Principios básicos del diseño de biorreactores.

Parte 2B- Balances y

Ecuaciones Por Modo de Operación
Reinhardt Acuña Torres

PRÓLOGO
En continuación de Principios básicos del diseño de
biorreactores. Parte 1- Cultivos y Biorreactores: El Propósito
de Utilización. La Parte 2B- trata específicamente de Balances
Generales Por Modo de Operación. Tema tratado en DISEÑO
DE BIOREACTORES, Parte 3 y MODELIZACIÓN DE
BIOPROCESOS INDUSTRIALES de mi Blog Biotecnología
Práctica. Pero renovado y actualizado con el objetivo de
Logo BioReAcToR
renovar algunos conceptos, aclarar otros e introducir nuevos.

BALANCE GENERAL POR MODO DE OPERACIÓN DE UN BIORREACTOR

El modo de operación de un sistema de cultivo, es sinónimo del modo de operación de un

biorreactor. Eso influye y afecta directamente el diseño de un biorreactor. Así como, el
modelo cinético de crecimiento, el tiempo de cultivo en biorreactor y el proceso de
producción en biorreactor.

Figura 1. Modo de Operación y Sistemas de Cultivo. Fuente: “ Grupo 5 biodigestor y biorreactor. Las
imágenes pueden estar sujetas a derechos de autor.
Existen tres modos de cultivo asociados a tres modos básicos de operación:

Operación Discontinua en Biorreactores: Operación por Lotes en Biorreactores

“Se caracteriza por la inoculación de un medio de cultivo estéril con
microorganismos, por un período específico de reacción. Durante este
tiempo, se alteran las concentraciones de células, sustrato (fuente de
carbono, sales, nutrimentos, vitaminas, etc.) y producto. Una buena
mezcla asegura que no existan diferencias locales significativas en la
composición y en la temperatura de la mezcla de reacción. Por otra
parte, la reacción no es estacionaria.”. Fuente: “Operación por lotes”.

En un sistema de operación discontinua la condición fundamental de flujo es: E = 0 = S.

“El flujo de entrada y el flujo de salida son cero: F1 = 0 = F2”
La curva de producción X(t) de un sistema que opera en
discontinuo (por tandas o lotes) se caracteriza porque tiene
un inicio con crecimiento cero (recta negra); tiene un
crecimiento exponencial rápido; seguido por un
estancamiento de la producción curvo y corto; con un
decaimiento (muerte del cultivo) que inicia apenas se agota
el substrato limitante de la velocidad de crecimiento.

Operación Semicontinua en Biorreactores: Operación Por Lotes Alimentados en

Biorreactores
En un sistema de operación semicontinua la condición fundamental de
flujo es: S = 0 → E = F. “El flujo de salida es cero: F1 = F; F2 = 0”
“Puede considerarse como una combinación de las dos operaciones
anteriormente descritas (por lotes y continua). Se practican muchas
variaciones de este tipo de proceso. La más popular involucra iniciar el
reactor como si se tratara de un proceso por lotes y cuando el sustrato
que limita el crecimiento (por lo general la fuente de carbono) se
consuma, se alimenta al reactor de una manera específica (proceso por
lotes con alimentación), o la concentración del sustrato se mantiene constante por medio
de cultivos extendidos. Además, se practica frecuentemente la adición programada de
sustrato para la producción de metabolitos secundarios, en la cual, el crecimiento celular y
la formación de producto ocurren por lo general en fases separadas.”. Fuente: “Operación
semicontinua”.
La curva de producción X(t) de un sistema que opera en
semicontinuo (operación alimentada) no tiene un inicio con
crecimiento cero; tiene una curva de crecimiento acelerada;
tiene un crecimiento estacionario largo y prolongado que se
da después de haber alcanzado el máximo de crecimiento;
seguido por el decaimiento y muerte del cultivo.

Operación Continua en Biorreactores: Operación de un

Quimiostato
En un sistema de operación continuo la condición fundamental de flujo es: E= S. “El flujo
de entrada (F1) es igual al flujo de salida (F2): F1 = F2 = F”

“Caracterizada por el hecho que el medio de cultivo se alimenta continua

y homogéneamente al biorreactor y debe ser constante, si se opera en
estado estacionario; el medio añadido puede ser estéril o contener los
microorganismos que se van a utilizar. La mezcla reaccionante se extrae
del reactor también de forma continua. Todas las variables de reacción y
los parámetros de control permanecen constantes a través del tiempo;
como resultado de lo anterior, se establece un estado estacionario en el
reactor seguido por una productividad y una salida constantes.”. Fuente:
“Operación continua”.
La curva de producción X(t) de un sistema que opera en
continuo (quimiostato) no tiene un inicio con crecimiento
cero; es creciente y exponencial, hasta lograr su crecimiento
máximo, en el estado estacionario (E.E); que se sostiene y
mantiene constante el tiempo durante todo el estado
estacionario; y no tiene decaimiento o muerte del cultivo.

ECUACIÓN DE BALANCE GENERAL POR SISTEMA DE FLUJO EN BIORREACTOR

El Balance General para cualquier tipo de operación de flujo se establece para un

componente cualquiera del cultivo (incluida la biomasa) como lo plantea la Ecuación (1).

La variación del
volumen del cultivo
en función del
tiempo está dada por la Ecuación (2).
Nota: en términos de flujo la Ec. 2 se denomina flujo volumétrico (Q) y tiene unidades de
m3/s.
Cuando el modo de cultivo es continuo,
ambos caudales son iguales (F1 = F2) y
el volumen (V) es constante, por lo que,
la Ec. (2) se reduce a cero (0) y la Ec. (1) se transforma en la Ecuación (3).
Nota: la Ec.3 que se conoce como ecuación de balance para una operación continua en
estado estacionario. De no existir el estado estacionario (EE) se producirían dentro del
biorreactor dos condiciones de flujo indeseables:
1. Si F1 > F2 se produce el rebalse o desborde del biorreactor, condición que se da
cuando el flujo de entrada sobrepasa la capacidad del biorreactor.
2. Si F2 > F1 se produce el lavado o drenado de producto o biomasa, condición que
se da cuando el flujo de salida sobrepasa la capacidad del biorreactor.
En una operación de flujo en modo semicontinuo, se
anula el término F2Ci del balance general de materia
Ec. (1); resultando este en la Ecuación (4).
Nota: Cuando el modo de operación es semicontinuo el caudal de salida F2
es nulo (F2 = 0) por lo que, el volumen V aumentará con el tiempo en función
del caudal de entrada F.

Cuando el modo de operación es discontinuo ambos caudales

son nulos (F1 = F2 = 0) por lo que, el volumen V es constante y
se anulan los términos F1Cio y F2Ci en la Ec. (1);
transformándola en la Ecuación (5).
Nota: La duración de un cultivo discontinuo es también, limitada en el tiempo, pero se
diferencia de la del cultivo semicontinuo en que, depende únicamente de las condiciones
iniciales del cultivo; esto por cuanto, no existe alimentación (F1).

Balances y Ecuaciones de Biorreactores en el Estado Continuo

Los balances de materia para la biomasa (X), el sustrato (S) y el producto (P) para un
biorreactor que opera en el Estado Continuo (E.E) son:
Balance de Biomasa en el Estado Continuo

VdX/dt = -FX + Vrx = -F/X + VµX = 0; rX = mX; E.E » dX/dt = 0

Por definición: D = velocidad de dilución = F/V » µ = D

Balance de Sustrato en el Estado Continuo

VdS/dt = F (So – S) – Vrs; rs = µX/YX/S; E.E » dS/dt = 0

Por definición: SEE = KsD/µm – D » XEE = YX/S (S0 – S)

Donde: D = velocidad de dilución; SEE = concentración del sustrato limitante de la
velocidad en estado estacionario; XEE = concentración de biomasa en estado
estacionario.

Balance de Producto en el Estado Continuo

VdP/dt = -FP + Vrp = PEE = qPX /D; rP = qPX; E.E » dP/dt = 0

Por definición: PEE = YP/X (µ+mp)

Donde: PEE = concentración del producto en el estado estacionario.
Nota: cuando el sustrato limitante de la velocidad de crecimiento (S) es también la
fuente de carbono: X = DY´X/S (So – SEE) / (D + msY´X/S)

Balances y Ecuaciones de Biorreactores en Estado Semicontinuo

Los balances de materia para la biomasa (X), el sustrato (S) y el producto (P) para un
biorreactor que opera en el Estado Semicontinuo (Alimentado) son:

Balance de Biomasa en el Estado Semicontinuo

d(VX)/dt = Vrx = VµX

Balance de Sustrato en el Estado Semicontinuo

d(VS)/dt = FSo – Vrs

Balance de Producto en el Estado Semicontinuo

d(VP)/dt = Vrp
Nota: en una operación en el Estado Semicontinuo el volumen V permanece dentro del
operador diferencial; ya que, varía con el tiempo.

Balances y Ecuaciones de Biorreactores en el Estado Discontinuo

Dado que F1 = F2 = 0, las ecuaciones de balance de materia para la biomasa (X), el
sustrato (S) y el producto (P) para un biorreactor que opera en el Estado Discontinuo son:
Balance de Biomasa en el Estado Discontinuo
d(X)/dt = rx = µX
Balance de Sustrato en el Estado Discontinuo

d(S)/dt = rs = µX/Yx/s
Balance de Producto en el Estado Discontinuo

d(P)/dt = rp

ECUACIÓN DE BALANCE INDIVIDUAL POR COMPONENTE EN BIORREACTOR

La Figura 2 muestra el Balance de Masa Individual para un Componente (y) en una
operación continua con transferencia de masa (Fi, Fo) a
través del volumen de control (V) del biorreactor, a una
velocidad molar (Ny) conocida como velocidad de
transformación.
Los balances individuales; ya sea que, se trate de un
balance de masa o un balance molar. Se establecen por
componente individual (y) del bioproceso. No obstante,
también es usual establecer balances particulares tales
como: el balance de biomasa (X), el balance de
substrato limitante de la velocidad de crecimiento (S),
y el balance producto (P). Incluso se
Figura 2. Balance de Materia para un Componente (y)
establecen balances específicos para
elementos como: oxígeno (balance de O2) y carbono (balance de C) en biorreactores con
funciones especiales como el levantamiento por aire; en donde, el oxígeno disuelto en el
medio líquido cumple una función nutritiva; además de la de agitación. O el de un
fermentador de levadura, en donde, el azúcar cumple la función análoga de fuente de
carbono.

Ecuación de Balance General de Materia para un Componente Individual ‘y’

d(Vy)/dt = (Fiyi + Vrgy + VNiy) – (Foyo + Vrcy + VNoy)

Donde: V = Volumen del biorreactor (L); Vy = volumen del componente ‘y’ dentro del
biorreactor (L); Fi = Velocidad de flujo de entrada ‘i’ al biorreactor (L/hr); Fi = Velocidad de
flujo de salida ‘o’ del biorreactor (L/hr); yi = Concentración del componente ‘y’ dentro del
biorreactor al inicio ‘i’ del bioproceso (g/L); yo = Concentración del componente ‘y’ dentro
del biorreactor al final ‘o’ del bioproceso (g/L); rgy = Velocidad de generación, formación o
producción del componente ‘y’ (g/L.hr); rcy: Velocidad de consumo o utilización del
componente ‘y’ (g/L.hr); Niy = Velocidad de transferencia inicial ‘i’ del componente ‘y’ del
gas al líquido (g/L.hr); Noy = Velocidad de transferencia final ‘o’ del componente ‘y’ del
líquido al gas ( g/L.hr); t = tiempo (hr).
Nota: las unidades comúnmente usadas para la velocidad molar (N) son g/h, kg/h,
mmol/h, mol/h. Si el volumen (V) es constante, es posible simplificar la ecuación
dividiendo por V ambos términos. Con lo que, la Ecuación de Balance General de Materia
para un Componente Individual ‘y’ se transforma en: dV/dt = Fi – Fo y el balance se
expresa en base volumétrica. Ejemplos: g/L.hr, mol/L.hr.

Ecuación de Balance de Biomasa (X)

d(VX)/dt = FiXi + VrgX – FoXo – VrcX. rgX = µX = Velocidad de crecimiento

de la biomasa (g/L.hr). rcX = kdX = Velocidad de muerte celular (g/L.hr).
Cuando el volumen (V) es constante, es posible simplificar la ecuación

dividiendo por V ambos términos Integrando

Resolviendo la integral
Ecuación de Balance de Sustrato (S)

d(VS)/dt = FiSi – FoSo – VrcS. Donde: rcS = qsX/YX/S = µx/YG + mx + qPX/YP.

Donde: c = coeficiente
estequiométrico; MW = Peso
Molecular.

Ecuación de Balance de Producto (P)

d(VP)/dt = FiPi – FoPo – VrgP. Donde: rgP = qpX.

Donde: f =
coeficiente de
formación;
MW = Peso Molecular.

Ecuación de Balance de Oxígeno Disuelto (O2)

d(VCO2)/dt = FiCO2i – FoCO2o – VrcO2 + VNiO2.

 Donde: NO2 = Demanda Oxígeno (O2) = Cantidad de
oxígeno requerida por unidad de tiempo y por unidad de
volumen de cultivo; YO2/x = Coeficiente de rendimiento de
oxígeno (O2) basado en células (x); µ = Velocidad específica
de crecimiento celular.
Donde: NA = Velocidad
de transferencia de
oxígeno; kL =
Coeficiente volumétrico de transferencia de O2 a la fase líquida (cm/hr); a = Area
interfacial específica (cm2/m3); C* = Concentración (Hipotética) de O2 en el equilibrio
(mM/L); C = Concentración de O2 disuelto en el seno de la fase líquida; P* = Presión
(Hipotética) de O2 en el equilibrio; P = Presión de O2 en el seno de la fase gas; H =
Constante de Henry.

Ecuación de Balance de Anhídrido Carbónico Disuelto (CO2)

d(VCCO2)/dt = FiCCO2i – FoCCO2o + VrgCO2 – VNoCO2

Nomenclatura:

• V = Volumen del líquido en el biorreactor, L

• t = Tiempo, hr
• y = Concentración del componente y en el líquido dentro del biorreactor, g/L
• X = Concentración de biomasa en el líquido dentro del biorreactor, g/L
• S = Concentración de sustrato en el líquido dentro del biorreactor, g/L

• P = Concentración de producto en el líquido dentro del biorreactor, g/L

• CO2 = Concentración de oxígeno en el líquido dentro del biorreactor, g/L
• CO2* = Concentración de oxígeno en el líquido en equilibrio con el gas, g/L
• CCO2 = Concentración de CO2 en el líquido dentro del biorreactor, g/L
• F = Velocidad de flujo de líquido, L/hr

• Ni = Velocidad de transferencia de un componente delgas al líquido, g/L.hr

• No = Velocidad de transferencia de un componente del líquido al gas, g/L.hr

• rg = Velocidad de generación, formación o producción, g/L.hr

• rc = Velocidad de consumo o utilización, g/L.hr

 • µ = Velocidad específica de crecimiento celular, hr-1

• qS = Velocidad específica de consumo de sustrato, g/g.hr

• qP = Velocidad específica de formación de producto, g/g.hr

• m = Velocidad específica de consumo de sustrato para mantenimiento celular,

g/g.hr

• Kd = Velocidad específica de muerte o declinación celular, hr-1

• YP = Coeficiente (estequiométrico) de rendimiento de producto basado en el

consumo de sustrato consumido para formación de producto, g/g
• YP/S = Coeficiente de rendimiento de producto basado en el consumo total de
sustrato, g/g
• YG = Coeficiente de rendimiento de biomasa basado en el consumo de sustrato
para crecimiento, g/g
• YX/S = Coeficiente de rendimiento de biomasa basado en el consumo total de
sustrato, g/g

• kLa = Coeficiente volumétrico de transferencia de oxígeno, hr-1.

Subíndices:

• i = Ingreso • o = Salida • S = Sustrato • P = Producto • O2 = Oxígeno CO2 =

Anhídrido carbónico.

ECUACIÓN DE DISEÑO DE UN BIORREACTOR

La Ecuación de Diseño de un Biorreactor se llama así porque se diseña a partir de la
Ecuación de Balance General por Sistema de Flujo en Biorreactor para determinar el
tiempo de cultivo dentro de un biorreactor según sea la operación de flujo en
biorreactor.
Ecuación de Diseño de un Biorreactor Continuo
Para poder utilizar la Ecuación de Diseño de un Biorreactor primero hay que modificar la
definición de componente de biomasa X y sustituirlo por conversión X del componente i
(Xi).

Por definición: Xi = (Fio-Fi)/Fio. Donde: F = flujo molar del componente i.

Despejando: Fi = Fio(1-Xi) » dFi/dt = -(Fio)dXi/dt = riV.

Con lo que, la ecuación de balance de biomasa para el estado estacionario se
transforma en: -FXi + riV = VdXi/dt = 0.

Reordenado: V/F = ∆Xi/-ri = τ = ecuación de diseño de un reactor de mezcla

perfecta. Donde: τ = tiempo de retención del cultivo dentro del biorreactor.
∆Xi = Xi2 – Xi1 = dXi.
“Otro término comúnmente utilizado en el diseño de reactores es el tiempo espacial (t) el
cual define el tiempo necesario para procesar o fermentar en el biorreactor, un volumen
de alimentación, medido en condiciones de entrada (presión y temperatura), igual al
volumen de operación del biorreactor (el que define el estado estacionario). El tiempo
espacial se obtiene dividiendo el volumen de reactor (V) entre el caudal volumétrico de
entrada al biorreactor (Q). t = V/Q. Observe que al igual que t las unidades de τ son s-1.”.

Por este motivo, el tiempo de cultivo dentro de un biorreactor en un

modo de operación continuo se conoce como tiempo de
retención (τ) de un biorreactor.

La figura muestra las Curvas de Concentración para la Densidad

Celular (X) y el Sustrato Limitante de la Velocidad de
Crecimiento (S) en función del Tiempo de una Operación de Flujo
en Modo Continuo.
Ecuación de Diseño de un Biorreactor Semicontinuo
Un sistema de cultivo semicontinuo es un sistema de flujo transitorio; donde hay un flujo
temporal que alimenta al biorreactor; por lo que, balance general de masa que se aplica
a un volumen de control (diferencial de volumen) para un componente i.

Por definición: Fi - (Fi + dFi) - (-rxi)dV = 0. Operando se obtiene: -dFi/dV = -rxi =

Ecuación de Balance para un Componente i de un Biorreactor en Flujo Semicontinuo.
También, por definición la conversión del componente i en biorreactores en flujo
semicontinuo es: Xi = (Fio - Fi)/Fio. Dado que no hay flujo de salida, la ecuación de
balance se convierte en: FiodXi = -rxidV. Integrando la expresión obtenemos: ∫dV/Fio
= ∫dXi/-rxi. Donde los límites de integración son: (0, V) para el volumen V y (Xio, Xif)
para la conversión X. Resolviendo la integral obtenemos: V/Fio = ∫dXi/-rxi = t la
Ecuación de Diseño para un Biorreactor en flujo Semicontinuo.
También es posible expresar la ecuación de diseño en función de la concentración; para
eso, debemos utilizar la siguiente ecuación: Fio = CioQi donde Cio es la concentración
del componente i en la condición inicial de entrada y Qi es el caudal volumétrico del
componente i. Sustituyendo expresiones obtenemos: V/Fio = V/QiCio = τ/Cio. Donde
τ es el tiempo espacial del biorreactor. En forma integral: τ = Cio∫dXi/-rxi =
Tiempo Espacial para un Biorreactor en Flujo Discontinuo.

Nota: para sistemas donde la densidad (ρ) es constante: τ = - ∫dCi/-rxi.

Por este motivo, el tiempo de cultivo dentro de un biorreactor en un

modo de operación semicontinuo se conoce como tiempo
de residencia (tr) de un biorreactor.

La figura muestra las Curvas de Concentración para la Densidad

Celular (X) y el Sustrato Limitante de la Velocidad de
Crecimiento (S) en función del Tiempo de una Operación de Flujo
en Modo Semicontinuo.
Ecuación de Diseño de un Biorreactor Discontinuo

Un sistema de cultivo discontinuo es un sistema discreto; en donde no hay flujo de

entrada (alimentación) o de salida (lavado) de biomasa (X); por lo que, la conversión del
componente i (Xi), se basa en los moles (Ni) del componente metabólico; no en la célula.

La ecuación de balance del componente i es: d(Xi)/dt = rxi = µXi. Utilizando la

definición de conversión y diferenciando Ni respecto al tiempo: dNi/dt = -NiodXi/dt.
Sustituyendo la ecuación de balance se transforma en: -NiodXi/dt = rxiV.

Separando en variables e integrando: ∫(Nio/-rxiV) dXi = ∫dt. Donde los límites de

integración para la conversión (X) son: Xio (conversión de entrada) y Xf (conversión final).
Y to = 0 = tiempo inicial; tf = tiempo total de reacción = tiempo final; para el tiempo de
reacción. Integrando obtenemos: t = Nio∫dXi/-rxiV la ecuación general de
diseño para un biorreactor discontinuo.
Por este motivo, el tiempo de cultivo dentro de un
biorreactor en un modo de operación discontinuo se
conoce como tiempo de cultivo (tc) de un biorreactor.

La figura muestra las Curvas de Concentración para la

Densidad Celular (X) y el Sustrato Limitante de la
Velocidad de Crecimiento (S) en función del Tiempo de
una Operación de Flujo en Modo Discontinuo.

OPERACIÓN CON SISTEMA DE FLUJO EN BIORREACTOR

Existen tres operaciones adicionales, asociadas a sistemas de flujo. Estas modifican el
comportamiento y la cinética del sistema.
Dichas operaciones son: recirculación, derivación
y purga.
Operación con Recirculación de Flujo: la
recirculación en bioprocesos industriales se
realiza con cuatro (4) objetivos fundamentales:
1. Recuperación de metabolitos
2. Dilución del flujo interno del bioproceso

3. Control de la variable biomasa del bioproceso

4. Circulación activa del fluido de trabajo o
cultivo
Mediante ecuaciones, podemos
plantear balances de
Figura 3.Esquema de una Operación con Recirculación de Flujo
materia para componentes individuales en los cuatro subsistemas distintos que se
indican con líneas interrumpidas.
1. Respecto a todo el proceso, incluyendo el flujo de reciclaje. Los balances que puedan
describir las ecuaciones para este sistema, no contendrán información acerca del flujo de
reciclaje.

2. Respecto al punto de unión en el que la alimentación nueva se combina con el flujo de

reciclaje. Las ecuaciones de balance de este sistema contienen información acerca del
flujo de reciclaje.

3. Único respecto al proceso. Estos balances no contienen información acerca del flujo de
reciclaje.

4. Respecto del punto de unión en el que el producto bruto se divide en reciclaje y

producto neto. Contiene información acerca del flujo de reciclaje y el producto.
Además, sin violar la homogeneidad, podemos realizar balances de materia, utilizando
combinaciones de subsistemas. La consecuencia de utilizar estos balances es que las
ecuaciones derivadas de ellos serán dependientes. Sólo tres de los cuatro balances son
independientes, si se hacen para un mismo componente.

Operación con Derivación de Flujo: una derivación es un flujo que pasa por alto una o
más etapas del proceso y llega directamente a una etapa posterior. Se suele utilizar un
flujo de derivación para controlar la composición de un flujo de salida final, de una unidad
de proceso, al mezclar el flujo de
Figura 4. Esquema de una Operación con Derivación de Flujo
derivación con el flujo de salida de la unidad, en las proporciones adecuadas para obtener
la composición final deseada.
Operación con Flujo de Purga: una purga es un flujo que se utiliza para eliminar una
acumulación de sustancias inertes o
indeseables que de otra manera se
acumularían en el flujo de reciclaje.

Figura 5. Esquema de una

Operación con Flujo de Purga

OPERACIÓN EN MODO DE CULTIVO DISCONTINUO (BATCH)

“Un reactor por lotes de mezcla completa es espacialmente homogéneo
como resultado de una agitación intensa; la temperatura y el pH
también pueden mantenerse uniformes, en todo punto del reactor, con
un control apropiado.”.

Reactor por Lotes

La forma más general de las ecuaciones de balance de materiales y de energía
para las especies de interés, es:

1.

Donde:
V es el volumen del reactor;

ci es la concentración del componente i;

cj representa la concentración de otras especies que pueden influir las velocidades de
formación o consumo de i en la reacción y

r(ci, cj) es la velocidad volumétrica de formación de ci por la reacción.

También se puede escribir un balance de masa global para el sistema:

2.
Suponiendo que la densidad total de la fase líquida (ρ) es constante, el volumen de
líquido permanece constante, y se puede sacar V del diferencial de la ecuación anterior,
para obtener:

3.

Con la densidad (ρ), y las capacidades caloríficas constantes, la ecuación de conservación

de la energía se puede escribir como:

4.

Donde:

cp es la capacidad calorífica;
D HR es el calor de reacción y

rX es la velocidad volumétrica del incremento en la masa de células secas.

Aunque el biorreactor se opera por lotes, la ecuación de balance de energía contiene los
términos para el flujo de calor del reactor asociado con el control de la temperatura (Q)
y para la generación de calor por agitación (-W, trabajo de eje).
Como ejemplo, el crecimiento microbial puede representarse por dos ecuaciones para la
masa de células y el sustrato, utilizando el modelo de Monod:

5.

6.

Con condiciones iniciales X(0) = X0 ; cS(0) = cS0

Estas ecuaciones pueden sumarse después de multiplicar la ecuación 6 por YX/S para
obtener:

Y de esta forma:
 7.

Expresando X en función de cS, a partir de la ecuación anterior y reemplazando el

resultado en la ecuación 6, se tiene:

8.

Ecuación que puede integrarse analíticamente para obtener:

9.

En esta ecuación, cS está implícita y el tiempo en el cual se consume el sustrato, puede

encontrarse calculando valores de t correspondientes a valores específicos de la
concentración de sustrato.

Si en el cultivo se forma un producto que puede estar parcialmente asociado o no

asociado al crecimiento microbial, de la forma:

10.

el balance de materiales para el sustrato debe reescribirse para contabilizar la

conversión de sustrato en producto, (ecuación 11), y las tres ecuaciones de balance de
material que resultan: ecuaciones 5, 10 y 11, pueden resolverse numéricamente para
obtener los perfiles de concentración típicos.

11.

Muerte de células en un cultivo por lotes

En un cultivo en crecimiento, algunas células pueden volverse inactivas o morir, como
resultado de errores en la auto síntesis (mala interpretación del ADN, por ejemplo). No
obstante, la fracción de células viables en los cultivos bacteriales puede ser bastante alta
en el crecimiento por lotes, las células eucariotas pueden morir a velocidades
apreciables, y así, la viabilidad de ese cultivo será menor del 100%. Si se considera que
únicamente las células viables (Xv) generan células no viables (Xnv) con una cinética de
primer orden, en función de la concentración de células viables con una constante de
velocidad de reacción k, se tiene, para el crecimiento microbial:

12.

13.

El crecimiento de la población total de células está dado por:

14.

Si se considera que m es aproximadamente constante para la mayor parte de la fase

exponencial del crecimiento por lotes, la ecuación 12 puede integrarse para Xv(t) y el
resultado se sustituye en la ecuación 14 para XT. La integración de la ecuación que
resulta, proporciona la concentración de células viables y la relación de viabilidad
(Xv /XT):

15.

16.

Si el inóculo se compone principalmente de células viables, Xv(0)/XT(0) es

aproximadamente igual a 1, y la expresión para la viabilidad, se reduce para tiempos lo
suficientemente grandes (exp(µ - k)t >1) a:

17.

esto es, la viabilidad fraccional permanece constante para la mayor parte del período
exponencial de crecimiento. Si la velocidad de muerte k es igual a la velocidad de
crecimiento, µ, se tiene entonces un crecimiento lineal de la biomasa total:

18.
Fuente: “Reactor por lotes”.

OPERACIÓN EN MODO DE CULTIVO SEMICONTINUO (FEED BATCH)

“Este tipo de operación es una forma intermedia
entre la operación por lotes y la continua,
incrementando la duración de la fermentación por
lotes y de la productividad global del reactor.”.

Reactor por lotes alimentado (Fed-batch)

“En la tecnología de operación por lotes con
alimentación repetida, el fermentador no se descarga
completamente después de la reacción; el residuo se
usa como inóculo para la siguiente corrida.”. Figura 6. Representación esquemática
de un reactor por lotes alimentado. F es
A continuación, se analiza la operación por lotes con
la corriente de entrada, cSA la
alimentación, con velocidades de alimentación concentración de sustrato en la
constantes y la operación por lotes con alimentación alimentación, V es el volumen de la
repetida. mezcla de fermentación y X la
concentración de biomasa en la mezcla
El punto de partida es la formulación de los balances de fermentación. Fuente: “Reactor por
de materiales para la biomasa, el sustrato y el lotes alimentado (Fed-batch)”.
producto junto con un balance total de materiales que es necesario puesto que el
volumen del reactor cambia con el tiempo. Con la suposición que la densidad del líquido
es constante, estas ecuaciones son:

1A.

1B.

1C.

1D.

Donde:
cSA es la concentración de sustrato en el afluente y π es la velocidad específica de
formación de producto.
Si por el momento se omite la formación de producto, las ecuaciones de balance de
materiales son:

2A.

2B.

2C.

Estas ecuaciones son similares a las de un quimiostato, con una importante diferencia;
el término F/V, análogo a la velocidad de dilución D, cambia con el tiempo, puesto
que V aumenta, mientras que D es constante para la operación quimiostática en estado
estacionario.
Los balances de células y sustrato se pueden combinar e integrar para obtener:

3.

Si la concentración de sustrato en el afluente cSA, satisface la ecuación:

4.

Se tiene:

5.

Lo cual también es cierto para tiempos muy largos (es decir, para t >> V/F), en los cuales
el término exponencial es pequeño.
A continuación, se analiza un caso especial. Si la velocidad de alimentación F es
constante, se puede esperar, por comparación con el comportamiento del quimiostato,
un estado cuasi estacionario en el período en donde la concentración celular es
constante con respecto al tiempo, es decir, dX/dt ~ 0. Lo anterior requiere que la
velocidad específica de crecimiento m, a F/V, debe disminuir como V se incrementa en
el tiempo. Si m decrece continuamente, la concentración de sustrato debe disminuir con
el tiempo (por esto dcS/dt no puede ser cero). Reemplazando la relación de Monod
para m, se obtiene

6.

La masa total de células (XV) con estas condiciones está dada por

7.
constante

Por esta razón, la masa total de células crece linealmente con el tiempo.

Ahora, se contempla como la velocidad específica de crecimiento debe variar bajo

condiciones de estado cuasi estacionarias. Como F es constante, V crece linealmente con
el tiempo (V = V0 + Ft) y

8.

Inicialmente, cuando V ~ V0

9.
~
Cuando el tiempo se hace mayor el volumen crece y V >> V0, por ello:

10.
~
La velocidad específica de crecimiento decrecerá rápidamente al comienzo y luego a una
velocidad mucho más lenta a medida que transcurra el tiempo. Esto puede observarse
numéricamente al solucionar las ecuaciones de balance de biomasa y sustrato. Para
simplificarlas, se introducen las siguientes variables adimensionales:
Los balances de materiales se convierten en:

11.

Si se considera el caso en el cual F no es constante y varía con el tiempo, se puede

seleccionar F de tal forma que F/V sea constante, indicado por l. Esto implica

12.
por lo tanto

Por lo anterior, el sistema con alimentación exponencial alcanzará las concentraciones

de estado estacionario correspondientes a las del quimiostato. Tanto X como cS se
pueden mantener en valores constantes.
Fuente: “Reactor por lotes alimentado (Fed-batch)”.

OPERACIÓN EN MODO DE CULTIVO SEMICONTINUO (QUIMIOSTATO)

“El uso de reactores continuos de tanque agitado, con el fin de extender la duración de
un cultivo microbial, se implementó en la década de 1950 por Novick y Szilard (1950) y
Monod (1950). El hecho que un reactor continuo de tanque agitado se podía utilizar
para mantener el crecimiento microbial en su valor de estado estacionario, el cual
puede variarse desde cualquier velocidad de crecimiento hasta la máxima  max , fue un
avance muy importante, ya que acabó con la tradicional manera de pensar en el sentido
que el tiempo para el crecimiento estacionario de los microorganismos era únicamente
posible a la máxima velocidad, correspondiente al tiempo mínimo de replicación que
aparece en los cultivos por lotes. Por consiguiente, el empleo de biorreactores
continuos de mezcla completa para el estudio de la fisiología microbial, condujo a
importantes avances en la comprensión del ciclo celular, la regulación metabólica y la
formación de productos.”.

El Quimiostato: el reactor continuo ideal de tanque agitado

 Las ecuaciones de
balance de
materiales se
pueden formular
para cada una de
las variables de
importancia del
reactor. Si se
supone el caso en
el cual
únicamente un
sustrato (S) limita
Figura 7. Esquema de un biorreactor continuo de tanque agitado. Por lo general, se la velocidad de
controlan las velocidades de flujo de nutrimentos al reactor, el pH y la temperatura. crecimiento de los
X indica el peso de células secas, cS es la concentración de sustrato y F es el flujo de organismos y que
nutrimentos al reactor. Fuente: “El Quimiostato: el reactor continuo ideal de
la velocidad
tanque agitado”.
volumétrica de
crecimiento está dada por m X, se tienen las siguientes ecuaciones:

1A.

1B.

1C.

Cuando los flujos volumétricos de entrada y de salida, Fe, Fsal, se mantienen constantes e
iguales a F, las ecuaciones se simplifican a: (nótese que dX/dt ya no es igual a mX, como
si sucede durante el crecimiento por lotes)

2A.

2B.

La relación, F/V se denomina generalmente como velocidad de dilución (D), con

unidades recíprocas de tiempo. Esta velocidad de dilución es el inverso del tiempo
promedio de residencia, t, y es igual al número de veces que una cantidad de mezcla de
reacción equivalente al volumen del reactor pasa a través del recipiente de reacción, por
unidad de tiempo. En estado estacionario (EE), las derivadas con respecto al tiempo se
hacen iguales a cero, y la ecuación para la concentración celular tiene la solución:

3.

Cuando la corriente de alimentación es estéril (lo cual casi siempre ocurre), X0 es igual a
cero, y las dos soluciones posibles para la ecuación anterior, son:

ó 4.

En el caso inusual en el cual la velocidad específica de crecimiento del cultivo [µ(cS)] es

independiente de la concentración de sustrato y, además, es constante, la concentración
de células en estado estacionario (XEE) cuando la velocidad de dilución es igual a µ, es
indeterminada. La solución de la segunda ecuación de balance de materiales muestra
que la concentración de sustrato en estado estacionario también es indeterminada, no
obstante que tanto XEE como cSEE deben satisfacer:

5.

Y así, es posible obtener un intervalo de valores para las concentraciones de células y de

sustrato.
Esto puede ser visto experimentalmente, cuando las concentraciones de entrada de
sustrato son muy bajas; también se observa que las concentraciones de células y de
sustrato varían con el tiempo.
Generalmente, sin embargo, la velocidad específica de crecimiento es función de la
concentración de sustrato. Cuando se utiliza la relación de Monod entre µ y cS , las
ecuaciones de balance de materiales ya no se indeterminan y se obtiene:

6.

Ecuación que puede resolverse para cS :

7.
siempre que
Y de la ecuación de balance para el sustrato se tiene:

8.

Y al reemplazar D = m en la ecuación anterior:

9.

La segunda solución de estado estacionario se obtiene cuando XEE = 0. El valor

correspondiente a la concentración de sustrato es cSEE = cS0. Este estado estacionario se
denomina como "lavado", puesto que las células ya no están presentes en el reactor. La
velocidad de dilución a la cual ocurre el lavado, puede hallarse examinando la ecuación
6. Cuando cSEE es igual a la concentración de sustrato en la corriente de alimentación, se
encuentra que la velocidad de dilución es:

10.

La máxima velocidad de dilución es ligeramente menor que la máxima velocidad

específica de crecimiento. Si la velocidad de dilución es mayor que este valor, el sistema
tiende a la segunda solución de estado estacionario XEE = 0. Esto puede observarse a
partir del comportamiento de cEE ; como D → µmax , cEE se vuelve indeterminada.

Tabla 1. Resumen de las soluciones de estado estacionario.

siempre que

es indeterminada si
Los valores de KS son pequeños, particularmente cuando se comparan con los de la
concentración de sustrato en la corriente de entrada, cS0. Por ello, la concentración de
sustrato en el estado estacionario es muy pequeña e independiente de la concentración
de sustrato en la corriente de entrada. Las soluciones no-triviales pueden aplicarse
únicamente en el caso en donde la concentración es mucho mayor que cSEE . Si cS0 < cSEE,
la velocidad específica de crecimiento m es constante, las ecuaciones se indeterminan y
pueden observarse una gran variedad de estados estacionarios.

La operación de un reactor continuo de tanque agitado bajo condiciones en las cuales

sólo un sustrato limita el crecimiento, da como resultado un valor casi constante de la
concentración de sustrato sobre un amplio intervalo de velocidades de dilución. Otros
sustratos, los cuales se consumen a velocidades proporcionales a la velocidad específica
de crecimiento de biomasa, también tendrán concentraciones de estado estacionario
que son independientes de D y, además, son constantes. Por esta razón, este tipo de
operación de biorreactores se denomina comúnmente como
operación quimiostática (es decir, el ambiente químico permanece estático).

Cuando la velocidad de dilución se aproxima a µmax, la concentración de células

desciende rápidamente. La operación del quimiostato a velocidades de dilución
cercanas a µmax es experimentalmente complicada debido a la sensibilidad del sistema.
Pequeñas variaciones de la concentración de sustrato en la corriente de entrada, la
velocidad del flujo de alimentación o en la velocidad de crecimiento de los
microorganismos, pueden ocasionar el lavado de las células.
La productividad volumétrica de células en un quimiostato está dada
por DXEE (expresada por lo general, en unidades de gramos de células por litro de
reactor por hora). La velocidad de dilución a la cual la productividad es máxima se
encuentra a partir de:

11.
de esta forma

La concentración de biomasa correspondiente es:

12.

Si KS << cS0 la productividad volumétrica se reduce a YX/SµmaxcS0.

Comparación entre la productividad de un cultivo por lotes y la de un cultivo continuo

La productividad de biomasa de cultivos por lotes y continuos puede compararse bajo
las mismas condiciones siempre que cS0 >> KS. La solución de la ecuación de balance de
biomasa para el cultivo por lotes puede simplificarse si se supone que µ ~ µmax durante
la fase exponencial del crecimiento. De esta forma, se obtiene el tiempo de duración de
la fase exponencial texp:

13.

Ecuación que se puede organizar en la forma:

14.

El tiempo total necesario para la fermentación por lotes, es la suma de los tiempos de
las fases de adaptación y exponencial y de los tiempos empleados en vaciar, esterilizar e
inocular de nuevo el reactor. Éstos últimos reúnen en una sola constante denominada
tiempo muerto tm . Con base en lo anterior, el tiempo total de la operación por lotes
será la suma del tiempo de la fase exponencial de crecimiento y el tiempo muerto:

15.

Si la concentración inicial de sustrato (cS0) es igual a la de la alimentación al quimiostato,

la biomasa producida en este tipo será aproximadamente YX/ScS0. La productividad
volumétrica del reactor por lotes es por lo tanto YX/ScS0 /tlotes. La comparación de ésta
con la máxima productividad de un quimiostato (ecuación 11), permite obtener:

16.

Típicamente, la relación de la concentración final de células a la concentración de células

en el inóculo (X/X0) es aproximadamente igual a 10. Por esta razón, el cultivo continuo
ofrece un mínimo de 2,3 veces la productividad de una fermentación por lotes.
Fuente: “El Quimiostato: el reactor continuo ideal de tanque agitado”.

Reactores de flujo en pistón y de lecho empacado

El extremo opuesto al reactor de mezcla completa es el reactor de flujo en pistón, en el cual, el
fluido se desplaza a lo largo de un tubo o canal de forma que se presenta un mezclado
imperceptible en la dirección del flujo (la dirección axial), pero hay una mezcla bastante buena
en la dirección radial. Tales reactores son comunes en la industria química, pero por razones que
se considerarán más adelante, son poco utilizados para el crecimiento de células. Sin embargo,
estos reactores se utilizan frecuentemente para células inmovilizadas y reacciones con enzimas.
La isomerización de glucosa a fructosa, que es un paso clave en la producción de jarabe de maíz
con un elevado contenido de fructosa, es un ejemplo importante de un proceso comercial que se
lleva a cabo en un reactor de lecho de enzimas inmovilizadas. Los diagramas esquemáticos de un
reactor de flujo en pistón y de uno de lecho empacado, se presentan a continuación:

Figura 8. Diagramas esquemáticos de un reactor de flujo en pistón y de uno de lecho empacado. Fuente:
“Reactores de flujo en pistón y de lecho empacado”.

Considérese primero un reactor de flujo en pistón sin catalizador y que contiene células
o una enzima. Si la velocidad superficial en la dirección axial (dirección z) es us (la
velocidad superficial es la velocidad lineal promedio que el fluido debería tener si no
hubiera empaque en el reactor y es igual a F/A, donde A es el área transversal del
reactor y F es el flujo volumétrico dentro del mismo), se pueden escribir las siguientes
ecuaciones de estado estacionario para el balance de células y de sustrato:

1.

Donde rX y rS son las velocidades de reacción basadas en los volúmenes de líquido.

Si la velocidad axial es constante, como debería ser el caso si la densidad del fluido
permanece constante, estas ecuaciones se convierten en:

2.

Las cuales pueden reescribirse en función de un tiempo constante

característico q (= z / us )
 3.

Por consiguiente, las ecuaciones se reducen a las de un reactor por lotes, excepto
que q reemplaza al tiempo t . Las condiciones iniciales y finales sobre las cuales estas
ecuaciones se integran, son las siguientes:

z=0 q=0 X = X0 cS = cS0

z=L q = L/us X = Xfinal cS = cSfinal

Así, las soluciones para las ecuaciones anteriores para varias expresiones de velocidad
(por ejemplo, la ecuación de Monod) pueden tomarse directamente de los resultados
para un reactor por lotes.
El reactor de flujo en pistón ofrece un grado de conversión de sustrato mayor que el de
un reactor de tanque agitado de igual volumen (y, por lo tanto, igual tiempo de
residencia), porque la velocidad de reacción en un reactor de tanque agitado será menor
que en un reactor de flujo en pistón. En un reactor de tanque agitado, la concentración
de sustrato cae inmediatamente al valor de salida y la velocidad de reacción se
determina por este valor. Con una cinética del tipo Monod, la velocidad decrece al
disminuir la concentración de sustrato; por ello, el reactor de flujo en pistón ofrece la
ventaja de mayores velocidades de reacción que en un reactor de tanque agitado,
debido a que la concentración de sustrato desciende desde su valor inicial a lo largo de
la dirección axial.
Las principales dificultades en la operación de un reactor de flujo en pistón con células
suspendidas radican en la necesidad de proveer un inóculo continuo de células (X0 debe
suministrarse a la entrada del reactor), y en el mantenimiento de un pH constante, así
como en el suministro de oxígeno a lo largo de la longitud del reactor. Estos problemas
generalmente son tan extremos que existen pocos ejemplos de reactores biológicos
perfectos de flujo en pistón. Algunos tipos de reactor pueden aproximarse como límite,
al comportamiento de flujo en pistón; por ejemplo, un reactor con circulación
pneumática de líquido con una fuerte circulación hacia arriba de líquido, o un gran
tanque de tratamiento de aguas de desecho.
En contraste con el crecimiento microbial, los reactores de flujo en pistón y de lecho
empacado se emplean comúnmente con enzimas libres e inmovilizadas. Aquí las
necesidades de suministro de oxígeno y control de pH no se aplican usualmente, ya que
muchas reacciones enzimáticas no requieren oxígeno y no generan ácidos o bases. Como
se mencionó, una de las mayores aplicaciones industriales de este tipo es la
isomerización de glucosa a fructosa para la producción de jarabe de maíz con alto
contenido de fructosa. Esta reacción está catalizada por glucosa isomerasa inmovilizada
sobre un soporte, tal como alúmina, en reactores de lecho empacado.
En un reactor de lecho empacado, la velocidad axial del fluido será mayor que en un
reactor abierto de flujo en pistón y depende de la fracción de espacio vacío e, definida
como:

ε = Volumen libre del reactor/Volumen total del reactor

4.
= 1 – (Volumen total de partículas/Volumen total del reactor)

y la velocidad de fluido intersticial, vi, es:

vi = F/(área de la sección transversal)

5.
= F/(V/L)

La velocidad intersticial se emplea luego para calcular el tiempo de residencia del

líquido τ. Éste tiene el valor τ = ε (V/F). En el caso de enzimas en solución, la fracción de
espacio vacío ε será igual a la unidad. Un valor típico de e para enzimas inmovilizadas
sobre soportes esféricos es aproximadamente igual a 0,4. En el caso de enzimas libres o
inmovilizadas, el balance de materia para el sustrato tiene la forma:

6.

y es posible la integración analítica de esta ecuación para algunas cinéticas comunes. La

tabla 1 muestra ejemplos de la expresión del tiempo de residencia en función de los
parámetros de la expresión de velocidad. Nótese que V'M es el producto de VM (máxima
velocidad de reacción por unidad de volumen de catalizador -líquido más sólido-) y el
volumen de catalizador por unidad de volumen de líquido (1-ε)/ε. De esta
manera, V'M = VM(1-ε)/ε.

Tabla 1. Tiempo de residencia t en función de la conversión de sustrato [d = (cS0 -cS)/cS0]

para reacciones enzimáticas en reactores de flujo en pistón y de lecho empacado.

Expresión de velocidad Tiempo de residencia (τ = εL/us )

Michaelis – Menten
 Inhibición por sustrato

Fuente: “Reactores de flujo en pistón y de lecho empacado”.

RESUMEN DE MODOS DE OPERACIÓN

El biorreactor puede operarse en una de las siguientes formas:

Operación discontinua o por lotes (batch),

Operación continua, o

Varios tipos de operaciones semicontinuas.

En la siguiente tabla, se resumen los algunas de las distintas formas de operación de un
reactor biológico.
Modo de operación Comentarios Curva: concentración- Balance de masa en
tiempo un reactor ideal

Por lotes

Inoculación y carga de todos los

nutrimentos y sustratos al
mismo tiempo y hasta consumo
total

Por lotes con

alimentación
intermitente
Varios esquemas volumen –
tiempo y velocidades de
alimentación

Por lotes extendida

La concentración del sustrato

(cS), permanece constante

Por lotes repetida

Después que ha
ocurrido la reacción
en un lote, una
pequeña cantidad
del fermento se
saca del reactor
para que sirva
como inóculo para
el siguiente lote del
proceso
 Antes de estado
estacionario:

Antes de estado
estacionario:
Cultivo continuo
Con flujos de entrada y de salida
(quimiostato)
del medio de reacción. El reactor
se denomina quimiostato, en
aquellos casos en los cuales la
densidad celular y la En estado
concentración permanecen estacionario:
En estado estacionario:
constantes

Cascada de reactores continuos de tanque agitado

Con o sin alimentaciones intermedias y recirculación
del medio de cultivo o del biocatalizador

Reactor continuo de tanque agitado con recirculación

de biocatalizador
 Combinación de
reactores (Reactor
El reactor continuo de tanque
continuo de tanque
agitado sirve como un reactor de
agitado y reactor
inoculación, ya que la operación 1)
de flujo en pistón)
en estado estacionario de un
reactor de flujo en pistón no es
posible debido al 2)
desplazamiento del
biocatalizador

Fuente: “Modos de operación”.