P1.

TINCIÓN GRAM
ALEJANDRA AGUILAR A. BRAULIO ALDAIR GUTIERREZ G.
7° SEMESTRE

MC L. Andrea Pérez García

Biotecnología, Energías Renovables
Instituto Tecnológico de la Laguna
Alu.19130787@correo.itlalaguna.edu.mx

Resumen
En esta práctica se realizó el aislamiento y la observación de los microorganismos que
normalmente se encuentran en el suelo y superficies. Con este fin, se hará que los
microorganismos presentes en estas muestras crezcan lo suficientemente con los nutrientes y
medios adecuados para su observación. Haciendo uso de distintas técnicas de siembra para
la inoculación como lo es la de agotamiento y múltiple. Permitiendo el crecimiento de los
microorganismos para llevarlos a cabo a un proceso de tinción para su identificación y
clasificación de las Gram, siendo su color violeta para la Gram positiva y rojo para las Gram
negativas, con la ayuda de un microscopio.

Palabras claves: Tinción, técnica de siembra, Gram

I. Introducción En cambio, las bacterias Gram negativas

En 1880 el médico Hans Christian Gram tienen una capa delgada de
desarrolló una técnica de tinción en la cual peptidoglucanos más una bicapa de
observaba bacterias en tejidos de lipoproteínas que se puede deshacer con la
pulmones de pacientes que morían de decoloración. La tinción de Gram puede
neumonía. Los resultados demostraron dos proporcionar información rápida para
categorías generales de bacterias que diagnósticos de infecciones, puede revelar
causaban neumonía: En la ilustración 1 se los agentes causales incluso con una toma
muestra como algunas se tiñen de violeta de muestra no adecuada. También hace
que fueron conocidas como Gram positiva posible distinguir entre contaminación de
y otras de rojo llamadas Gram negativas. la muestra y una verdadera infección.
Ilustración 1 Puede ayudar al clínico a seguir o cambiar
Visualización de
tinción de Gram
un tratamiento antibiótico inicial antes de
(Gram+ los resultados del cultivo, y en algunos
Violetas y casos, es capaz de mostrar la necesidad de
Gram- Rojas)
una atención médica urgente [1].
La diferencia de tinciones se debe a la II. Metodología
estructura de las paredes celulares de Para poder hacer una tinción de Gram, fue
ambos tipos de bacterias. Las bacterias necesario hacer un proceso desde cero, es
Gram positivas tienen una pared gruesa decir que se hizo cultivo de
compuesta de peptidoglucanos y microorganismo y luego estos identificar
polímeros, e impermeable, que hace que en la categoría que se encuentran de la
resista la decoloración. Gram.
Ilustración 2 Agar nutritivo en polvo (2.3gr por 100mL)
Para la preparación del medio cultivo se
usó un agar nutritivo se hizo una relación Ilustración 3Calentamiento del agar liquido
de 2.3 gr del agar (Ilustración 2) con Después de que se enfríe un poco el matraz
100mL de agua destilada, la mezcla se y se pueda manejar con seguridad, viene el
lleva a cabo en un matraz Erlenmeyer y momento de vaciar el agar liquido en una
con la ayuda de una parrilla y un agitador caja Petri (ilustración 3), sin olvidar que se
se mezcla y calienta hasta el punto de trabaja en un área estéril con la ayuda de 2
ebullición se toman 15 min (al momento mecheros a una distancia de 50 cm
de subir en forma de burbuja hay que aproximadamente, después de llenar las
retirarlo para evitar derrame y perdida de cajas Petri si es necesario se puede
sustancia) como se ve en la ilustración 3 refrigerar para acelerar que el agar cuaje.
para determinar una buena solución para el
medio.

Observación e
Recolección de Concentración Frotis de la
Inoculación Tinción identificación de
muestra de muestra muestra
las Gram

Gráfico 1 Proceso del trabajo de la muestra

Ilustración 5
En el graficó anterior muestra el proceso Aplicando técnica
de siembre a placa
que se lleva a cabo desde el punto de
partida de un cultivo de un inoculación se hicieron dos
microorganismo, donde iniciamos por técnicas de siembra, 2 por
recolectar una muestra con el isopo, y agotamiento, que es un
después en un tubo de ensaye se añade la método rápido y simple de
muestra para la concentración del agotamiento progresivo y
microorganismo como en la ilustración 4. continuo en forma de estría y una por
múltiple, donde la estría se esparce por
diferentes lugares de la placa, donde se
Ilustración 4 hace una estría y después hacer otra estría
Concentración de
muestra esparciendo el inoculo y repetir hasta no
dejar espacios.
Con la ayuda de una aza bacteriológica Sin olvidar que se trabaja en una zona
esterilizada se toma la muestra para llevar estéril. Para que el crecimiento se dé
la inoculación que también se le conoce adecuadamente, las 3 cajas Petri se
como plaquear, las muestras que se metieron a un horno de cultivo que ayuda
tomaron fueron de un agave, lodo y una a conservar la temperatura necesaria para
pluma de un ave (ilustración 5). Para la ello. Una vez dado el crecimiento
microbiano, con la ayuda de un
portaobjetos y nuevamente un aza, se Posteriormente después de la tinción, es
prepara para hacer la tinción Gram. observar e identificar las Gram positivas y
En el portaobjeto se pone una gota de agua negativas con la ayuda de un microscopio,
destilada y con el aza se toma una muestra y recordar las Gram positivas son violeta y
de algunas de las placas y se esparce por las rojizas son negativas, y así mismo
todo el portaobjeto, para sellarlo y secarse identificar la morfología de las bacterias
se pasa por encima de un mechero, si es (ilustración 9).
necesario en varias ocasiones (ilustración
6).
Ilustración 9 Visualización
e identificación de las
Ilustración 6 Portaobjetos Gram positivas y negativas
con muestra de un ave
III. Resultado y Discusión
Para la tinción se utilizan 4 tintes (cristal se observó el crecimiento de la muestra en
violeta, Lugol, alcohol acetona y las placas de la pluma de ave y la de lodo,
Safranina, ilustración 7) los cuales sin embargo, la plaga de agave no se
cumplen un objetivo. obtuvo el menor crecimiento (ilustración
10).
Ilustración 7 Tintes para
tinción Gram Ilustración 10 placas
Petri con muestras.
El cristal violeta es un colorante orgánico,
sintético y alcalino de Por lo tanto, se utilizaron dos portaobjetos
triaminotrifenilmetano que se usa para dar con las muestras del ave y una de lodo.
color a la Gram el cual se espera un minuto En la ilustración 11 se observó Gram
después de la aplicación y lavar de nuevo negativas y estreptobacilos y pequeñas
con agua destilada, el Lugol funciona colonias de Gram positiva,
como un fijador de primer tinte, el cual el
correspondiente al portaobjeto del lodo.
procedimiento es el mismo de tinción, por
consiguiente, se aplica un tercer tinte que
es la acetona, que ayudará a descolorar las
Ilustración 11 Gram
gran positivas que para este punto deberán negativa y positivas
estar teñidas de color violeta y hacer un
lavado casi inmediatamente después de su En la figura 12 muestra bacterias Gram
aplicación, y por último, para dar un negativas estreptococos y estreptobacilos,
contraste más rojizo, se utiliza safranina, con un porcentaje mínimo de bacterias
se aplica durante un minuto y lavar por Gram positiva, las cuales corresponden a
finalizar con la tinción de Gram[2]. la muestra del ave.

Ilustración 8 Tinción
y lavado de
muestras en el Ilustración 12 Gram
portaobjetos negativas
 IV. Conclusión positivas y las Gram negativas es el uso de
El cultivo microbiológico, en cuanto la tinción.
biotecnología, es de las más importantes
por un factor de suma importancia, es su V. Bibliografía
eficacia al momento de reproducir la 1. Patricia A. Rodríguez y Roberto
materia prima, ya que es lo que se busca al Arenas (2018). Hans Christian
hablar de biotecnología, ya que lo que se Gram y su tinción. Hospital
busca es ahorrar tiempo y ahorrar General Manuel Gea González,
economía. Para poder observar el 16(2), 166-167.
microorganismo se lleva a cabo un proceso 2. Admin (4 de septiembre de 2019).
muy necesario, lo que es la tinción Gram, <Tinción de Gram. EduLabC.
y el manejo adecuado de los tintes, ya que Recuperado de:
la acetona si no es retirado a tiempo puede https://edulabc.com.mx/tincion-
matar a los microorganismos, y con la de-gram/
finalidad de identificar por color las Gram