INGENIERÍA BIOQUÍMICA

TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO EN CELAYA

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE CELAYA

D.C. SILVA MARTÍNEZ GUILLERMO ANTONIO
FECHA: VIERNES 31 DE MARZO DEL 2023

UNIDAD II: MÉTODOS Y TÉCNICAS DE CULTIVO MICROBIANO

PRÁCTICA 5 “TINCIÓN DE GRAM”

MICROBIOLOGÍA “A”
Pacheco Ramírez Carlos Emmanuel 20030600
Ramírez Juárez Alin 20030916
Sánchez Balderas María Teresa 20030665
Sánchez Jiménez Montserrat 20030189

Semestre enero 2023 - junio 2023

Microbiología general 14 de marzo de 2023

TINCIÓN DE GRAM
Ramírez Juárez, A., Pacheco Ramírez, C., Sánchez Balderas, M. y Sánchez Jiménez M.

RESUMEN

La tinción de Gram es una técnica de tinción diferencial que permite clasificar a las bacterias en dos grupos:
Gram-positivas (tiñen de color azul violeta) y Gram-negativas (tiñen de color rojo-rosa), en función del grado
de permeabilidad de la pared celular de las bacterias, las Gram-positivas contienen una capa gruesa de
peptidoglucano mientras que las otras contienen una delgada capa de peptidoglucano, esta característica
influye al momento de retener el colorante y facilita la clasificación una vez que se observa en el microscopio.

1. COMPETENCIA su agrupación, la presencia de esporos y la

existencia de otros tipos celulares.
Que el alumno utilice las técnicas de tinción simple y
tinción de Gram para diferenciar bacterias. Diferenciales: cumple la función de la tinción simple
y, además, permite la diferenciación de las bacterias
2. MARCO TEÓRICO porque usan diferentes colorantes que se comportan
distinto según el microorganismo en cuestión. La
La tinción es una técnica auxiliar utilizada en coloración de Gram es la más usada en
microscopía para mejorar el contraste en la imagen bacteriología. Son diferenciales, ya que se dividen
vista al microscopio. Los diferentes colorantes en Gram-positivas y Gram-negativas. Las primeras
pueden ser utilizados para aumentar la definición y se tiñen de color azul violeta y las segundas
examinar grandes cortes de tejido, poblaciones adquieren un color rosado o rojo.
celulares o incluso para resaltar organelos dentro de
células individuales. (Sánchez, 2015) Especiales o Negativas: se usan para objetivar
distintas estructuras como la cápsula, el núcleo, los
La tinción de este tipo más utilizada es la tinción de flagelos, los esporos, etc. (Sánchez, 2015)
Gram, denominada así por el bacteriólogo danés
Hans Christian Gram, quien la desarrollo. Sobre la Las células fijadas al calor sobre un portaobjetos se
base de si reacción a la tinción de Gram, las tiñen primero con una solución de cristal violeta y
bacterias pueden dividirse en dos grupos, Gram- son lavadas después para quitar el exceso de
positivas y Gram-negativas. Debido a su importancia colorante. En este estado todas las células están
en taxonomía bacteriana ya que indica diferencias teñidas de azul. El portaobjetos se cubre entonces
fundamentales de la pared celular de las distintas con una solución yodo. El yodo entra en las células
bacterias. (Carbajal, 2017) y forma un complejo insoluble en agua con el cristal
violeta. De nuevo, todas las células se encuentran
La tinción de Gram es un método que no tiñe en la misma situación. Se lleva a cabo después de
igualmente todas las células, es un proceso la coloración con alcohol. Algunos organismos no se
denominado tinción diferencial. Es una prueba de decoloran (Gram-positivos) mientras que otros
laboratorio útil para detectar la presencia de (Gram-negativos) lo hacen. La diferencia esencial
microorganismos, especialmente bacterias y entre esos dos tipos de células está, por lo tanto, en
algunas veces hongos, en una muestra obtenida del la resistencia a la decoloración. Después de la
foco infeccioso o sospechoso de serlo. Proporciona decoloración las células Gram-positivas son todavía
resultados con rapidez y facilidad acerca de la más azules mientras que las Gram-negativas son
presencia de bacterias u hongos, y de ser así, del Incoloras. Para poner de manifiesto las células
tipo. (SEQC, 2022) Gram-negativas se usa un colorante rojo, como la
safranina o la fucsina básica. El proceso de
Existen distintos tipos de tinción: decoloración debe ser corto y es esencial un cálculo
preciso del tiempo para obtener resultados
Tinción simple: este tipo de tinciones nos permiten satisfactorios. (Carbajal, 2017)
observar la existencia de bacterias, su morfología,

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3. MATERIALES Y MÉTODOS

Para llevar a cabo esta tinción se realizó un frotis a

partir del cultivo que se obtuvo en el medio sólido de
la práctica anterior, para esto, con ayuda de un asa
estéril se distribuyó homogéneamente una colonia
de la muestra en un portaobjetos limpio para
después fijarlo con ayuda del mechero (haciéndolo
pasar de manera rápida 2 veces), una vez que
estuvo seco se cubrió el frotis con colorante cristal
violeta por 1 minuto, se escurrió el colorante y se
lavó con agua destilada. Después, se cubrió con el
mordente Lugol por 1 minuto y se realizó el mismo
procedimiento, se puso a decolorar con alcohol-
acetona de 5 a 15 segundos para volver a escurrir y
lavar con agua y por último se cubrió con colorante
de contraste: safranina y se dejó actuar por 30
segundos, se escurrió y lavó con agua. Una vez que
se secó se observó con el microscopio.
Figura 3. Diagrama de flujo de la alumna Sánchez
Balderas María Teresa.

Figura 1. Diagrama de flujo de la alumna Ramírez Juárez Alin.

Figura 4. Diagrama de flujo de la alumna Sánchez Jiménez

Montserrat.

4. RESULTADOS

Debido al tiempo únicamente se pudo realizar la

tinción de Gram a cuatro de los cultivos generados
en practicas anteriores, a partir de estos se
obtuvieron los siguientes resultados:

Figura 2. Diagrama de flujo del alumno Pacheco

Ramírez Carlos Emmanuel. 2
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→ En Agar sangre inoculado con caldo

tioglicolato se observaron estafilococos con
una coloración azul-violeta indicando
bacterias Gram-positivas.

Figura 8. Estreptococos Gram(+)

→ En Agar nutritivo inoculado con caldo

nutritivo se observaron estreptococos con
una coloración azul-violeta indicando
Figura 5. Estafilocos Gram(+) bacterias Gram-positivas.
→ En Agar Eosina Azul de metileno inoculado
con caldo nutritivo se observaron bacilos 5. DISCUSIÓN
con una coloración rojo-rosa indicando
El resultado obtenido en la práctica fue satisfactorio,
bacterias Gram-negativas.
ya que solamente se obtuvo bacterias Gram-
negativas en el agar Eosina Azul de metileno, esto
se debe a que es un medio específicamente utilizado
para el aislamiento de bacilos Gram-negativos de
rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales.
Este permite el desarrollo de todas las especies de
la familia Enterobacteriaceae.

Por otro lado, en el agar sangre y nutritivo hubo

presencia de bacterias Gram-positivas, en ambos
agares se pueden obtener bacterias Gram-positivas
y negativas. El agar nutritivo es un medio no
Figura 6. Bacilos Gram(-)
selectivo diferencial, mientras que el agar sangre
proporciona el crecimiento a partir de una bade rica
→ En Agar sangre inoculado con caldo nutritivo y complementada, ofreciendo óptimas condiciones
se observaron cocos con una coloración de desarrollo para microorganismos no fastidiosos.
azul-violeta indicando bacterias Gram-
positivas. El resultado obtenido en agar sangre de
estafilococos Gram-positivos sigue fomentando
nuestra teoría de la existencia de Staphylococcus
aureus ya que este género crece comúnmente en
medios no selectivos como agar sangre, son cocos
Gram-positivos presentados en pares, cadenas o en
este caso, racimos. Se espera que durante las
futuras prácticas podamos seguir reuniendo
información para su correcta identificación.

Figura 7. Cocos Gram(+)

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Microbiología general 14 de marzo de 2023

6. CONCLUSIÓN 4. ¿Qué es el aceite de inmersión? ¿Por qué

se utiliza?
Con la tinción de Gram se pudieron identificar Es un líquido viscoso transparente con alto
bacilos Gram-negativos en agar EMB, lo cual indica índice refractivo el cual les permite una
que en la muestra de la mesa exterior de la cafetería inmersión homogénea en aceite y elimina la
II existe la presencia de enterobacterias, puesto que desviación del haz luminoso aumentando la
este agar es selectivo de las mismas. Asimismo, se eficiencia del lente. Se utiliza ya que brinda la
confirmó la presencia de cocos en forma de racimos propiedad de concentrar la luz cuando esta pasa
(estreptococos) Gram-positivos en agar sangre, los a través del objetivo de 100X del microscopio,
cuales, al presentar una hemolisis bien definida, se aumentando su poder de resolución.
puede sospechar de la presencia de Staphylococcus
aureus en la muestra problema. 5. ¿Cuáles son las desventajas o limitaciones
de la tinción simple?
Finalmente, es importante que las tinciones se La principal desventaja es que, debido al
realicen de forma correcta, ya que es la clave para tratamiento al que debe someterse un tejido vivo
la correcta interpretación de resultados a nivel clínico para su tinción, las células acaban muriendo, por
y farmacéutico. lo que, no es posible observa a las células
activas en su estado natural, sino muertas.
7. CUESTIONARIO
1. ¿Por qué es importante fijar la flama?
6. ¿En qué se basa la tinción de Gram?
Porque hace que las bacterias queden
Es una prueba que detecta bacterias en el lugar
inactivadas y adheridas al portaobjetos
donde se sospecha una infección. Estas
alterando lo menos posible la morfología
también pueden usarse para detectar bacterias
bacteriana y las posibles agrupaciones de
en ciertos fluidos corporales, como la sangre o
células que pudiera haber.
la orina.

2. ¿Qué otros métodos de fijación se pueden

7. ¿De qué color se tiñen los Gram positivos y
emplear?
los Gram negativos?
Mediante la fijación química donde se emplea
La tinción de Gram es de color púrpura. Si se
sustancias químicas en la preservación como
mantiene púrpura al combinarse con la bacteria
formaldehido o formol, etanol, ácido acético, etc.
en muestra, quiere decir que son Gram
Presenta la ventaja de preservar las estructuras
positivas; si cambia a color rosado o rojo, son
celulares internas de los microorganismos.
Gram negativas.

3. Investiga cuáles son las estructuras

8. BIBLIOGRAFÍA
celulares o moléculas responsables de la
tinción simple realizada. Da ejemplos de [1]. Cervantes, E., García, R. & Salazar, P. (2014).
otros colorantes que podrían usarse. Características generales del
La tinción simple es un procedimiento en el cual Staphylococcus aureus. Revista
se agrega un solo colorante a la muestra y tiñe Latinoamericana de Patología Clinica.
toda la célula, proporcionando información como Recuperado de
la forma, el tamaño, las estructuras presentes en https://www.medigraphic.com/pdfs/patol/pt-
el citoplasma, y la agrupación de los 2014/pt141e.pdf
microorganismos. En estas tinciones se usa un
único colorante de carácter básico como puede [2]. Carbajal, S. (2017). Microbiologia: Tinción
ser azul de metileno o violeta de genciana. diferencial Gram. Recuperado de
https://pdfcoffee.com/informe-2-

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microbiologia-tincion-diferencial-gram-pdf-
free.html

[3]. González, R., Elizalde, B., Cortés, M. & Orduña,

M. (2020) Las tinciones básicas en el
Laboratorio de Microbiología: un enfoque
gráfico. UNAM: Facultad de Estudios
Superiores Zaragoza. Recuperado de
https://www.zaragoza.unam.mx/wp-
content/Portal2015/publicaciones/libros/cbio
logicas/libros/Tinciones.pdf

[4]. Lifeder (2022). Frotis bacteriano. Recuperado de

https://www.lifeder.com/frotis-bacteriano/

[5]. Sánchez, B. J. (2015). Tinción de Gram.

Recuperado de
https://www.academia.edu/18829021/Marc
o_teorico_tincion_gram

[6]. SEQC. (2022). Tincion de Gram. LabTestOnline.

Recuperado de
https://www.labtestsonline.es/tests/tincion-
de-gram