Temas 3 y 4 Taai

Técnicas Avanzadas de Análisis Instrumental.
TEMA 3: TÉCNICAS ESPECTROFOTOMÉTRICAS: ESPECTROFLUORIMETRÍA
FUNDAMENTOS BÁSICOS
La FLUORESCENCIA, FOSFORESCENCIA Y QUIMIOLUMINISCENCIA MOLECULAR son métodos

en los que las moléculas de analito son excitadas dando una especie cuyo espectro de
emisión suministra información para el análisis cualitativo y cuantitativo. Los tres métodos se
conocen como luminiscentes
Fluorescencia La excitación tiene lugar por

absorción de fotones.
Métodos luminiscentes Fosforescencia Métodos Fotoluminiscentes
La excitación tiene lugar

Quimioluminiscencia
mediante una reacción química
- Fluorescencia: Las transiciones electrónicas no implican un cambio de espín del electrón

- Fosforescencia: Las transiciones electrónicas implican un cambio de espín del electrón
- Quimioluminiscencia: Las partículas excitadas son los productos de una reacción entre el
analito y un reactivo adecuado
La determinación cuantitativa de especies orgánicas e inorgánica es a nivel de TRAZAS y presentan

las siguientes ventajas:
- Mayor sensibilidad y menores límites de detección (ppb)
- Gran intervalo lineal (mayor que en los métodos de absorción)
- Mayor selectividad que en los métodos de absorción
Aun así , estos métodos son menos aplicables que los de absorción debido al número relativamente
limitado de sistemas químicos que pueden producir fluorescencia
La fluorescencia tiene lugar e sistemas químicos gaseosos, líquidos y sólidos. Las especies
moleculares a veces presentan fluorescencia . A menudo se obtienen bandas de fluorescencia
moleculares ( o fosforescencia) centras a longitudes de onda más largas que la línea de resonancia.
El estado triplete es menos energético que

el estado excitado singlete. Una transición
singlete/triplete es menos probable que la
correspondiente a singlete/singlete. La
excitación por radiación de una molécula
en estado fundamental a un estado
excitado triplete tiene muy poca
probabilidad de que se produzca.
1 María Jesús Estudillo Parrado.

La FLUORESENCENCIA es un tipo particular de fenómeno de luminiscencia, que caracteriza a las

sustancias que son capaces de absorber energía en forma de radiaciones electromagnéticas y luego
emitir parte de esa energía en forma de radiación electromagnética de longitud de onda diferente.
- Su estudio proporciona información valiosa, tanto cualitativa como cuantitativa, sobre

aspectos estructurales de la molécula responsable, o de su relación con el medio que la rodea
- Debe producirse conversión interna y la probabilidad de que ocurra es alta
- Las transiciones electrónicas no implican un cambio de espín del electrón
- Es un proceso rápido que finaliza 10 -8 s después de la excitación por lo que no es posible
percibir la emisión de fluorescencia una vez eliminada la fuente de radiación
La FOSFORESCENCIA es el fenómeno por el cual ciertas sustancias tienen la propiedad de absorber

energía y almacenarla para emitirla posteriormente en forma de radiación. Posee el mismo
mecanismo físico que la fluorescencia, pero hay un retraso temporal entre la absorción y la
reemisión de los fotones de energía. Esta energía se libera lenta y continuamente.
- Debe producirse cruce entre sistemas y la probabilidad es menor

- Las transiciones electrónicas implican un cambio de espín del electrón
- El electrón se encuentra en un nivel energético más bajo por lo que es más estable
- Es un proceso más lento por lo que se puede ver a simple vista después de cesar la radiación
de excitación.
• El rendimiento cuántico (Φ) Es el cociente entre el número de moléculas que presentan

fluorescencia respecto al número total de moléculas excitadas o bien la de fotones emitidos
sobre fotones absorbidos
Kf
Φ=
∑ 𝐾𝑖
- Kf : Proceso de fluorescencia
- Ki : Resto de procesos de desactivación
• El tiempo de vida es el tiempo promedio que permanece la moléculas en su estado de excitación

antes de emitir un fotón
• Tiempos de transiciones en fluorescencia: La fluorescencia rara vez es el resultado de la absorción

de radiación de UV λ < 250 nm porque es suficientemente energética para producir desactivación
por disociación. Por tanto no se observa fluorescencia debida a transiciones σ→ σ*. La emisión se
restringe a transiciones π→π* y n→π*
-La fluorescencia la presentan con más frecuencia compuestos en los que π→π* es la transición de
mejor energía y no la transición n→π
-Los compuestos con posibilidad de transiciones con estructuras alifáticas a alicíclicas de carbonilo o
estructuras con dobles enlaces muy conjugados presentan fluorescencia
-Los sistemas aromáticos presentan fluorescencia
VARIABLES QUE AFECTAN A LA FLUORESENCIA Y FOSFORECENCIA
INFLUENCIA DE LA ESTRUCTURA MOLECULAR: La fluorescencia más intensa y la más útil es la

que presentan los compuestos con grupos funcionales aromáticos. Los compuestos que
tienen estructuras alifáticas y acíclicas de carbonilo o estructuras con dobles enlaces muy
conjugados pueden presentar también fluorescencia
Los heterocícliclos sencillos como los de la imagen no

presentan FLUORESCENCIA, porque la transición de
menor energía es la y n→π* que se transforma en
triplete favoreciendo la FOSFORESCENCIA
No obstante, si las estructuras se fusionan sí presentan FLUORESENCENCIA: Quinoleina,

Isoquinoleina,Indol.
Los hidrocarburos aromáticos no sustituidos son fluorescentes y aumenta con el grado de condensación:
Fenantreno.
Los grupos sustituyentes en los anillos bencénicos influyen en la fluorescencia. Los halógenos
disminuyen la fluorescencia con el nº Atómico del halógeno (EFECTO DEL ÁTOMO PESADO) porque
aumenta la probabilidad de cruzamiento entre sistemas favoreciendo la fluorescencia
𝐹 < 𝐶𝑙 < 𝐵𝑟 < 𝐼 (𝑑𝑖𝑠𝑚𝑖𝑛𝑢𝑐𝑖ó𝑛)
La sustitución de un carbonilo o un ácido carboxílico inhiben la fluorescencia porque la transición n→π*

es de menor energía que la π →π*
INFLUENCIA DE LA RIGIDEZ ESTRUCTURAL: Se ha observado que la fosforescencia está

favorecida en molécula con rigidez alta. La rigidez impide que se produzcan movimientos que
favorezcan la desactivación sin radiación. Es por ello que se aumenta la emisión fluorescente
cuando las sustancias absorben sobre superficies sólidas.
INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA: La fluorescencia disminuye con el aumento de la

temperatura porque aumenta el número de colisiones y la probabilidad de conversión
externa (desactivación sin radiación)
INFLUENCIA DE LOS DISOLVENTES: un aumento en la viscosidad de los disolventes aumenta

la fluorescencia. Además, emplear disolventes que contengan átomos pesados (Br4C; CH2I-
CH3) disminuye la fluorescencia, ya que se favorece la formación del estado triplete y por
tanto la fosforescencia
INFLUENCIA DEL OXÍGENO DISUELTO: generalmente disminuye la intensidad de la

fluorescencia (quenching), debido a las propiedades paramagnéticas del O2 que provoca
cruzamiento entre sistemas favoreciendo la fosforescencia.
INFLUENCIA DEL PH: La fluorescencia de un compuesto aromático con sustituyentes ácidos o

básicos en el anillo depende normalmente del pH. Tanto la longitud de onda como la intensidad de
emisión son probablemente diferentes para la forma ionizada y no ionizada del compuesto. LOS
PROCEDIMIENTOS ANALÍTICOS BASADOS EN FLUORESCENCIA REQUIEREN CONTROL ESTRICTO DEL PH
Anilina presenta fluorescencia en medio neutro y

básico en la región visible, pero desaparece en medio
ácido
Además, en compuestos con mayor numero de

formas resonantes, se favorece la estabilidad del
1º estado excitado y por ello hay fluorescencia en
la región UV. Si desaparece la posibilidad de
resonancia como en el caso del medio ácido,
desaparece la capacidad de fluo

RELACIÓN ENTRE LA CONCENTRACIÓN Y LA FLUORESCENCIA: La potencia de la emisión

fluorescente F es proporcional a la potencia radiante del haz de excitación absorbido por el
sistema .
La fluorescencia molecular es un método en el que las moléculas son excitadas dando un
espectro de emisión suministra información para el análisis cuantitativo y cualitativo
Al igual que en espectroscopia de absorción molecular, existe relación lineal ente la fluorescencia y
concentración
𝐹 =𝐾·𝐶
No siempre la fluorescencia aumenta con la concentración. Hay casos en los que la fluorescencia
disminuye al aumentar la concentración del analito de interés. A este fenómeno se le denomina
quenching o atenuación de la fluorescencia
ESPECTROS DE EMISIÓN Y EXCITACIÓN
La quinina proporciona un ejemplo clásico de especie

fluorescente; esta sustancia, presente en la naturaleza,
posee dos bandas de excitación analíticamente útiles,
una centrada a 250 nm y otra a 250 nm. Sin embargo
independientemente de la longitud de onda utilizada
para excitar la molécula,la longitud de onda del
máximo de emisión es de 450 nm.
Una consecuencia de la eficacia de la relajación

vibracional es que la banda de fluorescencia para
una transición electrónica dada se desplaza hacia
menores frecuencias o longitudes de onda más
largas respeto a la banda de absorción
(Desplazamiento de Stokes).

Únicamente tiene lugar una superposición

para picos de resonancia que implican
transiciones entre el nivel vibracional más
bajo del estado fundamental y el nivel
correspondiente de un estado excitado.
INSTRUMENTACIÓN
h·vem h·v
Cubeta Tratamiento y
Selector λ Detector
lecura
h·vex
Empleando adecuadamente los dos selectores de longitud de onda
Selector λ
(monocromadores), pueden registrarse dos espectros: Excitación y emisión.
Manteniendo fija la λex y haciendo un barrido de la radiación emitida, se obtiene

Fuente un espectro de emisión. Si la λem se mantiene constante y se hace variar la λex, se
obtiene el espectro de excitación
Casi todos los instrumentos de fluorescencia utilizan ópticas de doble haz para compensar las
fluctuaciones en la potencia de la fuente
FUENTES
Se necesitan fuentes más intensas que las utilizadas en las medidas de absorción, La sensibilidad es
directamente proporcional a la potencia de salida.
• LAMPARA DE ARCO DE XENON (Continuo): Cuando se requiere de una fuente de radiación continua
Se utiliza este tipo de fuente. El espectro es continuo desde 300-1300 nm. Se utilizan
monocromadores para aislar las bandas
• LAMPARA DE MERCURIO A BAJA PRESIÓN (Líneas): Produce líneas muy intensas a

254,366,405,436,546,577,691 y 773 nm. Las líneas se pueden aislar con filtros de interferencia o
absorción. el tiempo promedio que permanece las moléculas en su estado de excitación antes de
emitir un fotón.
Desde los comienzos de los 70 se usan también LASERS

FILTROS Y MONOCROMADORES
Tanto los filtros de interferencia como los de absorción han sido utilizados en los fluorímetros, Los
espectrofluorímetros está equipado con monocromadores de red
Los fluorímetros de filtro proporcionan una

forma relativamente simple y barata de
llevar a cabo análisis cuantitativos por
fluorescencia. Como ya se ha señalado,
para seleccionar las longitudes de onda de
la radiación de excitación y de emisión se
utilizan filtros de interferencia y de
absorción. Generalmente, los fluorímetros
son compactos, robustos y fáciles de usar.
Los espectrofluorímetros, emplean monocromadores,

donde la radiación que procede del primer
monocromador se divide en dos, una parte se dirige
hacia el fotomultiplicador de referencia y la otra hacia la
muestra. La radiación fluorescente resultante, después
de ser dispersada en el segundo monocromador, se
detecta en un segundo fotomultiplicador.
DETECTORES
La señal de fluorescencia es de baja intensidad por lo que se necesitan factores de amplificación altos
para estas medidas. Los tubos fotomultiplicadores son los detectores más utilizados en instrumentos de
fluorescencia sensibles. Suelen trabajar en la modalidad de recuento de fotones para mejorar la relación
señal/ruido
CUBETAS
Para medidas de fluorescencia se usan tanto cilíndricas como rectangulares norlamente de cuarzo. Los
fosforímetros son similares en diseño a los fluorímetros y a los espectrofluorímetros, excepto en que
requieren de componentes adicionales: Un dispositivo que alternativamente irradia la muestra y
después de un tiempo adecuado mide la intensidad de fosforescencia.
Las medidas de fosforescencia se llevan a

cabo a la temperatura de nitrógeno líquido
para prevenir la desactivación por colisión,
por lo que usa un recipiente Dewar con
ventajas de cuarzo. A esta temperatura el
analito se encuentra en un cristal de
disolvente sólido. El disolvente más usado
es una mezcla de dietiléter , pentano y
etanol

APLICACIONES DE LOS MÉTODOS FOTOLUMINISCENTES
Aplicables a intervalos de concentración mas bajos que las medidas espectrofotométricas de absorción
y se encuentran entre las técnicas más sensibles de las que pueden disponer los científicos.
A) MÉTODOS FLUORIMÉTRICOS
DETERMINACIÓN DE ESPECIES INORGÁNICAS
• MÉTODOS DIRECTOS: Implican la formación de un quelato fluorescente y la medida de su emisión
Las principales aplicaciones inorgánicas son metales como el Ca,Al,Be…
• MÉTODOS INDIRECTOS: Se basan en la disminución de fluorescencia como resultado de la acción

atenuadora de la especie que va a ser determinada
DETERMINACIÓN DE ESPECIES ORGÁNICAS
Se suelen determinar orgánicas y bioquímicas en campos como la alimentación, farmacia,clínica…:
Ejemplos: Enzimas,coenzimas,vitaminas,esteroides,agentes medicinales,naturales…
B) MÉTODOS FOSFORIMÉTRICOS
Los métodos fosforescentes y fluorescentes tienden a ser complementarios: Si un compuesto es muy

fosforescente será muy poco fluorescente.
Se suelen determinar especies orgánicas y bioquímicas: Ácidos nucleicos, Aminoácidos,

Piridina,Pirimidina,Enzimas,Hidrocarburos de petróleo, Pesticidas.
Dada la necesidad de bajas Tº y pobre precisión, no se usa tanto como la fluorescencia.
QUIMIOLUMINISCENCIA
Este fenómenos se produce cuando una reacción química da una especie electrónicamente excitada
que emite radiación para volver al estado fundamental. En sistemas biológicos se llama
bioluminiscencia.
-La instrumentación requiere de un recipiente adecuado de reacción y un tubo fotomultiplicador. La

fuente de radiación es la reacción química en sí entre el analito y el reactivo. Sin selector de longitudes
de onda. Estos métodos son muy sensibles debido a la ausencia de ruidos.
-Los límites de detección están determinados por la pureza del reactivo y son del orden de la ppb.
Ejemplos:
-Determinación de gases contaminantes atmosféricos como O2, óxidos de nitrógeno y compuestos

sulfarados
𝑁𝑂 + 𝑂3 → 𝑁𝑂2 + 𝑂2
𝑁𝑂2 ∗ → 𝑁𝑂2 + ℎ𝑌 ( λ = 600 a 2800 nm)
-Para aplicaciones en fase líquida: se usan sustancia quimioluminicstentes que contienen el grupo (por
ejemplo, Luminol). Algunos iones metálicos y especies orgánicas inhiben o exaltan la emisión de
radiación de la rección: Aa. Insecticidas, naftoles. Por ejemplo, el hierro de la hemoglobina tiene un
efecto catalítico sore la oxidación del luminol y se usa para identificar manchas de sangre

TEMA 4: TÉCNICAS ESPECTROFOTOMÉTRICAS. ESPECTROSCOPÍA

ATÓMICA
FUNDAMENTOS BÁSICOS
En espectroscopía atómica los espectros que se obtienen son de líneas dado que las
especies que absorben o emiten son átomos libres que no experimentan transiciones
rotacionales ni vibracionales como en el caso de las moléculas.
Existen tres tipos de espectroscopía atómica:
- Espectroscopía de absorción atómica (EAA)

- Espectroscopía de emisión atómica (EEA)
- Espectroscopía de fluorescencia atómica (EFA)
Excitación del
metal
Absorción de Absorción de
energía energía
radiante térmica
EAA EFA EEA
Estas técnicas están dirigidas al análisis de trazas y subtrazas de elementos metálicos y

semimetálicos. La determinación de estos elementos a estos niveles tiene interés en el estudio
de las propiedades físicas, químicas y biológicas de algunos sistemas.
Se llama ABSORCIÓN ATÓMICA a la absorción de energía procedente de

una fuente por parte de un vapor atómico.
La medida de la absorción de radiación se llama ESPECTROSCOPÍA DE

ABSORCIÓN ATÓMICA
1 María Jesús Estudillo Parrado

Se llama EMISIÓN ATÓMICA a la absorción de energía térmica y la

consiguiente emisión de alguna o toda la energía en forma de radiación.
La medida de la absorción de radiación se llama ESPECTROSCOPÍA DE

ABSORCIÓN ATÓMICA
Se llama FLUORESCENCIA ATÓMICA a la absorción de radiación por los átomos que pasan al
estado excitado y la posterior radiación emitida por estos átomos al volver al estado fundamental.
La medida de esta radiación emitida se llama ESPECTROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA ATÓMICA
Cuando una llama aspira una disolución, el calor de esta produce primero la evaporación del
disolvente. Los microcristales formados o bien se funden y se disocian en especies atómicas libres
o se disocian directamente al sublimar.
. .
𝑁𝑎𝐶𝑙!"#$%&'"ó) → 𝑁𝑎𝐶𝑙#ó%"!$ → 𝑁𝑎𝐶𝑙%í+&"!$ → 𝑁𝑎,-# + 𝐶𝑙,-# Vapor atómico
Los elementos atomizados pueden absorber energía radiante (EAA, EFA) de una λ característica
pasando a un estado electrónico excitado o pueden absorber energía de la llama y excitarse
térmicamente (EEA) emitiendo radiación de una λ característica al volver el electrón a su nivel
fundamental.
La energía requerida para excitar al electrón

desde el estado fundamental puede también ser
adquirida térmicamente en una llama. Para que
esto ocurra, la T de la llama debe ser
suficientemente alta para producir transiciones
electrónicas.
Por tanto, solo los elementos con líneas de

emisión de baja energía presentan líneas intensas
de emisión en la llama (alcalinos).

Espectros de emisión de
líneas de átomos de Li, Na y K
Ensayos de coloración de la llama

de algunos elementos químicos
ECUACIÓN DE MAXWELL-BOLTZMANN
𝑁/ 𝑔/ 01! 01"
= · 𝑒 2·4
𝑁. 𝑔.
N1/N0
Líneas de Energía de g1/g0 2000 K 3000 K 4000 K
resonancia, excitación,
nm eV
Cs 852,1 1,46 2 4,44·10-4 7,24·10-3 2,98·10-2
Na 589,0 2,11 2 9,86·10-6 5,88·10-4 4,44·10-3
Ca 422,7 2,93 3 1,21·10-7 3,69·10-5 6,04·10-4
Zn 213,8 5,80 3 7,29·10-15 5,38·10-10 1,48·10-6
La población en el estado excitado es pequeña en comparación con la población del estado

fundamental, incluso para Me alcalinos que se excitan con cierta facilidad. Elementos como el Zn
mostrarían baja sensibilidad en EEA. Se determina mejor por EAA.
ABSORCIÓN ATÓMICA
ATOMIZADOR
•Llama
Fuente de línea Detector
•Generador Hidruros
•Horno de grafito Monocromador

EMISIÓN ATÓMICA
ATOMIZADOR
•Llama Detector
•Plasma
•Arco o chispa Monocromador
FLUORESCENCIA ATÓMICA
ATOMIZADOR
•Filamento de grafito Detector
Monocromador
Fuente de línea
ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA

Atomizadores
Llama (EAA con llama, EEA Los dos atomizadores más empleados:
con llama
- Llama.
- Atomización electrotérmica (horno
Horno de grafito (EAA con de grafito).
horno de grafito
Generación de hidruros
(EAA con generación de
hidruros)

ATOMIZADORES: LLAMA
- Nebulización: introducción de la muestra en
forma de pequeñas gotitas o aerosol.
- Desolvatación: el disolvente es evaporado por
las latas temperaturas de la llama.
- Vaporización: el aerosol forma moléculas
gaseosas.
- Atomización: la mayoría de las moléculas
produce un gas atómico.
- Ionización: algunos de los átomos en el gas se ionizan en forma de cationes y electrones.
El nebulizador y el quemador son componentes importantes dado

que es necesario la presencia de átomos neutros del elemento.
- Cuando la disolución de la muestra pasa a la llama debe de estar
en forma de pequeñas gotitas (NEBULIZACIÓN).
- La muestra nebulizada se mezcla con los gases oxidantes y de
combustión en la cámara de pre-mezcla.
- Las gotas de muestra nebulizada tienen tamaños uniformes, no
obstante el 90% de la muestra no alcanza la llama.
Es muy importante controlar la velocidad de flujo de la mezcla

combustible-oxidante.
En emisión atómica, los Me alcalinos se Mo, Sn, Ca,

determinan mejor en llamas de T más Sr, Ba se
frías dada la facilidad de ionización de los atomizan
alcalinos en llamas de T más altas. Para el parcialmente
resto de los elementos se requiere una T
de llama más alta.
Llamas reductoras
En absorción atómica la llama de de altas
aire/acetileno es la más utilizada, aunque temperaturas
Nitroso/Acetileno
tiene ciertas limitaciones
Si, Al, V, Ti, Cr
no se atomizan
de forma
apreciable
(óxidos
refractarios)

ZONAS DE LA LLAMA
- Zona de combustión primaria: presenta una

luminiscencia azul debida a las bandas de emisión de
C2, CH y otros radicales. Nos e alcanza el equilibrio
térmico en esta zona.
- Zona secundaria: es la parte más fría de la llama, hay
óxidos moleculares dispersos.
- Región intermedia: zona más empleada de la llama
para las medidas. Predominan átomos libres.
Zona secundaria desprovista de O2.

Esta zona se atribuye a especies
CN, NH que forman una atmósfera
reductora.
ATOMIZADORES: HORNO DE GRAFITO (ATOMIZACIÓN ELECTROTÉRMICA)

Los atomizadores electrotérmicos proporcionan una mayor sensibilidad que la llama debido a
que toda la muestra se atomiza en un periodo muy corto de tiempo.
- Heating steps:
o Driying (remove wáter)
o Ashing (destroy organics)
o Atomization
- Small simple size:
o Typically 0,5-20 µl
- Enhanced sensitivity over flame
atomization
o The entire simple is analyzed.
o Much of the background matrix can be
eliminated.
La atomización tiene lugar en un tubo cilíndrico

de grafito abierto por los extremos con un orificio
central para la introducción de la muestra
mediante una micropipeta.

Existen dos corrientes de gas inerte:
- La corriente externa previene la entrada de aire del exterior y la consiguiente incineración

del tubo.
- La corriente interna fluye por los dos extremos del tubo y sale por el orificio central.
-
La corriente interna del Ar, desaloja los vapores

generados a partir de la matriz de la muestra
durante las primeras etapas de calentamiento.
En la atomización, la temperatura aumenta hasta 2000-

3000 ºC, dependiendo del elemento. Se forma un vapor
atómico que absorbe la radiación.
Los atomizadores electrotérmicos ofrecen la ventaja de su elevada sensibilidad para pequeños

volúmenes de muestra. Se utilizan volúmenes entre 0,5 – 20 mL. En estas condiciones los limites
de detección se encuentran del orden de las ppb, menores que las ppm que alcanza la llama.
La precisión relativa se encuentra en el intervalo 5 a 10 %, valores muy altos comparados con la

llama o plasma que oscilan entorno al 1 %. Además, los métodos de horno son más lentos,
requiriendo varios minutos por elemento.
La atomización electrotérmica se aplica cuando la llama o el plasma proporcionan límites de

detección inadecuados.

ATOMIZADORES: GENERADOR DE HIDRUROS
Se trata de un atomizador para muestras que contienen: As, Se, Sb, Sn, Bi…, es decir,
especies capaces de formar hidruros volátiles fácilmente.
La popularidad de la técnica de generación de hidruros se debe a la relativa

simplicidad y bajo coste del aparato y sobretodo a que el método lleva consigo la
preconcentración del analito y la separación del analito de la matriz de la muestra.
Los resultados son una mayor sensibilidad (mejor que con la llama) del orden de
ppb y una sorprendente supresión de las interferencias durante la atomización.
FUENTE DE RADIACIÓN: LÁMPARA DE CÁTODO HUECO
Esta lámpara produce líneas de emisión específicas del elemento empleado para
construir el cátodo
¿CÓMO FUNCIONA?
Después de aplicar una diferencia de potencial, el gas inerte sufre una ionización, generando
electrones.
∗
𝑁𝑒(,) → 𝑁𝑒 7 (,) + 𝑒 0
El electrón migra hacia la superficie del cátodo, produciendo la excitación de los átomos
metálicos, los cuales emiten su radiación específica al volver al estado fundamental.

La limitación de esta lámpara puede ser la necesidad normalmente de una lámpara diferente para
cada elemento o grupo de elementos. Aunque actualmente existen equipos con lámparas
multielementales.
FUENTE DE RADIACIÓN: LÁMPARA DE DESCARGA SIN ELECTRODOS
Las lámparas de descarga sin electrodos son fuentes de línea que producen intensidades de
radiación uno o dos órdenes de magnitud superior a las lámparas de cátodo hueco.
La lámpara no contiene electrodos. Para su activación utiliza un campo intenso de

radiofrecuencia o de radiación de microondas. Así se produce la ionización del Ar, originándose
iones que son acelerados hasta que adquieren suficiente energía para excitar a los átomos del
metal que emite radiación.
ESPECTROSCOPÍA DE EMISIÓN ATÓMICA
Para emisión, las fuentes de excitación (llama, arco y chispa) presentan algunos inconvenientes:
- Llama: la T alcanzada es relativamente baja por lo que es difícil determinar elementos

refractarios o elementos con altas energías de excitación. Los gases de combustión pueden
producir interferencias químicas o espectrales.
- Arco y Chispa: proporcionan altas T pero la naturaleza de la descarga depende de la muestra
a analizar.
En los años 80 se desarrolló una técnica de análisis multielemental para evitar esos
inconvenientes basada en el empleo de plasmas.
Un plasma se define como un gas altamente ionizado, es decir, una mezcla gaseosa con una
concentración significativa de cationes y electrones
71
𝐴𝑟 ⇔ 𝐴𝑟 7 + 𝑒 0
-E
ESPECTROMETRÍA DE PLASMA
El plasma es un gas altamente ionizado, eléctricamente neutro en su conjunto y confinado

en un campo electromagnético que alcanza temperaturas entre 6000 y 10000 K.
Se origina una especie de “llama” fuertemente luminosa, pero no hay combustión.

En el plasma se distinguen dos zonas:
- Núcleo brillante: termina en una cola.

- Cola: donde tiene lugar una intensa emisión continua. Esta emisión
se desvanece 10 mm por encima del núcleo.
La región situada entre unos 15 y 20 mm es ópticamente transparente

y es donde se llevan a cabo las medidas analíticas.
La antorcha del plasma está constituida por 3 tubos concéntricos. La muestra, en disolución, es
aspirada por un sistema nebulizador y transportada por el tubo central, arrastrada por el gas
portador (Ar) con un caudal de 1 ml/min.
Como T es elevada, es necesario aislar térmicamente

el plasma para evitar sobrecalentamiento del tubo de
cuarzo. Por ello, se introduce Ar tangencialmente por
el tubo más externo a 10-15 ml/min. Este flujo enfría
las paredes del tubo de cuarzo externo y a la vez,
estabiliza y centra el plasma.
CARACTERÍSTICAS DEL ICP
Utilización del ICP como fuente de ionización para Espectrometría de masas.
La técnica ICP-Espectrometría de masas (ICP-MS) es el resultado de la combinación de un

plasma con un espectrómetro de masas. La ICP-MS hace uso de la capacidad de un plasma
para generar iones monocargados de los elementos contenidos en la muestra.
Estos iones se introducen en el espectrómetro de masas. La función

del masas es similar a la del monocromador en EA. Sin embargo en
lugar de separar radiaciones de diferente longitud de onda separa los
iones según su relación masa/carga. Los iones de una determinada
relación masa/carga se hacen incidir sobre un detector que cuantifica
el número de iones presentes.
ESPECTROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA ATÓMICA
Desde 1964 se desarrollaron métodos analíticos basados en fluorescencia atómica. Esta técnica
es adecuada para la determinación cuantitativa de un número amplio de elementos.
No obstante, actualmente no se comercializa ningún instrumento de fluorescencia atómica, no

porque el método presente desventajas sino debido a que no se han demostrado ventajas
adicionales respecto de los métodos de absorción y emisión ya establecidos.
La espectroscopía atómica es un medio sensible para la determinación cuantitativa de más de

60 elementos metálicos y semimetales en muestras de áreas tan diversas como: metalurgia,
clínica, biológica, medioambiental, forense, alimentos, arqueológica,.....

APLICACIONES
LÍMITES DE DETECCIÓN
- EAA con llama: ppm
- EAA con generación de hidruros: ppm-ppb
- EAA con horno de grafito: ppb
- EEA con llama: ppm
- EEA-ICP: ppm-ppb
PRECISIÓN
La precisión relativa asociada a las medidas con llama o plasma son del orden del 1 al 2%. Los
errores que se obtienen con la atomización electrotérmica son del orden 5 al 10%.
LÍMITES DE DETECCIÓN (NG/ML) PARA ALGUNOS ELEMENTOS SELECCIONADOS

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Técnicas Avanzadas de Análisis Instrumental.

TEMA 3: TÉCNICAS ESPECTROFOTOMÉTRICAS: ESPECTROFLUORIMETRÍA

La FLUORESCENCIA, FOSFORESCENCIA Y QUIMIOLUMINISCENCIA MOLECULAR son métodos

Fluorescencia La excitación tiene lugar por

La excitación tiene lugar

- Fluorescencia: Las transiciones electrónicas no implican un cambio de espín del electrón

La determinación cuantitativa de especies orgánicas e inorgánica es a nivel de TRAZAS y presentan

El estado triplete es menos energético que

1 María Jesús Estudillo Parrado.

La FLUORESENCENCIA es un tipo particular de fenómeno de luminiscencia, que caracteriza a las

- Su estudio proporciona información valiosa, tanto cualitativa como cuantitativa, sobre

La FOSFORESCENCIA es el fenómeno por el cual ciertas sustancias tienen la propiedad de absorber

- Debe producirse cruce entre sistemas y la probabilidad es menor

• El rendimiento cuántico (Φ) Es el cociente entre el número de moléculas que presentan

sobre fotones absorbidos

• El tiempo de vida es el tiempo promedio que permanece la moléculas en su estado de excitación

• Tiempos de transiciones en fluorescencia: La fluorescencia rara vez es el resultado de la absorción

VARIABLES QUE AFECTAN A LA FLUORESENCIA Y FOSFORECENCIA

INFLUENCIA DE LA ESTRUCTURA MOLECULAR: La fluorescencia más intensa y la más útil es la

Los heterocícliclos sencillos como los de la imagen no

No obstante, si las estructuras se fusionan sí presentan FLUORESENCENCIA: Quinoleina,

𝐹 < 𝐶𝑙 < 𝐵𝑟 < 𝐼 (𝑑𝑖𝑠𝑚𝑖𝑛𝑢𝑐𝑖ó𝑛)

La sustitución de un carbonilo o un ácido carboxílico inhiben la fluorescencia porque la transición n→π*

INFLUENCIA DE LA RIGIDEZ ESTRUCTURAL: Se ha observado que la fosforescencia está

INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA: La fluorescencia disminuye con el aumento de la

INFLUENCIA DE LOS DISOLVENTES: un aumento en la viscosidad de los disolventes aumenta

INFLUENCIA DEL OXÍGENO DISUELTO: generalmente disminuye la intensidad de la

INFLUENCIA DEL PH: La fluorescencia de un compuesto aromático con sustituyentes ácidos o

Anilina presenta fluorescencia en medio neutro y

Además, en compuestos con mayor numero de

4 María Jesús Estudillo Parrado.

RELACIÓN ENTRE LA CONCENTRACIÓN Y LA FLUORESCENCIA: La potencia de la emisión

ESPECTROS DE EMISIÓN Y EXCITACIÓN

La quinina proporciona un ejemplo clásico de especie

Una consecuencia de la eficacia de la relajación

5 María Jesús Estudillo Parrado.

Únicamente tiene lugar una superposición

Manteniendo fija la λex y haciendo un barrido de la radiación emitida, se obtiene

• LAMPARA DE MERCURIO A BAJA PRESIÓN (Líneas): Produce líneas muy intensas a

Desde los comienzos de los 70 se usan también LASERS

6 María Jesús Estudillo Parrado.

Los fluorímetros de filtro proporcionan una

Los espectrofluorímetros, emplean monocromadores,

Las medidas de fosforescencia se llevan a

7 María Jesús Estudillo Parrado.

APLICACIONES DE LOS MÉTODOS FOTOLUMINISCENTES

DETERMINACIÓN DE ESPECIES INORGÁNICAS

• MÉTODOS DIRECTOS: Implican la formación de un quelato fluorescente y la medida de su emisión

Las principales aplicaciones inorgánicas son metales como el Ca,Al,Be…

• MÉTODOS INDIRECTOS: Se basan en la disminución de fluorescencia como resultado de la acción

DETERMINACIÓN DE ESPECIES ORGÁNICAS

Se suelen determinar orgánicas y bioquímicas en campos como la alimentación, farmacia,clínica…:

Ejemplos: Enzimas,coenzimas,vitaminas,esteroides,agentes medicinales,naturales…

Los métodos fosforescentes y fluorescentes tienden a ser complementarios: Si un compuesto es muy

Se suelen determinar especies orgánicas y bioquímicas: Ácidos nucleicos, Aminoácidos,

Dada la necesidad de bajas Tº y pobre precisión, no se usa tanto como la fluorescencia.

-La instrumentación requiere de un recipiente adecuado de reacción y un tubo fotomultiplicador. La

-Determinación de gases contaminantes atmosféricos como O2, óxidos de nitrógeno y compuestos