Bioreactor Por Lote Alimentado

Análisis de crecimiento microbiano para la obtención de Lactobacillus
plantarum, Lactobacillus rhamnosus y Saccharomyces boulardii en un

biorreactor multicultivo tipo lote alimentado
Angélica Noemí Cárdenas Chávez, Carmen Jacqueline Díaz Patiño, Jorge Arturo Murillo
García, Indira Marisol Muñoz Nieves, Giovanna Romero Palomino.
Centro Universitario de Ciencias Exactas e Ingenierías, Departamento de Ingeniería
Química, Lic. Ingeniería en Alimentos y Biotecnología.
Ing. De Sistemas Biotecnológicos, Ciclo 2022B.
Resumen:
Según una investigación (Grau, 1996), un biorreactor es un recipiente en el cual se lleva a

cabo una reacción catalizada por enzimas o células, libres o inmovilizadas, junto con los
mezcladores, equipos de toma de muestras y aparatos de control.
Se evaluó el funcionamiento de un biorreactor de tipo lote alimentando analizando sus

características, presentando las ventajas de la utilización de este tipo de reactor y
mencionando las condiciones necesarias para que este tenga un funcionamiento óptimo.
Se desarrolló la cinética de crecimiento de los microorganismos Lactobacillus planetarium,

Lactobacillus rhamnosus y Saccharomyces boulardii en reactores tipo lote con un medio de
cultivo previamente optimizado a base de melazas de betabel, sacarosa y extracto de té
verde (Camellia sinensis) como fuente de carbono y nitrógeno.
Palabras clave:
Crecimiento microbiano, sustrato, biorreactor.
Introducción:
La operación por lote alimentado o ‘’fed batch’’, es una técnica que permite obtener altas
concentraciones celulares y cortos tiempos lo que lo hace muy productivo y al mismo
tiempo nos permite minimizar los problemas de inhibición por sustrato y limitaciones de
oxígeno disuelto en cultivos aeróbicos (Mardones 1, 2011).
El cultivo por lote alimentado (CLA) es una operación durante la cual los nutrientes o parte
de ellos son introducidos al fermentador, en forma continua o intermitente, mediante una
corriente de alimentación y al no existir una corriente de descarga provoca una continua
variación del volumen de fermentación. (Caicedo et al., 2020)
En el modo de alimentación por lote se optimiza el uso del sustrato, para ello es deseable
hacer que la biomasa aumente a una tasa de crecimiento específica constante.
Figura 1. Reactor por lote alimentado.
Donde x corresponde a la biomasa, s la cantidad de sustrato y v volumen del biorreactor.

Para obtener un producto deseado se exige el mantenimiento de una tasa de crecimiento
específica constante, por esta razón la biomasa y el volumen crecen indefinidamente hasta
que no hay más sustrato o se alcance la máxima capacidad del biorreactor la tasa de
crecimiento específica μ depende de varios factores, como las condiciones ambientales
que se deben mantener constantes o en valores óptimos que son como temperatura, pH, por
mencionar algunos dado que en los modelos estándares, μ puede depender de la
concentración de sustrato en el reactor s y de concentraciones de producto p. (Caicedo 1 L)
El problema de control, en el caso de μ constante, implica que el sustrato se mantenga

constante. La cantidad de sustrato provista al biorreactor depende de dos variables: F, el
flujo de entrada, y si, la concentración de sustrato en el flujo de entrada. Generalmente es
solo posible manipular el primero, puesto que no hay actuadores comerciales que permitan
variar ambas variables independientemente. Para tener ambas acciones del control
disponibles, en la práctica se consideran dos flujos de entradas, F1 y F2, con
concentraciones de sustratos sin máx. y sin min.
Resultados:
Se usó como reactor tipo lote un reactor PYREX® de 1L, el cual tuvo un volumen inicial
de MBT de 600 mL estéril. El inóculo fue del 1% v/v y las condiciones a las que estuvieron
fueron de 37°C y 125 rpm, haciendo uso de parrillas de calentamiento con agitación. En el
caso de los lotes para SB se tuvo además el control de flujo de aire a una velocidad de 1
L/min con ayuda de un rotámetro. El tiempo de operación de los reactores fue de 25 hrs;
tomando muestras por triplicado de los tres reactores operados para cada una de las corridas
(corrida 1- LR y corrida 2- SB) en tubos Eppendorf® durante los tiempos 0-6,8-11,25 hrs,
mantenidos en refrigeración a 3°C hasta su análisis.
El conteo de biomasa viable se hizo por medio del método de conteo en placa por técnica
de microgota, con cajas Petri con MRS o YPD como fuente de carbono para LR y SB,
respectivamente y agar. Las diluciones se hicieron con disolución salina 0.85% p/v. El
sembrado fue por triplicado por dilución para cada toma de los reactores, las cajas fueron
incubadas hasta su conteo a una temperatura de 37°C. Los conteos se hicieron 24hrs
después de su sembrado y se confirmaron 48 hrs después.
Figura 2. Relación de concentración de biomasa en unidades de UFC/mL a g/L para Lactobacillus rhamnosus
Figura 3. Relación de concentración de biomasa en unidades de UFC/mL a g/L para Saccharomyces
boulardii
Figura 4. Concentración de biomasa en unidades de g/L para Lactobacillus rhamnosus

Figura 5. Concentración de biomasa en unidades de g/L para Saccharomyces boulardii
Discusión:
Los tres reactores tuvieron la misma tendencia y alcanzaron concentraciones muy

parecidas. De igual forma las desviaciones estándar son considerables por la cuestión de las
posibles causas mencionadas. De manera general se compara como en el caso de los
reactores de tipo lote en donde se produjo LR se alcanzaron concentraciones muy pequeñas
comparadas con SB. En el caso de este último sí se manejó la cantidad de melazas de
betabel en el MBT correctas, ocasionando una mayor producción de biomasa y por el hecho
de que la morfología de ese tipo de microorganismo es mucho más grande que la de LR.
Al utilizar el reactor por lote alimentado se obtuvo la ventaja de extender la etapa

exponencial de crecimiento ya que se alimentó sustrato constantemente, consiguiendo
concentraciones de biomasa elevadas. La agitación constante del reactor ayuda a asegurar
la homogeneidad del sistema, y esto a su vez ayuda a que toda la mezcla de
microorganismos en el sistema tengan acceso al oxígeno y el sustrato y se mantengan en
condiciones isotérmicas.
Conclusiones:
Un biorreactor tipo lote alimentado nos permite obtener y producir grandes cantidades de
concentraciones celulares en un tiempo relativamente corto gracias a la posibilidad de
alimentar sustrato cada que se requiera, lo cual nos brinda una mayor facilidad y
practicidad al momento de obtener las concentraciones celulares deseadas.
Una de las principales ventajas es que podemos elegir si todos los nutrientes utilizados aquí
se depositan de forma continua o en pausas, es decir que dependiendo de la manera de
utilización del biorreactor nunca se detienen los nutrientes añadidos o también pueden
haber pausas entre lote de nutrientes.
En la evaluación del crecimiento microbiano de Lactobacillus planetarium, lactobacillus

rhamnosus y Saccharomyces boulardii mediante el reactor por lote alimentado, se demostró
que controlando los niveles de pH y temperatura, se puede obtener un mayor crecimiento
de biomasa, aunque esto también dependerá del tipo de morfología del microorganismo a
tratar.
Referencias:
Caicedo 1 L, S. 1. (s.f.). Estudio comparativo de cuatro sistemas de propagación de
levadura cervecera por lote alimentado . Revista colombiana de biotecnología ,
51-56.
Grau, B. B. M. (1996). Diseño de biorreactores y enzimología.
Mardones1, N. A. (2011). Modelación ,simulación y control de procesos de fermentación.

Revista chilena de ingeniería , 210-218.
Carranza, A., Negrete, A. & Vergara, P. (2018). ANÁLISIS, SIMULACIÓN E
IMPLEMENTACIÓN DE MODELOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO
PARA LA OBTENCIÓN DE LACTOBACILLUS PLANTARUM,
LACTOBACILLUS RHAMNOSUS Y SACCHAROMYCES BOULARDII EN
UN BIORREACTOR MULTICULTIVO TIPO LOTE ALIMENTADO.

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Análisis de crecimiento microbiano para la obtención de Lactobacillus

plantarum, Lactobacillus rhamnosus y Saccharomyces boulardii en un

Según una investigación (Grau, 1996), un biorreactor es un recipiente en el cual se lleva a

Se evaluó el funcionamiento de un biorreactor de tipo lote alimentando analizando sus

Se desarrolló la cinética de crecimiento de los microorganismos Lactobacillus planetarium,

Crecimiento microbiano, sustrato, biorreactor.

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Donde x corresponde a la biomasa, s la cantidad de sustrato y v volumen del biorreactor.

El problema de control, en el caso de μ constante, implica que el sustrato se mantenga

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UN BIORREACTOR MULTICULTIVO TIPO LOTE ALIMENTADO.

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