Cromatografia en Columna

ESCUELA SUPERIOR POLTÉCNICA DE
CHIMBORAZO
FACULTAD: FACULTAD DE CIENCIAS

CARRERA: INGENIERÍA AMBIENTAL
ACTIVIDAD GRUPAL
CROMATOGRAFÍA DE PAPEL (PC)- CROMATOGRAFÍA DE

COLUMNA CLÁSICA (CC)
1. DATOS GENERALES:
NOMBRE: (estudiante(s) CODIGO(S): (de estudiante(s)
Oliver Chango 305

Carmen Loja 319
Génesis Quisintuñ a 293
Mariela Saquinga 297
GRUPO No.: 9
DOCENTE: Dra. Lourdes Carrera
PARALELO: IV “A”
FECHA DE ENTREGA:
18/01/2022
Cromatografía en columna
Es una técnica de purificación, puesto que permite aislar los compuestos deseados de una
mezcla.
Procedimiento
La cromatografía en columna utiliza una columna de vidrio vertical que se llena con un
soporte sólido adsorbente (fase estacionaria: los más utilizados son gel de sílice (SiO2) y
alúmina (Al2O3)). La muestra que se quiere separar se deposita en la parte superior de este
soporte. El resto de la columna se llena con el eluyente (disolvente que constituye la fase
móvil) que, por efecto de la gravedad, hace mover la muestra a través de la columna. Se
establece un equilibrio entre el soluto adsorbido en la fase estacionaria y el disolvente
eluyente que fluye por la columna. Debido a que cada uno de los componentes de una
mezcla establecerá interacciones diferentes con la fase estacionaria y la móvil, serán
transportados a diferentes velocidades y se conseguirá su separación. Así, de manera
similar a otros tipos de cromatografía, las diferencias en las velocidades de desplazamiento
a través del medio sólido se corresponden con diferencias en los tiempos de elución por la
parte inferior de la columna para cada uno de los componentes de la muestra original, que
se recogerán en fracciones diferentes.
La polaridad del eluyente afecta las velocidades relativas con las que los diferentes
componentes de la mezcla se mueven en la columna. Los disolventes polares compiten más
eficientemente con las moléculas polares de una mezcla por los lugares polares del
adsorbente. Por lo tanto, un disolvente polar desplazará las moléculas, incluyendo las más
polares, rápidamente a través de la columna. Si el disolvente es muy polar la elución será
muy rápida y generalmente habrá poca separación de los componentes de la mezcla. Si por
el contrario el disolvente es muy apolar, no eluirán los compuestos de la columna. Por lo
tanto, la elección del eluyente es crucial para el éxito de la cromatografía en columna. A
menudo se utiliza un gradiente creciente de polaridad para la elución. La CCF se utiliza
para determinar y elegir el sistema solvente adecuado para cada separación.
En 1978 se introdujo una versión modificada denominada cromatografía en columna

rápida. La diferencia con la cromatografía en columna tradicional es que en la técnica
rápida el disolvente se hace atravesar la fase estacionaria aplicando una presión positiva.
Esto hace que las separaciones mejoren en resolución y se pueda disminuir el tiempo de
elución, por lo cual constituye un método de elección. (Oblq s.f.)
Cromatografía en columna clásica.

Ha demostrado ser uno de los sistemas de mayor utilidad para la purificación preliminar o
para el aislamiento de cantidades relativamente grandes de flavonoides a partir de extractos
vegetales crudos.
Consiste en:
 Aplicar la muestra a separar en la parte superior de una columna rellena de la fase

estacionaria y,
 Eluir secuencialmente los componentes de la muestra con una fase móvil adecuada.
 Hacer circular exclusivamente por gravedad y por la presión hidrostática ejercida
por ella en la parte superior de la columna.
Principales factores
Al efectuar una cromatografía en columna son:
- Elección de la fase estacionaria y del eluyente: Ambos se
escogen ensayando previamente por cromatografía en capa fina distintas combinaciones de
los dos.
-Se elige aquella que proporcione la mejor separación de las substancias que queremos
aislar, de las cuales la de Rf más alto no lo debe tener superior a 0,5 en el eluyente
escogido. Si alguna de ellas tiene Rf muy
bajo será necesario efectuar una elución en gradiente.
- Geometría de la columna
En general son rectas de vidrio con una placa porosa sinterizada en el extremo inferior que
actúa a modo de soporte de la fase estacionaria, y una llave de teflon para regular el flujo de
eluyente.
La eficacia de las columnas rectas crece en función de L/D2
L= la longitud de fase estacionaria
D= el diámetro de la columna.
Ello conduce a la utilización de columnas largas y estrechas para un peso de adsorbente
dado, desaconsejándose las columnas excesivamente largas.
- Empaquetamiento de la columna
Debe efectuarse cuidadosamente para conseguir un empaquetado homogéneo. Puede ser
húmedo, si se realiza a partir de una suspensión de la fase estacionaria en la
fase móvil, o en seco, si la fase eestacionaria se vierte directamente al interior de la
columna humectándose.
- Aplicación de la muestra
Generalmente, la muestra se aplica en solución, disuelta en el mínimo volumen de eluyente
posible. Cuando existen problemas de solubilidad puede aplicarse mediante
introducción sólida. (Vila Casanovas 1987)
Cromatografía en papel.
La cromatografía en papel, tanto analítica como preparativa, ha sido durante años la técnica
cromatográfica más ampliamente utilizada en la investigación de flavonoides.
La cromatografía en papel utiliza grandes hojas de papel de un cierto grosor (0,3-0,8mm)
en los que se siembra la muestra en forma de banda. La elución se realiza en cubetas
herméticamente cerradas, y puede ser en forma ascendente o descendente. Esta última
permite una elución continua a fondo perdido, cortando el extremo inferior del papel en
forma de diente de sierra para facilitar el goteo del eluyente. De esta forma, se consigue un
recorrido más largo y, como consecuencia, una mejor separación.
Las substancias quedan separadas en forma de bandas que se recortan del cromatograma
seco.
¿Cómo se recupera?
Se recuperan utilizando MeOH o MeOH:H20(1:1) extrayendo con agitación la banda

cortada a trozos, o bien eluyendo, ya estos trozos colocados en una columna
cromatográfica, ya la banda entera en la misma cubeta cromatográfica recogiendo el líquido
en un vaso de precipitados.
Bibliografía:
«Oblq.» Oblq. s.f.
http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_tipus.html#columna (último
acceso: 01 de 02 de 2022).
Vila Casanovas, Roser . «Contribución al estudio de polifenoles y aceites esenciales en el genero

Thymus L.» tesis, Barcelona, 1987.

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NOMBRE: (estudiante(s) CODIGO(S): (de estudiante(s)

Oliver Chango 305

DOCENTE: Dra. Lourdes Carrera

En 1978 se introdujo una versión modificada denominada cromatografía en columna

Cromatografía en columna clásica.

 Aplicar la muestra a separar en la parte superior de una columna rellena de la fase

Se recuperan utilizando MeOH o MeOH:H20(1:1) extrayendo con agitación la banda

Vila Casanovas, Roser . «Contribución al estudio de polifenoles y aceites esenciales en el genero

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