Actividad 6

Armando Rodríguez Ramírez
93287999
Biología
Comunicación Oral y Escrita
U3. Actividad de aprendizaje para RA. Actividad 6: Actividad práctica:

Aplicaciones de la biología molecular ¿Qué es una PCR y para qué sirve?
Introducción
La secuenciación del ADN se refiere a una técnica general de laboratorio para determinar
la secuencia exacta de nucleótidos, o bases, en una molécula de ADN. Las cadenas de
bases (a menudo denominadas por la primera letra de sus nombres químicos: A, T, C y G)
codifican información biológica que las células utilizan para crecer y funcionar. La
secuenciación del ADN es esencial para comprender la función de los genes y otras partes
del genoma. Hay una serie de diferentes métodos de secuenciación de ADN disponibles en
la actualidad, cada uno con sus propias características, y el desarrollo de otros es un área
activa de la investigación genómica (Secuenciación de ADN | NHGRI, s. f.).
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica sensible y muy útil para
obtener y generar múltiples copias de una secuencia de ADN específica a partir de una
muestra de ADN compleja con distinta diversidad y riqueza de secuencias. Este proceso se
llama: amplificación de ADN. Para ello, es necesario utilizar una enzima llamada “Taq
Polymerase”, que es muy utilizada en estos métodos y sus variantes. Este método
proporciona recomendaciones para garantizar una PCR exitosa (Método, 2017).
Objetivos
Reconocer las aplicaciones la biología molecular en a través del desarrollo de una práctica
de laboratorio virtual
- Simular el análisis de una prueba PCR

- Analizar el cambio de variables en el estudio del análisis de pruebas PCR
- Reconocer las aplicaciones que tienen las pruebas PCR
Consulta Previa
1. Consulte acerca del proceso de replicación del ADN y elabore un diagrama de flujo en el
que explique detalladamente los pasos.
2. ¿Por qué se habla de una hebra adelantada y una retrasada en la replicación del ADN?
La hebra sintetizada en la misma dirección que la horquilla de replicación que se mueve

hacia adelante se denomina hebra delantera, líder o líder y es sintetizada continuamente
por la ADN polimerasa, mientras que la hebra sintetizada en la dirección opuesta que
avanza se denomina secuencia rezagada o secuencia rezagada. conductor lento. Su
síntesis se produce de forma intermitente, debiendo esperar a que se produzca la rama de
replicación para obtener una determinada longitud del ADN molde (Biología aplicada, s. f.).
Son varias las moléculas que hacen posible la replicación en el organismo eucarionte y
entre ellas se pueden mencionar (Biología aplicada, s. f.):
La helicasa, enzima rompe los puentes de hidrógeno de la doble hélice, abriendo las dos
hebras, permitiendo el avance de la horquilla de replicación.
Las proteínas SSB que estabilizan las cadenas abiertas y las mantienen separadas una
de otra.
El cebador, iniciador o primer, fragmentos de ARN que se unen a la cadena molde por
puentes de hidrógeno para que el ADN polimerasa I reconozca donde debe unirse para
empezar a añadir nucleótidos.
Las ADN polimerasas, enzimas que permiten unir los nucleótidos para la producción de la
hebra de ADN e incluso puede corregir errores
La ARN primasa, enzima que sintetiza el cebador de ARN necesario para la síntesis de la
cadena complementaria a la cadena rezagada.
El ADN ligasa une los fragmentos de Okazaki.
3. Consulte acerca de los reactivos necesarios para realizar una PCR.
Los reactivos más comúnmente usados para los ensayos por PCR se enlistan a
continuación (Método, 2017):
• Buffer de Reacción
• Taq 10X
• dNTPs
• Primers ADN estándar
• Agua libre de Nucleasas
• Taq Polimerasa
4. Elabore una lista de las aplicaciones que tiene la técnica de PCR
A continuación se enuncian algunos tipos de pruebas PCR con sus principales aplicaciones
(formación), 2020):
PCR anidada: se trata de una variante de la PCR básica que utiliza dos pares de
cebadores. En un primer paso, se realiza la amplificación de una región del genoma, para
después concretar más la región mediante una segunda amplificación más específica. Esta
PCR se utiliza para amplificar fragmentos muy específicos del genoma.
RT-PCR: Esta técnica convierte el ARN de una muestra en ADN. Para ello utiliza la
transcriptasa inversa, una enzima utilizada por los retrovirus Se utiliza para múltiples
objetivos. Por ejemplo se puede utilizar para saber si un gen se está expresando en una
muestra biológica. También se utiliza para genotipar diferentes virus de ARN, como el
SARS-Co-V o el VIH.
PCR cuantitativa: es una PCR que permite medir en tiempo real la cantidad de fragmentos
que se van produciendo. Se utiliza a menudo para analizar la expresión de los genes.
PCR múltiple: en este tipo de PCR se realizan amplificaciones simultáneas de más de un
fragmento de ADN. Para ello, se utilizan varios cebadores diferentes en una misma
reacción.
PCR in situ: esta PCR se realiza en células o tejidos. Se utiliza para poder detectar
secuencias de ADN en el interior de las células que no son detectables mediante otras
técnicas.
PCR digital: es una de las últimas generaciones en técnicas de amplificación de ADN. Está
basada en la separación de cada muestra en múltiples particiones (microgotas), de forma
que la reacción de amplificación se produce de forma independiente cada una de ellas.
Materiales y métodos
Los materiales empleados se presentan en la tabla 1.
Tabla 1. Materiales empleados en la práctica
Cantidad Elemento
1 Simulador
1 Computador
El procedimiento llevado a cabo se presenta en la figura 1.
Figura 1. Procedimiento de la práctica.

Resultados
Para el análisis de sensibilidad, se escogió el número de ciclos como variable a modificar y

las demás variables quedaron constantes de la siguiente forma:
Temperatura de desnaturalización: 80°C, por 10 segundos

Temperatura de recocido: 68°C, por 10 segundos
Temperatura de extensión: 54°C, por 20 segundos
Masa de ADN: 50 ng
Volumen de primer: 1 µL
Volumen dNTP: 0.5 µL
Unidades de enzima: 1 U
Volumen de buffer: 10 µL
Además de lo anterior, se realizó el análisis de sensibilidad para cada tipo de enzima

disponible (Taq y Phusion). Los resultados se presentan en la tabla 1.
Tabla 1. Resultados del análisis de sensibilidad de pruebas PCR, variando el número de

ciclos y tipo de enzima
Rendimiento Tiempo
Enzima # Ciclo Pureza [%]
[ng/µL] [min]
15 0,1 10,6 20
30 0,5 20,6 30
45 1,4 34,3 40
Taq
60 3,3 47,8 50
75 6,5 54,6 60
90 13,4 59,7 70
15 0,2 13,4 20
30 0,9 28,1 30
45 2,5 47,8 40
Phusion
60 6 61,4 50
75 13,9 70,4 60
90 32,1 74,1 70
Análisis de Resultados
Con el propósito de realizar un análisis de la simulación de resultados de pruebas PCR, se

propuso desde los objetivos de este informe el análisis de sensibilidad de una variable
respecto a los resultados de las pruebas.
El análisis de sensibilidad escogido relaciona el número de ciclos de la prueba con el

rendimiento, la pureza y el tiempo de ejecución de la prueba; además de lo anterior, también
se tuvo en cuenta el tipo de enzima, se realizó la variación de 15 hasta 90 ciclos con las
enzimas “Tag” y “Phusion”.
En las figuras 2 y 3 se presenta gráficamente la variación de las variables anteriormente
mencionadas con el número de ciclos. Podemos determinar que la enzima “Phusion” logra
obtener mejores purezas más rápido a comparación de la enzima “Taq”. Sin embargo, en
términos de rendimientos y tiempos de realización de la prueba, las dos enzimas llegan a
obtener valores muy cercanos o iguales.
Figura 2. Resultados del análisis de sensibilidad con la enzima Taq (elaboración propia).
Figura 3. Resultados del análisis de sensibilidad con la enzima Phusion (elaboración

propia).
Finalmente, podemos inferir que puede haber una relación exponencial entre el número de
ciclos y la pureza, lineal entre el número de ciclos y el tiempo de ejecución de la prueba; y
logarítmica entre el número de ciclos y el rendimiento.
Conclusiones
• La simulación de las pruebas PCR es una herramienta que familiariza a los

estudiosos interesados con los resultados que deberían obtener y reportar. En
particular con el simulador trabajado, tiene la gran ventaja de poder realizar
variaciones de las variables de entrada y con esto realizar análisis como el que se
presentó
• Podemos concluir que hay una relación exponencial entre el número de ciclos y la
pureza, lineal entre el número de ciclos y el tiempo de ejecución de la prueba; y
logarítmica entre el número de ciclos y el rendimiento.
• Las aplicaciones de las pruebas PCR son en campos específicos, estudios
relacionados con el cambio de la cadena de ADN de organismos. En el caso en
particular de ingeniería ambiental (mi programa académico), son pocos los estudios
que relacionan esta técnica, ya que la gran mayoría de estudios están relacionados
con procesos a gran escala
Referencias
Biología aplicada. (s. f.). Recuperado 3 de julio de 2022, de http://www.secst.cl/colegio-

online/docs/26052020_623pm_5ecdb31acb184.pdf
formación), R. M. G. (Coordinador del área de. (2020, abril 1). PCR: Qué es y qué
aplicaciones tiene - El blog de Genotipia. Genotipia. https://genotipia.com/pcr/
Método: PCR. (2017, noviembre 14). Conogasi. https://conogasi.org/articulos/metodo-pcr/
Secuenciación de ADN | NHGRI. (s. f.). Genome.gov. Recuperado 3 de julio de 2022, de

https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Secuenciacion-del-ADN

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- Simular el análisis de una prueba PCR

La hebra sintetizada en la misma dirección que la horquilla de replicación que se mueve

El ADN ligasa une los fragmentos de Okazaki.

3. Consulte acerca de los reactivos necesarios para realizar una PCR.

4. Elabore una lista de las aplicaciones que tiene la técnica de PCR

El procedimiento llevado a cabo se presenta en la figura 1.

Figura 1. Procedimiento de la práctica.

Para el análisis de sensibilidad, se escogió el número de ciclos como variable a modificar y

Temperatura de desnaturalización: 80°C, por 10 segundos

Además de lo anterior, se realizó el análisis de sensibilidad para cada tipo de enzima

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Método: PCR. (2017, noviembre 14). Conogasi. https://conogasi.org/articulos/metodo-pcr/

Secuenciación de ADN | NHGRI. (s. f.). Genome.gov. Recuperado 3 de julio de 2022, de

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