Practica 3 - Equipo 1

Licenciatura en ingeniería biológica Laboratorio de Ciencias III
Cuantificación de proteína
Badillo Huerta Charbel Sebastian, Frida Ukume González Fernández, Irving Leonardo Dumas Soto
, Frida Miranda López Portillo Rivera, Gabriel Vigueras2,*
1 Licenciatura en Ingeniería Biológica, División de Ciencias Naturales e Ingeniería Universidad

Autónoma Metropolitana-Cuajimalpa, Artificios No. 40, 6° Piso Col. Hidalgo
Álvaro Obregón, C. P. 01120 México, D. F.
2 Departamento de Procesos y Tecnología, División de Ciencias Naturales e Ingeniería Universidad

Autónoma Metropolitana-Cuajimalpa, Artificios No. 40, 6° Piso Col. Hidalgo
Álvaro Obregón, C. P. 01120 México, D. F.
*jvigueras@correo.cua.uam.mx
Palabras clave: Proteína, espectrofotómetro, cuantificación, biomoléculas, medición
Introducción
Las proteínas están conformadas por aminoácidos, unidas por un enlace peptídico en forma de
cadena, estos son monómeros de unidad. Gracias a que estos están unidos en forma de cadena
ayuda a que se plieguen de forma tridimensional, esto hace que las proteínas puedan tener miles
de funciones, sean estructurales, enzimáticas, transportadoras, etc.
Las estructura de las proteínas se diferencian entre por la secuencia de los aminoácidos, por la
estructura primaria de las proteínas, esta estructura determina la función de la proteína como tal.
De las propiedades de las proteínas tenemos la especificidad y la desnaturalización.
La especificidad es cuando se lleva a cabo una función específica que se realiza, esto lo hace una
determinada estructura primaria que tiene una conformación espacial propia.
La desnaturalización es cuando se pierde la estructura terciaria.
La tarea de conocer las secuencias completas de genes para algunas bacterias,
levaduras, plantas, animales y humanos ha sido completada. Abriendo un nuevo
campo de investigación llamado proteómica el cual tiene el reto de responder a la
pregunta ¿Qué función tiene cada gen? Ya que los genes codifican para proteínas y
Estas son las que determinan la forma, función y fenotipo de un organismo. Por lo cual
es necesario conocer la función, estructura, cantidad e interacción de las proteínas con
otras y su ambiente. Un método de laboratorio rápido, simple y económico es el
ensayo de Bradford, el cual es utilizado para determinar el contenido de proteína de
una muestra. Se basa en el color que se desarrolla al unirse el colorante, azul
Coomassie G-250, a la proteína y mediante un espectrofotómetro se mide la
absorbancia de luz en unidades cuantificables. La Ley de Lamber-Beer, dice
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que un soluto que absorbe la luz de una longitud de onda particular, la
La absorbancia es directamente proporcional a la concentración del soluto en solución.
Para determinar la concentración de proteína total presente en una muestra se
requiere preparar una curva estándar empleando una proteína patrón, que
generalmente suele ser albúmina sérica bovina. El ensayo es aplicado comúnmente
para cuantificar el contenido de proteína en alimentos u otros materiales biológicos. En

los métodos cromatográficos y electroforéticos utilizados para la purificación y
caracterización de proteínas se requiere conocer de forma cuantitativa la
concentración de estas macromoléculas. Para estudiar las actividades enzimáticas, se
requieren cuantificar dos propiedades, la cantidad total de proteína y la actividad
enzimática, con lo cual se puede determinar la velocidad específica de reacción. Por
otro lado considerando que todas las células están formadas de proteínas, es posible
cuantificar de forma indirecta la cantidad de biomasa.
Objetivos
● Determinar la concentración de proteína de muestras de leche.
● Conocer y aplicar el método de Bradford para la cuantificación de proteína.
● Aprender el uso, manejo y cuidados del espectrofotómetro UV-Vis.
● Elaborar una curva estándar de BSA para la cuantificación de proteína.
Materiales y métodos
● 1 pipeta automática de 100 µL –1000 µL
● Caja con puntas de plástico azules de 100 µL – 1000 µL
● 1 pipeta automática de 10 µL –100 µL
● Caja de puntas de plástico amarillas de 10 µL a 100 µL
● Vaso de precipitados de 100 mL
● Matraz aforado de 100 mL
● Espátula
● Agitador magnético
● Parrilla con agitación
● 10 tubos de 5 mL
● 12 microtubo 1.5 mL Eppendorf
● 2 tubo falcon 15 mL
● 10 Celdas de plástico de 1 mL
● Vortex
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● Gradilla para microtubos
● Gradilla para tubos de 15 mL
● Piseta con agua destilada
● Espectrofotómetro (al menos 2, idealmente 4)
● Potenciómetro
● Balanza analítica
● Reactivo de Bradford 1x (aprox. 5 mL)
● Suero albúmina bovina (BSA) (solución Stock 2 mg/mL)
● Reactivos para preparar buffer de fosfatos salino (PBS)
● A partir de la solución stock de BSA prepare diluciones desde 0 hasta 25 µg/mL. Utilice
PBS como diluyente.
● Una vez hechas las mezclas, agitar bien para homogeneizar la solución.
● Diluya 1:1000 la muestra de leche en PBS.
● Coloque en cada celda 800 µL muestra o estándar y agregue 200 µL de reactivo
de Bradford, tape con parafilm y agite suavemente.
● Incube a temperatura ambiente durante 5 minutos.
● Compare el color de la muestra con los estándares para estimar a vista la
concentración de proteína.
● Lea la absorbancia a 595 nm (A595) en espectrofotómetro, antes de 1 h de añadido.
● el reactivo de Bradford, ajustando a cero con el blanco.
● Registre los resultados de absorbancia en la tabla.
● Realice el análisis por duplicado.
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Resultados y discusión
En la tabla 1 mostramos la curva de calibración a partir de los datos obtenidos en la cuantificación

a través del espectofotómetro.
Conclusiones
Conclusiones
Podemos concluir que al realizar la primera medición y el duplicado de la medición de la proteína
de la leche, obtuvimos una R=1, ya que fue la más cercana a la requerida que es de R=0.99.
Esto nos dice que la leche que usamos para poder medir la proteína es la que dice en la
información nutrimental.
Referencias
● Bradford MM, A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram
quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding, Anal Biochem, 72,
248–254 (1976).
● Quick Start Bradford Protein Assay Instruction Manual, Bio-Rad Laboratories

Hercules, CA.
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● Sedmak JJ and Grossberg SE, A rapid, sensitive and versatile assay for protein
using Coomassie Brilliant Blue G-250, Anal Biochem 79, 544–552 (1977).
● Guillén, M. V. L. (2009). Estructura y Propiedades de las Proteínas. Obtenido de http://

www. uv. es: http://www. uv. es/tunon/pdf_doc/proteinas_09. pdf. 34p.
Recomendaciones
Usar el material de forma adecuada, no tocar la celdas por donde pasa la luz, no mover del rango
establecido las micropipetas, realizar el pesaje correcto y mediciones correctas de las sustancias
establecidas, usar bata de laboratorio e identificar las sustancias con sharpie.
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1 Licenciatura en Ingeniería Biológica, División de Ciencias Naturales e Ingeniería Universidad

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para cuantificar el contenido de proteína en alimentos u otros materiales biológicos. En

En la tabla 1 mostramos la curva de calibración a partir de los datos obtenidos en la cuantificación

Podemos concluir que al realizar la primera medición y el duplicado de la medición de la proteína

● Quick Start Bradford Protein Assay Instruction Manual, Bio-Rad Laboratories

● Guillén, M. V. L. (2009). Estructura y Propiedades de las Proteínas. Obtenido de http://

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