sp. ArHy505 y Azotobacter sp. AzHy-510, (PVK) desarrollado en 1948 (9), el medio
confería a estos microorganismos mayor Sperber (10) que presenta en su compo-
capacidad de solubilización de fosfatos in- sición Ca3 (PO4)2 y se utiliza para aislar
solubles en relación en la cepa Enterobac- BSF a partir de muestras de suelo, raíces
ter sp. Hy-402, la cual no produce exopoli- y rizosfera. En 1992, se diseñó un nuevo
sacáridos. Otros mecanismos propuestos medio de cultivo con igual fuente de Pi y
como responsables de la solubilización de finalmente, en 1999, se formuló el medio
fosfatos insolubles son la producción de NBRIP o National Botanical Research
ácidos inorgánicos como el ácido nítrico Institute’s Phospahte growth médium
y el ácido sulfúrico, generados, respecti- desarrollado por Nautiyal (11), que ha sido
vamente, por las bacterias nitrificantes y uno de los más usados por su eficiencia
Thiobacillus sp. durante la oxidación de para seleccionar microorganismos con
compuestos nitrogenados o del azufre in- alta capacidad para solubilizar fuentes
orgánico, los cuales reaccionan con los de Pi. En cualquier caso, la característica
fosfatos insolubles tornándolos biodispo- distintiva de todos ellos es que permiten
nibles. identificar a las cepas solubilizadoras a
partir del halo traslúcido que se desarrolla

84
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

en torno a las colonias correspondientes Seguidamente la muestra se homogenizó


(12). mediante cuarteo en caja de Petri así:

Además de los medios de cultivo


anteriores, un medio bastante usado
es SMRS1 (13) que contiene purpura
de bromocresol como indicador de pH,
sulfato de amonio y extracto de levadura
como fuente de nitrógeno, cloruro de sodio
y potasio para regular la presión osmótica
y otros componentes como sulfato • Se toma 1 cajas Petri y se llena con la
de magnesio, sulfato de hierro como muestra.
cofactores enzimáticos (14) (Tabla 2). • Cada una se cuartea
De la muestra homogenizada se pesaron
Tabla 2. Composición del medio de cultivo 10 g de la caja, y se depositó en una pro-
SMSR beta previamente esterilizada; luego se
aforó a 100 ml con agua peptona estéril.

Se realizaron las siguientes diluciones


seriadas: 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-
6, 10-7y 10-8.

A partir de ellas se tomaron 100 μl de las


3 últimas diluciones (10-6, 10-7 y 10-8) y
se sembraron por superficie en medio de
cultivo SMSR (Figura 1).

El objetivo de este trabajo consistió en la Se dejaron las cajas inoculadas a


evaluación de una metodología adecuada temperatura ambiente y se evaluó a las 3
para el aislamiento de microorganismos semanas.
solubilizadores de fósforo a partir del jar-
dín botánico de la Universidad Libre sec-
cional Pereira.

Materiales y métodos
Luego de seleccionar el nicho ecológico
para la toma de muestra de suelo, se dis-
puso de una pala previamente lavada; se
tomó la muestra a una profundidad de 10
cm aprox., en la rizosfera de plantas selec-
cionadas, tomando una muestra de suelo
de 100 g.

La muestra se depositó en una bolsa es- Figura 1. Siembra en medio de cultivo


téril tipo Ziploc y se llevó al laboratorio selectivo SMSR. Obsérvese el color del
de Microbiología de la Universidad Libre, medio de cultivo.
Pereira.

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UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

Resultados y discusión
Existen muchos microorganismos con
capacidad para solubilizar fosfatos,
pertenecientes a diversos géneros, entre
los cuales pueden encontrarse bacterias
y hongos con diferentes mecanismos
para realizar dicha solubilización, como
son la producción de ácidos orgánicos,
la producción de enzimas fosfatasas y
la producción de enzimas fitasas. Así
mismo, se han descrito algunos genes
involucrados como el gen phoD, phoA,
phoB, ykol,  PhyC (15).
Figura 2. Morfología macroscópica de
En este estudio se obtuvo un tipo presuntas Bacterias Solubilizadoras de
de colonias representativas de Fósforo. Se puede observar el cambio de
microorganismos solubilizadores de tonalidad del medio de púrpura a amarillo
fósforo, de color naranja, pequeñas y debido a la liberación de ácidos y a la dis-
puntiformes, de textura suave y babosa minución del pH.
como se observa en las Figuras 2 y 3.
Se pudieron apreciar las características
macroscópicas pero el resultado no
se confirmó microscópicamente por
lo que no se logró determinar de qué
microorganismo se trataba; sin embargo,
las colonias descritas son representativas
de bacterias solubilizadoras de fósforo.

No obstante, en la mayoría de
investigaciones, la presencia de halos
de inhibición alrededor de las colonias
es lo que permite la determinación de la
capacidad de solubilización y la selección
semicuantitativa de los microorganismos
con capacidad solubilizadora de fosfato Figura 3. Morfología macroscópica de
(16), característica que no fue posible presuntas Bacterias Solubilizadoras de
observar en este caso. Fósforo.

Teniendo en cuenta la composición del


medio de cultivo utilizado para el aisla-
miento de bacterias Solubilizadoras de
Fósforo (Tabla 2), se identificó como prin-
cipal compuesto para cumplir con este ob-
jetivo el Fosfato de Calcio (Ca3 (PO4)2)
ya que actúa como su única fuente de fos-
fato. Por tal motivo se sugiere realizar va-

86
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

riaciones en la cantidad utilizada de este cro y mesofauna, la materia orgánica en-


compuesto. tre otros factores químicos y ambientales
influyen en la presencia, ausencia o canti-
Como se muestra en la Tabla 1 de com- dad presente de un determinado microor-
ponentes del medio, para preparar 1 L se ganismo en el suelo.
adicionaron 5 g de (Ca3 (PO4)2), por lo
que se propone variar entre cantidades Coincidiendo con lo anterior, varios auto-
menores y mayores a este para descubrir res señalan que la variabilidad en el núme-
cuál es la cantidad ante la cual reaccio- ro de microorganismos solubilizadores de
nan mejor las bacterias solubilizadoras de fósforo puede responder a múltiples cau-
fósforo; se proponen las siguientes canti- sas como el clima, la historia de cultivo del
dades: 2.5 g, 7.5 g y 10 g para facilitar el suelo, el tipo de suelo y los cultivos. Sin
análisis de los resultados que se obten- embargo, es importante mencionar que el
gan. Al evaluar la adición de estas nuevas método de enumeración utilizado por cada
cantidades se debe ser muy cuidadoso de investigador también podría ser causa de
agregar la cantidad exacta, ya que este la variabilidad (17).
compuesto puede afectar el pH del medio
y el indicador del mismo, ya que en otros Conclusión
estudios ha ocurrido que en vez de virar Después de implementar la metodología
de un color púrpura a amarillo una vez para el aislamiento de microorganismos
empiezan a actuar las bacterias y a liberar solubilizadores de fosforo se determi-
ácidos orgánicos, lo que ocurre es que vira nó que si se logró el aislamiento de bac-
de amarillo a púrpura, afectando el funda- terias solubilizadoras de fosforo cómo
mento del método. pudo evidenciar en los resultados. Por
este motivo se puede concluir que la
Por otra parte, es posible que las bacterias metodología implementada dio resultados
solubilizadoras de fósforo posean ciertos positivos; sin embargo se realizan ciertas
requerimientos específicos respecto al sul- sugerencias respecto al medio de cultivo
fato de hierro (FeSO4.7H2O), por lo que utilizado en el aislamiento para así
también se podrían variar las cantidades optimizar los resultados en un próximo
de este compuesto en la preparación del estudio.
medio de cultivo, probando con a la mitad
o el doble de la cantidad que se adicionó Agradecimientos:
inicialmente. Igualmente puede hacerse Los autores manifiestan sus
necesario utilizar un agente secuestrante agradecimientos al Programa de
como el EDTA (Ácido etilendiaminotetraa- Microbiología de la Universidad Libre,
cético) para encapsular el hierro, ya que el Pereira.
ser un elemento con alto potencial reactivo
puede afectar la composición del medio. Referencias Bibliográficas

Igualmente, es importante resaltar que la 1. Lambers H, Shane MW, Cramer


concentración de microorganismos so- MD, Pearse SJ, Veneklaas EJ. Root
lubilizadores de fósforo puede variar de structure and functioning for efficient
un lugar a otro, por lo que también se re- acquisition of phosphorus: match-
comienda variar los lugares de toma de ing morphological and physiologi-
muestras, ya que los cultivos, la humedad, cal traits. Ann Bot. 2006 Oct; 98(4):
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88
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Investigación, Desarrollo e Innovación

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view/251/502

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Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

ARTÍCULO DE REVISIÓN

Efecto del campo magnético sobre el crecimiento microbiano.


Barona Duque Kerynd1, Salgado Rivera Juanita1, Guzmán Jojoa David M1,
Alvarez Aldana Adalucy2.

Resumen Abstract:

Introducción: El crecimiento microbiano Introduction: Microbial growth is the most


es el pilar de investigación más importante important research pillar in microbiology,
en la microbiología, de este se ha encon- from this it has been found that many of
trado que gran cantidad de ellos poseen them have too long a generation time, so
un tiempo de generación demasiado largo an opportunity has been found in the use
por tanto se ha encontrado en el uso del of the Magnetic Field (CM). since this in-
Campo magnético (CM) una oportunidad, fluences microbial growth, either by inhi-
ya que este influye en el crecimiento micro- biting or stimulating it, depending on the
biano, ya sea inhibiéndolo o estimulándo- intensity and time of exposure. In this re-
lo, dependiendo de la intensidad y tiempo view, the effects of CM on microbial growth
de la exposición. En esta revisión se dan are known, taking as an example different
a conocer los efectos del CM en el creci- applications and microorganisms to which
miento microbiano tomando como ejemplo they have been subjected. Methodology:
diferentes aplicaciones y microorganismos For its fulfillment, a literature search was
a los cuales han sido sometidos. Metodo- conducted in databases such as Radalyc,
logía: Para su cumplimiento, se realizó Nature, Science Direct and NCBI. Conclu-
una búsqueda de la literatura en bases de sions: Evidence that CM presents inhibi-
datos como Redalyc, Nature, Science Di- tory, unobservable and stimulating effects,
rect y NCBI. Conclusiones: Evidenciando being great effects, running to be taken to
que El CM presenta efectos inhibitorios, no the food industry as a pathogen inhibitor,
observables y estimulantes, siendo gran- in the field of biotechnology for bioreme-
des efectos, postulándose para ser llevado diation and also in the area of medicine to
a la industria alimentaria como inhibidor de reduce diseases or pathogenic infections.
patógenos, en el campo de la biotecnolo-
gía para la biorremediación y como tam- Keywords
bién en el área de la medicina para reducir Magnetic field, intensity, microbiology, inhi-
enfermedades o infecciones patógenas. bition, proliferation

Palabras Claves
Campo magnético, intensidad, microbiolo-
gía, inhibición, proliferación

1 Estudiantes Programa de Microbiología. Universidad Libre Pereira. Semillero Microorganismos de


importancia en salud humana y animal “OBVIO MICROBIO”.
2 Profesora investigadora. Programa de Microbiología. Grupo de investigación MICROBIOTEC.
Universidad Libre Seccional Pereira. Líder Semillero “OBVIO MICROBIO”.

90
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

Introducción Los efectos producidos dependen de su


La ciencia cada vez avanza más y consi- densidad, frecuencia y del tiempo de ex-
go, nuevas investigaciones, una de estas posición, en especial la intensidad, esta
no muy conocida, pero si muy antigua es magnitud es medida en Teslas (T) o en
el campo magnético en un uso biológico. Gauss (G). Su importancia está en que a
El descubrimiento del campo magnético muy alta intensidad puede inhibir el creci-
como tal se ubica en plena edad de hie- miento microbiano. (2)
rro, definida como “la fuerza ejercida a un
objeto provocado por un flujo de electrici- El crecimiento microbiano es el estudio
dad”, es decir, por el movimiento de car- más importante que posee la microbio-
gas eléctricas. Con el paso del tiempo se logía, la cual ha descrito que este creci-
involucraron nuevos investigadores y ya miento posee unas etapas: latencia, ex-
en la Edad Media el CM era usado para ponencial, estacionaria y de muerte. El
aliviar el dolor, mejorar la salud, detener CM afecta en la segunda etapa, donde el
los procesos de envejecimientos y otras crecimiento es logarítmico, el cual lo pue-
tantas cosas. Es a partir de esto que se de afectar positivamente, alargando esta
fundamentaron los pilares para indagar etapa y disminuyendo la fase estacionaria
mucho más.(1) o negativamente, influyendo más rápida-
mente a la fase de muerte. (3)
Varias han sido las ciencias a parte de la
física que se han fijado en el CM, entre Este magnetismo ha sido probado tanto
estas la microbiología. Los inicios de la in- en medio de cultivo líquido como también
vestigación del CM en esta ciencia se dan sólido, alterando el ambiente de cada mi-
por los problemas que generan la existen- croorganismo, pero muchos de éstos po-
cia de bacterias multirresistentes a me- seen la capacidad de adaptarse al medio
dicamentos, desde allí se vislumbró esta para su supervivencia dónde se comien-
herramienta como nueva alternativa para zan a presentar cambios metabólicos, ya
eliminar patógenos y fue gracias a esto que tales microorganismos inician a acele-
que se descubrió que el efecto del CM en rar su propia producción de enzimas y ATP
el crecimiento microbiano no es solo uno, (4). El CM tiene tal efecto en ellos a causa
este se puede clasificar como “no obser- de sus membranas anisotrópicas la cual
vable, inhibitorio y estimulante”. (2) es la responsable de las principales fun-
ciones del transporte de las membranas.
Existen 2 tipos de CM que han sido pro-
bados en microorganismos, el oscilatorio La inhibición se da a altas intensidades ya
y el estático. El estático posee una ven- que modifican el transporte de iones debi-
taja por encima del oscilatorio, ya que el do a que cambia la velocidad de reproduc-
usuario sabe confiadamente que el campo ción celular, la variación del metabolismo
estático, trata continuamente los microor- lo que ocasiona en el medio de cultivo au-
ganismos, además son fáciles de contro- mento del pH a básico, afectando el creci-
lar y es posible usarlos sin restricciones, miento y con ello, la desintegración de la
en continuo. Por otro lado, los oscilatorios pared celular, produciendo liberación del
son más cuestionables en términos de fre- material interno porque se modifica la es-
cuencia del campo, intensidad del campo, tructura de la membrana formando poros
diámetro y profundidad de los efectos y que permiten la salida del mismo (Hernan-
están restringidos en el entorno del labo- dez, Sandra et al 2015)
ratorio (3)

91
UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

Por otro lado la estimulación se da en in- que la membrana plasmática es el eje


tensidades extremadamente bajas me- principal para sus efectos y que la “reso-
didas en militeslas (mT) lo cual provoca nancia del ciclotrón” es uno de los res-
cambios en la orientación y dirección de la ponsables de las alteraciones producidas
migración y en la estructura de biomolécu- por el magnetismo, puesto que provoca la
las, en la síntesis de ADN provocando au- aceleración de partículas cargadas. (8)
mento en ella, cambios en las biomembra- El objetivo de esta revisión fue determinar
nas, dónde en la biomembrana plasmática los efectos causados por el Campo mag-
altera el flujo de iones .(6) Se sabe que nético en los microorganismos y dar a co-
la fase exponencial se da en presencia de nocer las alteraciones a nivel bioquímico
nutrientes, por tal motivo para que la tasa que causa.
de estimulación sea más efectiva debe
haber presencia de fuente de carbono, ya Metodología
que el CM incrementa la entrada de azú-
cares por la membrana y así acelerando Se desarrolló búsqueda de literatura en
sus rutas metabólicas. (5) plataformas como Scielo, Redalyc, Scien-
ce Direct, Nature y NCBI, de las cuales
Al acelerar tales procesos por ende se fueron tomadas la mayoría de artículos
aceleran otros factores que poseen los utilizados para el presente artículo.
microorganismos, como la producción de
biomasa la cual es el peso anhídrido que Fue utilizado en las búsquedas palabras
producen, ya sea orgánico o inorgánico, claves como “Campo magnético”, “Mag-
tal producción depende de la composición netismo en microorganismos”, “Magnetic
y balance de las fuentes de nutrientes (7) Field AND microorganisms” y “Magnetic
y en éste caso, de la intensidad del cam- Field AND H.pylori”., utilizando operadores
po magnético, pues éste también influye boleanos como “AND” y adicionalmente se
en la naturaleza de los nutrientes, de su usó la plataforma MeSH para la selección
medio de cultivo puesto que puede activar de plabras claves del presente artículo.
las partículas coloidales de éste, lo cual Se seleccionaron artículos donde eva-
remueve parte de Ca unida a los fosfolípi- luaban los efectos del CM sobre diferen-
dos, provocando mayor permeabilidad de tes microorganismos y que revelaran las
la membrana plasmática de los microorga- intensidades específicas a la que fueron
nismos.(8) sometidos, de los microorganismos se en-
focó en Escherichia coli, Saccharomyces
Han sido varias las teorías que han res- cerevisiae y Chlorella vulgaris y se realizó
paldado tales efectos de los CM en los búsqueda para determinar si Helicobacter
microorganismos, ya que aún no se com- pylori ya había sido sometido al campo
prende completamente los efectos bioquí- magnético, de lo cual en los últimos años
micos de tal efecto, pero todos coinciden su aplicación ha avanzado.

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Resultados

Tabla 1. Literatura relevante

Artículo Autores Año Hallazgo


Cultivo de Chlorella Liliana Gómez Luna , 2011 Un CM magnético de 0,03T
vulgaris sobre Inaudis Álvarez , Roger permite el aumento de
residual de soja con Rivero crecimiento microbiano, mayor
la aplicación de un biomasa y mayor carotenos en
campo magnético fase estacionaria de C.vulgaris

Influencia del campo Matilde Anaya , Eduardo 2015 El aumento de crecimiento


magnético sobre Barbará , Jesús Padrón, de S.cerevisiae puede
el crecimiento de Sofía F. Borrego , ser estimulado por CM de
microorganismos Oderlaise Valdés , Alian intensidades bajas y además
patógenos ambientales Molina estimula el aumento de su
aislados en el Archivo biomasa en intensidades de
Nacional de la 3mT
República de Cuba
Influencia de campos Sandra Johana 2014 E.coli se puede adaptar a
magnéticos en Hernández Jiménez, los medios alterados por
el crecimiento de Estefanía Lucero los campos magnéticos
E.coli y S.cerevisiae Domínguez Toro, Luis acelerando su metabolismo.
y la capacidad de Gonzaga Gutiérrez
solubilizar fósforo en
Pseudomonas sp y
Bacillus sp de uso
industrial
Analyzing effects of Turhan Karagulera, 2017 El CM afecta la solubilidad de
ELF electromagnetic Hasan Kahramanb, las partículas y/o la hidratación
fields on removing Melek Tuter de los microorganismos en los
bacterial biofilm biofilms
Overexpression of Farkhondeh Poursina, 2018 En biofilms se presentó una
spoT gene in coccoid Jamshid Fagri, disminución de coccoides y
forms of clinical Nasrin Mirzaei, muerte de espirales que al
Helicobacter pylori ajieh Ghasemian Safaei morir transmiten un compuesto
isolates. toxico para las demás viables,
logrando una disminución de
biomasa

Understanding the Mun Fai Loke, Chow 2016 El CM afecta el gen amiA,


dimorphic lifestyles Goon Ng, Yeespana influyente en el cambio de
of human gastric Vilashni, Justin Lim estado de espiral a coco.
pathogen Helicobacter & Bow Ho
pylori using the
SWATH-based
proteomics approach

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Discusión

- Campo Magnético
El campo magnético se define como una
radiación no ionizante, para su respectiva
explicación se basa en la energía
electromagnética más conocida que es la
luz del sol, es decir “La frecuencia de la luz
solar” (luz visible) siendo la línea divisora
de la radiación ionizante y no ionizante,
estando esta última por debajo de ella,
clasificada como “más benigna” y con
frecuencias más bajas (figura 1). (9)

La línea de investigación del efecto del CM


en diferentes microorganismos, en los últi-
mos años ha demostrado ser exponencial,
puesto que se ha determinado que dicha
aplicación posee efecto en la viabilidad y en
el crecimiento microbiológico, siendo va-
riables dependientes de la intensidad del
campo magnético, el tiempo de exposición
y el tipo de microorganismo (10) siendo
objeto de estudio de la “Magnetobiología”
como ciencia (2) Figura 1. Espectro electromagnético no
ionizante. Tomada de: http://www.insht.
El CM se puede aplicar en sistemas es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/
biológicos de tipo estático u oscilante, TextosOnline/EnciclopediaOIT/tomo2/49.
es decir, un campo magnético que varía pdf.
según la frecuencia de la corriente
eléctrica que lo induce (en Hz)(2). • Efectos Causados Por El Cm Sobre
Las aplicaciones de este tipo suelen usar Los Microorganismos
frecuencias extremadamente bajas (ELF)
y de muy baja frecuencias (VLF) siendo de Se ha evidenciado que el CM pueden tener
mayor frecuencia que los estáticos (> 0 Hz efectos sobre la velocidad de reacciones
hasta los 30 kHz). Clasificándose: la ELF bioquímicas, en las condiciones
con un intervalo de frecuencia de 0 a 300 fisiológicas de los microorganismos, en su
Hz y la VLF en el intervalo de 300 Hz a 30 tasa de crecimiento e incluso su muerte.
kHz.(9) (11)

Existen diferentes teorías que explican tal


suceso como lo es el ion ciclotrón, el cual
establece que: “cualquier ion que entra en
un campo magnético a una determinada
velocidad, experimenta una fuerza que
depende de esa velocidad y de la inten-

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sidad el campo” donde la trayectoria del genéticas en los microorganismos pues-


ion(girofrecuencia) depende también de to que se postula que los efectos mag-
aquella fuerza, ya sea una trayectoria netobiológicos del campo magnético,
circular o espiral, siendo además depen- exactamente en frecuencias extremada-
diente del tipo de carga y la masa del ion. mente bajas, de 50 o 60 Hz, sobre
Según esta teoría, la resonancia del ciclo- los microorganismos, es causado por
trón se da cuando la girofrecuencia del ion la genotoxicidad (cambios irreversibles
se iguala a la girofrecuencia del CM, y la del ADN) que este provoca. (2) Donde,
energía se transfiere selectivamente des- se ha visto que intracelularmente se ven
de el campo hacia los iones. Por tanto, su alterados los microorganismos, especial-
consecuencia son las modificaciones me- mente en la cromatina, en los niveles de
tabólicas (12) proteínas y mRNA, por tanto, la causa que
define el efecto que surgirá será el ADN.
Se ha demostrado que el CM posee efecto Por ejemplo en E.coli a altas frecuencias
directo con la célula (13), puesto que influ- su ADN se puede degradar o en bajas au-
ye como se mencionó anteriormente en el mentan los mRNA y consigo surgen más
gradiente de voltaje de los fluidos celula- cantidad de genes que ayudan a aumen-
res afectando las funciones fisiológicas de tar su virulencia y capacidad de sobrevivir,
la célula. (14) donde la importancia radica en el compo-
nente espacialtemporal del campo aplica-
Como una de las primeras consecuencias do(10)
es el efecto sobre sus membranas, ya que Aunque, no se puede generalizar que el
se altera su permeabilidad, fluidez y el CM es más inhibitorio cuanto mayor es
mantenimiento de su integridad, causando su frecuencia e intensidad y tiempo de
un cambio en sus componentes lipídicos. exposición, como pasa con el tratamiento
Además, estudios demuestran que afecta térmico. Este efecto propone la existencia
su potencial, observándose por ejemplo del valor de frecuencia o intensidad “ven-
en bacterias gram+ como Staphylococcus tana” que debe ser encontrado según sea
aureus hiperpolarización mientras que Es- el objetivo deseado. Por tanto, no existe
cherichia coli despolarización, afectando una relación directa entre los parámetros
por tanto el transporte de iones. Donde característicos del CM y su efecto, y que
tales efectos se traducen a señales que pueden encontrarse además microorga-
el microorganismo las toma como factores nismos “magnetorresistentes”. (12)
de estrés, alterando su carga superficial,
donde la teoría de Chapman interpreta • Efectos Causados Por El Cm Sobre
como “las alteraciones en la carga de la Los Microorganismos Resistentes
superficie afectan el potencial de la mem- A Antibioticos
brana y cuando la carga de la superficie
se vuelve más negativa, esto causa una Existen diferentes rutas que han tomado
disminución en la magnitud del potencial los microorganismos para lograr su super-
de la membrana y viceversa” causando vivencia, un claro ejemplo es hacia los an-
además la proliferación de proteínas de tibióticos, siendo una problemática de sa-
choque térmico, haciendo que afecte en el lud pública(15), por tanto como se ha evi-
crecimiento y morfología.(13) denciado anteriormente el CM puede tener
efecto inhibitorio, siendo posiblemente una
Tales efectos también han sido reportados alternativa para suplir la función de los an-
mediante el diagnóstico de alteraciones tibióticos, pero, ¿qué pasa en el momento

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de ambos actuar, CM y antibióticos? Pues la matriz exopolimérica, afectando su


Salmen, SH et al (2018) realizó una inves- capacidad de adherirse a superficies.(21)
tigación con 3 microorganismos: Staphylo- Otra evidencia es la realizada por Mercier,
coccus aureus (ATCC 29213), Staphylo- A et al (2016) quien lo utilizó para probar
coccus epidermidis (ATCC 25923), and la capacidad del CM en los biofilms en un
Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853), reactor de agua y se evidencia que afectó la
pero en comparación con sus respectivos composición de la comunidad planctónica
controles el CM de 900 MHz y 1800 MHz y sésil. Donde especularon que el CM
, no produjo una zona de inhibición signifi- “afectó la solubilidad de las partículas y/o
cativa , habiendo solo una excepción que la hidratación de los microorganismos”,
fue S.aureus en Amoxicilina, los cuales controlando la formación de biopelículas
aumentaron su sensibilidad.(16) De igual en agua natural. (22)
manera, los resultados aun presentan
controversia, ya que otros investigadores • Usos Del Campo Magnético A Nivel
Grossmann, et al. Expusieron a E.coli y Macro
S.aureus a un CM de 0.5T4T durante 30-
120min y no obtuvieron efectos significa- Campo Magnético En Alimentos
tivos sobre el crecimiento y la actividad
bioquímica de los microorganismos, como Como unas de las principales aplicaciones
los antibióticos. (17) Son varios los resul- del CM en alimentos está dirigida a
tados, pero se puede afirmar que el CM es la calidad del producto, tanto para su
un fuerte competente en la medicina, de- inocuidad como para sus características
mostrándose por ejemplo en el caso de los bromatológicas. Entre la inocuidad se ha
animales de laboratorio con huesos frac- señalado a èste efecto como “una especie
turados infectados, que el CM aumentó el de la última tecnología de esterilización
efecto de los antibióticos con la reducción no térmica”,atrayendo un mejor impacto
del edema postraumático y la aceleración debido a su alta tasa de esterilización a
de la curación de la fractura.(18)(19) patógenos y menos impacto en la nutrición
y el sabor de los alimentos , donde su
Por otro lado, una manera adicional de razón ha sido descrita por el fuerte campo
resistencia que se postula son los biofilms magnético que acelera las partículas
o también llamados biopelículas, son cargadas que a su vez golpea a otras
consorcios microbianos encontrados moléculas, llevando a la descomposición
en una matriz de producción propia de y electrólisis de las moléculas para
sustancias poliméricas extracelulares (20). convertirse en aniones y cationes. Estos
Don el CM frente a estas “comunidades” y iones pasan a través de la membrana
como lo reportó Karaguler,T et al (2017) celular y actúan sobre sustancias
en su experimentación frente al biofilm intracelulares para inhibir el crecimiento
Pseudomonas aeruginosa y S. epidermidis de microorganismos. Llevando a una
bacterial, se determinó que si hay efecto, alteración en sus parámetros fisiológicos,
presentándose en un 50% frente a los incluidos el incremento, la transcripción,
controles la disminución de biofilms, por la síntesis y la secreción de factores de
motivo de la influencia del CM de las crecimiento, etc(23)
cargas eléctricas colocadas en la mem-
brana celular, interacción que produce Por ejemplo, el CM ha sido evaluado
un comportamiento celular distorsionado, en jugos vegetales contra E. coli O157:
debido a cambios en la estructura de H7 donde en jugos de pepino, lechuga,

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zanahoria y tomate mostraron resultados provocados en cada exposición como se


significantes de inhibición con respecto al puede ver en la figura 2. Donde también
control a una intensidad de 8T, aplicado se comprobó que sus características orga-
3 veces. Por ejemplo en pepino hubo nolépticas no fueron alteradas, siendo un
disminución en crecimiento de 1.36 método seguro para la aplicación en la in-
logs, 1.45 logs y 2.09 logs , de cada dìa dustria alimentaria. (23)
respectivamente, a causa de los efectos

Figura 2. E. coli O157: H7 expuesta a 8T tres veces. Tomada de: (23)

Por otro lado como se ha dicho anterior- por su acción sobre las partículas carga-
mente, a intensidades bajas, el efecto das que están en suspensión.(2)
puede ser opuesto, es decir estimular el
crecimiento y metabolismo de los microor- Campo Magnético Y Biorremediación
ganismos, es aquí donde el CM es apli- Se han llevado a cabo aplicaciones para
cado para mejorar la calidad organolép- el tratamiento de aguas residuales en
tica de un producto, por ejemplo una de sistemas de lodos activados, puesto que
los argumentos que investigadores toman proporciona una mejora en la separación
para el uso de esta tecnología, es que el sólidolíquido durante la sedimentación.
CM logra activar complejos enzimáticos También se evidencia aumento de meta-
que los MOs por si solos no lo hacen, pro- bolitos secundarios en los MOs como son
duciendo metabolitos secundarios que los ácidos grasos insaturados que ayudan
ayudan a mejorar la calidad del producto. a la producción de la actividad deshidro-
Como es el caso de las levaduras, don- genasa y otros compuestos, que a su vez
de se busca modificar bajo normativas a ayuda al aumento en la tasa de elimina-
estos MOs para mejorar la fermentación. ción de la Demanda Química de Oxígeno
Evidenciándose que la acción repetida de (DQO). En un reactor de lodos activados
la exposición magnética acelera los pro- aeróbicos ayuda a fomentar la biomasa en
cesos metabólicos al aplicar TM sobre los màs de un 14%, por otra parte, se ha lo-
microorganismos de interés fermentativo grado también la aclimatación de lodos y
inoculados en el medio, con recirculación la eliminación de DQO bajo el efecto de
del mismo (en sistemas a flujos) o repitien- un campo magnético de hasta 20 mT en
do la dosis en cortos tiempos (en volúme- comparación con un sistema de control y
nes estáticos). Además también se conoce la exposición periódica a una densidad de
que el CM puede estimular positivamente flujo magnético de 40 mT aumentó la nitri-
la turbidez del vino causado posiblemente ficación. (24)

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También se ha estudiado en la biorreme- un consorcio de E. coli, L. adecarboxylata,


diación de diferentes metales, como la S. aureus, P. denitrificans, S. paucimobilis,
presentación del efecto magnetostáticos R. erythropolis a 10mT por24min posee
a diferentes intensidades (2.4 mT, 6 mT, un efecto de inhibición, en Staphylococ-
10 mT, 17.4 mT) donde en tratamiento de cus epidermidis, Staphylococ-cus aureus,
aguas residuales que habían sido con- Serratia marcescens y Escherichia coli a
taminadas por Cr (VI), y en particular en 2.1–5.1 μT por 12h se presenta aumento
Brevibacillus sp. y Bacillus sp. con habi- de la tasa de crecimiento de Staphylococ-
lidades reductoras de Cr, se evidenció en cus epidermidis, Staphylococcus au-reus
todos los casos, un aumento en la canti- y Escherichia coli , reducción del creci-
dad de microorganismos en un 3265%, miento de Serratia marcescens(24)
donde la reducción máxima de Cr (VI) fue
a 6 mT.(25) También han sido aplicados para mejo-
rar la calidad de lodos activados, para el
Por parte de la exposición en suelos, se tratamiento de aguas residuales(29), los
evidenció que a una exposición de 0.15- cuales poseen microorganismos como
0.35 T tuvo una tasa de respiración más bacterias, hongos, protozoos y algas.
alta en comparación con el control y tam- Siendo las bacterias las más importantes
bién se ha demostrado la biorremediación en el proceso del lodo activado, puesto
de metales en suelos contaminados a cau- que se encargan de la descomposición
sa de proliferación de MOs biorremediado- de la materia orgánica del efluente y con
res, esto debido a que el CM aumenta la sus diferentes actividades bioquímicas
tasa de biodegradación, como también se permite metabolizar una gran parte de los
presentó en Microbacterium maritypicum, compuestos orgánicos que están presen-
donde a 200mT se logró duplicar la biode- tes en las aguas residuales.(30) y gracias
gradación del benzo ( a ) pireno.(26) Ade- al CM se ha evidenciado el aumento de
más, la unión de diferentes tecnologías las poblaciones deseadas, como bacte-
con el CM han sido influyentes, como lo rias y hongos, hasta un 50% de aumento
son los biofiltros para degradar el tricloroe- en comparación con los controles a una in-
tileno, siendo expuestos a campos mag- tensidad de 10mT en 60min, en su mayo-
netostáticos de 30-60 mT registraron más ría géneros como Bacillus spp. y Candida
eliminación (+ 2.4%) que el control, debido spp, siendo grandes degradantes (31)
al aumento de Acinetobacter , Chryseo-
bacterium y Acidovorax en los casos ex- Campo Magnético Y Biorreactores
puestos.(27) Actualmente las industrias buscan cada
vez más mejorar cada uno de sus pro-
Así que hasta el momento han sido un cesos, como es la suspensión de células
gran número de MOs en los cuales se en sus biorreactores, ya que consigo trae
han establecido sus respectivos efectos, ventajas como incluir la capacidad de tra-
entre los mencionados anteriormente bajar con una alta concentración de bio-
también se pueden destacar: Chlorella masa(32), usar operación de flujo conti-
vulgaris, una microalga con efecto esti- nuo(33) y obtener un producto de alto ren-
mulante 5mT-31mT y un efecto inhibitorio dimiento (34). El problema fue detectado
de 45mT-200mT(28), Geobacter spp. Con primeramente, el cual esa el desarrollo de
estimulaciòn a 0,005mT, Salmonella typhi- grandes burbujas que lograban desapro-
murium a 14,6mT sin efecto, un estudio en vechar el sustrato dispuesto y muy baja

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transferencia de masa, donde con ayuda como estimulante. El efecto negativo fue
del CM se lograba evitar y mejorar la ac- comprobado a diferentes densidades altas
ción de producción de metabolitos de los del magnetismo medidas en mT como lo
microorganismos.(35). Lo cual ha sido lo- afirma Hernandez et al (5) donde varios
grado por ejemplo con Rhizopus oryzae investigadores han expuesto a tal microor-
para la producción de biodisel donde au- ganismos a intensidades de 10, 17, 40,
mentó una recuperación de este producto 80, 120 y 160mT donde en cada uno se
de un 18.7% a 31.8% con campo magné- vio reflejado la disminución de células via-
tico(36) y también ha sido logrado para la bles, pero según evidencias todo depen-
producción de etanol a partir de Saccharo- de directamente de las variables físicas
mices cerevisiae.(37) y biológicas, como el tiempo, puesto que
E.coli posee la capacidad de adaptarse a
Por otra parte, también se ha logrado fa- los cambios provocados por el CM en dife-
cilitar la recuperación de biomasa a partir rentes intensidades. (5)
de microalgas con exposición de CM ex-
terno del biorreactor, especialmente para Por otro lado Nawrotek et al. (8) comprue-
Chlorella vulgaris , utilizando también na- ba que E.coli incrementa su crecimiento
nopartículas en el medio, donde, en prime- en intensidades extremadamente bajas.
ra medida se extraerían con ayuda de las (24) Como se muestra en la tabla 2, el
partículas las microalgas y posteriormente efecto dependen de la intensidad y tiempo
se desprenderían de ellas, para obtener fi- del CM, donde otros investigadores tam-
nalmente el producto aislado. (38) bién ponen en juego esto, pues comprobó
un incremento de crecimiento de un 100%
- Efecto Del Cm Sobre Diferentes Mi- siendo comparado con el control sin expo-
croorganismos sición a intensidades de 0,1T en 6,5 horas.
(5)
Escherichia Coli
En lo referente al campo magnético esta
enterobacteria posee efecto en su creci-
miento tanto inhibitorio, no observable y

Tabla 2. Efectos del CM según la intensidad y tiempo de exposición en E.coli. Tomada

Saccharomyces cerevisieae timulante en su crecimiento como lo afir-


ma Anaya et al (2) puesto que comprobó
Éste microorganismo más conocido como que a intensidades de 3mT se estimula el
levadura gran influencia para la industria crecimiento, como se revela en la figura 3
también ha sido sometido a diferentes in- Obtenida de sus resultados. (2).
tensidades de CM, donde en intensidades
extremadamentes bajas posee efecto es-

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Figura 3. Estimulación de crecimiento de S.cerevisieae en intensidad de 3mT por 2


horas: a y b controles, c y de: tratadas por magnetismo. Tomada de(2)

Por lo contrario, según lo establecido en el microalgas


artículo “Influencia de campos magnéticos Con lo referente a las microalgas, Chlo-
en el crecimiento de E. coli y S. cerevisiae rella vulgaris ha sido de gran importancia
y la capacidad de solubilizar fósforo en para biotecnólogos, pero a la necesidad
Pseudomonas sp y Bacillus sp de uso in- de obtener gran cantidad de éste a un ni-
dustrial” Hernandez et al(5) éste microor- vel industrial, han buscado nuevas alter-
ganismo presenta inhibición en intensida- nativas para obtenerlo, entre estas, está el
des entre 9000 y 14000 mT. Éste también campo magnético, como lo afirma Wang
a la hora de someterlo a una intensidad et al.(2006) el cual comprueba que para
extremadamente baja de 0,025mT se cada especie de Chlorella hay un rango
presencia el aumento de biomasa. Como de estimulación y de inhibición como se
efectos no observables se han obtenido muestra en la tabla 3.(28)
con intensidades de 16T durante 8 horas.
(5)

Tabla 3. Rangos de inhibición y estimulación del CM en Chlorella. Tomada de:(28)


Estimular Inhibir
Mínimo 5 mT 45mT
Máximo 32 mT 200mT

En el artículo “Cultivo de Chlorella vulga- diferentes medios de cultivo, donde obtu-


ris sobre residual de soja con la aplicación vieron que el medio de cultivo de soja fue
de un campo magnético”(28) sometieron el mejor para obtener en menos cantidad
a tal microalga a una intensidad de 0,3T de tiempo mayor cantidad celular, dónde
obteniendo gran estimulación en su cre- el conteo fue realizado por medio de una
cimiento comparado con el control, tales cámara Neubauer mejorada con ayuda de
efectos también fueron comparados con un microscopio óptico de campo claro.(28)

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Figura 4. Resultados del CM 0.03Mt en C.vulgaris, con respecto al número de células.


CMP: campo magnético permanente CM: campo magnético por 1h. Tomada de:(28)

A parte de estimular el crecimiento también tos y proteínas, evaluándose en un campo


estimula la cantidad de biomasa como se magnético permanente, un CM expuesto a
puede ver en la gráfica 2 donde se au- una hora y uno de control.(8)
menta la cantidad de lípidos, carbohidra-

Figura 5. Resultados de la cantidad de lípidos, carbohidratos y proteínas después de


la exposición magnética en C.vulgaris. Tomada de(28)

Así que el CM magnético en microalgas Helicobacter pylori


como C.vulgaris puede estimular su cre- En H.pylori los estudios cada vez aumen-
cimiento, la cantidad de biomasa pero po- tan más, pues su comienzo con el CM se
see la capacidad de disminuir carotenos, sitúa para el control del efecto de gastritis
es decir la clorofila, pero éste último su- crónica, donde dónde tal infección ha sido
cede en fase exponencial puesto que en tratada por magnetismo como lo afirma
fase estacionaria si se logra un determina- Domínguez et al (2012) revelando gran-
do aumento.(28) des mejoras en los pacientes.

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Posteriormente, se sabe que H. pylori pue- La mayoría de investigaciones con refe-


de presentar 2 tipos de formas resistentes, rente a H.pylori ha sido sobre sus biofilms,
como es el caso de su estado coccoide como se pudo observar anteriormente y
(viable pero no cultivable), caracterizándo- eso es a causa de reconocer que el CM
se por producir un peptidoglucano similar da como resultado diferentes efectos,(43)
a los de la esporulación de Bacillus sphae- puesto que en general, en los organismos
ricus (39) y poder escapar detección por el procariotas la exposición causa cambios
sistema inmune(40) y otra de sus formas fenotípicos y transcripcionales en las cé-
de supervivencia es su capacidad de for- lulas libres y afectando la adherencia de
mar biofilms, donde gracias a la literatura las mismas en biofilms(44)(45)(46) Como
e investigadores ya se reportó efectos del se puede observar en la figura 5. El CM
CM para este caso, donde en el caso de influye especialmente en la morfología de
biofilms se presentó una disminución de H.pylori, donde se retuvo la forma en espi-
coccoides y muerte de morfología en es- ral en comparación con la cocoide, a causa
piral que al morir transmiten un compues- de la falta de expresión del gen amiA, in-
to toxico para las demás viables, logran- volucrado en la transición de la morfología
do una disminución de biomasa.(41)Otra espiral a cocoide H. pylori, teniendo menor
razón por la cual el CM afecta el estado cantidad de morfologias cocoides, puesto
coco, es por la alteración de la transcrip- que los esperiales son sensibles ala expo-
ción de genes, pues se ha visto que a ex- sición y facilitan el daño en su membrana
posición del CM el gen amiA, influyente en y permiten la penetración yoduro de pro-
el cambio de estado de espiral a coco, se pidio fluorescente que da como resultado
ha visto afectado. (42) Donde se dice que células espirales muertas rojas como se
ambas morfologías pueden habitar en las pueden observar en la Figura 5. Por tanto
células humanas excepto en células epi- también en esta exposición se evidencia
teliales gástricas ya que: “La forma espiral una disminución en la biomasa total como
tiende a inducir proteínas proapoptóticas también en la proteína encargada de la
más altas, mientras que la segunda forma formación de biofilms(45) en consecuen-
tiene la inclinación de inducir proteínas an- cia de la afectación en la biocomunicación
tiapoptóticas más altas que iluminaron el microbiana(47) y en la densidad celular
papel de las formas coccoides en la carci- bacteriana facilitando la comunicación cé-
nogénesis gástrica” (42) lulacélula dependente del CM (48) .

Figura 5 . Biofilms de H.pylori expuestos a CM. A. biofilms en formación. B. Biofilm


maduro. Tomada de:(49)

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Ya saliendo de ensayos de laboratorio, ac- Chem Inf Model. 2013;53(9):1689–


tualmente se evidencia el uso de magne- 99.
tismo a nivel de tratamientos con ayuda de 2. Anaya M, Barbará E, Padrón J, Bo-
micropartículas magnéticas de hundimien- rrego SF, Valdés O, Molina A. Influen-
to específicas para el estómago (SMMP) cia del campo magnético sobre el
(50) con el fin de proporcionar un mejor crecimiento de microorganismos pa-
tratamiento para las infecciones por H. tógenos ambientales aislados en el
pylori , los cuales se suministran con fár- Archivo Nacional de la República de
macos como amoxicilina, mostrando una Cuba. Biomedica. 2015;35(3):325–
erradicación significativamente mayor de 36.
H. pylori en comparación con el fármaco 3. Brkovic S, Postic S, Ilic D. Influence
libre. Es una especie de magnetoterapia of the magnetic field on microorga-
pues también se logra usar con un magne- nisms in the oral cavity. J Appl Oral
to externo que ayuda a prologar el tiempo Sci. 2015;23(2):179–86.
de estas partículas en el estómago.(51) 4. Bello Gutiérrez J. Ciencia bromato-
Igualmente existe otras partículas como lógica Bello. 1st ed. 2000. 459 p.
las poliméricas magnéticas, logrando éxi- 5. HERNANDEZ JIMENEZ, Sandra
to para la terapia antimicrobiana gástrica. Johana; DOMINGUEZ TORO EL,
(52) GONZAGA GUTIERREZ L. Influen-
cia de campos magnétivos en el cre-
Conclusión: cimiento de E. coli y S. cerevisiae
El campo magnético posee grandes efec- y la capacidad de solubilizar fósfo-
tos como se pudo evidenciar anteriormen- ro en Pseudomonas sp y Bacillus
te, el cual puede ser llevado a la industria sp de uso industrial. Rev Ciencias.
alimentaria como inhibidor de patógenos, 2015;19:109–21.
en el campo de la biotecnología para bio- 6. Zapata JE, Moreno G, Márquez EJ.
rremediación y aumento de producto y EFECTOS DE LOS CAMPOS MAG-
como también en el área de la medicina NÉTICOS SOBRE EL CRECIMIEN-
para reducir enfermedades o infecciones TO DE Saccharomyces cerevisiae.
patógenas. El efecto del campo magnéti- 2002.
co en los microorganismos aun es un pi- 7. EspinozaBretado, R.; Návar J. BIO-
lar que poco se ha tratado, pero ya hay MASS PRODUCTION, DIVERSI-
suficientes testimonios por parte de in- TY AND ECOLOGY OF THE TREE
vestigadores para confirmar que altera el SPECIES IN A PRODUCTIVITY
crecimiento microbiano, desde el fenotipo GRADIENT IN THE TAMAULIPAN
hasta en su nivel transcripcional, pero aún THORNSCRUB OF NORTHEAS-
se necesita de gran cantidad de investiga- TERN OF MEXICO SUMMARY. Vol.
ciones, puesto que el objetivo es recono- 11, Revista Chapingo Serie Ciencias
cer la intensidad del CM adecuado para la Forestales y del Ambiente. 2005.
inhibición o proliferación en los diferentes 8. Nawrotek P, Fijałkowski K, Struk M,
microorganismos. Kordas M, Rakoczy R. Effects of 50
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106
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

ARTÍCULO DE REVISIÓN

Microalgas y Cianobacterias: ¿qué son?


¿dónde encontrarles? ¿cómo cultivarles?
Salgado Rivera Juanita1, Barona Duque Kerynd1, Guzmán Jojoa David M1,
Álvarez Aldana Adalucy.2

Resumen Abstract:

Introducción: Las microalgas y cianobac- IMicroalgae and cyanobacteria have been


terias han estado presentes en la tierra present on earth for millions of years. Algae
desde hace millones de años. Se conoce is known as a polyphyletic group consis-
como algas a un grupo polifilético confor- ting of organisms belonging to the bacteria
mado por organismos pertenecientes a los and eukaryotic do-mains. Methodology:
dominios bacteria y eucariota. Metodolo- In the search for information, they used
gía: En la busqueda de información utili- four databases, a 5-year filter and different
zaron cuatro bases de datos, un filtro de 5 keywords. Conclusions: The potential
años y diferentes palabras clave. Conclu- presented by microalgae is immense, their
siones: El potencial que presentan las mi- adaptive capacity and presence in all en-
croalgas es inmenso, su capacidad adap- vironments makes them a microorganism
tativa y presencia en todos los ambientes of interest, there is still a lot to know and
les convierte en un microorganismo de much more in the region.
interés, aún hay muchísimo por conocer y
mucho más en la región. Keywords:
Microalgae, Crops, Taxonomy, Importan-
Palabras clave: ce, Potential
Microalgae, Cultivos, Taxonomía, Impor-
tancia, Potencial.

1 Estudiantes Programa de Microbiología. Universidad Libre Pereira. Semillero Microorganismos de


importancia en salud humana y animal “OBVIO MICROBIO”.
2 Profesora investigadora. Programa de Microbiología. Grupo de investigación MICROBIOTEC.
Universidad Libre Seccional Pereira. Líder Semillero “OBVIO MICROBIO”

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UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

Introducción eralmente acuáticos, pertenecientes a los


dominios bacteria y eucariota, a su vez in-
Las microalgas y cianobacterias han es- tegran diferentes reinos (2) (Figura 1).
tado presentes en la tierra desde hace mil-
lones de años, estas hicieron parte de los Para llevar a cabo la fotosíntesis estos or-
primeros organismos vivientes en el pla- ganismos tienen un compuesto llamado
neta y se les atribuye en primera instancia clorofila, que es el encargado de producir
la fotosíntesis, cuya aparición transformó su color característico además de hacer
la dinámica de evolución del planeta (1). parte fundamental en la captación de fo-
Se conoce como algas a un grupo polif- tones de luz para su uso durante este pro-
ilético conformado por organismos, gen- ceso (3)(4).

Figura 1. Panorama polifilético de microalgas. Tomado de (2)

Estos organismos son conocidos por te- servido para lograr una clasificación de es-
ner una alta eficiencia fotosintética y son tas (Tabla 1) dado que esta es quien otor-
las productoras primarias de más rápido ga el color principal al organismo y es el
crecimiento (5). Además de su importan- primer factor de clasificación morfológica
cia durante el proceso de nutrición de las (6)(4)(7).
algas, la clorofila es un elemento que ha

108
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

Tabla 1. Clasificación de microalgas según su clorofila. Tomado de (7)

Clorofila a y b Clorofila a y ficobilinas Clorofila a y c


Chlorophytes Rhodophytes Cryptophytes
Chlorarachinophytes Glaucophytes Haptophytes
Euglenophytes Dinoflagellates
Heterokont algae:
Bacilariophytes
Chrysophytes
Dictyochophytes
Eustigmatophytes
Pelagophytes
Phaeophytes
Phaeothniophytes
Raphidophytes
Synurophytes
Xanthophytes

El avance en las tecnologías de identifica- al planteamiento de una nueva clasifica-


ción molecular y muchos estudios en este ción del dominio eucariota (8). En la que
campo han resultado en la construcción se prescinde del uso de reinos y los or-
diferentes tipos de mapas filogenéticos en ganismos son reclasificados en supergru-
busca de aclarar el panorama evolutivo y pos (9), en los que las microalgas han sido
la diversidad de los phylum descritos que ubicadas particularmente en tres de estos,
deriva en lo polifilético de este grupo. Los Excavata, Chromophytes, Rhizaria (Figura
alineamientos de las secuencias conse- (2) (10)
guidas a través de los años han llevado

Figura 2. Clasificación taxonómica de microalgas. Extraído de: (10)

109
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Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

Desde hace algún tiempo las microalgas más la naturaleza de estos organismos,
han llamado la atención de ciencia e in- su clasificación taxonómica, su cultivo y
dustria gracias a que se les ha descubierto los diferentes usos que se les puede dar
como una fuente importante de biomasa desde una perspectiva biotecnológica.
y algunos otros compuestos de importan-
cia (11), además de la captación, fijación Metodología
y transformación del CO2 del planeta, o En la búsqueda de información se utiliza-
también llamado biorremediación del aire ron cuatro bases de datos, Sciencedirect,
(12). Entre las sustancias producidas por Scielo, Pubmed y google académico, jun-
estos organismos y que son de interés que to con las palabras clave Microalgae, Mi-
se han encontrado diferentes aceites para croalgae culture, Microalgae taxonomy,
producción de biocombustibles o suple- Microalgas Colombia y Microalgas eje ca-
mentos alimenticios y una alta concentra- fetero. Estas se filtraron por el factor años,
ción de proteínas asimilables por animales y se restringió la búsqueda a los últimos 5
en general (13). años.

En este orden de ideas, se plantea esta Resultados


revisión con el fin de comprender un poco

Tabla 2. Resultado de la búsqueda bibliográfica. Fuente propia.

Palabra clave Sciencedirect Scielo Pubmed Google académico

Microalgae 14.404 175 5.386 42.100

Microalgae Culture 9.154 69 1.070 27.500

Microalgae Taxonomy 2.167 4 288 16.800

Microalgas Colombia 32 9 1 1.950

Microalgas eje cafetero 0 0 0 28

Se han encontrado microalgas en todo Han sido reportadas en todas las condicio-
tipo de ambientes, en los acuaticos están nes de pH, concentración salina o tempe-
presentes en vida libre, ocasionalmente li- ratura (13). Ferrero et al (18), logró aislar
gados con otros organismos como corales diferentes especies a partir de fuentes de
y esponjas (14-16), en los terrestres están aguas residuales, lagos y ríos; después de
en simbiosis con hongos e incluso hay haberles incubado en agua tomada del lu-
registro de su presencia afectando monu- gar de origen, hicieron un proceso de ais-
mentos en zonas arqueológicas (17). lamiento usando esta misma agua estéril,
con una fuente de carbono y agar.

110
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

El cultivo general por excelencia se da sis (19). Las complicaciones presentadas


en caldos, con el uso de fotobioreacto- por este tipo de cultivos han incentivado
res (PBR, por sus siglas en inglés) y un la exploración de nuevas técnicas de con-
constante suministro de CO2, esto porque servación como algunas de inmovilización
las condiciones de crecimiento requieren en agar (18,20) y en alginato de calcio
la fijación de este gas y la intervención de (21,22).
fotones para la activación de la fotosínte-

Figura 3. Modelo propuesto por Chat et al. Extraído y editado de: (25)

Estas técnicas deben cumplir con los re- en procesos de biorremediación de aguas
querimientos de nutrición del organismos, residuales utilizándoles en plantas tipo pe-
para ellos muchos recurren al uso de me- tar como una parte más del proceso de sa-
dios recomendados en literatura, que po- neamiento de estas aguas (27,28).
seen una fuente de carbono disponible, y
otros simplemente con utilizan agua toma- Los estanques abiertos son económicos y
da del origen del alga esterilizada a la que su escalamiento se facilita, mientras que
adicionan bicarbonato como una fuente de los sistemas cerrados son notoriamente
carbono (23) (24). Chat et al por su parte, costosos, lo que limita su uso (24). Como
proponen un nuevo método combinando resultado, al rededor del 90% de la actual
el sistema de cultivo bacteriano tradicio- producción de biomasa industrial a nivel
nal, con el de flujo continuo de aire (25). mundial es obtenida en sistemas abiertos
(29). Por motivos del control de variables
Ellas pueden también ser masivamente ambientales y la experimentación de fuen-
cultivadas en PBR abiertos (estanques) o tes, intensidades, colores y tiempos de los
cerrados. Dependiendo de las aplicacio- fotones que excitan la fotosíntesis para
nes, el crecimiento puede ser foto incenti- investigación se prefieren los sistemas ce-
vado con luz natural o artificial (26). Por la rrados sobre los abiertos (30). Muchos de
variabilidad que tienen las algas muchas estos son programados para generar ci-
especies son estudiadas para ser usadas clos determinados de luz y oscuridad (31),

111
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Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

además también facilitan el uso de luces proceso difícil y de mucho gasto energé-
de diferentes colores para mirar su efecto tico en el cultivo tradicional de microalgas
sobre el cultivo (32). suspendidas (33). Es por esto que escoger
una técnica de cosecha es crucial, esta
Una limitante en los estanques abiertos es debe cumplir con parámetros que sirvan al
la cosecha, porque se ha encontrado que fin que tendrá la biomasa (34), las técnicas
los tamaños pequeños (micrómetros) y la más utilizadas para la cosecha se presen-
baja densidad (menor al 1%) de microal- tan en la Figura 4.
gas en el cultivo hacen de la cosecha un

Figura 4 Técnicas para cosecha de biomasa microalgar. Extraído de: (34)

A pesar de la variedad de métodos existen- porque se les han encontrado diversos


tes el costo de cosecha continúa siendo un usos con alto potencial de explotación bio-
cuello de botella para la producción indus- tecnológica. Estas aplicaciones están en
trial de microalgas, este es aproximada- salud y nutrición humana y animal, con la
mente un 2030% del costo total de produc- posible obtención de biomoléculas de alta
ción(35). Por esta razón la búsqueda de importancia como proteínas y lípidos, ade-
un método de cosecha sencillo y rentable más de algunas alternativas en tratamien-
es una prioridad entre las investigaciones to de enfermedades como cáncer (41)(42)
de microalgas. Estas investigaciones han (41).
encontrado la respuesta a este problema
en dos caminos, idear nuevos métodos de Es también claro que cumplen un papel
cosecha (36–38)(39), o proponiendo dife- muy importante en los procesos de bio-
rentes técnicas de cultivo (33). rremediación de aguas, suelo y aire (43)
(44,45), esto no solo asimilando el mate-
Estos organismos son ampliamente explo- rial orgánico presente, sino también dismi-
rados desde hace algunas décadas (40) nuyendo la presencia de metales pesados

112
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

que puedan contaminar aguas y gases de puedan traer a la comunidad. Sin duda al-
efecto invernadero que tienen alta presen- guna vale la pena saber qué hay y poder
cia en el aire y son altamente nocivos para empezar a generar formas de explotar sus
la salud humana y animal. usos a favor de todos.

La producción de biocombustibles de alto Referencias Bibliográficas


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la minería como Torres (48), en la caracte- 2. Krasowska A, Jablonski S, Biniarz
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uso en la industria (50,51), o simplemente croalgae – Biodiesel Potential Pro-
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trolera como el Meta, en la región cafetera 3. Delgadillo Rodríguez IP, Montene-
los avances han sido limitados y no se han gro Ruíz LC, Pinilla Agudelo GA,
encargado de caracterizar o explotar las Melgarejo LM. Medición de la fluo-
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sencia en todos los ambientes, especial- Barrantes M, Meneses-Montero K,
mente acuáticos, las hace un microorga- Núñez-Montero K. IDENTIFICA-
nismo de interés por su facilidad de culti- CIÓN DE UNA COLECCIÓN DE MI-
vo. Si bien aún hay mucho que explorar en CROALGAS AISLADAS DE COSTA
cuanto a sus métodos de cultivo y cose- RICA MEDIANTE SECUENCIA-
cha, son microorganismos cuya investiga- CIÓN DE ADNr 18S Identification of
ción se facilita, y sobre los que todavía hay a Microalgae Collection Isolated from
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UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

ARTÍCULO DE REVISIÓN

El agua como ruta de transmisión de Helicobacter Pylori.


Ceballos Toro Valeria, Quintero María del Mar1, Álvarez Aldana Adalucy2
Siller López Fernando3

Resumen embargo, estas técnicas deben mejorarse


Helicobacter pylori es un bacilo móvil para poder detectar la viabilidad de las cé-
Gram negativo cuya morfología es espiral. lulas para que sean métodos 100% efec-
Se considera catalasa, oxidasa y ureasa tivos, lo cual beneficiará la salud pública.
positiva. Es una bacteria de distribución
mundial cuya prevalencia varía de acuer- Palabras clave: Helicobacter pylori, agua,
do a las características epidemiológicas detección, riesgo sanitario.
de la población. Las rutas de transmisión
descritas son: oral-oral, gastro-oral y fecal- Abstract
oral; aunque también se ha descrito su Helicobacter pylori is a Gram negative mo-
transmisión a través de alimentos, anima- bile bacillus. Its morphology is spiral and is
les y agua. Para la realización del siguien- considered catalase, oxidase and urease
te artículo de revisión se ejecutó una bús- positive. It is a bacterium of worldwide dis-
queda en las bases de datos PubMed y tribution whose prevalence varies accor-
Science Direct utilizando los términos He- ding to geographical distribution, ethnicity,
licobacter pylori, water, detection methods, race, socioeconomic factors, hygiene and
VBNC y cocoid form. Obteniendo como re- sanitation. There are several distribution
sultado que existe una alta prevalencia de routes but the best known are oral-oral,
esta bacteria en países en vía de desarro- gastro-oral and fecal-oral; it has also been
llo que cuentan con condiciones deficien- described that the bacteria can be trans-
tes de saneamiento, por lo que el agua se mitted through food, animals and water.
convierte en uno de los canales por el cual For the realization of the following review
viaja la bacteria, se mantiene con vida, lle- article, a search was made in the databa-
ga al estómago del ser humano y lo colo- ses PubMed, PubMed Central and Science
niza. H. pylori sobrevive en agua gracias a Direct using the terms Helicobacter pylori,
varios mecanismos como es su cambio a water, detection methods, VBNC y cocoid
forma cocoide (VBNC), su capacidad para form. Obtaining as a result that there is a
formar biofilms y de asociarse con amebas high prevalence of this bacterium in deve-
de vida libre. Debido a su presencia en for- loping countries that have poor sanitation
ma viable pero no cultivable es difícil de conditions, so that water becomes one of
detectar en las muestras de agua, por lo the channels through which the bacteria
que es necesaria la utilización de métodos travels, stays alive, arrives to the stomach
moleculares como PCR, FISH y LAMP, sin of the human being and colonizes it. H.

1 Programa de Microbiología. Universidad Libre Pereira. Semillero Microorganismos de importancia


en salud humana y animal “OBVIO MICROBIO”
2 Profesora investigadora. Programa de Microbiología. Grupo de investigación MICROBIOTEC.
Universidad Libre Seccional Pereira. Líder Semillero “OBVIO MICROBIO”
3 Programa de Microbiología. Universidad Libre Pereira. Líder Semillero Microbiología Molecular
“MICROMOL” fernando.siller@unilibre.edu.co

118
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

pylori survives in water thanks to several ha descrito que la bacteria puede ser
mechanisms such as its change to coccoid transmitida a través de alimentos, animales
form (VBNC), its ability to form biofilms and y agua (6). Hace algunos años pocas
to associate with free-living amoebas. Due investigaciones implicaban el agua como
to its presence in a viable but not cultivable vehículo de transmisión de H. pylori, pero
way, it is difficult to detect in water sam- hoy en día hay suficiente evidencia de la
ples, so it is necessary to use molecular presencia de esta bacteria en el agua a
methods such as PCR, FISH and LAMP, nivel mundial, por lo que se puede implicar
however, these techniques must be impro- al agua tratada y no tratada como posible
ved in order to detect the viability of the vehículo de transmisión(7). La hipótesis
cells to be 100% effective methods, which de que el agua es una vía de transmisión
will benefit public health. de H. pylori está respaldada por dos tipos
de estudios; los epidemiológicos que han
Key words: Helicobacter pylori, water, de- demostrado una mayor prevalencia de la
tection, health risk infección en países en vía de desarrollo
que padecen problemas relacionados
Introducción con la distribución sanitaria del agua a la
Helicobacter pylori es un bacilo móvil Gram población y los estudios que han detectado
negativo, microaerófilo, su morfología o aislado H. pylori de diversas fuentes de
típica es en espiral de aproximadamente agua (8, 9). Por este motivo, son varios
3.5 x 0.5 µm. Bioquímicamente es los estudios que se han centrado en
ureasa(1), oxidasa y catalasa positivo; se determinar el potencial del agua como
encuentra colonizando el estómago de fuente de transmisión de H. pylori y su
aproximadamente la mitad de la población capacidad de producir la infección clínica
mundial y es la causa de gastritis, úlceras (10).
pépticas, cáncer gástrico y linfoma de
células B2. H. pylori fue la primera especie La presente revisión tiene como objetivo
bacteriana probada para causar cáncer compilar la información actual con relación
y está clasificado como un carcinógeno a la presencia de Helicobacter pylori en
del grupo I por el Agencia Internacional aguas; las metodologías de detección y
para la Investigación sobre el Cáncer su cambio morfológico de forma espiral
(IARC)(3). Es una bacteria de distribución a forma cocoide en el agua así como
mundial cuya prevalencia varía de su patogenicidad al encontrarse en este
acuerdo a la distribución geográfica, estado.
etnia, raza, factores socioeconómicos, de
higiene y saneamiento. La infección puede Metodología
presentarse a cualquier edad pero se Se realizó una búsqueda amplia y
presenta con mayor frecuencia en edades sistemática de la literatura en las bases
tempranas, donde puede permanecer de datos PubMed y Science Direct
asintomática o hacerse sintomática en utilizando los términos Helicobacter
la adultez; no produce inmunidad de pylori, water, detection methods, VBNC
memoria y suele darse la reinfección(4, 5). y cocoid form, para lo cual se empleó el
conector booleano AND. La búsqueda
Las rutas de transmisión de H. pylori arrojó como resultado 797 y 12.614
aún son poco conocidas pero las más artículos respectivamente, de los cuales
aceptadas son las vías oral-oral, gastro- 136 y 3.360 correspondían a trabajos
oral y fecal-oral; aunque también se no mayores a 5 años de publicación, el

119
UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

cual fue un criterio de aceptación, ya que la prevalencia de H. pylori a menudo es


se restringió la bibliografía a artículos superior al 50%, siendo estos últimos
originales publicados en los últimos 5 países en desarrollo que aun cuentan con
años y algunos artículos de revisión. Se servicios de saneamiento deficientes (15).
seleccionaron artículos sobre los métodos
de detección de H. pylori en agua, sobre el En este punto aparece otro posible factor
cambio de forma espiral a forma cocoide detrás de las diferencias geográficas y
(viable no cultivable) que sufre la bacteria económicas en la incidencia de la infección
en el agua y en general sobre evidencias y son las fuentes mejoradas que permiten
del agua como mecanismo de transmisión el acceso al agua de estas poblaciones, las
de la bacteria H. pylori. cuales consisten en métodos artesanales
que aplican las personas que no tienen
Resultados y Discusión suministro continuo de agua, como lo son
La primera asociación entre el agua y la el agua entubada en el hogar, pozos de
infección por H. pylori fue sugerida en sondeo, manantiales de arenas de cavado
Perú en 1991 cuando se observó que los bien protegidos, agua de lluvia y fuentes
niños peruanos que consumían agua no de agua públicas o externas, las cuales
tratada tenían mayor prevalencia de H. pueden llegar a ser fuentes directas de H.
pylori (9, 11) y aun hoy en día Perú tiene pylori como arroyos y aguas superficiales
una prevalencia estimada del 45,5%; contaminadas por contaminación fecal,
encontrándose en agua potable la mayor industrial y doméstica (16, 17, 18).
cantidad de la bacteria, equivalente a 1.6
x 106 copias del genoma/L. Un estudio H. pylori ha sido detectada en varias
publicado en este año arrojó que el agua fuentes de agua, incluyendo lagos, ríos,
potable en Lima está contaminada con agua del grifo, agua de pozo, aguas de
H. pylori el 20.3% del tiempo, resultando riego, agua de mar, agua mineral, agua
positivas 49 de 241 muestras (13). de unidades dentales, agua potable y
sus sistemas de distribución como lo han
Diferentes estudios han mostrado la demostrado diferentes estudios realizados
prevalencia de esta bacteria en países en Colombia, Perú, Estados Unidos,
en vía de desarrollo, esto relacionado con España, Costa Rica, Irán, Pakistán, entre
las circunstancias socioeconómicas y la otros (19).
calidad de vida llevan a la falta de acceso a
agua potable de calidad, a un saneamiento Aunque algunos estudios han encontrado
adecuado, a medidas higiénicas estrictas que el agua clorada carece de la bacteria,
y a una buena atención en salud, se dice que arrojaron esta conclusión
permitiendo estas situaciones que el agua debido a que se basaron en la falta de
contaminada sea uno de los canales por recuperación utilizando métodos de
el cual viaja la bacteria, se mantiene con cultivo estándar, ya que muchos otros
vida, llega al estómago del ser humano y autores han demostrado que H. pylori es
lo coloniza (6, 13, 14). capaz de resistir y tolerar las prácticas de
desinfección normalmente empleadas en
En las poblaciones del Norte de Europa y el tratamiento del agua potable(20, 21). Se
América del Norte, alrededor de un tercio dice que el cambio de morfología permite
de los adultos se encuentran infectados a las células evadir el tratamiento con
por la bacteria, mientras que en Europa cloro del agua utilizada para el consumo
del Sur y Este, América del Sur y Asia, humano (22).

120
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

En un estudio realizado en España se de los cuerpos de agua en función de


expuso el patógeno a una concentración los niveles de bacterias indicadoras
de 0.96 mg/L de cloro libre durante varios fecales cuando el agua tratada no está
tiempos control, observando que H. pylori necesariamente exenta de H. pylori (24,
perdía su capacidad de crecimiento sobre 25).
medios de cultivo pasados 5 minutos.
Sin embargo, mediante las técnicas Aparte de ser resistente al cloro, H. pylori
moleculares FISH y PCR observó que un es resistente al ozono (19) y a la radiación
porcentaje elevado de las células pasaban UV como tratamiento terciario, hecho
a forma viable no cultivable, demostrando que pudo deberse al alto caudal de agua
así que la bacteria puede sobrevivir a tratado en el estudio, el cual no permitió
concentraciones elevadas de cloro libre una penetración total de la radiación
y que los tratamientos de desinfección en ultravioleta durante un tiempo suficiente,
aguas potables podrían ser ineficientes o bien que el sistema de radiación UV no
para la eliminación de éste patógeno de se encontraba en buenas condiciones de
las redes de distribución (23). mantenimiento (23).

Aunque varios estudios epidemiológicos Se han descrito algunos mecanismos


proponen el agua como un intermediario que le permiten sobrevivir a Helicobacter
en la transmisión fecal-oral de H. pylori pylori en un ambiente adverso para ella
(20); se ha encontrado que la detección como es el agua. Entre ellos encontramos
de esta bacteria en muestras de agua no la conversión a su forma cocoide (forma
siempre se correlaciona con la presencia viable no cultivable) (Fig 1), su capacidad
de bacterias fecales indicadoras (E. coli o para adherirse a diferentes materiales y
Enterococcus). Es más, se ha demostrado agregarse junto con otras bacterias para
que H. pylori es más resistente a la cloración forma estructuras complejas en tuberías
que E. coli. Lo cual puede constituir un u otras superficies en contacto con agua
grave problema de salud pública, ya que (biopelículas) y también para sobrevivir
a menudo se intenta predecir la seguridad dentro de amebas de vida libre (FLA).

Figura 1. Cambios morfológicos en Helicobacter pylori. Forma espiral (flecha negra


larga), forma V (flecha negra corta), forma U (flecha blanca corta) y forma cocoide o
viable no cultivable (flecha blanca larga) (26).

121
UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

Forma Viable No Cultivable - Vbnc la división de los enlaces peptídicos por


Muchas especies de bacterias entran en el acción de Csd1, Csd2 y Csd3. Luego,
estado viable no cultivable (VBNC) cuando los enlaces intrapéptidos también se
están expuestas a condiciones estresantes escinden por acción secuencial de Csd3,
como inanición, bajas temperaturas y de una DL-carboxipeptidasa desconocida
en general condiciones ambientales y Csd4, que permite una relajación
desfavorables, siendo esta una estrategia inicial del peptidoglicano en la zona de
de adaptación para la supervivencia a torsión, perdiendo la forma helicoidal. A
largo plazo. A diferencia de las células continuación, los monómeros que han
normales que son cultivables en medios sido sometidos a la acción enzimática,
adecuados y se convierten en colonias, son reconocidos por diferentes
las células VBNC son células vivas que transglicosilasas líticas, como Slt y MltD,
pierden su capacidad de crecer en medios que se eliminan para la posterior inserción
de cultivo en los que normalmente crecen. de nuevos monómeros. Finalmente, la
A pesar de esto, las células VBNC no se inserción de nuevos monómeros en el
consideran células muertas debido a que peptidoglicano y la elongación, se realiza
tienen una membrana intacta que contiene mediante PBP1, PBP2 y proteínas de
la información genética en perfecto membrana (MreC). Esto aumenta la
estado, además de ser metabólicamente longitud de las cadenas de glucanos y los
activas (27). enlaces cruzados (30).

La capacidad de ingresar al estado VBNC La forma espiral se ha asociado con


puede ser ventajosa para la bacteria, pero la capacidad de moverse en un medio
representa un riesgo para la salud humana viscoso, como el moco gástrico. Esto
ya que bajo los métodos convencionales significa que la forma helicoidal puede
de cultivo no es posible su detección, por ser innecesaria en ambientes acuáticos
lo que si en una muestra todas o algunas y también puede implicar un costo
bacterias se encuentran en estado VBNC, energético innecesario para la bacteria
la cantidad total de bacterias viables será (30), siendo este otro posible motivo que
subestimada o no se detectará (28) y justifique el cambio de forma.
tratándose de un patógeno humano, podrá
infectar a la persona que consuma el agua Por mucho tiempo se consideró que
en la cual no pudo ser detectado. muchos de los problemas que se han
encontrado en la recuperación de formas
Se ha demostrado la viabilidad y la viables de H. pylori en el agua, se debe
capacidad de cultivo de H. pylori en agua a que estas pasan a formas cocoides
hasta por 75 horas a 10 °C. Así mismo o VBNC. Desde un punto de vista más
se determinó que el total de células no amplio, ahora se acepta que lo que ocurre
disminuía por períodos mucho más largos es que estas bacterias no se logran cultivar
de tiempo en condiciones adecuadas (2 bajo métodos rutinarios y convencionales
años a 4 °C) (29). de laboratorio (29) sino que son necesarios
métodos de detección molecular.
Varios estudios han señalado que los
cambios en la morfología de H. pylori Formación de Biopelículas
están estrechamente asociada a los La formación de biopelículas en el
genes implicados en la síntesis de ambiente ha sido propuesto como una
peptidoglucano. En primer lugar, ocurre estrategia de H. pylori para sobrevivir en

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Investigación, Desarrollo e Innovación

los sistemas de distribución de agua (22). biopelículas actuaron como inhibidores


de la PCR11, por los genes utilizados
Las biopelículas son comunidades para la amplificación o por la técnica de
microbianas embebidas dentro de una procesamiento de muestras (7).
matriz orgánica polimérica autoproducida
y adherida a una superficie viva o inerte; La capacidad de H. pylori para crecer
son sólidas y presentan canales por donde y formar biopelículas in vitro e in vivo
fluyen el agua y los nutrientes a las zonas podría ser una ventaja para la especie
más profundas. Los primeros análisis para evitar lesiones causadas por factores
de la producción de biofilm por parte de estresantes químicos, como la terapia
bacterias, como H. pylori, se llevaron, antimicrobiana in vivo, o el estrés inducido
mediante estudios de microscopía por la privación de nutrientes en el medio
electrónica, observando formas espirales, ambiente (22).
cocoides y degenerativas. La formación de
la biopelícula conlleva un proceso de cinco La presencia de las biopelículas de H.
fases: 1) Adsorción reversible de la bacteria pylori en agua se ha verificado mediante
a la superficie; 2) Unión irreversible a la PCR, sondas de ADN e hibridación
superficie; 3) Fase inicial de maduración fluorescente in situ (FISH). Así mismo,
con crecimiento y desarrollo microbiano; se ha presentado evidencia in vitro que
4) Producción del exopolímero y, 5) sugiere que las interacciones con bacterias
Desarrollo final de la colonia con dispersión específicas (por ejemplo, Mycobacterium
de células colonizadoras (31). chelonae) dentro de una biopelícula de
múltiples especies puede contribuir a la
Cuando H. pylori se adhiere a una viabilidad de H. pylori (33).
superficie, comienza la activación del
quorum sensing así como los mecanismos Es necesario tener en cuenta que
de formación de los biofilms. Se ha aunque una población disponga de
trabajado con biofilms en sistemas de aguas municipales potables y de grifos
tuberías y tanques de almacenamiento y adecuados, la calidad del agua de la
algunos autores creen que así es como potabilización no es la misma en todas
H. pylori puede ser viable en el agua (25) partes, además el estado del acueducto
debido a que al ubicarse en la parte interna como daños previos que exponen al agua
de estos tanques y tuberías, las hace potable a contaminación con materia fecal,
bastante inaccesibles y difícil de alcanzar la antigüedad del acueducto y la presencia
por los desinfectantes (32). de biopelículas en las tuberías, deben
estudiarse como factores predictores de
En Colombia se evaluó la presencia de H. contaminación del agua (7).
pylori en muestras de agua y biopelículas
de los grifos de instituciones educativas Asociación con amebas de vida libre
oficiales de la ciudad de Medellín a través (FLA)
de una técnica de reacción en cadena de Se ha demostrado previamente que
la polimerasa (PCR) directa convencional, las amebas de vida libre (FLA), como
identificando la bacteria por cultivo en Acanthamoeba, Naegleria, Vermamoeba
11.2% y PCR en 2.1% de las muestras o Balamuthia, pueden actuar como
(7). En este caso, el cultivo tuvo mejor huéspedes de algunos patógenos
rendimiento que la PCR probablemente bacterianos capaces de resistir la digestión
porque los componentes de las amebiana (bacterias resistentes a amebas,

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ARB). Dentro de ellas, las bacterias dudas sobre si H. pylori es realmente viable
sobreviven y son más resistentes a las e infeccioso en el agua, sin embargo se
condiciones ambientales que normalmente han realizado pocos estudios al respecto
las matarían. Por lo tanto, FLA actúa como en humanos, pero si se ha demostrado la
«caballo de Troya» para ARB, permitiendo viabilidad infecciosa de esta forma de H.
la supervivencia bacteriana y/o la pylori en ratones, tanto a través de agua
transmisión a susceptibles hospedadores como de sonda nasogástrica (38).
(34, 35).
En el estudio realizado por Boehnke,
Recientemente, un estudio in vitro ha se suministraron a ratones SS1
indicado que H. pylori puede sobrevivir concentraciones estáticas variables de H.
dentro de Acanthamoeba castellanii pylori en agua de: 1.29 x 105, 106, 107,
después de resistir un tratamiento de 108 y 109 UFC/L, estableciendo como
desinfección por cloración. FLA proporciona concentración mínima infecciosa de H.
refugio para H. pylori, lo que le permite pylori en agua para esta cepa de ratones
sobrevivir bajo diferentes tratamientos y 106 UFC/L. Además, se sugirió que la
hacer posible su transmisión a humanos. dosis infecciosa en humanos puede ser
El análisis de qPCR de las muestras menor que para los ratones porque H.
mostró la presencia de ADN de H. pylori pylori no es un habitante normal del ratón
intracelular en 28 (50,9%) de las muestras (39), coincidiendo con los resultados de
de aguas residuales y en 11 (91,7%) de la QMRA mencionada previamente y con
las muestras de agua potable. Así mismo, otros estudios que establecieron la dosis
se indicó que no se pudieron recuperar infectante estimada para el ser humano en
colonias por cultivo de las muestras de 104 - 1010 UFC/L (11, 38).
FLA positivas, debido a que la bacteria
podría haber adquirido su estado VBNC, Por otra parte, Guimarães et al, realizaron
ya que mediante DVC-FISH se observó un estudio que pretendía evaluar el
su viabilidad después del tratamiento con efecto de la exposición al agua en varios
hipoclorito (34, 36). mecanismos de H. pylori que inducen una
respuesta en las células del huésped, para
Virulencia de las formas cocoides de H. lo cual se utilizó la línea celular epitelial
pylori gástrica humana AGS y se obtuvieron
Para determinar si H. pylori representaba importantes resultados, como que después
un riesgo significativo para la salud pública, de 24h de exposición al agua H. pylori
era necesario realizar una evaluación pierde su capacidad de cultivo (Fig 2) al
cuantitativa del riesgo microbiano cambiar su morfología a forma cocoide la
(QMRA), la cual fue realizada por Ryan cual es viable pero no cultivable; así como
et al., quienes sugirieron un nivel máximo la capacidad de inducir la producción de
del contaminante en agua potable de un IL-8 por las células AGS; su adhesión a
organismo por litro (<1 organismo/L). las células se ve disminuida en un 40% y
Igualmente se determinó la mediana de H. se limita la influencia de la bacteria sobre
pylori en agua potable para el rango anual la apoptosis de la célula huésped(40). Sin
de riesgo de infección en 6.84 x 10-02/L embargo, es importante aclarar que en
para humanos (37). otros estudios, la bacteria ha perdido su
capacidad de cultivo a las 48 h e incluso a
Históricamente el cambio en la morfología las 72 h (30).
(de bacilo espiral a cocoide) ha planteado

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Figura 2. Efecto de la exposición al agua en la capacidad de cultivo de Helicobacter


pylori. Después de la exposición al agua, la suspensión bacteriana fue sembrada en
placas con agar tripticasa soya y se incubo por 7 días a 37°C en condiciones de mi-
croaerofilia. Las unidades formadoras de colonias (UFC) fueron contadas para evaluar
la capacidad de cultivo (40).

Aquellas cepas que modulan su habilidad niveles de ureasa, continúa la síntesis de


para adherirse a diversas células in vitro proteínas (menos del 1% de la cantidad
también manipulan su habilidad para de proteínas sintetizadas por la forma
causar infección in vivo en modelos bacilar), aunque en pequeñas cantidades
animales, mediando diversas matrices y y produce pequeñas cantidades de DNA
adhesinas bacterianas (29). (26, 32).

En dos estudios realizados en Irán, los Igualmente se ha indicado que la forma


genotipos más comúnmente detectados espiral coexiste con células mucosas
entre los aislamientos de H. pylori en agua inalteradas o con daños diversos, mientras
potable fueron vacAs1a (83.3%), vacAm1a que la cocoide está estrechamente
(66.6%), vacAs2 (50%) y cagA (50%)8, asociada con las células mucosas gástricas
y en agua mineral embotellada fueron gravemente dañadas. La forma espiral
vacAs1a (100%), vacAm1a (87.5%), cagA está asociada con la gastritis activa crónica
(62.5%) e iceA1 (62.5%) (41), lo cual y la forma cocoide se asocia con mayor
indica que en muestras de agua, H. pylori frecuencia a la gastritis crónica inactiva en
en su forma cocoide conserva una serie pacientes adultos sintomáticos. La forma
de factores de virulencia encargados de espiral induce una mayor expresión de
la colonización e invasión de la mucosa proteínas proapoptóticas (Fos, Gadd45a y
gástrica, demostrando que estas células Myc), mientras que la cocoide induce una
no cultivables son formas infecciosas (42). mayor proteína antiapoptótica (survivina),
la cual se relaciona frecuentemente con
Además de expresar los genes anteriores, el desarrollo de cáncer, lo que sugiere
la forma cocoide mantiene detectable los que la forma cocoide puede desempeñar

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un papel en la carcinogénesis gástrica, rutinariamente la especie de las muestras


además se encontró que la abundancia de de agua mediante técnicas convencionales
la proteína inductora del factor de necrosis de cultivo microbiológico. Por lo tanto, la
tumoral alfa (TNF-alfa) aumenta en la aplicación de métodos moleculares para
forma cocoide (43), sugiriendo que lo que la detección rápida, sensible y específica
sugiere que la forma viable no cultivable de H. pylori en entornos acuáticos es de
de H. pylori encontrada en agua puede ser suma importancia.
más virulento que la espiral y contribuir a
la patogénesis grave como es el cáncer Usualmente cuando se logra cultivar H.
gástrico. pylori a partir de muestras ambientales
como el agua, no es posible aislarse
En el tejido gástrico, las formas cocoides completamente debido al crecimiento
(VBNC) pueden permanecer latentes de la microbiota competitiva en un agar
durante mucho tiempo y retener los factores selectivo, demostrando que los medios de
de virulencia, por lo que también pueden cultivo actualmente disponible no son lo
ayudar a los fracasos del tratamiento y necesariamente útiles para el aislamiento
la recurrencia de la infección y de las de las bacterias del medio ambiente en
enfermedades gastroduodenales (26). especial H. pylori. Cuando muestras de
La recurrencia de la infección es posible la presunta colonias se analizan, células
debido a la ocurrencia de recombinación Gram-negativas exhiben una morfología
genética con otras cepas de H. pylori típica de la bacteria pero se mezclan
que podrían estar presentes en el mismo con otros bacilares que no son H. pylori
huésped, lo que da como resultado una (45). Para favorecer la eliminación de
mayor diversificación genética la cual esta microbiota competitiva se han
puede ayudar a la bacteria a adaptarse desarrollado técnicas alternativas como
a un nuevo huésped después de la son la separación inmunomagnética (IMS)
transmisión (40). y el tratamiento ácido (23).

Así como existen múltiples estudios que El principal desafío cuando se realiza un
demuestran la presencia y la capacidad muestreo ambiental es la incapacidad
infectiva de H. pylori en agua; en otro de demostrar la existencia de H. pylori
estudio realizado por Boehnke et al con la viable en el agua, que potencialmente
cepa de ratones SS1 y H. pylori, ninguno puede colonizar el estómago o el
de ellos mostró signos de infección, lo duodeno porque los métodos moleculares
cual puede ser explicado debido a que la utilizados para detectar las bacterias en
variabilidad genética de las cepas de H. el medio ambiente son incapaces de
pylori es amplia, por lo que es posible que distinguir entre bacterias muertas; sin
algunas cepas carezcan de la capacidad embargo, han surgido técnicas como la
de persistir en el agua y por el contrario se DVC-FISH (Hibridación fluorescente in
transmitan únicamente a través de otras situ en combinación con la incubación
rutas, como las vías de persona a persona de conteo viable directo) que permite la
o vía fecal-oral (44). detección específica de células viables
y tiene la ventaja de no ser inactivado
Métodos de detección por inhibidores de muestras, así como la
Uno de los principales problemas para implementación del agente intercalante
aceptar el agua como posible reservorio PMA a la técnica qPCR (10). Esta última
de H. pylori es la incapacidad de aislar sigue siendo un desafío, ya que solo

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demuestra la integridad de la membrana pero no puede detectar genes marcadores


y puede conducir a una sobreestimación de virulencia como cagA lo cual no lo hace
de la población de bacterias viables en muy útil al momento de querer confirmar
algunas condiciones de inactivación (42). la presencia de H. pylori a través de estos
genes de virulencia (47).
La prueba de qPCR para H. pylori presenta
por si sola varias ventajas: no se basa Además de las anteriores técnicas, existen
en el cultivo; muchas muestras pueden otras como la amplificación isotérmica
analizarse rápidamente (hasta 384 medida por bucle (LAMP por sus siglas en
muestras en 2 h); se eliminan muchas de inglés) que es un mecanismo más rápido
las fuentes de error humano del proceso y fácil. Esta técnica es una reacción de
de análisis y disminuye el potencial de amplificación de una etapa, que puede
contaminación(46). Sin embargo, debe producir una gran cantidad de copias
tenerse en cuenta que la mayoría de los en menos de una hora en condiciones
resultados positivos de qPCR podrían isotermas. La ventaja más importante
deberse al ADN de células no viables, por de este método es que no necesita
lo que este método no es adecuado para desnaturalización del ADN (2). Además,
determinar el potencial infeccioso de una se puede realizar sin un termociclador y
muestra (10). los resultados pueden observarse a simple
vista (46). También se utiliza la citometría
Por su parte, la PCR convencional es el de flujo, la cual es una técnica analítica que
método más utilizado hasta el momento, tiene el potencial de hacer una distinción
siendo más sensible y específico, pero tiene entre los cuatro estados fisiológicos
algunas limitaciones, como numerosos de las bacterias: reproductivamente
ciclos térmicos, costoso termociclador y un viable, metabólicamente activa, intacta
método de identificación y manifestación y permeabilizada. Puede determinar las
del producto lento y difícil (2). proporciones de los estados VBNC y VC
y las células muertas, en función de la
Cuando se utiliza la PCR como método integridad de la membrana de la bacteria
de detección, es necesario realizar un (46).
tratamiento previo o enriquecimiento que
aumente la sensibilidad de la prueba Es importante resaltar que la transmisión
mejorando así las tasas de detección por agua también ha sido sugerida para
debido a que existen inhibidores de la otras especies de Helicobacter como
enzima Taq polimerasa presentes en el H. mustelae, H. muridarum, H. felis, H.
agua (por ejemplo, en las aguas residuales canadensis, H. pullorum, H. canis y H.
los ácidos húmicos) que pueden producir cetorum. Utilizando para su detección
resultados falsos negativos (45). la técnica PCR rRNA 16S y 23S,
descubriendo que el uso de 16S era más
La viabilidad de H. pylori en muestras de específico para los resultados esperados
agua puede evaluarse mediante PCR de (48).
transcripción inversa (RT-PCR), y ensayos
de anticuerpos fluorescentes indirectos Para la detección molecular se han
(IFA). La prueba IFA utiliza anticuerpos utilizado diversos genes como ureC (32)
específicos que permiten la enumeración que se ha demostrado que es único y
de células tanto cultivables como no esencial para el crecimiento de H. pylori21
cultivables y las formas espiral y cocoide, rRNA 16S (cebadores Hp1, Hp2 y Hp3)49,

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Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

glmM (25), ureA, cagA, vacA (19), iceA, portamiento higiénico-sanitario de


oipA, cagE and baba2 (41). pacientes con diagnóstico de úlce-
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48. Cunachi AM, Fernández M, Delgado Infect Dev Ctries. 2011; 6(3): 251-5.
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ter DNA in different water source and
penguin feces from Greenwich, Dee
and Barrientos Islands Antarctica.
Polar Bio. 2016; 39(9): 1539-1546.

131
UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

Características y beneficios del Kéfir como probiótico: Una


revisión para el mejoramiento de la salud
Eder Jair Salazar1, Juan Diego Sánchez1, Lina María Londoño Giraldo.2

Resumen Abstract:

El kéfir es un producto lácteo fermentado Kefir is a fermented milk product that ori-
que se origina a partir de las montañas ginates from the Caucasus mountains,
del Cáucaso, si bien ha sido ampliamen- although it has been widely consumed in
te consumido en Rusia y en Asia central, Russia and central Asia, such as Kazakhs-
como Kazajstán, Kirguistán durante siglos, tan, Kyrgyzstan for centuries, it is now in-
ahora es cada vez más popular en Países creasingly popular in European countries,
europeos, Japón y Estados Unidos debido Japan and United States due to its nutritio-
a sus efectos nutricionales y terapéuticos. nal and therapeutic effects. The objective
El objetivo de esta revisión fue hacer una of this review was to make a synopsis on
sinopsis sobre las características y los be- the characteristics and benefits of kefir for
neficios del kéfir para el mejoramiento de the improvement of human health. For this,
la salud humana. Para lo anterior se hizo a bibliographic search was made in four
una búsqueda bibliográfica en cuatro ba- databases Science Direct, Academic Goo-
ses de datos Science Direct, Academic gle, SciElo and Scopus using the terms
Google, SciElo y Scopus utilizando los «kefir», «kefir and probiotic», «kefir and
términos “kefir”, “kefir and probiotic”, “kefir yogurt». Kefir contains active live cultures
and yogurt”. El kéfir contiene cultivos vivos of the normal flora, which is composed of
activos de la flora normal, que se compo- strong varieties of microorganisms that
ne de variedades fuertes de microorga- help to overcome pathogenic organisms,
nismos que ayudan a sobrepasar a los repopulate the digestive tract and aid in
organismos patógenos, repoblar el tracto digestion. Microorganisms predispose the
digestivo y ayudan en la digestión. Los mi- protein that enchant the digestion and ab-
croorganismos predisponen a la proteína sorption of proteins and also use lactose,
que encanta la digestión y absorción de so that many people who have problems
proteínas y también usan la lactosa, por of lactose intolerance can consume kefir.
lo que muchas personas que tienen pro-
blemas de intolerancia a la lactosa pueden Key words: Kefir; probiotic; composition;
consumir kéfir. microbial diversity.

Palabras Clave: kéfir; probiótico; compo-


sición; diversidad microbiana.

1. Estudiantes programa de Microbiología, Universidad libre Pereira:


ederj-salazarc@unilibre.edu.co- juand-sanchezr@unilibre.edu.co
2. Profesora. Programa de Microbiología. Universidad Libre Pereira.
linam.londonog@unilibre.edu.co

132
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

Introducción fabricado utilizando los microorganismos


aislados de él.[8] En la producción de kéfir
ahora se están utilizando cultivos iniciado-
El kéfir es un producto lácteo fermentado res que contienen liofilizado LAB y levadu-
que se origina a partir de la montañas del ras de kéfir.[9]
Cáucaso.[1] El término se deriva de la pa-
labra kef, que significa “sabor agradable”
en turco.[2] Kéfir también se conoce como
Kefyr, Kéfir, Kefer, Kiaphur, Knapon, Kepi
o Kippi.[3] Si bien ha sido ampliamente
consumido en Rusia y en Asia central,
como Kazajstán, Kirguistán durante siglos,
ahora es cada vez más popular en Países
europeos, Japón y Estados Unidos debido
a sus efectos nutricionales y terapéuticos. Figura 1. Aspecto físico de los típicos
Estudios previos sobre el kéfir han reportado gránulos de kéfir. Tomada de: Critical Re-
efectos antimicrobianos, inmunológicos, views in Food Science and Nutrition, Z.
antitumorales e hipocolesterolémicos, así Ahmed, Y. Wang, A. Ahmad et al., Kéfir
como actividad de β-galactosidasa.[4] and health.
El kéfir se fabrica a partir de granos de Generalmente el kéfir contiene una mez-
kéfir o cultivos madre preparados a partir cla compleja de LAB (lactobacilos, lacto-
de granos de kéfir (Figura 1). Los granos cocos, leuconostocs, estreptococos), le-
de kéfir son gránulos pequeños, duros, vaduras (Candida sp., Kluyveromyces sp.,
de forma irregular, de color blanco ama- Saccharomyces sp., Torulopsis sp., Zygo-
rillento que varían en diámetro de 3 a 35 saccharomyces sp.) Y, a veces, bacterias
mm, con la aparición de coliflores en mi- del ácido acético (Acetobacter sp.). La
niatura. Estos granos contienen bacterias actividad metabólica simbiótica de varias
del ácido láctico (LAB) y varias levaduras especies de bacterias y levaduras crea un
combinadas con caseína y azúcares com- sabor único.[10]
plejos en una matriz de polisacáridos.[5][6]
El polisacárido principal es el kefiran, que La presente revisión tendrá como objetivo
comprende cantidades iguales de glucosa revisar aspectos relacionados como las
y galactosa.[7] Un kéfir de buena calidad características y beneficios nutricionales
tiene una viscosidad espumosa y vertible. del kéfir utilizado como probiótico con pro-
Debido a que el grano de kéfir es compli- piedades de interés para el mejoramiento
cado, mantener su calidad en la produc- de la salud humana.
ción es problemático y también tiene una
vida útil corta. El uso de microorganismos Metodología
aislados del grano de kéfir ahora se reco- Se realizó una búsqueda sistemática de
noce como un desarrollo prometedor en literatura gris referente al kéfir como pro-
lo que respecta a la estandarización de biótico para la construcción del artículo de
la producción de kéfir y la preservación revisión, utilizando cuatro bases de datos
de sus propiedades deseables. Se ha de- Science Direct, Academic Google, SciElo
mostrado que la cantidad y variedad de y Scopus utilizando los términos “kefir”,
microorganismos en el kéfir fabricado a “kefir and probiotic”, “kefir and probiotic”,
partir de grano es mayor que en el kéfir “kefir and yogurt”. Las bases de datos

133
UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

arrojaron 2399, 34800, 40 y 1361 artículos niza y 1.0% de ácido láctico y alcohol.[13]
respetivamente. Se priorizaron los artícu- Se ha informado que el kéfir contiene 1,98
los publicados principalmente en los últi- g / L de CO2 y 0,48% de alcohol, y el con-
mos 20 años. La búsqueda se realizó en tenido de dióxido de carbono (201.7-277.0
abril de 2019. ml/L) se correlacionó positivamente con la
concentración (10-100 g/L) de granos de
Desarrollo kéfir.[5] Se han estudiado las propiedades
del kéfir fabricado en Escocia y Polonia
A. Composición quimica utilizando leche bovina, caprina y ovina
La composición del kéfir (Tab.1) no es uni- con diferentes cultivos iniciadores.
forme y no está bien descrita.[11] El tipo y
el volumen de la leche afectan sus propie- la composición química del kéfir oscilaba
dades sensoriales, químicas y de textura. entre el 10,6% y el 14,9% para los sóli-
[12] además, la composición de sus gra- dos totales, el 2,9–6,4% para la proteína
nos y cultivos y el proceso de producción cruda, el 3,8–4,7% para los carbohidratos
influyen en sus propiedades.[11] y el 0,7–1,1% para la ceniza.[14] En otro
estudio, informaron que los granos de ké-
El kéfir típicamente contiene entre 89 y fir contienen 86.3% de humedad, 4.5% de
90% de humedad, 0.2% de lípidos, 3.0% proteína, 1.2% de ceniza y 0.03% de gra-
de proteínas, 6.0% de azúcar, 0.7% de ce- sa.[15]

Tabla 1. La composición quimica y los valores nutricionales del kefir (Adaptado de:
Renner and Renz- Schaven, 1986; Halle et al, 1994) [10]

Componentes 100 g Componentes 100 g


Energía 65 kcal Contenido mineral (g)
Grasas (%) 3.5 Calcio 0.12
Proteína (%) 3.3 Fósforo 0.10
Lactosa (%) 4 Magnesio 12
Agua (%) 87.5 Potasio 0.15
Sodio 0.05
Leche ácida (g) 0.8 Cloro 0.10
Alcohol etílico (g) 0.9
Ácido Láctico (g) 1 Elementos traza
Colesterol (g) 13 Hierro (mg) 0.05
Fosfatos (g) 40 Cobre (ug) 12
Molibdeno (ug) 5.5
Aminoácidos Manganeso (ug) 5
esenciales
Triptófano 0.05 Zinc (mg) 0.36
Fenilalanina + Tirosina 0.35
Leucina 0.34

134
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

Isoleucina 0.21 Compuestos Aromáticos


Treonina 0.17 Acetaldehido
Metionina + Cisteina 0.12 Diacetil
Lisina 0.27 Acetoina
Valina 0.22
Vitaminas (mg)
A 0.06 B12 0.05
Caroteno 0.02 Niacina 0.09
B1 0.04 C 1
B2 0.17 D 0.08
B6 0.05 E 0.11

Los principales productos formados du- B. Características microbiológicas


rante la fermentación son el ácido láctico, La población microbiana encontrada en
el CO2 y el alcohol. El ácido láctico es el los granos de kéfir ha sido citada como
ácido orgánico más abundante, es decir, un ejemplo de una comunidad simbiótica;
la concentración más alta después de la esta naturaleza simbiótica ha hecho que la
fermentación y se deriva de aproximada- identificación y el estudio de los microor-
mente el 25% de la lactosa original en la ganismos constituyentes dentro de los
leche de inicio. Las cantidades de etanol granos de kéfir sean problemáticos.[16]
y CO2 producidas durante la fermentación
del kéfir dependen de las condiciones de Numerosas especies microbianas en los
producción.[16] granos de kéfir se identifican mediante di-
versas técnicas microbiológicas y molecu-
Se ha descubierto que el kéfir tradicional lares.[19] (Ver Tab.2).
elaborado con leche caprina presenta una
baja viscosidad y propiedades sensoria- Se encontró que la población microbiana
les, a diferencia de las del kéfir bovino y en el grano de kéfir consistía principal-
que contenía un 0,04-0,3% de etanol.[1] mente en lactobacilos (65-80%), con lac-
también se ha encontrado que el conteni- tococos y levaduras que comprenden el
do de etanol resto.[20] La composición de la pobla-
ción puede diferir
en kéfir bovino y caprino enriquecido con
concentrado de proteína de suero de le- El diacetilo, la acetoína y el acetaldehído,
che era de 0.32 y 0.35%, respectivamente. que son compuestos aromáticos, están
Durante el proceso de fermentación se ge- presentes en el kéfir. El diacetilo es produ-
neraron ácido láctico, ácido acético, ácido cido por Streptococcus lactis subsp. dia-
pirúvico, ácido hipúrico, ácido propiónico, cetylactis y Leuconostoc sp.[11] durante
ácido butírico, diacetilo y acetaldehído. el almacenamiento, la concentración de
Estos compuestos imparten el sabor y el acetaldehído aumenta mientras que la de
aroma al kéfir.[17] acetoína disminuye.[18]5, 10, 15, and 22 h
of fermentation (final pH=4.6

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UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

tanto por el origen del grano como por el contribuyen al sabor y la sensación en la
método de cultivo para el sustrato. Los fac- boca.[16]
tores que influyen en el grado de acidifica-
ción durante la producción de kéfir son el C. Características nutricionales
tamaño de la inoculación del grano, la agi- El kéfir contiene vitaminas, minerales y
tación y la temperatura de incubación[21]. aminoácidos esenciales que son benefi-
ciosos para la curación y la homeostasis.
Las levaduras y los lactobacilos son mu- Por lo general contiene como vitaminas la;
tuamente dependientes y crecen en pro- B1, B2, B5 y C. El contenido de vitaminas
porciones equilibradas en los granos de de kéfir está influenciado por el tipo de le-
kéfir, y se observó simbiosis entre las leva- che y la flora microbiológica. Se han deter-
duras, los lactobacilos y los estreptococos minado que el kéfir contiene vitaminas B5,
durante la producción de kéfir.[3] B2 y B1 en aproximadamente 3, <5 y <10
mg / kg, respectivamente. también contie-
Se reconoce que las levaduras desempe- ne vitaminas A y K y caroteno.[22]
ñan un papel clave en la preparación de
productos lácteos fermentados, en los que El kéfir contiene proteínas completas que
proporcionan nutrientes esenciales para el se digieren parcialmente, lo que facilita
crecimiento, como los aminoácidos y las la digestión por el cuerpo.[23] El perfil de
vitaminas, alteran el pH, secretan etanol y aminoácidos cambia durante la fermenta-
producen CO2. Las levaduras en el kéfir ción de la leche, y se encontró que el kéfir
están menos estudiadas que las bacte- contiene niveles más altos de treonina, se-
rias, aunque las levaduras en los granos rina, alanina, lisina y amoniaco que la le-
proporcionan claramente un ambiente fa- che. También contiene otros aminoácidos,
vorable para el crecimiento de las bacte- como valina, isoleucina, metionina, lisina,
rias del kéfir, produciendo metabolitos que fenilalanina y triptófano.[24]

136
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

Tabla 2. Composición microbiana de granos de kéfir de diferentes orígenes analizados,


utilizando diferentes metodologías.

Origen Microorganismos Métodos Referencia


empleados
para estudiar la
microbiota del kéfir
Granos L. kefiri, L. parakefiri, L. Identificación Garrote et al. (2001) [25]
de kéfir paracasei, L. kefiranofaciens de aislamientos
(Argentina) subsp kefiranofaciens, mediante prueba Golowczyc et al. (2008)
L. kefiranofaciens subsp bioquímica, patrón [26]
kefirgranum, L. plantarum, de proteína de Londero et al. (2012) [27]
Lc. lactis ssp. lactis, células completas,
Lc. lactis ssp. lactis FTIR, RAPD-
biovar diacetylactis, Leu. PCR, huella
mesenteroides, Acetobacter dactilar de PCR
sp, K. de Rep (GTG) 5,
marxianus, Sac. cerevisiae, fenilalanil-ARNt
Sac. Unisporus sintetasa (PheS),
secuenciación del
gen, polimorfismo
de la región ITS.

Amplificación por
PCR de 16S y
26S secuencias
de ADNr-DGGE e
identificación de
bandas DGGE.

Granos de L. kefiri, L. kefiranofaciens, Análisis Korsak et al. (2015) [28]


kéfir (Bélgica) L. metagenético
lactis ssp. cremoris, Leu. dirigido al ADN
mesenteroides, Glu. ribosomal
frateurii, 16S y 26S
Ac.orientalis, Ac. fragmentos por
lovaniensis, pirosecuenciación.
Naumovozyma spp., K.
marxianus,
Kazachastania kefir

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Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

Granos de L. kefiranofaciens, L. Identificación de


kéfir (Brasil) parakefiri, microorganismos Zanirati et al. 2015).
L. kefiri, L. amylovorus, L. aislados por
buchneri, L. crispatus, L. fenotípicos
paracasei, L. helveticus, L. y métodos
uvarum, L. lactis, Leu. genotípicos.
mesenteroides, Glu. japonic Amplificación por
us, Ac. syzygii, Sac. PCR de 16S y 26S
cerevisiae. secuencias de
ADNr-DGGE
y
pirosecuenciación.
Granos de L. kefiranofaciens, L. kefiri, Análisis de Dobson et al. (2011)
kéfir (Irlanda) L. secuenciación
helveticus L. parabuchneri, compositiva 16S.
L.
acidophilus, L. parakefiri,
Leucoconstoc spp

Granos de L. kefiranofaciens, L. lactis, PCR -DGGE de Garofalo et al. (2015) [31]


kéfir (Italia) St. granos de kéfir e
thermophilus, Enterococcus identificación de
sp., bandas DGGE.
Bacillus sp., Ac. fabarum, Análisis de
Ac. la diversidad
lovaniensis, Ac. orientalis, de bacterias
Dekkera anomala y levaduras
mediante la
pirosecuenciación
del gen rRNA.

138
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

Granos L. plantarum, L. delbrueckii Aislamiento Garbers et al. (2004) [32]


de kéfir subsp en medios de
(Sudáfrica) delbrueckii, L. brevis, L. crecimiento
delbrueckii subsp lactis, L. selectivos e
curvatus, L. fermentum, Lc. identificación
lactis mediante el uso
subsp. lactis, Leu. de características
mesenteroides morfológicas
subsp. cremoris, Leu. y bioquímicas.
mesenteroides ssp. PCR-DGGE de
mesenteroides/dextranicum, granos de kéfir e
C. identificación de
lipolytica, C. lambica, C. bandas DGGE.
krusei,
C. kefyr, C. holmii, Sac.
cerevisiae,
Zygosaccharomyces
sp., Cryptococcus
humicolus,
Geotrichum candidum

L.: Lactobacillus, Lc.: Lactococcus, St.: Streptococcus, Ac: Acetobacter, Glu.: Glu-
conobacter, O.: Oenococcus, Sac.: Saccharomyces, K.: Kluyveromyces, C.: Candida.

Los contenidos de aminoácidos esencia- en el cual determinaron que los macroe-


les en kéfir son (mg / 100 g) valina, 220; lementos presentes en el grano de kéfir
isoleucina, 262; metionina, 137; lisina, eran: potasio, 1,65%; calcio, 0,86%; fós-
376; treonina, 183; fenilalanina, 231; y trip- foro, 1,45%; y magnesio, 0,30%, mientras
tófano, 70.[33] que los microelementos encontrados fue-
ron: (mg / kg) de cobre, 7,32; zinc, 92,7;
El triptófano, uno de los aminoácidos más hierro, 20,3; manganeso, 13.0; cobalto,
importantes del kéfir, es de importancia 0,16; y molibdeno, 0.33.[22]
clave en el sistema nervioso.[33]
El kéfir es una buena opción para los indi-
Respecto al contenido mineral, el kéfir es viduos intolerantes a la lactosa, aquellos
una buena fuente de calcio y magnesio. El que no pueden digerir cantidades signifi-
cativas de lactosa, que es el azúcar pre-
fósforo, que es el segundo mineral más dominante en la leche. El contenido de
abundante en el cuerpo humano y ayuda lactosa se reduce en kéfir, mientras que el
en la utilización de carbohidratos, grasas de la β-galactosidasa se incrementa como
y proteínas para el crecimiento celular, el resultado de la fermentación.[11]
mantenimiento y la energía, también es
D. Kéfir como probiótico
abundante en el kéfir.[22] se han estudia-
El kéfir es un probiótico natural. Los pro-
do los macro y microelementos en kéfir,

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UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

bióticos son alimentos que contienen bac- E. Aspectos terapéuticos


terias vivas, que son beneficiosos para la Históricamente, el kéfir ha sido recomen-
salud. Según otra definición, un probiótico dado para el tratamiento de varias afec-
es un complemento alimenticio microbiano ciones clínicas, como problemas gastroin-
vivo que afecta de manera beneficiosa al testinales, hipertensión, alergias y cardio-
animal huésped al mejorar el equilibrio mi- patías isquémicas.[38]and the certain of
crobiano y se utilizan en productos lácteos probiotics when administered in adequate
fermentados.[34] el término “probiótico” amounts were reported have an anti-in-
se remonta a 1965, cuando se refería a flammatory properties. The purpose of this
cualquier sustancia u organismo que con- study were to evaluate the effect of admi-
tribuye al equilibrio microbiano intestinal. nistration of goat milk and soy milk kefir on
Principalmente de animales de granja. a immune responses including spleen lym-
principios de este siglo, el concepto pro- phocyte proliferation, production of pro-in-
biótico básico fue concebido por primera flammatory cytokine (TNF-α Sin embargo,
vez por Metchnikoff (1907) y había creído la variabilidad inherente a las condiciones
durante mucho tiempo que la compleja de producción de kéfir en diferentes ensa-
población microbiana en el colon tenía un yos dificulta la realización de comparacio-
efecto adverso en el huésped a través de nes entre los resultados científicos infor-
la autointoxicación. más tarde se revisó mados.[39]
para insistir en la idea de un suplemento
de alimento microbiano vivo, en lugar de Se han evaluado las fermentaciones de
cualquier sustancia y se hizo más rele- grano de kéfir de diversos sustratos y se
vante para los seres humanos.[35] Hasta ha observado una amplia variedad de
entonces, las leches fermentadas habían compuestos bioactivos, como ácidos or-
sido una fuente común de alimentos. Más gánicos, CO2, H2O2, etanol, Péptidos
recientemente, los probióticos se definen bioactivos, exopolisacáridos (kefiran) y
como “organismos vivos que, al ingerirse bacteriocinas.[39]
en ciertas cantidades, ejercen beneficios
para la salud más allá de la nutrición bá-
F. Actividad antimicrobiana
sica inherente”.[36] Esta revisión enfatiza
Santos et al. (2003) [40] observaron el
la necesidad de poblaciones suficientes
comportamiento antagónico de los lacto-
de microorganismos vivos y además in-
bacilos aislados de granos de kéfir con-
dica que los beneficios pueden incluir
tra E. coli, L. monocytogenes, Salmonella
tanto la mejora del equilibrio microbiano
Typhimurium, S. Enteritidis, Shigella flex-
como otros efectos en la salud.[34] El kéfir
neri y Y. enterocolitica. Silva et al. (2009)
contiene cultivos vivos activos de la flora
[41] observaron la inhibición de Candida
normal, que se compone de variedades
albicans, Salmonella Typhi, Shigella son-
fuertes de microorganismos que ayudan
nei, Staphylococcus aureus y E. coli por el
a sobrepasar a los organismos patóge-
kéfir cultivado en azúcar moreno. Por otro
nos, repoblar el tracto digestivo y ayudan
lado, Chifiriuc et al. (2011) [42] observa-
en la digestión.[37] Los microorganismos
ron que toda la leche fermentada con gra-
predisponen a la proteína que encanta la
nos de kéfir tenía actividad antimicrobiana
digestión y absorción de proteínas y tam-
contra Bacillus subtilis, S. aureus, E. coli,
bién usan la lactosa, por lo que muchas
E. faecalis y S. Enteritidis, pero no inhibió
personas que tienen problemas de intole-
a P. aeruginosa y C. albicans. Todos es-
rancia a la lactosa pueden consumir kéfir.
tos estudios indican que la actividad an-
[35]

140
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

timicrobiana del kéfir está asociada con postoperatorios y en pacientes con


la producción de ácidos orgánicos, pépti- trastornos gastrointestinales. En Rusia, el
dos (bacteriocinas), dióxido de carbono, kéfir ha sido utilizado por investigadores
peróxido de hidrógeno, etanol y diacetilo. en el tratamiento de úlceras pépticas en
Estos compuestos pueden tener efectos el estómago y el duodeno de pacientes
beneficiosos no solo en la reducción de humanos.[44]
patógenos transmitidos por los alimentos y
el deterioro de las bacterias durante la pro-
I. Efectos anticarcinogénicos
ducción y el almacenamiento de bebidas,
El papel anticancerígeno de los productos
sino también en el tratamiento y la preven-
lácteos fermentados se puede atribuir,
ción de gastroenteritis e infecciones vagi-
en general, a la prevención del cáncer
nales. Además, también se demostró la
y la supresión de tumores en etapa
actividad antimicrobiana del polisacárido
temprana, por el retraso de las actividades
kefiran contra las bacterias y C. albicans.
enzimáticas que convierten los compuestos
[40]
procancerígenos en carcinógenos, o por
la activación del sistema inmunitario.
G. Actividad antinflamatoria y cura- [13] Kubo et al. (1992) [45] informaron
tiva sobre la inhibición de la proliferación de
Se observaron actividades curativas y tumores de Ehrlich ascitis trasplantados
antiinflamatorias de kéfir y kefiran en subcutáneamente en ratones. Liu et al.
ratones después de un tratamiento de (2002) [46] observaron la inhibición del
siete días con gel de kéfir, así como crecimiento tumoral, la inducción de la lisis
actividad antiinflamatoria cuyo tejido celular apoptótica en tumores y aumentos
granulomatoso y retorcimiento es inducido significativos en los niveles de IgA en
por el ácido acético en ratones. Husseini ratones, lo que sugiere que el kéfir tiene
et al. (2012) [43] corroboró la actividad propiedades antitumorales y promueve la
curativa en quemaduras infectadas con resistencia de la mucosa a las infecciones
Pseudomonas aeruginosa en ratones.[42] intestinales.[46]

H. Impacto en el tracto gastrointesti- J. Estimulación del sistema inmuno-


nal (GIT) lógico
El efecto causado por el consumo de kéfir La formación de péptidos bioactivos
en la composición de la microbiota intestinal durante los procesos de fermentación o
puede deberse a una combinación de digestión ha demostrado una variedad
factores, como la inhibición directa de de actividades fisiológicas, incluida la
patógenos por la producción de ácidos estimulación del sistema inmunológico
y bacteriocinas, además de la exclusión en modelos animales.[16] Thoreux y
competitiva de patógenos en la mucosa Schmucker (2001) [47] después de
intestinal.[43] Según Marquina et al. alimentar a ratones con kéfir, observaron
(2002) [44] el consumo de kéfir aumentó un aumento en la respuesta inmune
significativamente los recuentos de LAB en específica de la mucosa (IgA) contra
la mucosa intestinal y redujo las poblaciones la toxina del cólera. La estimulación
de enterobacterias y clostridios. Además, del sistema inmunológico también
el consumo de kéfir también impidió la puede ocurrir debido a la acción de los
colonización por C. jejuni en pollos de exopolisacáridos que se encuentran en los
ceca y fue eficaz en los tratamientos granos de kéfir. Medrano et al. (2011) [48]

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UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

observaron que el kefiran pudo modificar de kéfir. Actualmente, la aplicación de


el equilibrio de las células inmunitarias probióticos en la industria alimentaria se
en la mucosa intestinal. Vinderola et al. encuentra en expansión y la comprensión
(2005) [49] demostraron la capacidad de las relaciones simbióticas entre los
de inmunomodulación del kéfir en la diferentes microorganismos presentes en
respuesta inmune de la mucosa intestinal los alimentos, así como sus interacciones,
de los ratones. La administración de podría ayudar a mejorar los procesos
kéfir también indujo una respuesta en la tecnológicos.
mucosa intestinal, lo que sugiere que los
componentes del kéfir pueden estimular Datos Estadísticos
las células del sistema inmunitario Según los estudios estadísticos
innato, suprimir la respuesta inmunitaria relacionados con kéfir al analizar
del fenotipo Th2 o promover respuestas resultados de búsqueda en la revista
inmunitarias mediadas por células contra Scopus nos arrojó que en el 2018
tumores e infecciones por patógenos incremento los estudios de este producto
intracelulares.[46] Recientemente, Hong lácteo debido que en los últimos años
et al. (2009) [50] demostraron, in vitro, se ha generado la necesidad del estudio
la capacidad inmunomoduladora de la de este y su comportamiento a nivel
LAB aislada de los granos de kéfir, lo que fermentativo (Figura 2). Uno de los países
sugiere su influencia en la secreción de las más destacado y considerado número
citocinas proinflamatorias IL-6 y TNF- por uno por los estudios realizados es Turquía
TLR-2.[50] debido a que uno de los grandes intereses
de ellos son las leches fermentadas
Consideraciones Finales considerándolas como un alimento sano
Kefir es un ejemplo tradicional de la que ha existido muchos años atrás y
coexistencia de bacterias y levaduras y que ahora en la actualidad ha sido muy
la importancia de esta relación simbiótica estudiado por sus aportes benéficos para
parece clara, ya que es necesario producir la salud (Figura 3). Al igual que las áreas
compuestos beneficiosos para la salud. con más publicaciones relacionadas a
Aunque la evidencia no es concluyente este producto son la agricultura y las
y se deben realizar más estudios, los ciencias biológicas por su gran interés en
estudios científicos existentes demuestran los procesos fermentativos y la presencia
los beneficios para la salud reportados de microorganismos (Figura 4).
empíricamente por el consumo histórico

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Investigación, Desarrollo e Innovación

143
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Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

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Artículo de Revisión

Cultivo y métodos fenotípicos para determinar el perfil de


susceptibilidad en Helicobacter pylori
María Alejandra Buitrago Gómez1, Laura Díaz Ramírez1, Michelle Mejía Romero1,
Adalucy Álvarez Aldana2.

Resumen Abstract:

Introducción: Numerosos métodos Introduction: Numerous methods have


han sido desarrollados para detectar la been developed to detect the resistance
resistencia de Helicobacter pylori (H. of Helicobacter pylori (H. pylori) to
pylori) a los antimicrobianos. Se tiene al antimicrobials. The agar dilution method is
método dilución en agar como referencia used as a reference recommended by The
recomendada por The Clinical Laboratory Clinical Laboratory Standards Institute.
Standards Institute. Igualmente se There are also various techniques that arise
tienen diversas técnicas que surgen as an alternative analysis, including the
como alternativa de análisis, entre ellas E-test and disk diffusion. Methodology:
la prueba de E-test y difusión en disco. through a systematic review of the
Metodología: mediante una revisión literature describe the reproducibility of the
sistemática de la literatura describir la evidence and its proper use. Conclusions:
reproducibilidad de las pruebas y su establish whether the tests used for this
adecuada utilización. Conclusiones: purpose meet the necessary conditions
establecer si las pruebas utilizadas para to select it as a routine test capable
tal fin reúnen las condiciones necesarias of generating reliable results that help
para seleccionarla como prueba de rutina direct the appropriate treatment based on
capaz de generar resultados confiables susceptibility and not empirically.
que ayuden a direccionar el tratamiento
adecuado basado en la susceptibilidad y Key words: Helicobacter pylori, drug
no de manera empirica. resistance microbial, anti-bacterial agents,
bacteria
Palabras clave:
Helicobacter pylori, farmacorresistencia
microbiana, antibióticos, bacteria.

1 Programa de Microbiología. Universidad Libre Pereira. Semillero Microorganismos de


importancia en salud humana y animal “OBVIO MICROBIO”
2 Profesora investigadora. Programa de Microbiología. Grupo de investigación
MICROBIOTEC. Universidad Libre Seccional Pereira. Líder Semillero “OBVIO MICROBIO“

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MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

Introducción general sobre H. pylori, razón por la cual


no se tienen datos altamente precisos.
Helicobacter pylori (H. pylori) es una bac-
teria Gram-negativa en forma de espiral, En la mayoría de los individuos, la infec-
patógeno humano y un microaerófilo fas- ción por H. pylori puede continuar durante
tidioso (1-2). Es un patógeno humano co- toda la vida como una condición asinto-
mún que ha existido en el estómago desde mática (12). Por lo general, la prevalencia
hace aproximadamente 60.000 años (3). de H. pylori aumenta con la edad en la
Sin embargo, no fue de importancia has- mayoría de los países y con un nivel so-
ta que fue cultivado por Marshall y Warren cioeconómico más bajo, sin embargo, se
(2-3). El descubrimiento de H. pylori en ha observado un descenso en la prevalen-
1982 fue el punto de partida de una revo- cia de la infección por H. pylori en las últi-
lución sobre los conceptos y el tratamiento mas décadas en el análisis de tendencias
de las enfermedades gastroduodenales temporales de varias poblaciones grandes
(4) Pero solo hasta el 2005 recibieron su (13-14). En ciertos contextos, la infección
reconocimiento, en la historia de los pre- generalmente tiene lugar en la infancia y
mios Nobel, esta es solo la tercera vez suele durar toda la vida (15).
que se reconoce el descubrimiento de una
bacteria (5). H. pylori se define como un carcinógeno
de Clase I por la Organización Mundial de
Es una de las causas más comunes de in- la Salud y fue la primera especie bacte-
fecciones bacterianas crónicas en todo el riana comprobada que causa cáncer por
mundo (6). La infección por H. pylori afec- la Agencia Internacional para la Investiga-
ta a más de la mitad de la población adul- ción del Cáncer (8, 10, 16). Desafortuna-
ta en todo el mundo, hoy, 30-80% de la damente, su persistencia en el estómago
población mundial está infectada con este causa inflamación gástrica crónica y daño
organismo pero la prevalencia de la infec- tisular, lo que lleva a alteraciones que pue-
ción por H. pylori varía ampliamente según den evolucionar a enfermedades gástricas
el área geográfica, la edad, la raza, el nivel graves, asociada con úlcera péptica y lin-
socioeconómico y los factores bacterianos foma gástrico (17). Aunque la mayoría de
específicos de la cepa (3, 7-8). Los prin- los pacientes infectados no desarrollarán
cipales modos de transmisión se consi- ninguna complicación clínicamente signi-
deran fecal-oral y oral-oral, pero algunas ficativa, la infección por H. pylori confie-
pruebas indirectas informan la transmisión re un 1% - 10% de riesgo de desarrollar
a través del agua potable y otras fuen- úlceras gástricas o duodenales, un 0.1%
tes ambientales (9-10). En Colombia se - 3% de riesgo de desarrollar adenocar-
ha descrito su ocurrencia en material de cinoma gástrico y <0.01% de desarrollo
biopsias gástricas y se han llevado a cabo de linfoma de tejido linfoide asociado a la
estudios seroepidemiológicos. Las zonas mucosa (18-21). Además, la erradicación
montañosas de Colombia como Pasto y de H. pylori puede disminuir rápidamente
Medellín, ofrecen altas tasas de prevalen- la inflamación activa en la mucosa gástri-
cia con 93% y 67,1% respectivamente, en ca, prevenir la progresión hacia lesiones
comparación con las tasas medias de las precancerosas y la atrofia gástrica reversa
zonas planas como San Gil y algunos mu- antes del desarrollo de metaplasia intes-
nicipios del Meta con 48% y 61,2% respec- tinal (15, 22). Por lo tanto, la erradicación
tivamente (11). Sin embargo en Colombia parece ofrecer el enfoque más directo
no se han hecho estudios de prevalencia para reducir las enormes consecuencias

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humanas y económicas de la infección por factores implicados en el fallo terapéutico


H. pylori (23). es la resistencia a los antimicrobianos uti-
lizados, por lo que es de vital importancia
Además de los trastornos gastrointestina- determinar la sensibilidad antimicrobia-
les, H. pylori también desempeña un pa- na mediante pruebas basadas en cultivo
pel en las enfermedades extradigestivas, como difusión en disco, microdilución en
incluidas la anemia ferropénica inexplica- caldo, E-test y dilución en agar. Este últi-
ble, la púrpura trombocitopénica idiopáti- mo establecido como método de referen-
ca crónica, el retraso del crecimiento y la cia por el National Committee for Clinical
deficiencia de vitamina B12 (24-25). Un Laboratory Standards (NCCLS) y actual-
diagnóstico primario confiable y control del mente Clinical Laboratory Standards Ins-
éxito del tratamiento de la infección por H. titute (CLSI) (29, 20). El método epsiló-
pylori es crucial para pacientes con un am- metro o E-test es altamente concordante
plio espectro de afecciones relacionadas con el método de referencia y su uso está
(26-27). El diagnóstico preciso de la infec- recomendado por la British Society for An-
ción por H. pylori implica el conocimiento, timicrobial Chemotherapy (BSAC) (30).
esfuerzo e investigación combinados de
laboratorios, gastroenterólogos y patólo- Las ventajas de la prueba dilución en agar
gos (26). Si H. pylori aumenta el riesgo de incluyen la reproducibilidad de los resul-
desarrollar otras enfermedades, el costo tados y el desarrollo satisfactorio de la
de la morbilidad asociada a este microor- mayoría de los microorganismos de difícil
ganismo podría ser mucho mayor (14). crecimiento (20). Sin embargo, entre sus
desventajas están la compleja metodolo-
El tratamiento de las infecciones produci- gía requerida para su desarrollo y el alto
das por H. pylori puede realizarse con la costo por prueba. Generalmente no se
combinación de diferentes antibióticos, realiza en laboratorios clínicos de rutina
entre ellos claritromicina, amoxicilina, te- pero es ideal para laboratorios regionales
traciclina y metronidazol y un inhibidor de de referencia o laboratorios de investiga-
la bomba de protones que disminuye la ción que analizan un gran número de ce-
secreción clorhídrica del estómago. Las pas (26). En contraste, el E-test, descrito
monoterapias no han demostrado utilidad recientemente, es el método de elección
clínica y se recomienda el empleo de te- para uso en laboratorios de rutina e inves-
rapias dobles, triples o incluso cuádruples tigación y se basa en la combinación de
(27). las pruebas de difusión en disco y dilución
en agar entregando una sofisticada pero
Los medicamentos que generan más re- fácil y reproducible metodología (31).
sistencia antimicrobiana son los nitroimi-
dazoles (metronidazol y tinidazol), presen- Por lo anteriormente expuesto, este trabajo
tando una tasa de resistencia aproximada pretende, mediante una revisión sistemá-
del 35% en los países industrializados tica de la literatura acerca del tema de la
(13). En países como Colombia, donde el reproducibilidad de las pruebas y su ade-
uso indiscriminado de antibióticos es muy cuada utilización, ya que es de gran impor-
frecuente, la tasa de resistencia es mucho tancia al momento de realizar diagnósticos
mayor, razón por la cual algunos grupos certeros sobre la sensibilidad o resisten-
no utilizan este medicamento en la terapia cia de un microorganismo hacia los anti-
de erradicación contra H. pylori (28). microbianos (32), por tanto es necesario
Por lo anteriormente descrito uno de los establecer si las pruebas utilizadas para

150
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

tal fin reúnen las condiciones necesarias artículos fueron la base de la construcción
para seleccionarla como prueba de rutina de este texto y se encuentran referencias
capaz de generar resultados confiables al final del mismo.
que ayuden a direccionar el tratamiento
adecuado basado en la susceptibilidad y Resultados Y Discusión:
no en lo que se recomienda comúnmente. El tratamiento de la infección por H. pylori
es difícil, y de los ensayos clínicos iniciales
Metodología: parece que la actividad in vitro no siempre
Se realizó revisión sistemática de literatu- se correlaciona con el éxito in vitro y que
ra que recopila y sintetiza los resultados la recaída ocurre frecuentemente después
de múltiples investigaciones con el obje- de la eliminación aparentemente exitosa
tivo de realizar una evaluación crítica que del organismo con diversos agentes an-
permite resumir y abordar lo más relevan- timicrobianos (20). Los tratamientos de
te del tema. erradicación se han desarrollado duran-
te los últimos 20 años, este consiste ge-
Se dispuso una amplia búsqueda de ma- neralmente en varias combinaciones de
terial virtual tanto en libros como en las medicamentos. Actualmente hay al me-
bases de datos que ofrecen los paquetes nos ocho medicamentos antimicrobianos
de la Universidad Libre seccional Pereira. disponibles para tratar la infección con H.
Para la bibliografía en español se empleó pylori: amoxicilina, tetraciclina, claritromici-
dialnetplus, google académico y scielo; na, metronidazol, levofloxacina, tinidazol,
para los textos en inglés pro-quest, Pub- furazolidona y rifabutina (33). Más común-
Med, scopus, google academic y scien- mente, un supresor de ácido (generalmen-
cedirect. Se usaron como palabras clave: te un inhibidor de la bomba de protones) o
Helicobacter pylori, farmacorresistencia un antagonista del receptor de histamina
microbiana, antibióticos y bacteria (Heli- (receptor H2) se prescribe en combinación
cobacter pylori, drug resistance microbial, con dos de los antibióticos, generalmente
anti-bacterial agents, bacteria; en inglés), amoxicilina, metronidazol o claritromicina
en compañía de operadores booleanos durante 7-14 días. La combinación de dos
(AND – OR) y de otras palabras que fue- antibióticos puede aumentar el éxito de la
ron de ayuda, las cuales fueron: Pruebas terapia de erradicación y disminuir la posi-
de susceptibilidad, correlación, E-test, di- bilidad de resistencia secundaria a los an-
lución en agar y difusión en discos. tibióticos (33-36). La triple terapia empírica
estándar ahora solo se recomienda en re-
De la búsqueda preliminar se obtuvieron giones donde se sabe que la resistencia a
67 artículos en español y 238 en inglés; la claritromicina es menor del 15% -20% y
de los cuales solo se escogieron aquellos en pacientes sin antecedentes de exposi-
que cumplieran el requisito de ser publi- ción previa a macrólidos. Si bien no se ha
cados en los últimos 5 años. También se desarrollado un nuevo tratamiento como
descartaron títulos que tuvieran un enfo- alternativa a la terapia triple estándar, es-
que diferente al descriptivo sin discriminar tudios recientes han descrito las ventajas
si estos eran científicos o de revisión. Y de utilizar diferentes combinaciones de
por último se eliminaron todos aquellos ar- antibióticos conocidos o la duración pro-
tículos de revisión. Finalmente se concluye longada del tratamiento (25, 37).
con 6 artículos en español y 55 en ingles
que, previo a su sutil lectura, se decidió El éxito de estos tratamientos ahora se ve
solo emplear 51 respectivamente. Estos comprometido por el aumento en la resis-

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tencia a los antimicrobianos que represen- las cepas de H. pylori resistentes a la cla-
ta el principal factor clave para el fracaso ritromicina, la amoxicilina, el metronidazol
del tratamiento pero se debe incluir tam- y la levofloxacina se han vuelto cada vez
bién el compromiso de los pacientes por más prevalentes en todo el mundo (27,
el mismo, los antecedentes genéticos in- 31). La resistencia a la tetraciclina y la ci-
dividuales, cargas bacterianas gástricas profloxacina ha sido reportada por varios
masivas, bacterias internalizantes, alta estudios, pero todavía parece poco común
acidez gástrica, polimorfismos génicos (IL- (32).
1B y CYP2C19), lavado y dilución de an-
timicrobianos, formación de biopelículas La resistencia a los antibióticos en H.
(19, 38). Se estima que en un 20% de los pylori es la causa principal del fracaso de
pacientes con H. pylori positivos, las tera- la erradicación. La resistencia creciente
pias empíricas de primera línea fracasan a menudo es paralela a los patrones de
por lo tanto, los médicos deben prescribir consumo de antibióticos, y puede variar
terapias de segunda línea para erradicar dentro de los grupos de pacientes según
H. pylori (39). Varios factores impulsan el la región geográfica, la edad y el sexo del
desarrollo de resistencia antimicrobiana paciente, el tipo de enfermedad, el lugar
con el número de fracasos anteriores del de nacimiento y la presencia de otras in-
tratamiento, siendo este el más importan- fecciones (32). Para superar el problema
te. Recientemente se ha demostrado que de la resistencia a los antimicrobianos y
después de una sola terapia sin éxito, la aumentar las tasas de curación de los tra-
resistencia a la claritromicina aumentó tamientos iniciales, se están desarrollando
al 60%; otros intentos de tratamiento en nuevas combinaciones de fármacos a par-
vano dieron como resultado una resisten- tir de las fórmulas existentes (12, 27). El
cia tan alta como 80% lo cual disminuye aumento de la resistencia ha complicado
considerablemente las tasas de curación aún más la búsqueda de un régimen de
(31). Dado que la resistencia a los antibió- tratamiento óptimo y también ha enfocado
ticos es el principal determinante del fra- una nueva atención hacia métodos confia-
caso del tratamiento, existe una necesidad bles para determinar la susceptibilidad in
continua de definir las tasas de resisten- vitro de esta especie bacteriana (23).
cia localmente y controlar estos patrones
cambiantes de susceptibilidad para guiar Los estudios de vigilancia continua que
la terapia óptima (40). controlan el estado actual de la resistencia
a los antimicrobianos son indispensables
La proporción de pacientes en quienes la para establecer directrices actualizadas
infección se erradica después del trata- sobre los tratamientos de erradicación de
miento oscila entre 60% y 95% (21). En primera línea (45). Al igual que otras bac-
todo el mundo, la resistencia a los antimi- terias, la resistencia de H. pylori a los an-
crobianos de H. pylori es alta, y parece es- tibióticos que da como resultado una falla
tar aumentando para al menos tres de es- en el tratamiento de primera línea varía
tos ocho agentes, claritromicina 0% a 45%, entre 40% y 70%. Por lo tanto, es impor-
metronidazol 10% a 90% y levofloxacina tante controlar las tasas de resistencia en
6% a 21% (41-43). En paralelo, la resis- diferentes países y poblaciones (21). El
tencia doble a claritromicina y metronida- tratamiento de las infecciones causadas
zol se disparó al 65% y la resistencia triple por H. pylori requiere que se preste es-
a claritromicina, metronidazol y quinolonas pecial atención a los métodos confiables
aumentó a 15% (44). Comprensiblemente, para determinar la susceptibilidad in vitro

152
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

de este microorganismo, adquiriendo así Prueba de susceptibilidad antimicro-


una mayor importancia la aplicación de biana
estas pruebas (3). Todo con el propósito Cultivar H. pylori es difícil, lento y costoso,
de mejorar la eficacia de los regímenes y es un medio poco práctico para estable-
de tratamiento y para garantizar el ma- cer el diagnóstico de infección (17). Pero
nejo adecuado de la infección a pesar a pesar de esto es el paso principal para
de que las directrices internacionales re- poder aplicar todas las pruebas de sus-
comiendan el cultivo más las pruebas de ceptibilidad correspondientes. Los compo-
susceptibilidad a antibióticos para guiar el nentes de los medios incluyen una base
tratamiento de tercera línea después del de agar, suplementos de crecimiento y
fracaso de dos esquemas previos. No se suplementos selectivos (38). Cuando fal-
considera este enfoque como obligatorio tan nutrientes, H. pylori pierde su forma de
antes del tratamiento de primera y segun- espiral y se transforma en forma cocoide
da línea (21,40). progresivamente. La mayoría de la gente
cree que estas formas son tanto no culti-
El diagnóstico de la infección por H. pylori vables como inviables. Sin embargo, otros
se divide en métodos invasivos y no inva- afirman que algunos de ellos pueden ser
sivos. Las pruebas diagnósticas invasivas viables pero no cultivables y constituyen
incluyen imagen endoscópica, histología, una forma resistente de la bacteria (38).
prueba rápida de ureasa, cultivo y métodos El cultivo permite probar la sensibilidad a
los antibióticos de H. pylori para elegir los
moleculares. Las pruebas diagnósticas no
agentes apropiados para la erradicación.
invasivas están basados en ​​ la detección
Además, el aislamiento de bacterias nos
de un antígeno o anticuerpo en heces o
ha permitido tener una mejor comprensión
sangre muestras o en la prueba de aliento
de los patógenos y la interacción del hués-
con urea (34, 46). Se debe destacar que
ped y el desarrollo de vacunas (38, 47).
en la lectura de la bibliografía no existen
En general, el cultivo tiene casi el 100%
recomendaciones sobre si se deben tomar de especificidad, pero la sensibilidad del
una o más biopsias gástricas para evaluar cultivo muestra una variación significativa,
la resistencia de H. pylori a los antibióticos, entre 85% -95% (19). Los métodos basa-
pero debido a la distribución desigual de la dos ​​en el cultivo, que incluyen la prueba
bacteria en la mucosa gástrica, las biop- E-test, la dilución en agar, la microdilución
sias de varios sitios del estómago podrían en caldo y los métodos de difusión en dis-
aumentar el rendimiento diagnóstico para co, generalmente se realizan para la prue-
la detección de H. pylori y es probable que ba de susceptibilidad a antibióticos de H.
el éxito de las terapias de erradicación (27, pylori. Estos son aplicables para todos los
39). A pesar de la disponibilidad actual de agentes antimicrobianos, que se prueban
estos métodos diagnósticos, cada método a través de diluciones en serie de varias
tiene sus propias ventajas, desventajas y concentraciones (15).
limitaciones. La elección de uno u otro mé-
todo podría depender de la disponibilidad Los métodos fenotípicos habituales de
y accesibilidad de las pruebas de diagnós- las pruebas de susceptibilidad pueden
tico, el nivel de los laboratorios, la relación aplicarse a H. pylori, pero dado que la re-
de probabilidad de las pruebas positivas y sistencia se debe esencialmente a muta-
negativas y las condiciones clínicas de los ciones puntuales, también se utilizan mé-
pacientes (32, 47). todos genotípicos, especialmente para la
claritromicina (38). Entre los métodos fe-
notípicos que son los que permiten estas

153
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pruebas se encuentran: antimicrobianos. La prueba de E-test es


una tira de plástico que contiene gradien-
Método de dilución de agar tes crecientes de concentración antimicro-
El método de dilución en agar, general- biana, continuos y exponenciales en un
mente considerado el método de refe- lado y una escala de CIM gradual gradua-
rencia para comparar otras técnicas (38). da que cubre 15 diluciones dobles en el
El “Instituto de Estándares Clínicos y de sitio opuesto (24, 41, 48). En la mayoría
Laboratorio” (CLSI) ha aprobado solo el de los casos, los resultados se interpre-
método de dilución de agar, pero requiere taron fácilmente para la mayoría de los
mucho tiempo, trabajo intensivo y útil para fármacos, ya que las elipses de inhibición
probar simultáneamente una gran canti- generalmente estaban claramente demar-
dad de cepas. No es adaptable a un pe- cadas y el punto de intersección del borde
queño número de cepas, por lo que no es de la zona con la tira también estaba bien
práctico realizarlo rutinariamente. Se han delineado (24). El método E-test tiene la
informado también dos métodos alternati- ventaja de ser un método cuantitativo con
vos el método de difusión del disco y la una expresión directa de CIM, su estable
prueba del Epsilómetro (E-test) (14). de liberación de antibióticos y una toleran-
cia a la incubación prolongada y además,
Prueba de difusión de disco. está adaptado a bacterias de crecimiento
El método de difusión en disco es el más lento como H. pylori. Se ha encontrado
simple, económico para las pruebas de una buena correlación entre este método
susceptibilidad de rutina y adaptable a la y el método de dilución en agar, con la ex-
práctica clínica. Sin embargo, general- cepción del metronidazol (47, 49).
mente no se recomienda para bacterias
de crecimiento lento (14, 38). El método A través de la bibliografía hemos encontra-
de difusión del disco consiste en colocar do diversos ejemplos del uso y compara-
un disco recubierto de antibiótico directa- ción de las diferentes pruebas de suscep-
mente en la placa de agar inoculada con tibilidad para determinar así la correlación
H. pylori y determinar la zona de inhibición existente entre los resultados de las mis-
del crecimiento bacteriano. Este método mas. Glupczynsky et al. (1991) demostró
rentable es ampliamente utilizado para la la correlación entre los resultados de las
prueba de susceptibilidad antimicrobiana pruebas por dilución en agar y los méto-
para una variedad de microorganismos, dos de E-test en general, el 86% de los
pero los criterios de difusión del disco resultados estuvieron dentro de la dilución
para la prueba de susceptibilidad antimi- de 1 log2 y el 99,5% en los pasos de dilu-
crobiana para H. pylori no han sido hasta ción de 2 log2. No se encontraron errores
la fecha definidos (27). Incluyendo que es mayores o mayores entre el E-test y las
inapropiado para microorganismos como CIM de dilución en agar. Sin embargo, de-
H. pylori, que requieren una atmósfera mi- mostró que para el metronidazol, algunas
croaerófila, un tiempo de incubación pro- cepas produjeron crecimiento de numero-
longado y numerosos aditivos en el medio sas colonias pequeñas dentro de la zona
de crecimiento (35). de elipse de inhibición. Estas colonias
generalmente se identificaron claramente
E-test. y se interpretaron como aislados resisten-
La prueba del épsilómetro es un nuevo tes. Lograron también la identificación de
método de prueba de susceptibilidad in vi- algunas cepas que produjeron zonas de
tro diseñado para la determinación cuan- inhibición elíptica difusa mal definidas, es-
titativa de la susceptibilidad a los agentes pecialmente con tetraciclina.

154
MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

Piccolomini et al. (1997) en su estudio eva- disco. En cuanto a la prueba de sensibili-


luaron la confiabilidad de los resultados dad a la difusión de disco de antibióticos,
obtenidos mediante el uso de la metodolo- la sensibilidad fue de 37.5% en tetraciclina
gía de la prueba E-test comparándola con 100.0% en claritromicina, 0% en metro-
la dilución en agar y la microdilución en nidazol, 87.5% en ciprofloxacina, 12.5%​​
caldo para determinar la susceptibilidad en amoxicilina. Mientras que con respec-
cuantitativa de H. pylori a 20 agentes an- to a la prueba E-test, la claritromicina fue
timicrobianos. La máxima CIM se observó intermedia en 50.0%, la sensibilidad en
para metronidazol 32 mg/ml por los tres Metronidazol fue 0%, ciprofloxacina en
métodos. La prueba E-test arrojó un ma- 75%, tetraciclina en 25%. En este traba-
yor número de resultados que indicaron jo, la tasa de resistencia al metronidazol
resistencia que los métodos de referencia detectado por el E-test fue 100%, reveló
cuando se probó el metronidazol. En ge- una alta tasa de resistencia a la amoxici-
neral, el 91,3% de las CIM determinadas lina mediante la prueba E-test del 87.5%.
por la prueba E-test se encontraban den- También se halló una alta tasa de resis-
tro de la dilución 1 log2 y el 98,8% estaban tencia a la claritromicina, del 100% por el
dentro de las diluciones 2 log2. La prueba método de difusión del disco, sin embargo,
E-test tuvo un acuerdo superior al 80% solo el 50% se confirmaron resistentes a
con la referencia métodos a excepción de
la claritromicina mediante la prueba E-test.
las pruebas con tetraciclina (70.8%) por la
microdilución en caldo.
Ogata et al. (2014) en su estudio evaluó la
confiabilidad de la prueba E-test y la difu-
Nuevamente Glupczynsky et al. (2002)
sión en disco comparando con el método
realizó un estudio multicéntrico en donde
de dilución en agar para evaluar la sus-
evaluó la fiabilidad de la prueba E-test en
comparación con el método de dilución de ceptibilidad antimicrobiana de H. pylori. El
agar de referencia. En general, la variabi- metronidazol mostró el nivel de resistencia
lidad inter e intralaboratorio de los resul- más alto: 40,2%, 33,7% y 39,9% mediante
tados de la dilución en agar resultó baja el método de dilución en agar, E-test y di-
para claritromicina y amoxicilina (es decir, fusión en disco, respectivamente. La clari-
respectivamente, menos de 2 y 3 varia- tromicina presentó una tasa de resistencia
ciones de log2 en los resultados de CIM del 19.5% mediante el método de dilución
obtenidos para todos los aislamientos de en agar y mediante la prueba E-test un
H. pylori por los cuatro centros participan- 20.8%. La difusión de disco mostró resis-
tes) independientemente de la asociación tencia en 38.9%. La amoxicilina mostró
de parámetros. Por el contrario, la variabi- 10.4% de tasa de resistencia por dilución
lidad de los resultados de la CIM para el de agar y 9% por E-test, pero presentó la
metronidazol fue mucho mayor. Para este mayor tasa de resistencia por difusión de
antimicrobiano solo se encontró una con- disco (68.8%). Determinó que las princi-
cordancia moderada entre los resultados pales diferencias fueron el precio de cada
de la prueba E-test y los de la dilución de prueba y el tiempo consumido para prepa-
agar, con solo 57.5% y 77.5% de todos los rar cada uno. La dilución de agar necesita
valores CIM que muestran concordancia una dilución secuencial de antimicrobia-
dentro de 1 log2 y dentro de 2 log2 dilucio- nos y utiliza y fue la prueba más laboriosa
nes, respectivamente. y que requirió mucho tiempo para prepa-
rarse, sin embargo se podian evaluar 20
Fathi et al. (2013) evaluó la correlación muestras en cada placa.
entre la prueba de E-test y la difusión en

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Selgrad et al. (2014) inició su estudio con de metronidazol por la “CLSI”: susceptible
la hipótesis de si la toma y el análisis de ≥ 21 mm, intermediario 16-21 mm y re-
biopsias del antro y el corpus podían au- sistente < 16 mm. El punto de inflexión a
mentar el rendimiento diagnóstico para otros antimicrobianos se basó en estudios
optimizar la terapia guiada por la suscep- previos con metodología similar: amoxici-
tibilidad a antibióticos de H. pylori. En el lina susceptible ≥ 25mm y resistente a la
estudio se demostró que la susceptibilidad amoxicilina < 25 mm, claritromicina sus-
a diferentes antibióticos entre el antro y ceptible ≥ 21 mm y claritromicina resisten-
las biopsias del cuerpo es un fenómeno te < 21 mm, y furazolidona susceptible ≥13
común y también se produce en la erradi- mm y resistente a furazolidona < 21 mm
cación sin tratamiento previo en pacientes (31, 46).
previamente tratados. De acuerdo con es-
tudios previos se encontró una susceptibi- De las muchos pruebas de diagnóstico
lidad antibiótica discordante comparativa- disponibles para la detección de la infec-
mente alta a claritromicina y metronidazol ción por H. pylori, cada una de ellas tie-
entre el antro y las biopsias del cuerpo. ne ciertas ventajas y desventajas. Ya sea
debido a la baja sensibilidad o especifici-
Di Giulio et al (2016) determinó el perfil dad, ninguno de ellos puede considerarse
de susceptibilidad de ciertas cepas de H. como el estándar de oro “Gold standart”
pylori mediante el uso de E-test y la dilu- (47). A pesar de que el Comité Nacional de
ción en agar pero incluyendo en este estu- Normas de Laboratorio Clínico estandari-
dio la toma de biopsias del antro y el fondo zó y aprobó el método de dilución en agar
del estómago como en el estudio anterior. como método de referencia para la prue-
Se mostró una concordancia total de los ba de sensibilidad de H. pylori, este no es
resultados entre el E-test y la placa de agar adecuado para las pruebas individuales
de tres sectores. La evidencia más clara de cepas únicas en la práctica diaria (16).
fue el mayor porcentaje de resistencia a La prueba E-test, por otra parte, se ha uti-
claritromicina tanto en el antro como en lizado con frecuencia para la prueba de
el fondo, y el mayor porcentaje de cepas susceptibilidad de H. pylori, y los resulta-
resistentes a metronidazol, levofloxacina, dos se han correlacionado estrechamente
amoxicilina, ciprofloxacina en fondo gástri- con los resultados de la dilución de agar
co con respecto al antro. Sin embargo, no en algunos estudios pero no en otros. Los
hubo diferencias significativas en ninguno resultados variaron especialmente con
de los casos. respecto al metronidazol (27, 35). Estu-
dios previos han demostrado que la tasa
A través de la literatura se lograron deter- de resistencia al metronidazol determina-
minar cómo criterios interpretativos para da por la prueba E-test podría sobreesti-
las CIM de las pruebas: no existe un punto marse en un 10-20% en comparación con
de corte estandarizado CIM para H. pylori la determinada por el método de dilución
para la prueba de dilución en agar, excep- en agar (40-41).
to para claritromicina (CIM ≥ 1 μg/ml, e in-
termedios si CIM = 0.5 μg/ml). El punto de La prueba E-test es mucho menos labo-
corte CIM para otros antimicrobianos se riosa y es más fácil de realizar que el mé-
basó en la literatura (CMI ≥ 2 μg/ml para todo de dilución en agar, adicionalmente
amoxicilina y furazolidona, ≥ 4 μg/ml para que ha demostrado una excelente corre-
tetraciclina y ≥ 8 μg/ml para metronida- lación con el método de dilución en agar
zol). Para la difusión en disco el estándar para la mayoría de los antibióticos Ade-

156
MICRO - CIENCIA
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más, la prueba E-test requiere el material nicho ecológico y a la naturaleza frágil de


y los principios del ampliamente usado la bacteria. La detección ha sido un tema
método de susceptibilidad a la difusión de gran interés desde el descubrimiento
del disco (21, 33, 50). Entre los métodos de la bacteria en 1982, pero incluso aho-
de prueba de susceptibilidad fenotípica, la ra, no se puede proponer un método per-
prueba de difusión en disco es el método fecto. Se debe establecer un régimen de
más fácil y económico, pero no se reco- tratamiento antibiótico juicioso para una
mienda para especies bacterianas que mayor prevención del desarrollo de la re-
crecen lentamente Se recomienda E-test sistencia a H. pylori a otros agentes an-
como el mejor y más simple método para tibióticos; esto podría lograrse mediante
la evaluación de susceptibilidad antibióti- la realización de ensayos de diagnóstico
ca de rutina para H.pylori, a pesar de que adecuados antes del inicio del tratamiento.
su costo es más elevado en comparación Las pruebas de susceptibilidad son renta-
a las otras metodologías (9, 50, 40). Sin bles, previene la administración de antibió-
embargo, combinaciones de más de una ticos ineficaces y permite la adaptación de
prueba por lo general dan el diagnóstico un tratamiento individual que sea exitoso
bastante satisfactorio (47, 49). para los pacientes. Es necesario analizar
en el futuro si las pruebas de susceptibili-
Cualquier terapia de una enfermedad in- dad posteriores son útiles una vez que un
fecciosa se basa en gran medida en los tratamiento guiado por resistencia ya no
resultados de las pruebas de susceptibi- ha tenido éxito.
lidad, y los resultados de la erradicación
de H. pylori se optimizan cuando hay dis-
ponibles resultados de susceptibilidad es- Referencias Bibliográficas:
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laboratorios que tienen la capacidad de Serological methods for diagnosis of
realizar cultivos y pruebas de sensibilidad H. pylori infection and monitoring of
de aislados de H. pylori; por lo tanto, la in- eradication therapy. European Jour-
nal of clinical microbiology and infec-
formación necesaria para seleccionar los
tious disease, 19 (3) 164-173.
mejores agentes para usar en base a las
3. Yamada, T. Current European con-
pruebas de sensibilidad a menudo no está cepts in the management of Helico-
disponible (41). Las pruebas de suscepti- bacter pylori infection. The Maastricht
bilidad en etapas más tempranas podrían Consensus Report. 1997;41:8-13.
ser de mayor beneficio para los pacientes 4. Piccolomini R, Bonaventura G, Ca-
afectados y pueden ayudar a los médicos tamo G, Carbone F, Neri M. Compa-
a seleccionar un tratamiento de erradica- rative Evaluation of the E Test, Agar
ción apropiado. Dilution, and Broth Microdilution for
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UNIVERSIDAD LIBRE
Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

INSTRUCCIONES PARA LOS AUTORES

• Los artículos enviados deben ajustar- análisis empleado e indicar el paque-


se a los requisitos uniformes para los te estadístico utilizado. En esté aparte
manuscritos enviados a revistas bio- debe de mencionarse el seguimiento
médicas del grupo Vancouver 2016. de las normas éticas de investigación
• Los manuscritos deben enviarse en científica en humanos y la aplicación
texto original, en idioma español, úni- de consentimiento informado cuando
camente al correo electrónico: micro- sea el caso, ajustarán a los principios
ciencia.pei@unilibre.edu.co contenidos en la Declaración de Hel-
• El artículo se acompaña de la autori- sinki de la Asociación Médica Mundial.
zación por parte de los autores. (VER • Los resultados deben presentarse se-
ANEXO 1). cuencialmente apoyados en tablas,
• El texto no debe exceder 12 páginas gráficas y figuras con su leyenda, en
tamaño carta, escrito a interlineado el texto deben mencionarse solo los
1.5, con márgenes 2.5 c.m en el lado datos más relevantes evitando la ten-
izquierdo y derecho, 3 c.m superior e dencia a repetir todos los datos obser-
inferior, tipo de letra Times New Ro- vados en las tablas.
mán, tamaño de la fuente 12, título y • La discusión debe estar destinada a
subtítulos en mayúscula y negrilla. comparar los resultados obtenidos con
• El título del trabajo debe contener en- otras investigaciones o referencias
tre 12 y 16 palabras. El nombre del au- teóricos y con las posiciones y análisis
tor y los coautores se ubicarán a con- delos autores respaldados científica-
tinuación del título y a pie de página mente.
aparecerá el nombre de la institución • Las conclusiones deben referirse a
a la que pertenece, el grupo y línea de los hallazgos y de esta manera deben
investigación, además el correo elec- desprenderse de los resultados y su
trónico. discusión. Evite emitir conclusiones
• El resumen del artículo no debe con- producto de posiciones propias pero
tener más de 250 palabras, incluye que no tienen el respaldo en los datos
el objetivo, metodología, resultados y obtenidos en el estudio. Cuando sea
conclusiones; debajo del resumen los apropiado se pueden incluir recomen-
autores indicarán no más de 5 pala- daciones.
bras clave, presentadas también en
idioma inglés. (http://www.ncbi.nlm.
ARTICULOS DE REVISION- ARTICU-
nih.gov/mesh/ y http://decs.bvs.br/ ).
LOS DE REFLEXION:
• La introducción debe ser breve y pro-
porcionar solo la explicación necesaria • Si se trata de artículos de revisión y re-
para que el lector pueda comprender flexión el contenido del texto no debe
el texto y la continuación. Al final debe exceder 15 páginas tamaño carta, es-
contener un párrafo que exponga de crito a interlineado 1.5, con márgenes
forma clara los objetivos del trabajo. 2.5 c.m en el lado izquierdo y derecho,
• La metodología debe describir el tipo 3 c.m superior e inferior, tipo de letra
y enfoque del estudio, la población, el Times New Román, tamaño de la fuen-
muestreo, los instrumentos y el mé- te 12, título y subtítulos en mayúscula
todo de recolección de datos, tipo de y negrilla.

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MICRO - CIENCIA
Investigación, Desarrollo e Innovación

• En artículos de revisión el autor debe pertenece el artículo, sin abreviar/año de


presentar de forma amplia y critica la publicación; volumen/número de la revista
bibliografía referente a un tema, si- (entre paréntesis): rango de páginas.
tuada en una perspectiva específica y Ejemplo: Nissinen A, Berrios X. Puska P.
exponiendo tendencias y avances, lo intervenciones comunitarias contra las
cual implica una extensa revisión bi- enfermedades no transmisibles: lesiones
bliográfica (mínimo 50 referencias). de los países desarrollados para los países
• En artículos de reflexión el autor anali- en desarrollo. Boletín de la organización
za, interpreta o hace una crítica sobre mundial de la salud. 2001, 79 (10): 963-
un tema, a partir de las fuentes origi- 970.
nales. Es una contribución original y
actual. LIBROS: Apellido completo e iniciales del
• Cuando se trate de artículos sobre re- nombre del autor o autores, separados
visión de temas o reflexiones el articu- por coma. Título del libro y subtitulo (si lo
lo debe contener una introducción. hay) separados por dos puntos. Numero
• Agradecimientos: este aparte es op- de edición o reimpresión indicados con
cional y se refiere a la citación de per- la abreviatura ed. o reimpr. (este dato se
sonas, instituciones u otros que hayan omite cuando corresponda a la primera
colaborado con la realización del tra- edición) ciudad de publicación: editorial:
bajo. año de publicación páginas. Ejemplo:
• Referencias Bibliográficas: las refe- Ackley BJ, Landwing GB, Manual de
rencias se deben numerar secuencial- diagnósticos de enfermería 7a ed. Madrid:
mente en el texto por medio de núme- editorial elsevier;2007. p. 395-425
ros arábigos elevados (superíndice),
en texto plano, es decir, sin utilizar REFERENCIAS ELECTRÓNICAS:
hipervínculos de notas al final. El lis- Deben seguir el siguiente formato: autor,
tado de referencia debe aparecer al en caso de no contar con el autor, se
final del texto bajo el título: “referen- debe consignar la institución responsable
cias bibliográficas” y cada una debe por la publicación. Título del articulo o
comenzar con el apellido del autor y documento. [internet] Disponible en: anotar
luego las iniciales del nombre, sin sig- la dirección electrónica, acceso, fecha de
nos de puntuación entre estos dos ele- consulta. Ejemplo: Pro familia. Encuesta
mentos. Si son varios autores se de- nacional de demografía y salud 2005.
ben escribir un máximo de seis; si son [internet] disponible en: www.profamilia.
más de este número deben citarse los org.co/encuestas/00resumen/01 general.
seis primeros y luego la abreviatura et htm. acceso marzo 13 de 2006.
al. Los nombres de los autores deben
separarse con comas. Atentamente:
Comité editorial
Las referencias deben seguir el siguiente Revista MICROCIENCIA
formato de acuerdo a los requisitos Correo:
uniformes para manuscritos enviadas a microciencia.pei@unilibre.edu.co
revistas biomédicas: ISSN: 2323-0320

REVISTAS: Autor o autores. Título del


articulo y subtitulo (si lo hay) separados
por dos puntos. Título de la revista a que

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Seccionales Pereira, Barranquilla, Socorro.

ANEXO 1:

Autorización de publicación de Artículos

Los autores abajo firmantes certifican que:

El artículo entregado es original, no infringe las leyes de derechos de autor o cualquier otra
ley de derechos de propiedad coherente con estas. No ha sido publicado previamente y
no ha sido enviado para publicación en otra revista. La revisión del artículo se ha hecho
por todos los autores, los cuales estamos de acuerdo con el mismo.

Autorizamos a la Universidad Libre Pereira o con quien ella previamente tenga


convenios de difusión para su edición, publicación, reproducción, distribución y
divulgación a nivel nacional e internacional por medios impresos, digitales, Internet, CD
ROM, en texto completo o parcial, respetando siempre la titularidad de los derechos
morales correspondientes.

Sin perjuicio de los usos otorgados en desarrollo de este convenio continuaremos


conservando los correspondientes derechos sin modificación o restricción alguna,
puesto que, de acuerdo con la legislación colombiana aplicable, el presente es un
acuerdo jurídico que en ningún caso conlleva la enajenación del derecho de autor y de
sus conexos.

Cordialmente:

ACEPTO

Título del artículo:

Firma – documento de identidad de autores:

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