Microscopía

MICROSCOPÍA
CITOHISTOLOGÍA
Karla Lange
Objetivos
• Describir los componentes
del microscopio.
• Identificar la aplicación de
los diferentes tipos de
microscopio.
• Definir los conceptos en
microscopía
Microscopio
• micro, pequeño y scopio, observar

• instrumento que permite
observar objetos demasiado
pequeños para ser vistos a simple
vista.
Dimensiones
Evolución del
microscopio…1
Primer Siglo XVII

microscopio •Robert Hooke,
compuesto 1673-1716
•Cristopher Cock
1590 •y M. Malpighi Anthony van
•Hans y Zacharias Leeuwenhoek
Janssen
Evolución del
microscopio…2
Carl Zeiss
1831 sistemas de
Robert Brown, inmersión en aceite
núcleo de la célula
1837-1838
Schleiden y Schwann,
Teoría celular
Microscopía
• Técnica
• Microscopía clínica
• Producir imágenes visibles
• Estructuras o detalles pequeños
• No son percibidos a simple vista
• Capacidad de las muestras para
absorber, refractar o reflejar la luz.
Tipos de microscopía
• Campo claro
• Campo oscuro
• Fluorescencia
• Interferencia
• Luz polarizada
• Contraste de fases
• Barrido confocal
• Electrónico
– Barrido
– transmisión
Campo claro
• Microscopio óptico compuesto
– Luz visible
– Utiliza cortes muy finos(5 micras)
– Métodos de tinción adecuados
Campo claro
Contraste de fases
• muestras sin colorear
• Diferencias en índice de refracción
– Útil para estudiar especímenes vivos
– Muestras frescas
– Modificaciones
• Interferencia
• Interferencia diferencial
Contraste de fases
Interferencia…1
• Modificación del microscopio de contraste
de fases
• Permite la cuantificación de masa en los tejidos
• Se basa en determinar cambio en reflexión de la
luz
Interferencia…2
• Nomarski (interferencia diferencial)
– Permite estudiar las propiedades de
superficie de las células
– Produce una imagen brillante contra un fondo
oscuro sin halos de difracción de una célula
viva.
• Determinación del índice de refracción
• Determinación de sólidos, masa seca y espesor de
las estructuras celulares
Interferencia…3
• Utilizado en los tratamientos de
fertilización in vitro
Mucosa Riñón de
bucal rata Obelia
DIC DIC
CONTRASTE
DE FASES
DIFERENCIAL
Contraste
de fases
Luz polarizada
• Modificación del microscopio de campo
claro
• Debido al fenómeno de birrefringencia se pueden
observar sustancias cristalinas y moléculas
fibrosas
• Vitamina B
Luz polarizada
• Absorción
• Reflexión
• Dispersión
• Birrefringencia (doble refracción)
• Dos polarizadores
– Polarizador (entre fuente de iluminación y
condensador)
– Analizador (entre objetivo y ocular)
Campo oscuro
• Ilumina lateralmente el espécimen
– Observando microorganismos
• Fitoplancton marino, microparásitos, etc.
Fluorescencia
• Epifluorescencia
– Técnica tinción reactivo
fluorescente
• Diferente longitud de onda
• transiluminación
• Luz U.V. no es visible y
daña la retina
– Los resultados pueden
registrarse
fotográficamente
Confocal
• Mezcla de tecnologías
– Imagen óptica obtenida en un
microscopio de luz
– Iluminación de amplia longitud de onda
• Óptica de muy alta resolución
– Con sistema de barrido de imágenes mediante
una fuente de luz láser con difracción limitada
Barrido confocal
• Estructura de sustancias
biológicas
– Combina
• microscopio de campo claro
• equipo fluorescente
• sistema de barrido que emplea un
rayo láser
• Computadora se reconstruye la
imagen tridimensional
Microscopios electrónicos
• TRANSMISIÓN • BARRIDO
– Utiliza un haz de electrones – El haz de electrones no
para producir la imagen atraviesa la muestra, sino
– Permite observación de que choca contra su
detalles a escala superficie.
macromolecular – Permite una gran
magnificación de las
imágenes
Otras aplicaciones
Microscopio campo
claro
Sistemas del microscopio
• Posee dos sistemas

– Mecánico
• Sostiene al sistema óptico
• elementos necesarios para la
iluminación y enfoque del
preparado
– Óptico
• Observación ocular
objetivos
mecánico Observación
microscopio oculares
óptico
condensador
iluminación
Fuente de
luz
Soporte o cuerpo
Pie o base
Fuente de luz /espejos
Diafragma de campo
Diafragma de apertura
Ajuste de distancia e interpupilar
Brazo
mecánico
Platina
microscopio
Revólver
ópticas
Tubo binocular
Control mecánico xy
Tornillos macro y micro
Tornillos y control del
condensador
Diafragma de
apertura soporte
Condensador
Diafragma de
campo
Fuente de base
Luz
Brazo
platina
Control
macrométrico
y micrométrico
Ocular
Objetivos
objetivos
•Clasificación
•Aumento
•Bajo
•Mediano
•grande
•Tipo de lentes
•Esféricos
•Acromáticos
•Apocromáticos
•Plan
•Planacromáticos, planapocromáticos
Conceptos en microscopía
• PODER DEFINIDOR
– es la capacidad del objetivo
de formar imágenes de
contornos nítidos.
• Aberración cromática
– Luz policromática
– Halo coloreado alrededor
• Aberración esférica
– Campo esférico
• Correcciones
– Lentes planáticos
– Lentes acromáticos
– Lentes planapocromáticos
Conceptos en
microscopía
• Magnificación
– Ampliación por un sistema
óptico
– Multiplica
• Valor del objetivo
• Valor del ocular
– 10x (objetivo) x 10x(ocular) =

100 aumentos
www.olympusmicro.com
• PODER DE RESOLUCIÓN
– Es la capacidad de separar
claramente dos puntos en un objeto.
Está en relación inversa con el límite
de resolución.
– Generalmente depende del diseño del
objetivo
• LÍMITE DE RESOLUCIÓN
– Es la menor distancia que debe existir
entre dos objetos para que puedan
visualizarse por separado.
Límite de resolución
Límite de
resolución
Ojo humano 0.2 mm
Microscopio campo claro 0.2 μm
M. electrónico de barrido 2.5 nm

m. electrónico de transmisión
0.05 nm
(teórico)
m. electrónico de transmisión
1.0 nm
(práctico)
Conceptos en
microscopía
• APERTURA NUMÉRICA (AN)
– Capacidad de captar los rayos
difractados
– Dado por
• Índice de refracción del medio por
el que pasa la luz (n)
• Angulo que forman los rayos
difractados (µ)
• AN= n (sen µ)
Conceptos en
microscopía
• PROFUNDIDAD DE CAMPO
– Permitir la observación simultánea de
varios planos del preparado.
• Inversamente proporcional a la escala de
reproducción o aumento.
• DISTANCIA FRONTAL (trabajo)
– Es la distancia de la lente frontal al
preparado colocado en la platina,
cuando está enfocado.
• Disminuye cuando aumenta la escala de
reproducción del objetivo.
Conceptos en
microscopía
• Parafocalidad
– Mantener el enfoque entre
objetivos
• Paracentración
– Mantener el centro entre objetivos
evaluación
evaluación
Qué tipo de microscopía se
utiliza en las siguientes
muestras?
Por qué?
Gracias por su
atención
Referencias
• www.olympusmicro.com
• Fortoul, T (2013), Histología y Biología
celular. McGrawHill. Capítulo 1.
• Leica. (2000). La teoría del microscopio

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• micro, pequeño y scopio, observar

Primer Siglo XVII

• Posee dos sistemas

– 10x (objetivo) x 10x(ocular) =

Microscopio campo claro 0.2 μm

M. electrónico de barrido 2.5 nm

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