Clonación Coniferas Latifoliadas
Clonación Coniferas Latifoliadas
Clonación Coniferas Latifoliadas
El concepto de CLON
Grupo de clulas o de organismos genticamente idnticos, originados a partir de una nica clula u organismo por reproduccin asexual, por divisin artificial de estados embrionarios iniciales o por transplante nuclear.
Grupo de plantas genticamente idnticas, obtenidas todas ellas por propagacin vegetativa de un individuo seleccionado.
El concepto de CLONACION
Clonacin de genes: tcnica que consiste en multiplicar un fragmento de ADN recombinante en una clula-husped (generalmente una bacteria o una levadura) y aislar luego las copias de ADN as obtenidas. Clonacin molecular: insercin de un segmento de ADN ajeno, de una determinada longitud, dentro de un vector que se replica en un husped especfico. Clonacin celular: proceso de multiplicacin de clulas genticamente idnticas, a partir de una sola de ellas.
Clonacin individual: proceso de multiplicacin o masificacin de un genotipo completo mediante tcnicas que utilicen todo o parte de una planta (clulas, tejidos, rganos).
WHAT IS CLONING?
Cloning BEARS - PANDAS CATS COWS DEER EXTINCT SPECIES GOATS HORSES HUMANS INSECTS MICE - RATS MULES PIGS SHEEP TREES
POR QU CLONAR, SI LOS ARBOLES SE REPRODUCEN FCILMENTE POR SEMILLAS? Y ADEMS, LOS GENETISTAS Y BIOTECNLOGOS COBRAN CARO !
CONCLUSION?
PROPAGACIN DE LEOSAS
Sexual
- Cruzamiento libre - Cruzamiento controlado
Asexual
Micropropagacin
Macropropagacin
Cultivo in vitro
Embriognesis somtica
Hijuelos, etc.
ENTONCES? :
CLONACIN DE INDIVIDUOS SELECTOS
Cuttings TCNICAS MACRO TISULARES: Acodos Injertos Hijuelos, etc.
Micropropagacin de porciones de tallos, hojas, races, etc. Cultivo de meristemos. Cultivo de polen (andrognesis) Cultivo de protoplastos Cultivos celulares en suspensin
Bioreactores
Hibridacin, Fusin de protoplastos
EJEMPLOS?
Cultivo de meristemos Microinjertos
Propagacin clonal y saneamiento del material vegetal (i.e.: eliminacin de virus).
Cultivo de pices caulinares Cultivo de yemas axilares Morfognesis directa Semilla artificial
Reproduccin vegetativa.
Transformacin gentica - T.G. va Agrobacterium - T.G. Biolistic, electroporacin, transformacin de protoplastos, microinjeccin, etc.).
SER VIVO
GENOMA
LOCI
GEN
MEJORADOR DE PLANTAS
Muchos rboles, familias, sitios, tiempo, objetivos de produccin. Selecciona para un rasgo dado, el gen ms adecuado
Seleccin:
BIOTECNOLOGO
ESCASAS !
HIBRIDACION VIA CRUZAS
O BIEN
TOTIPOTENCIA CELULAR
CAPACIDAD MORFOGNICA
EXPRESIN DE LA TOTIPOTENCIA
ORGANOGNESIS
EMBRIOGNESIS SOMTICA
DIRECTA
INDIRECTA
DIRECTA
INDIRECTA
Organognesis
Conduce a la diferenciacin de meristemos caulinares y/o radiculares que originan tallos o races adventicias, respectivamente.
ETAPAS ORGANOGNESIS
Establecimiento
Proliferacin
Elongacin Enraizamiento
CAULOGNESIS
RIZOGNESIS
Aclimatacin
VENTAJAS
ALTAS TASAS DE PROLIFERACIN PRODUCCIN TODO EL AO
ORGANOGNESIS
Hasbn, R. 2004
Establecer metodologas de cultivo in vitro de material adulto evaluando tipo de tejido a introducir (yemas y hojas) y respuesta de induccin morfognica (organognesis y/o embriognesis somtica).
SECUENCIA OPERACIONAL. Base Copa
100 um
- En un punto indiferenciado comienza el ordenamiento del tejido vascular con la evidente presencia de elementos conductores en los nuevos brotes.
EMBRIOGNESIS SOMTICA
Multiproceso a travs del cual clulas vegetales somticas indiferenciadas originan embriones normales sin conexin vascular al tejido de origen.
TIPO EXPLANTO
MEDIO CULTIVO
AMBIENTE
EMBRIOGNESIS SOMTICA
VENTAJAS
Sistema de propagacin masiva. Clonacin genotipos selectos. Generacin de ambos polos de desarrollo (raz y tallo). Automatizacin del proceso mediante cultivo lquido. Criopreservacin de los e.Ss. Semilla artificial (facilidad de manejo). Regeneracin de plantas transformadas genticamente.
EMBRIOGNESIS SOMTICA
LIMITACIONES
Difcil induccin desde tejido adulto. Efecto del genotipo. Afinamiento protocolos de cultivo. Germinacin asincrnica. Embriones somticos con anormalidades. Variaciones somaclonales.
INDUCCIN EMBRIOGNICA
CLULAS COMPETENTES
REQUERIMIENTOS
ES INDIRECTA ES DIRECTA
EXPRESIN EMBRIONARIA
* ORGANIZACIN ESPACIAL
* GENERACIN DE DIVERSIDAD CELULAR
MADURACIN EMBRIONARIA
* EXPANSIN CELULAR
* ACUMULACIN SUSTANCIAS DE RESERVA
PROCESO ANLOGO A EMBRIOGNESIS CIGTICA REPRESIN DE LA GERMINACIN TOLERANCIA A LA DESHIDRATACIN EN OCASIONES SON NECESARIOS TRATAMIENTOS POSTMADURACIN
ABA
ESTRS OSMTICO
MADURACIN E. S.
ETILENO
pH
FOTOPERODO
GERMINACIN Y CONVERSIN
DESARROLLO DE LA RAZ Y BROTE CAULINAR GENERALMENTE OCURRE SIN REGULADORES DE CRECIMIENTO SE DEBE TENER PRESENTE SEMEJANZA AL PROCESO NATURAL EL CRECIMIENTO DE PLNTULAS DERIVADAS DE E.S. SE ENCUENTRA BAJO LA INFLUENCIA ACUMULATIVA DE UNA SERIE DE TRATAMIENTOS PREVIOS
MORFOLOGA NORMAL ?
TOLERANCIA A LA DESHIDRATACIN
TIPO EXPLANTO
MEDIO CULTIVO
AMBIENTE
Volumen del recipiente, medio lquido/slido, pH, ventilacin recipientes, etc. Temperaturas, HR, fotoperiodo, etc.
EMBRIOGNESIS SOMTICA
Directa
Indirecta
Recurrente
ESTUDIO DE CASO:
Categora 1
Categora 2
Tercera Semana
Categora 3
En Presencia de Hormonas
En Ausencia de Hormonas
Resultados