Informe Extraccion Del ADN

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Universidad Simón Bolívar Laboratorio Biología Molecular Y

Genética

Laboratorio 4. Extracción de ADN.


Valeryn Camargo1, Valentina Camargo1, Daniella Perez2 y Jhair
Rodríguez2.
1 estudiantes de medicina, T02 – p21 tercer semestre.
2 Moisés Arquez Mendoza.

Resumen
Se le llama extracción al método por el cual se obtiene el ADN a partir de material
biológico (ej.: cepillado bucal, saliva, sangre o cualquier tejido) utilizando técnicas
físicas y químicas. La extracción consiste en la separación y purificación del ADN
con el fin de poder estudiarlo, analizarlo o manipularlo. se basa en las características
fisicoquímicas de la molécula. La unión de los nucleótidos ocurre entre el grupo
fosfato y el azúcar, mediante enlaces fosfodiéster, dando lugar al esqueleto de la
molécula. En el presente laboratorio realizaremos una extracción de ADN
preparando una solución de lisis celular.
Palabras Clave: Solución, Separación, ADN, Molécula.

Introducción

El ácido desoxirribonucleico (ADN) es un polímero de unidades simples

denominadas nucleótidos, constituido por una molécula de azúcar desoxirribosa

unida a un grupo fosfato y una base nitrogenada que puede ser guanina, citosina,

adenina o timina. Estas unidades son las encargadas de codificar la información

genética contenida en los genomas de los organismos biológicos, por lo que

extraerlos de las células es de gran importancia para el estudio de sus funciones

biológicas. Es importante saber que se le llama extracción al método por el cual se

obtiene el ADN a partir de material biológico un ejemplo es el cepillado bucal, saliva,

sangre o cualquier tejido) utilizando técnicas físicas y químicas. La extracción

consiste en la separación y purificación del ADN con el fin de poder estudiarlo,

analizarlo o manipularlo. En la investigación biomédica el ADN se utiliza para


analizar y diagnosticar a pacientes con enfermedades neurodegenerativas, cáncer,

infecciones, etc. El proceso de obtención de ADN a partir de material biológico

consta de 2 pasos, el primer paso, denominado extracción, consiste en la

desestabilización, ruptura y desnaturalización de todas las moléculas que recubren

el material genético, primero por disrupción mecánica, luego por escisión química y

finalmente por enzimas Digestión. El segundo paso, llamado purificación, permite el

aislamiento de ADN a partir de extractos celulares, extracción de contaminantes con

solvente, seguida de precipitación de proteínas y finalmente material genético en

solución acuosa. En esta práctica, se extraerá ADN de muestras de plantas

utilizando artículos domésticos comunes para comprender la lógica detrás de la

extracción y purificación de material genético.

Materiales y métodos
- Lavaplatos líquido.

- Agua destilada.

- Sal de cocina (NaCl) y bicarbonato de sodio.

- Alcohol al 70 %.

- Pulpa de tomate.

- Papel filtro, filtro de café o gaza.

- Vaso de precipitado o vaso plástico.

- Cuchara plástica mediana

- Palillos de madera
Preparamos una solución de lisis celular, entonces mezclamos unos 100 mL de
agua, con una cucharada de sal y dos cucharadas de bicarbonato de sodio.

una vez disueltas estas sales, Ponemos dos cucharadas de jabón líquido de lavar
platos y mezclamos suavemente para no generar espumas.
Ahora tenemos que realizar la lisis celular para ello, en un vaso limpio mezclamos
una parte del extracto o pulpa vegetal (tomate), con dos partes de la solución lisis
anterior, mezclamos suavemente y dejamos reposar unos 3 minutos, para que
los componentes reaccionen.

Ahora toca purificar el material genético, para lo cual filtramos en nuevo vaso
nuestra mezcla de lisis, con la ayuda de papel filtro

Finalmente tomamos 20 mililitros del filtrado, lo agregamos en un tubo falcon y


suavemente agregamos alcohol al 70 %, garantizando que este se deslice
suavemente por las paredes del tubo y dejamos reposar. Después de unos
minutos se forma una especie de lana blanca en la superficie del alcohol, que
retiraremos con la ayuda de palillos de madera.
Resultados y discusión

PREGUNTAS
1) ¿En el procedimiento realizado, que función cumplen la sal de
mesa (NaCl), el Bicarbonato y el jabón líquido?

• Para entrar en la célula el DNA se compacta utilizando algunas


proteínas, entonces lo que hace la sal y el bicarbonato es soltar las
proteínas del DNA y desempaquetarlo, todo con el fin de usar la
micropipeta para poder extraerlo.

• sabemos que la célula está rodeada por una membrana, esta


membrana está compuesta por moléculas de grasa (lípidos,
fosfolípidos), de igual forma que en la cocina usamos el jabón para
disolver la grasa de los platos, aquí lo usaremos para disolver las
grasas de la membrana de las células con el detergente, entonces
se rompe la membrana y se libera todo el contenido de la célula
incluyendo el ADN.

2) ¿Por qué es importante el alcohol en el proceso de purificación?

En presencia de altas concentraciones de sal y de alcohol frío, el ADN


liberado de tus células precipita y se agrega hasta poder visualizarse
a simple vista. Las otras moléculas en el extracto celular, como los
aminoácidos y carbohidratos, permanecen disueltas en el alcohol y el
agua y no se pueden visualizar.

La adición de alcohol frío precipita el ADN dado que es insoluble en


altas concentraciones de sal y alcohol. El ADN precipitado forma unas
finas hebras blancas y visibles en el límite de separación de la fase
de alcohol, mientras que el resto de las sustancias permanecen
disueltas.
3) ¿En qué parte del proceso se separan las proteínas?

El DNA es muy grande, y para entrar en la célula de compacta usando


proteínas, bien, entonces para separar estas proteínas y
desempaquetar el DNA se utiliza la sal de cocina ya disuelta en agua,
entonces ¿qué pasa?

el sodio neutraliza la carga negativa de los grupos fosfatos, por lo tanto,


el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, y la sal evita
la unión de las proteínas al ADN.

4) ¿Qué modificación harías a este protocolo para mejorar su


eficiencia y por qué?

Usaría el alcohol al 96% y no al 70% para que la muestra de ADN sea


mucho más pura y podamos observar de mejor manera las hebras
blancas del DNA

Conclusión

Al terminar la practica denominada SOLUCIONES podemos concluir que con el


desarrollo experimental de la presente practica nos pudimos percatar de que la
concentración de una solución depende directamente de los factores de molaridad
y normalidad, las cuales son propiedades que determinan las características de una
solución, con lo cual se puede saber que tan básicas o ácidas pueden ser estas
soluciones. Con lo anterior se puede llegar a la conclusión de que es muy importante
tener presente el conocimiento de las expresiones que nos ayudan a conocer
algunas de las características básicas de una solución, con las cuales se pueden
calcular soluciones de diferentes grados de concentración
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