Genética Inversa

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GENETICA INVERSA.

“La genética inversa es una disciplina genética que, partiendo del conocimiento de un


fragmento de ADN clonado o secuenciado, investiga sobre su función biológica alterando
dicho ADN mediante mutación, generalmente a nivel masivo. Dicha mutación puede ser
puntual, por sustitución de nucleótidos, o más drástica, por ejemplo,
mediante silenciamiento de genes completos.” [1]
Mientras la genética convencional se basa en la identificación y caracterización del gen de
los fenotipos, la genética inversa busca examinar el efecto de las mutaciones inducidas o
expresiones alteradas de un cierto gen y posterior a esto analizarlo a fondo y lograr
entender los comportamientos y funciones de este; entonces en vez de ir del fenotipo a
las secuencias se hace lo opuesto.
Generalmente, para efectuar dicho estudio se emplean enfoques globales, genómicos, y
por ello sus técnicas, como son el empleo de micro matrices de ADN. Hoy en día el
término genética inversa se utiliza para expresar el descubrimiento de la causa de una
enfermedad hereditaria, empezando por el gen responsable hasta llegar a la enzima
defectuosa. [2]
Dentro de las técnicas que usa la genética inversa encontramos:
- Mutagénesis aleatoria
- Mutagénesis dirigida
- Fenocopias
- Tilling
- Ingeniería genética.
La genética inversa tiene diversas aplicaciones de gran importancia en la cotidianidad,
aplicaciones como la reconstrucción de genomas, la ingeniería de vacunas, investigación
para la industria farmacéutica, etc. Gracias a las investigaciones en este campo se han
diseñado vacunas vivas atenuadas que combinan genes de virus actuales con virus
previamente alterados (atenuados) que pertenecen a la misma cepa genérica.” El ejemplo
más exitoso de vacuna viva atenuada es el de la vacuna contra la influenza, que puede
brindar hasta un 90% de protección en adultos menores de 65 años, y hasta un 40% en
adultos mayores de 65 años. El virus de la influenza A tiene 8 segmentos de ARN. En la
vacuna viva atenuada, una combinación de 6 segmentos atenuados combinados con 2
segmentos normales (WT), diseñados en plásmidos, crean una vacuna viva atenuada.” [3]
En resumen, la genética inversa juega un papel crucial en el desarrollo de células y organismos
modificados genéticamente que permiten a los científicos comprender la función de los genes.

[1] [2] https://es.wikipedia.org/wiki/Gen%C3%A9tica_inversa#Clonaci%C3%B3n

[3] https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-ampliado/genetica-inversa
BIBLIOTECAS

Las bibliotecas son colecciones de secuencias clonadas. El resultado de una clonación son
segmentos de ADN pequeños, que pueden representar un único gen o incluso solo una porción de
un gen. En consecuencia, para explorar, aunque solo sea una pequeña fracción del genoma de un
organismo, es necesario disponer de una gran colección de clones. El conjunto de clones de DNA
procedentes de un sólo individuo se denomina biblioteca de clones. Estas bibliotecas pueden
representar el genoma completo de un individuo, un solo cromosoma o el conjunto de genes
transcripcionalmente activos en un único tipo celular. [1]

Las bibliotecas génicas.

Una biblioteca genómica debe representar la totalidad del genoma de un organismo como un
conjunto de la superposición de fragmentos clonados, que, por lo tanto, permiten el aislamiento
de una secuencia en el genoma. En conclusión, una biblioteca genómica o genoteca será una
población, por así decirlo, de “bacterias huésped” que llevaran ADN procedente de un vector de
clonación y que representaran todo el genoma de un organismo respectivo.

Elaboración de genotecas.

Para preparar una biblioteca genómica, se extrae ADN de las células, es cortado con la ayuda de
enzimas de restricción y finalmente los fragmentos obtenidos se ligan a vectores. Es en este último
paso donde se da el éxito o no de la formación de la genoteca, habrá que elegir el tipo de vector
indicado, de modo que la biblioteca contenga todo el genoma en el menor número de clones
posible. Una biblioteca que se pueda rastrear fácil es aquella que tiene pocos clones, no porque
tenga menos información del genoma, sino que los vectores fueron capaces de llevar clones de
mayor tamaño y por lo tanto estarán en menor cantidad. Por otro lado, si se utilizan vectores que
solo pueden ligar secuencias pequeñas, se necesitarían muchos más clones haciendo dificultoso el
rastreo en la biblioteca.

Para evitar esto se han desarrollado técnicas para aislar los cromosomas y así tener bibliotecas
para cada uno de los de cromosomas (Bibliotecas específicas de cromosomas). Los mecanismos
más utilizados son la electroforesis y la citometría de flujo, este último consiste en aislar los
cromosomas mediante la tinción de células mitóticas con colores fluorescentes, uno para los pares
de A-T y otro para G-C. Luego estos son pasados por un rayo láser que clasifica los cromosomas.

Existe otro tipo de biblioteca que es la del cDNA o ADN complementario, que se hace a partir del
ARN mensajero de “una población en un momento dado, y representan los genes
transcripcionalmente activos que hay de esa célula en el momento de hacer la biblioteca” . Esta
sirve para estudiar sucesos específicos como el desarrollo, la muerte celular del cáncer y de otros
procesos biológicos.
El número de clones necesarios para contener todas las secuencias de un genoma depende de
diversos factores, que incluyen del tamaño medio de los insertos clonados, al tamaño del genoma
a clonar y el nivel de probabilidad deseado. El número de clones de una biblioteca puede
calcularse con la siguiente fórmula:

ln ( 1 – P )
N=
ln ( 1 – f )
donde N es el número de clones necesarios, P es la probabilidad de recuperar una secuencia
determinada, y f es la fracción del genoma presente en cada clon.[2]

Estas genotecas serán entonces como nuestros bancos, puesto que allí se almacenarán una
colección enorme de genes, que a su ves se encuentran clasificados y preparados para su uso, ya
sea en experimentación como como en desarrollo de posibles proyectos con interés biomédico.

[1] [2]  Klug WS, Cummings MR, Spencer CA. Conceptos de Genética. 8 a ed. Madrid:
Pearson Educación, S.A; 2006

https://www.youtube.com/watch?v=b1kuAh1K1xE

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