INFORME DE COMPONENTE 1601-2021

Nombre del estudiante: Grupo

colaborativo:

Práctica 1. Determinación de la concentración de

carbohidratos y proteínas
Actividad 1. Determinación de la concentración de glucosa por
un método enzimático colorimétrico
Código del experimento 226
1. Registre los valores de absorbancia a 505nm medidos luego de
preparar cada una de las muestras

Tubo Absorbancia
505nm
0 -0,132
1 -0,079
2 0,033
3 0,144
4 0,368
5 0,705
6 0,857
7 0,494
8 0,310
9 0.144
10 0.164
11 0.174

2. Tabla de concentración de Glucosa en los tubos 0 a 5

 Tubo Concentración
0 0
1 0,15
2 0,45
3 0,75
4 1,5
5 2,5

3. Gráfica de la curva Patrón

3. Concentración de glucosa en los tubos 6 a 11

Tubo Concentración
(mg/dL)
6 2.3811
7 0.3835
8 -0.1889
9 -0.6920
10 -0.6709
11 -0,5625

Registre los cálculos realizados

Y=mx + b
X= (y-b)
m

XT6=0.857 – 0.1227 =2.2124

 0.3319

XT7=0.494 – 0.1227 =1.1187

0.3319

XT8=0.310 – 0.1227 =0.5643

0.3319

XT9=0.144– 0.1227 =0.0641

0.3319

XT10=0.164 – 0.1227 =0.1244

0.3319

XT11=0.174 – 0.1227 =0.1545

0.3319

4. Concentración de glucosa en las muestras de partida A y B

Muestra Concentración
(mg/dL)
A 19,17 mg/dL
B 0,622 mg/dL
Registre los cálculos realizados

C 1 x V 1 = C 2 X V2

C1= C2 X V2
V1
CT7= 0.3835 x 2000 = 19,17
40

CT10= 0.1244 x 2000 = 0,622 mg/dL

400

Actividad 2 Determinación de la glucemia (concentración de

glucosa en sangre)
Código del experimento 061
1. Registre los valores de absorbancia a 505nm medidos luego de
preparar cada una de las muestras

Tubo Absorbancia
505nm
0 -0.076
1 0.237
2 0.238
3 0.231
 6 0.388
7 0.146
8 0.014
9 0.143
10 0.034
11 -0.029

2. Concentración de glucosa en la muestra Patrón

Tubo Concentración
(mg/dL)
1 100.85 mg/dL
2 101.27 mg/dL
3 98.29 mg/dL

Promedio absorbancias 0.235

Tubos 1 a 3

Registre los cálculos realizados para hallar la concentración de

glucosa

A= a b c

A1 = A2
C1 C2

C2= C1 X A2
A1
Ct1 = 100mg/dL x 0.237= 100.85 mg/dL
0.235

Ct2 = 100mg/dL x 0.238= 101.27 mg/dL

0.235
Ct3 = 100mg/dL x 0.231= 98.29 mg/dL
0.235

3. Concentración de glucosa en los tubos 6 a 11 empleando la

ecuación de Lambert-beer
Tubo Concentración
(mg/dL)
6 165.10 mg/dL
7 62.12 mg/dL
8 5.95 mg/dL
9 60.85 mg/dL
10 14.46 mg/dL
11 -12.34 mg/dL
Registre los cálculos realizados

Ct6 = 100mg/dL x 0.388= 165.10 mg/dL

0.235

Ct7 = 100mg/dL x 0.146= 62.12 mg/dL

0.235

Ct8 = 100mg/dL x 0.014= 5.95 mg/dL

0.235

Ct9 = 100mg/dL x 0.143= 60.85 mg/dL

0.235

Ct10 = 100mg/dL x 0.034= 14.46 mg/dL

0.235

Ct11 = 100mg/dL x -0.029= -12.34 mg/dL

0.235

4. Concentración de glucosa en las muestras de partida A y B

Muestra Concentración
(mg/dL)
A 165.10mg/dL
B 60.85mg/dL

Registre los cálculos realizados

Las concentraciones del tubo 6 y 9 ya estaban calculadas porque

fueron las que no se diluyeron.

Actividad 3. Determinación de la concentración de proteínas

por un método colorimétrico: método de Lowry
Código del experimento 012
1. Registre los valores de la concentración y absorbancia a 580nm
medidos luego de preparar cada una de las muestras patrón de los
tubos 0 - 5

Tubo Absorbancia Concentración

580nm de proteína
0 -0.034 0
1 0.210 0.023
2 0.413 0.046
3 0.599 0.069
4 0.697 0.092
 5 0.847 0.11

Registre los cálculos realizados para hallar la concentración de la

proteína patrón
C 1 x V 1 = C 2 X V2

C1= C2 X V2
V1
CT1= 2g/L x 30  µL= 0.023
2600 µL
CT2= 2g/L x 60  µL= 0.046
2600 µL
CT3= 2g/L x 90  µL= 0.069
2600 µL
CT4= 2g/L x 120  µL= 0.092
2600 µL
CT5= 2g/L x 150  µL= 0.11
 2600 µL
2. Gráfica de la curva Patrón (concentración vs absorbancia)

3. Concentración de proteína en los tubos 6 a 11

Tubo Concentración
(mg/dL)
6 0.0307
7 0.0483
8 0.0319
9 0.0611
10 0.0865
11 0.1009
Registre los cálculos realizados

Y=mx + b
X= (y-b)
m

XT6=0.254 – 0.0149 =0.0307

7.7717

XT7=0.391 – 0.0149 =0.0483

7.7717

XT8=0.263 – 0.0149 =0.0319

7.7717

XT9=0.490– 0.0149 =0.0611

 7.7717

4. Concentración de proteína en las muestras de partida A y B

Muestra Concentración
(mg/dL)
A 0,6279 mg/dL
B 0.7943 mg/dL
Registre los cálculos realizados

C 1 x V 1 = C 2 X V2

C1= C2 X V2
V1
CT7= 0.0483 x 2600 = 0,6279 mg/dL
200

CT9= 0.0611 x 2600 = 0.7943 mg/dL

200

Conclusiones

A medida que se aumenta la concentración de la muestra se aumenta

la absorbancia.

La absorbancia de longitud de onda es una propiedad física que nos

permite identificar semejanzas entre ciertos compuestos. Ésta
característica física depende de las concentraciones de las soluciones.
En esta práctica, la absorbancia de longitud de onda se debía a la
diferente concentración de una misma solución.

Práctica 2. Análisis de ADN

Código del experimento
1. Tabla de absorbancias A260, A280 y A260/A280 para cada una de las
10 muestras problema

% %
muestra A260 A280 A260/A280
proteínas ADN
 1 8 92 0,569 0,339 1,68

2 87 13 0,349 0,442 0,79

3 99 1 0,315 0,458 0,69

4 44 56 0,468 0,386 1,21

5 79 21 0,371 0,432 0,86

6 3 97 0.583 0,332 1,75

7 67 33 0,404 0,416 0,97

8 52 48 0,446 0,396 1,13

9 14 86 0,552 0,346 1,59

10 29 71 0,510 0,366 1,39

Capturas de los espectros de las 10 muestras (individuales o

superpuestas)
 Respuesta a los ítem del punto 6 de la guía.

Ítem
a. Analizar que sucede con las Se puede analizar
absorbancias a medida que que a medida que
 incrementa el porcentaje de ADN en aumenta la
las muestras. concentración del
ADN aumenta el
valor de
absorbancia.
Contrastando el
resultado con ley de
Lambert-Beer
b. Que indica la relación A260/A280 Esta relación es
utilizada para
evaluar la pureza en
un extracto de
ADN. A260/280
Siendo la relación de
absorbancia de la
cantidad de ADN
medida a 260 nm
sobre la cantidad de
proteína media a
280 nm.
c. Muestra desconocida 1, Muestra muy
A260/A280=0,83 contaminada
Muestra desconocida 2, Muestra muy
A260/A280=1,16 contaminada

Muestra desconocida 3, Muestra muy

A260/A280=1,00 contaminada

Muestra desconocida 4, Muestra muy

A260/A280=0,47 contaminada

Muestra desconocida 5, Muestra

A260/A280=1,61 contaminada
Conclusiones

 El uso de la ley de Beer, nos permite establecer relaciones

entre la absorbancia de un compuesto y la intensidad de
energía que absorbe este auna determinada longitud de onda.
Permitiéndonos hallar una correcta concentración de una
analito problema utilizando una muestra patrón para
correlacionar la absorbancia del primero, con la concentración
y la absorbancia específica de la muestra patrón.
 Entre todas las muestras analizadas se puede concluir que la
muestra 1 es la que está menor contanminada ya que posee
un 92% de ADN y solo un 8% de proteína.
 La muestra más contaminada que se encontró fue la muestra
3 con 1% de ADN y un 99% de proteína.
 Práctica 3. Separación electroforética de isoenzimas de LDH
sobre acetato de celulosa.
Código del experimento 0786
Muestra Tira A M1
Muestra Tira B M3
2. Registra la imagen de la tinción de la tira y densitograma de
cada una de las tiras

Tinción y densitograma
Muestra Tira A

Tinción y densitograma
Muestra Tira B

A2. partir de que tejido se ha preparado la muestra

Tejido Tira A Músculo

Imagen de densitometría y tinción del tejido seleccionado
Tejido Tira B Corazón
Imagen de densitometría y tinción del tejido seleccionado

Conclusiones

La electroforesis con acetato de celulosa juega en la actualidad un

papel muy importante en los procedimientos rutinarios de
diagnóstico clínico, pero también ayudan a investigar una amplia
gama de temas en ciencias de la vida. Permiten separar las
proteínas principalmente por su carga.

La electroforesis es el único procedimiento de medida existente que

permite visualizar las isoenzimas y las formas atípicas de masa
molar elevada.

Se comparó la separación de las proteínas en la tira de acetato de

celulosa y los densitogramas para encontrar el tejido al cual
correspondía cada una de las muestras M1 y M3, encontrando que
la M1 fue de los músculos y la M3 del corazón.

Práctica 4. Determinación del punto isoeléctrico y

electroforesis de proteínas.
Parte I. Determinación del punto isoeléctrico de la caseína
1. Gráficas de Absorbancia vs pH para los valores obtenidos
por cada grupo de (independientes o sobrepuestas)

2. Punto Isoeléctrico experimental obtenido por cada grupo

Grupo Punto Isoeléctrico experimental de la
 Caseina
1 6.1
2 5.1

El punto isoeléctrico teórico de la caseína es de 4.6, en el grupo 1

dio in punto isoeléctrico de 6.1 y en el grupo 2 de 5.1 concluyendo
que entre mayo absorbancia mayor es la concentración de caseína .
Parte II Separación de proteínas en gel de poliacrilamida
SDS
Ejercicio 1 Corrido electroforético simulado

Corrido electroforético 1
Muestra problema N°5
seleccionada
Patrones 1.β-gal
seleccionados 2.ovalb
3.anh. carb.
Datos de la curva de Pendiente:-1.18
calibración Ord. en origen:5.00
r:-0.91
r2:0.82
Movilidad relativa de 0.36
la proteína problema
Masa relativa (Mr) 36887
experimental de la
proteína problema
Peso molecular de la 43505
proteína problema
(Acon MW)
Datos de los patrones utilizados en el corrido 1
Patrón 1 2 3
Mr 116107 42734 29011
Avance (mm) 1.42 10.67 20.63
Movilidad 0.02 0.18 0.49
relativa
Imagen de la gráfica y del corrido electroforético 1
 Corrido electroforético 2
Muestra problema N°7
seleccionada
Patrones 1.β-gal
seleccionados 2.ovalb
3.anh. carb.
4 TIM
5 Mioglob
Datos de la curva de Pendiente: -1.13
calibración Ord. en origen:4.99
r:-0.95
r2:0.91
Movilidad relativa de 0.74
la proteína problema
Masa relativa (Mr) 14434
experimental de la
proteína problema
Peso molecular de la 13673
proteína problema
(Acon MW)
Datos de los patrones utilizados en el corrido 2
Patrón 1 2 3 4 5
Mr 116107 42734 29011 26527 17183
Avance (mm) 1.42 10.67 28.46 30.12 38.18
Movilidad 0.2 0.19 0.49 0.52 0.66
relativa
Imagen de la gráfica y del corrido electroforético 2
 Corrido electroforético 3
Muestra problema N°10
seleccionada
Patrones 1.β-gal
seleccionados 2.ovalb
3.anh. carb.
4 TIM
5 Mioglob
6.Lisoz
7.BPTI
Datos de la curva de Pendiente:-1.19
calibración Ord. en origen: 5.01
r:-0.98
r2:0.96
Movilidad relativa de 0.67
la proteína problema
Masa relativa (Mr) 16320
experimental de la
proteína problema
Peso molecular de la 16638
proteína problema
(Acon MW)
Datos de los patrones utilizados en el corrido 3
Patrón 1 2 3 4 5 6 7
Mr 1161 42734 29011 26527 17183 14296 6500
07
Avance 1.42 10.67 28.46 30.12 38.18 41.74 56.2
(mm) 1
Movilidad 0.2 0.19 0.49 0.52 0.66 0.72 0.98
relativa
Imagen de la gráfica y del corrido electroforético 3
De acuerdo con los resultados obtenidos en el ejercicio 1
Corrido electroforético simulado, compare:

Respuesta
a. Compare La masa relativa En el corrido número 1 se
de obtenida por usted con la obtuvo para la experimentación
masa relativa teórica en cada un valor de 36887 y para la
simulación. teórica 43505, concluyendo que
están muy lejanas dependiendo
errores experimentales o el
porcentaje del gel utilizado.

En el corrido número 2 se
obtuvo para la experimentación
un valor de 14434 y para la
teórica 13673, concluyendo que
están muy lejanas dependiendo
errores experimentales o el
porcentaje del gel utilizado.

En el corrido número 3 se
obtuvo para la experimentación
un valor de 16320 y para la
teórica 16638, concluyendo que
están muy lejanas dependiendo
errores experimentales o el
porcentaje del gel utilizado.

b. Compare El valor de r y r2 La relación entre movilidad

en los tres corridos relativa y masa relativa para el
electroforéticos. corrido número 1 fue de -0.91 y
0.82 respectivamente siendo
inversamente proporcional pues
 a medida que aumenta la
movilidad relativa aumenta la
masa relativa.

La relación entre movilidad

relativa y masa relativa para el
corrido número 2 fue de -0.95 y
0.91 siendo inversamente
proporcional pues a medida que
aumenta la movilidad relativa
aumenta la masa relativa.

La relación entre movilidad

relativa y masa relativa para el
corrido número 1 fue de -0.98 y
0.96 siendo inversamente
proporcional pues a medida que
aumenta la movilidad relativa
aumenta la masa relativa.
c. Responda considera usted Se pudo observar que los
que es mejor usar más o menos valores cambian dependiendo la
muestras patrón, justifique su cantidad de muestras utilizadas.
respuesta. Entre menos muestras la
movilidad relativa y masa
relativa aumentan.
Ejercicio 2. Efecto del porcentaje de la acrilamida en el
corrido electroforético

Corrido electroforético 1 - Acrilamida 7.5%

Muestra problema N°7
seleccionada
Voltaje seleccionado 200
Datos de la curva de Pendiente:-1.35
calibración Ord. en origen:5.13
r:-1.00
r2:1.00
Movilidad relativa de 0.74
la proteína problema
Masa relativa (Mr) 13639
experimental de la
proteína problema
Peso molecular de la 13673
proteína problema
(Acon MW)
Imagen de la gráfica y del corrido electroforético 1
Acrilamida 7.5%
 Corrido electroforético 2 - Acrilamida 12%
Muestra problema N°7
seleccionada
Voltaje seleccionado 200
Datos de la curva de Pendiente:-1.02
calibración Ord. en origen:4.86
r:-0.93
r2:0.86
Movilidad relativa de 0.74
la proteína problema
Masa relativa (Mr) 12784
experimental de la
proteína problema
Peso molecular de la 13673
proteína problema
(Acon MW)
Imagen de la gráfica y del corrido electroforético 1
Acrilamida 12%
 Corrido electroforético 2 - Acrilamida 15%
Muestra problema N°7
seleccionada
Voltaje seleccionado 200
Datos de la curva de Pendiente:-0.85
calibración Ord. en origen:4.71
r:-0.87
r2:0.76
Movilidad relativa de 0.74
la proteína problema
Masa relativa (Mr) 12173
experimental de la
proteína problema
Peso molecular de la 13673
proteína problema
(Acon MW)
Imagen de la gráfica y del corrido electroforético 1
Acrilamida 15%

De acuerdo con los resultados obtenidos en el ejercicio 2

Efecto del porcentaje de la acrilamida en el corrido
electroforético, responda

Respuesta
a. Obtuvo los mismos valores Se obtuvo los mismos valores
de movilidad relativa, ¿por de movilidad relativa (0.74).
qué? Esto sucede porque el voltaje
no cambió y la muestra
tampoco, factores que afectan a
la electroforesis.
 b. Los cambios en la movilidad La masa relativa cambió un
relativa afectaron la poco en los tres corridos
obtención de la masa electroforéticos(bandas en gel)
relativa, ¿Por qué sucede
esto?

c. Comparar los tres corridos La movilidad relativa y la masa

electroforéticos (bandas en relativa fueron inversamente
el gel) qué diferencias proporcional, pues a medida
encuentra, explique. que aumenta la movilidad
relativa aumenta la masa
relativa.
Conclusiones
 La caseína precipitó en medio acético en el grupo 1 un pH =
6.1 y en el grupo 2 un pH 5.1. El margen de error con
respecto a su valor teórico de pH = 4.6 fue de cerca del
15.3%.
 Se comprobó experimentalmente que el punto isoeléctrico se
da en un determinado valor (o intervalo) de pH y que,
tanto por encima, como por debajo de este valor, la
proteína se mantiene en forma iónica y es más soluble.

 Se observó que la solubilidad de las proteínas no depende

únicamente del pH, sino que intervienen las propiedades del
solvente. La caseína, a diferencia de otras proteínas, puede
precipitar en solución acuosa, debido a que sus residuos
aminoácidos mayoritarios (como el ácido glutámico /
glutamato) son principalmente de naturaleza iónica.

Práctica 5. Ensayo de Cinética enzimática: Determinación de

la actividad gamma-glutamiltranspeptidasa en una muestra
de orina
Actividad gammaGT.
Código del experimento 008
1. Medida del curso de la reacción enzimática cubeta 2

Tiempo Absorbancia 405nm

(min)
1 0.029
2 0.050
3 0.071
4 0.093
5 0.113
6 0.134
7 0.160
 8 0.180
9 0.201
10 0.221
2. Medida del curso de la reacción enzimática cubeta 3

Tiempo Absorbancia 405nm

(min)
1 0.046
2 0.092
3 0.131
4 0.178
5 0.220
6 0.265
7 0.303
8 0.349
9 0.399
10 0.437
1. Gráfica de la absorbancia vs tiempo de reacción para cada
muestra ( cubeta 2 y Cubeta 3) y su regresión líneal
 2. Concentración de la actividad enzimática de cada muestra

Cubeta Concentración de la actividad enzimática

2 8.6x10-4
3 4.18x10-3

Registre los cálculos realizados a partir de la fórmula de la

pendiente de la recta

Concentración de cubeta 2

AE= 0.0216 x 2.4ml = 8.6 x 10-4 mmol/mol-1

3
9.25 x 10 molxLxcm X 0.0065

Concentración de cubeta 3 Da el mismo volumen

AE= 0.0435 x 2.4ml = 4.18 x 10-3 mmol/min-1

3
9.25 x 10 molxLxcm X 0.0027

Conclusiones

La espectrofotometría permite detectar cambios en

la absorbancia de luz por parte del sustrato o del producto (según
la concentración de estos).Los ensayos espectrofotométricos son los
más utilizados, ya que permiten medir la velocidad de la reacción
de forma continua.

La cubeta 3 tuvo mayor concentración enzimática con un valor de

4.18 x 10-3 comparada con la concentración de la cubeta 2 que fue
8.6x10-4, esto se produjo ya que la cubeta 2 estaba diluida y la
cubeta 3 no.

Referencias bibliográficas
M.C. García, M. Cuza, A. Sánchez, A. Abdo.(2011). “Factor de
Transferencia y extractos bacterianos en asmáticos con infecciones
respiratorias recurrentes”. Rev Alerg Asma Inmunol Pediatr; 7/4:124
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Herráez A. s.f. Biomodel. Laboratorios virtuales. Ensayo del MTT para
viabilidad metabólica [disponible en línea] recuperado en
http://biomodel.uah.es/lab/citotox/inicio.htm
Herráez A. s.f. Biomodel. Laboratorios virtuales. Simulador de
electroforesis de proteínas sobre acetato de celulosa [disponible en
línea] disponible en
http://biomodel.uah.es/lab/acetato/LDH_aplicar_muestras.htm
García Jerez A. 2018. Cinética Enzimática [Archivo de vídeo]
recuperado en https://www.youtube.com/watch?v=sLrhI9mgHDQ