Laboratorio de Análisis Instrumental: Cuantificación de Ácido Linoleico en Leche Materna Por RMN - H

Laboratorio de Análisis Instrumental 01 (2022) 1-2
Químico
Laboratorio de Análisis Instrumental Farmacéutico
Biólogo
Cuantificación de ácido linoleico en leche materna por RMN-¹H

Aguilar, Ingrid.; Angulo, Johana.; Arguelles, Valeria.; Gutierrez, Humberto.
*Laboratorio de Docencia 1, Facultad de Química, Universidad Autónoma de Yucatán. Fecha: 08/03/2022
1. Introducción 3 de 3 Cafeína
Probeta de 25 mL
La resonancia magnética nuclear (RMN) permite Probeta de 50 mL
dilucidar la estructura de moléculas, especialmente Embudo de separación
moléculas orgánicas, basándose en las propiedad Matraz balón de 100 mL
magnéticas de los núcleos, que se comportan como Pinza keck
imanes al tener un momento magnético intrínseco.¹ Pipeta pasteur con bulbo
Los núcleos con números impares de p+ o n, como Tubo de resonancia magnética
átomos de 1H, son magnéticamente más activos y de Anillo de hierro
carga positiva, estos, en presencia de un campo Soporte universal
magnético, se orientan en la misma dirección que el Micropipeta de 1-10 o de 2-20 µL
campo (spin α), mientras que los negativos en dirección Pizeta
opuesta (spin β).2
Cuando una muestra con compuestos orgánicos es -Metodología/procedimiento-
irradiada por un pulso de radiación, los núcleos spin α se Se midieron 5 mL de la muestra y se extrajo con 30 mL
promueven al β, cuando regresan a su estado inicial, de CHCl₃-MeOH 3:1 lo cual se filtro a gravedad.
emiten señales dependientes de la diferencia de energía Después se efectuó la extravasación líquido-líquido
entre ambos spines, dicha señal es detectada por el recuperando la fase orgánica,esto se trasvasó a un
espectrómetro RMN, registrándose como el espectro matraz balón (previamente pesado) y se evaporó el
RMN.2 disolvente en un evaporador rotatorio, seguidamente se
La leche materna es el principal alimento durante los esperó a que esté a temperatura ambiente el matraz y se
primeros 6 meses de vida, el ácido linoleico está peso el extracto seco. Se adiciono en el matraz 0.5 mL de
constituido por 18 átomos de carbono y 2 dobles enlaces, CDCl₃ y se homogeneizó, después con la ayuda de una
tiene isómeros geométricos y posicionales (ác. linoleico pipeta pasteur y un filtro de papel libre de pelusas se
conjugado), que, en junto con otros ácidos grasos preparó el extracto para analizarlo por RMN, de la
esenciales, constituye el 10% de las grasas de la leche siguiente manera: se transfirió la muestra disuelta a un
materna, su contenido depende de diversos factores tubo de resonancia, se le agrego 3 mg de cafeína al
como el régimen alimenticio o edad de la madre.3 extracto del tubo de resonancia, se selló y etiquetó la
tapa del tubo de resonancia con los siguientes datos:
LAI-S3-EQ6.
2. Materiales y métodos 7 de 7
-Materiales- 3. Resultados y discusión 2.5 de 7

Equipo de resonancia magnética nuclear de protón de
400 MHz, con sonda dual Los resultados que se obtuvieron a través de la
Evaporador rotatorio elaboración de la RMN-1 se muestran en la imagen 1,
Balanza analitica donde se puede apreciar la presencia del protón vinílico
Muestra de leche materna del patrón interno, la cafeína, el cual cuenta con un valor
Solución CHCl ₃-MeOH 3:1 de integral de 100.
Solución CDCl₃
1
Con eso calculado se sustituyeron los datos de la fórmula

1, dando como resultado:
mg de ácido linoleico =
moles∗1889.05∗1
(1.4933 x 10−5 )(280.44 g/mol)(1000)
2∗100
= 39.55 mg de ácido linoleico
El resultado obtenido no se puede comparar con otros

datos o literaturas en el estado en el que se obtuvo. Para
corregir eso se decidió obtener el porcentaje de ácido
linoleico contenido en la muestra. Utilizando la fórmula:
Fórmula 3:
Imagen 1. Espectro de la RMN obtenido de la muestra
P peso de ácido linoleico
de leche materna. % de ácido linoleico= ∗100
P peso de la muestra analizada
A partir de este patrón interno se fue realizando la
Para el cálculo del peso de la muestra se tomó el peso del
cuantificación de las demás señales leídas por el equipo.
matraz balón sin muestra (59.5 g) y se comparó con su
Con base a esta se obtuvo el resultado de la integral de la
peso conteniendo la muestra (60.9 g) obteniendo el peso
señal obtenida del metileno contenido en el ácido
de la muestra de 1.4 g.
linoléico, esta fue de 1,889.05. Esta señal se puede ubicar
Al sustituir los valores con los datos obtenidos en la
del lado derecho del gráfico entre los valores de 2.7-2.9
práctica y cálculos previos se obtuvo el siguiente
ppm.
resultado:
Más a la izquierda se logran identificar las señales de los
otros ácidos grasos correspondientes de la leche materna.
Para obtener los mg de ácido linoléico de la muestra se P 39.55mg
% de ácidolinoleico= ∗100=2.825 %
utilizó la fórmula: P 1400mg
Fórmula 1: Con estos datos obtenidos con la fórmula 3 (2.825%) es

n PI∗I x∗p I posible mencionar que el contenido de ácido linoleico en
mg de ácido linoleico = ( )( PM x )(1000) la muestra fue muy por debajo al indicado como valor
px I PI
normal en un estudio realizado Durán y Masson en Chile
Donde: (18.9%)5 . Esto puede ser tanto por causa de una dieta
nPi = número de moles del patrón interno con baja ingesta de alimentos ricos en ácidos grasos
Ix = integral del ácido linoleico esenciales para el desarrollo de la leche materna, como
IPI = integral del patrón interno (cafeína) por algún error en la preparación de la muestra, se notó
pI = numero de protones del patrón interno (cafeína) que la leche materna no era completamente homogénea y
px = numero de protones de x (grupo metilo del ácido esto pudo modificar los valores al tomar una porción con
linoleico) bajos ácidos grasos.
PMx = Peso molecular del ácido linoleico
4. Conclusiones 5 de 5
Para la obtención del número de moles del patrón
interno se realizó un cálculo, utilizando la fórmula:
Los resultados arrojados por la prueba de RMN-¹H en
conjunto con la utilización de fórmulas denotaron un
Fórmula 2:
porcentaje de ácido linoleico (2.825%) bastante
gramos pesados deficiente en comparación con los estándares
nPi =
PM del compuesto establecidos por diversos estudios. Se recomienda revisar
el estado nutricional de la paciente para encontrar
Sustituyendo los datos solicitados la ecuación y su correlación entre este porcentaje y sus hábitos
resultado quedaron de la siguiente forma: alimenticios, así como interpretar las señales totales
obtenidas de los demás ácidos grasos en la muestra como
0.0029 g forma de complementar los resultados.
nPi = = 1.4933 x 10-5 moles de cafeína
194.2 g/mol
5. Referencias 3 de 3
2
1. Laurella, S. Resonancia magnética nuclear: Una

herramienta para la elucidación de estructuras
moleculares. Editorial de la Universidad de La
Plata: Argentina, 2016.
2. Universidad Veracruzana (UV). Tema 10.
Espectroscopia de resonancia magnética nuclear
[En línea].
https://www.uv.es/jcastell/Espectroscopia.pdf
(Consultado Febrero 2022).
3. Guerra, H. Determinación de ácido linoleico
conjugado en leche materna. Trabajo de fin de
grado. Universidad Nacional de Colombia,
Bogotá, 2010.
4. Durán, S.; Masson, L. Aporte de ácidos grasos
trans, ácido linoleico conjugado y ácido
docosahexaenoico, en la grasa de la leche
materna de nodrizas chilenas. Rev. Chil Nutr.
[En linea] 2010, 37, 9-17.
https://www.scielo.cl/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S0717-
75182010000100001#:~:text=El
%20%C3%A1cido%20graso%20de
%20mayor,internacionales%20(21%2C33)
(Consultado Marzo, 2022)

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Cuantificación de ácido linoleico en leche materna por RMN-¹H

*Laboratorio de Docencia 1, Facultad de Química, Universidad Autónoma de Yucatán. Fecha: 08/03/2022

-Materiales- 3. Resultados y discusión 2.5 de 7

Con eso calculado se sustituyeron los datos de la fórmula

El resultado obtenido no se puede comparar con otros

Fórmula 1: Con estos datos obtenidos con la fórmula 3 (2.825%) es

1. Laurella, S. Resonancia magnética nuclear: Una

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