Universidad Rafael Landívar

Laboratorio de Bioquímica
Janeth Quintanilla 1148418
Sección: 03

REPORTE 4: TITULACIÓN DEL ÁCIDO GLUTAMICO

PRÁCTICA No. 4

Objetivos:
1) Determinar en forma práctica el pK de un aminoácido mediante el método de
titulación por neutralización ácido-base.
2) Comparar los valores de pK del aminoácido problema, obtenido experimentalmente,
con los valores teóricos para su identificación.
3) Conocer las diferentes formas en que pueden existir los aminoácidos.

Antecedentes
Los aminoácidos son moléculas orgánicas que se combinan para formar las proteínas
necesarias para los seres vivos, los aminoácidos más comunes se conocen como α-
aminoácidos, ya que poseen un grupo amino primario (-NH2) como sustituyente del
carbono α, además de un grupo carboxílico (COOH), los cuales difieren únicamente de su
cadena lateral R. Existen alrededor de 20 aminoácidos y como se mencionó anteriormente
cada uno de ellos posee un grupo R distinto, además cada uno de ellos difiere de los valores
de pKa de sus grupos ionizables, el orden de desprotonación de los aminoácidos va a
depender de estos valores de pKa, y se genera desde el grupo ionizable con la menor pKa
hasta el grupo con la mayor pKa. Además es importante mencionar que esta desprotonación
está directamente relacionada con el pH al que se encuentra el aminoácido (Canaj et al,
2018).
Los grupos carboxilo y amino de los aminoácidos funcionan como ácidos y bases débiles,
respectivamente, y como tales, se ionizan cuando están en solución. Los aminoácidos tienen
almenas dos pc, por lo que tienen mayor capacidad amortiguadora, ya que presentan de tres
a cuatro formas iónicas diferentes. Cuando la forma iónica tiene una carga neta de cero se
dice que se encuentra en su punto isoeléctrico. Al variar de pH, cambia la proporción de las
formas iónicas y es posible ver la capacidad amortiguadora de los aminoácidos. Cada
aminoácido tiene su propio pc, puesto que presenta diferentes sustituyentes en sus cadenas
laterales. Mediante una titulación, se puede determinar el pc de un aminoácido (Armstrong,
2001).
Titulación, es la adición de sucesivas cantidades de una base o de un ácido fuertes, a una
solución de ácido o de base a titular, con la medición simultánea de su pH, hasta el punto de
equivalencia en el cual los equivalentes de ácido y de base se igualan (Armstrong, 2001).

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La curva de titulación será bifásica. Habrá dos porciones separada inflexiones en la curva de
titulación. El punto medio de la primera inflexión es donde el aminoácido está mitad informa
ácida y mitad en forma zwitterion. El punto de inflexión C ocurre cuando todo el aminoácido
original ya está informa de zwitterion. El pH al cual esto ocurre se denomina el pH
isoeléctrico (punto isoeléctrico) y se le da el símbolo pi. En la titulación de pH de un
aminoácido con un grupo no ionizable”, el punto de equivalencia ocurre en la pi del
aminoácido. En el punto medio de la segunda inflexión, la mitad del aminoácido está en
forma de zwitterion y la otra mitad está en forma básica. Las curvas de titulación
proporcionan la siguiente información: -Medida del pk de los grupos ionizables: se localizan
en el punto medio de la zona tampón. -Regiones de capacidad tampón: mesetas donde se
localizan los pKs; dichas regiones se encuentran en el intervalo pc ± 1 unidad de pH. -pI: se
localiza en el intervalo de viraje. pI = (pk1+pk2)/2. -Formas ionizables del aminoácido
encada rango de pH. -Carga eléctrica del aminoácido encada rango del pH. -Solubilidad
relativa del aminoácido encada rango de pH (Koolman and Röhm., 2012).

Diagrama de flujo

Tomar dos muestras Colocar estas dos

Inicio de 10 ml de solucion muestras en los
de glutamato. erlenmeyers

Al 2do. erlenmeyer,
Al 1er. erlenmeyer
agregar agua destilada Anotar el volumen
agregar NAOH hasta
al volumen de NaOH agregado.
llegar a pH 11
del paso 2.

Identificar y anotar el Llenar otra bureta con Titular la solución del

pH. HCl 1M paso 3 agregando HCl.

Titular la solución del

Fin del Proceso.
paso 2 con HCl 1M

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Datos, Cálculos y Resultados

Tabla 1: Titulación del ácido glutámico con NaOH.

mL de NaOH pH= 11
1 4.97
2 5.27
4 5.50
4 5.91
6 6.44
8 7.02
10 9.50
11 10.15
12 10.46
13 10.70
14 10.89
14.5 11
pKa de NaOH: 8.05 %error: 8.05-5.95 *100 = 35.29%
pKa del ácido Glutámico: 5.95 5.95
Fuente: Datos Experimentales

Tabla 2: Titulación del ácido glutámico con HCl.

mL de HCl pH= 4
3 10.25
6 7.11
9 6.25
10 6.08
13 5.77
15 5.54
18 5.03
pKa de HCl: 6.55 %error: 6.55-5.95 *100 = 10.08%
pKa del ácido Glutámico: 5.95 5.95
Fuente: Datos Experimentales

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Discusión de resultados
El ácido glutámico o glutamato es uno de los aminoácidos clasificados como cargados
negativamente a pH fisiológico, además clasificado en los aminoácidos no esenciales ya
que este puede ser sintetizado a partir de otros compuestos. Este aminoácido es uno de los
aminoácidos más abundantes en el cuerpo humano. Además el ácido glutámico presenta
un segundo grupo carboxilo en su cadena secundaria (Berg et al. 2007).
Titulación del ácido glutámico con NaOH, los aminoácidos presentan distintas
características, dentro de ellas se encuentran su capacidad para existir como iones zwitterion
dependiendo del pH del medio, esta forma predomina cuando se tiene un pH en el cual
la molécula posee una carga neta de cero, esto se conoce como punto isoeléctrico (PI). En la
práctica se quería obtener un pH de 11 al momento de ir titulando con NaOH, se obtuvo, un
pH de 4.97 cuando se tenía 1 ml de NaOH y un pH de 11 cuando se tenía 14.5ml de NaOH.
Estos cambios en el pH al ir adicionando NaOH se deben a la desprotonación en el
siguiente orden del grupo carboxilo(COOH), el grupo R de la cadena lateral y finalmente
la desprotonación del grupo amino primario (-NH2), se adiciono NaOH hasta llegar a pH
11 y con esto asegurar la desprotonación de todos sus grupos ionizables (Campbell et al.,
2006). La desprotonación de estos grupos se debe a que cada uno de los grupos tiene una pKa
específica a la cual se desprotonan, las pKa correspondientes de cada uno de los grupos
del ácido glutámico, razón por la cual al alcanzar este calor de pH, el cual es equivalente
al valor de la pKa cada uno de estos grupos se desprotonan en orden de la menor a la mayor
pKa. Para observar los resultados obtenidos, véase; (Tabla 1: Titulación del ácido glutámico
con NaOH).
Titulación del ácido glutámico con HCl, el HCl al ser un compuesto de naturaleza ácida, hizo
que se creara una neutralización al momento de agregarlo al Erlenmeyer por medio de la
titulación, la solución se volvió básica, haciendo así que el pH fuera bajando hasta obtener
uno de 5.03 con 18 ml de HCl. No se pudo llegar hasta un pH de 4, que era lo que indicaba
la práctica, por falta de tiempo. Lo que hizo que el pH disminuyera fue la acidez provocada
por el grupo amina NH3 protonizada la cual le da una carga positiva o catiónica a la especia
anima del ácido glutámico, pero dejándole una carga formal a la especie de -1 ionizables
(Campbell et al., 2006). Obteniendo así, un pKa de 6.55, con porcentaje de error del 10.08%.
este margen de error pudo haber estado presente por los ml de HCl que no se titularon. Para
observar los resultados obtenidos, véase; (Tabla 2: Titulación del ácido glutámico con HCl).

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Cuestionario
1. Construya gráficas de titulación para los dos procesos anteriores. Identifique en
ambas el punto isoeléctrico.

 Titulación para NaOH.

PH
12
pKa 2
10

8 pKa 1

0
0.011 0.012 0.013 0.014 0.016 0.018 0.02 0.021 0.022 0.023 0.024

(Fuente Propia)
 Titulación para HCl.

PH
12

10
pKa 1
8 pKa 2

0
0.013 0.016 0.019 0.02 0.023 0.025 0.028

(Fuente Propia)

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Tabla: Pka de NaOH Y HCl.
Pka -NaOH- pKa -HCl- Pka -Ácido Glutámico-
P.I= 7 y 9.1 P.I= 7 y 6.1 P.I= 2.2 y 9.7
pKa: 7 + 9.1 = 8.05 pKa: 7+6.1 = 6.55 pKa: 2.2 + 9.7 = 5.95
2 2 2
Fuente: Datos Experimentales

2. Escriba la reacción de ionización del ácido glutámico.

(Guerra, 2019)

Conclusiones
Los pKa de los grupos funcionales de los aminoácidos se encuentran localizados a distintos
rangos de pH.
Al no usar el ácido glutámico hizo que el grupo carbonilo COOH fuera reemplazado por un
sodio, este reemplazo hizo que unos de los tres pKa teóricos desapareciesen, dejando como
resultado el punto isoeléctrico del ion distinto al del ácido.
A travez de las curvas de titulación se pudieron determinar el pKa, pKb y el punto
isoeléctrico.
Todos los aminoácidos poseen un punto en el que se comportan como una sal neutra. En
este punto la carga neta del aminoácido es nula ya que los dos grupos disociables tienen su
carga de signo contrario y compensada.
Los aminoácidos por tener al menos un grupo ácido y un grupo amino pueden considerarse
como anfolitos, es decir, sustancias que pueden comportarse como ácidos o como bases.

Referencias Bibliográficas
Armstrong; Bradley; Bennet. (2001). Bioquímica. 6a ed. Reverté, Barcelona.550 p.
Berg, J.M; Tymoczko, J.L; Stryer, L. Biochemistry, sixth edition; W.H freeman and
company: New York, 2007: 668-669.

6
 Canaj, A.B; Kakaroni, F.E; Collet, A; Milios, C.J. α-Amino acids: Natural and
artificial building blocks for discrete polymetallic clusters. Polyhedron [Online] 2018, Vol.
151, 1-32.
Campbell, P.N; Smith, A.D; Peters, T.J. Bioquímica aplicada. Bioquímica y
biología molecular en la era posgenómica, Quinta edición; Masson: España, 2006: 453.
Guerra, J. (2019). Curvas de titulación de los aminoácidos | LIBRO ELECTRÓNICO
DE BIOQUÍMICA | Juan José Martínez Guerra. Retrieved 3 October 2019, from
http://libroelectronico.uaa.mx/capitulo-4-aminoacidos-y/curvas-de-titulacion-de-los.html

Koolman and Röhm. (2012). Bioquímica: Texto y atlas. 4a ed. Ed. Médica Panamericana,
México.488 p.

Anexos

Figura 1: Preparación de
soluciones de Glutamato.

Figura 2 y 3: Titulación
Figura 4: Medición del de NaOH y HCl.
pH.