IQ 04 Determinación Cualitativa de Aminoácidos

Universidad Mariano Gálvez de Guatemala
Revisado por: Autorizado por:

Elaborado por:
Instituto de Investigaciones Instituto de Investigaciones
Facultad de Ciencias Químicas, Biológicas, Químicas, Biológicas,
Químicas Biológicas Biomédicas y Biofísicas Biomédicas y Biofísicas
Diciembre, 2021 Diciembre, 2021 Mes, año de autorización

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Práctica No. 04 Determinación cualitativa de la presencia de

aminoácidos en solución
Práctica adaptada para educación a distancia
(Tiempo para el cual está diseñada la práctica: 180 min)
Introducción
Dentro de los organismos vivos se encuentran varias moléculas, a base de carbonos,

que les permite llevar a cabo procesos celulares para mantener la vida. Estas moléculas
son conocidas colectivamente como biomoléculas y se clasifican en cuatro tipos
diferentes: las proteínas, los carbohidratos, los lípidos y los ácidos nucleicos. Las
biomoléculas con funciones más amplias dentro de los seres vivos son las proteínas y
sus monómeros, los aminoácidos.
Los aminoácidos son moléculas con una estructura general definida y que, al unirse
entre sí en un orden específico para cada caso, forman una gran cantidad de proteínas
diferentes. Esas proteínas tienen una amplia gama de acción dentro del organismo,
desde catálisis de reacciones hasta funciones estructurales. Increíblemente, todas las
proteínas de todas las especies están formados por los mismo veinte α-aminoácidos
comunes. Sin embargo, la función de los aminoácidos va más allá de formar proteínas,
e incluso algunos aminoácidos del organismo no se encuentran en ellas.
En esta práctica, se describen las reacciones para la determinación cualitativa de la

presencia de aminoácidos dentro de soluciones conocidas y para su cuantificación.
Objetivos/Competencias
Mediante la práctica, investigación y observación, el estudiante será capaz de:
1. Describir y explicar las diferentes reacciones de los aminoácidos que hacen

posible su detección cualitativa en solución.
2. Llevar a cabo las principales pruebas cualitativas para la determinación de la

presencia de aminoácidos en soluciones.
3. Cuantificar un aminoácido en solución usando la reacción de la ninhidrina por

espectrofotometría.
4. Deducir las limitaciones de las reacciones de detección cualitativa de

aminoácidos.
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Antecedentes
Las proteínas llevan a cabo una gran variedad de funciones esenciales en los
organismos vivos, desde la catálisis de transformaciones químicas necesarias hasta
darle forma y estructura al organismo donde se encuentre. A pesar de poseer funciones
tan diversas, las proteínas están formadas por los mismos α-aminoácidos. Estos
aminoácidos, conocidos también como aminoácidos comunes, se definen como aquellos
para los cuales existe al menos un codón en el código genético del organismo. Cada
proteína es un polímero de α-aminoácidos en orden específico dictado por el gen
correspondiente dentro del genoma. Las proteínas también pueden contener
aminoácidos derivados, que generalmente se forman enzimáticamente a partir de un
aminoácido común que ya ha sido incorporado a la estructura de una proteína. (Devlin,
2011)
Tal como se muestra en la Figura 1, un α-aminoácido consiste de un carbono central,

llamado el carbono α , unido a un grupo amino (-NH2), a un grupo carboxilo (-COOH), a
un átomo de hidrógeno (-H) y a un grupo variable distintivo de cada aminoácido,
denominado -R y conocido como su cadena lateral. Teniendo cuatro grupos diferentes
unidos a un carbono tetraédrico, el aminoácido es una molécula con actividad óptica, con
su centro quiral ubicado en el carbono α. De esta manera, existen dos formas de cada
aminoácido, los isómeros L y D, siendo una la imagen especular de la otra, tal como se
muestra en la Figura 2. Todos los aminoácidos que se encuentran como parte de las
proteínas son isómero L. (Berg et al., 2015)
Figura 1. Representación de los cuatro principales grupos de un α-aminoácido común alrededor de un átomo de carbono
(llamado carbono α). El grupo R representa un grupo de átomos característicos para cada α-aminoácido. Adaptado de (Nelson
et al., 2021)
Figura 2 Debido a la presencia de cuatro grupos diferentes alrededor de un átomo, un α-aminoácido es una molécula con
actividad óptica alrededor del carbono α, el centro quiral. A pesar de existir dos isómeros posibles, L y D, en las proteínas se
encuentran solamente α-aminoácidos en su isómero L. Adaptado de (Berg et al., 2015)
Dentro de las proteínas pueden encontrarse veinte tipos diferentes de cadenas

laterales, variando en tamaño, forma, capacidad de formar puentes de hidrógeno y
reactividad química. Todas las proteínas de todas las especies están formadas por los
mismos veinte tipos de α-aminoácidos, con muy pocas excepciones. Estos grupos
laterales permiten la clasificación de los α-aminoácidos, usualmente de la siguiente
forma:
• Aminoácidos hidrofóbicos, con grupos R no polares

• Aminoácidos polares, con grupos R neutros
• Aminoácidos positivos, con grupos R con carga positiva a pH fisiológico
• Aminoácidos negativos, con grupos R con carga negativa a pH fisiológico (Berg
et al., 2015)
Los α-aminoácidos tienen como principal función el ser los componentes de péptidos
y proteínas. Aunque solamente 20 aminoácidos están incluidos en el código genético,
algunas cadenas laterales pueden modificarse enzimáticamente después de haberse
formado la proteína (cambios post traduccionales). Sin embargo, los α-aminoácidos
tienen otras funciones clave en el organismo. Algunos de ellos, o sus derivados, forman
parte de lípidos específicos, tales como la serina en los fosfolípidos y la glicina en las
sales biliares. Varios aminoácidos funcionan como neurotransmisores, mientras que
otros son precursores de neurotransmisores, mediadores e incluso hormonas. Ciertos
aminoácidos son precursores de otros metabolitos, como la glucosa por medio de la
gluconeogénesis, las bases nitrogenadas para los ácidos nucleicos, el grupo hem para
la hemoglobina, entre otros. Otros aminoácidos, diferentes a los que se encuentran en
las proteínas, poseen funciones como intermediarios en la síntesis y degradación de
aminoácidos proteinogénicos y en el ciclo de la urea. La Figura 2 sintetiza las distintas
funciones de los aminoácidos en el organismo. (Koolman & Röhm, 2005)
Figura 2. Resumen de las funciones de los aminoácidos en el organismo. Adaptado de (Koolman & Röhm, 2005)
Pre-laboratorio
1. Los seres vivos poseen -aminoácidos. ¿Qué significa esto y cuáles otros
pueden existir?
2. Investigue la estructura de los 20 aminoácidos comunes en el organismo.
3. ¿Qué es un aminoácido esencial y cuáles lo son para el ser humano?
4. ¿A través de cuál reacción identifica la ninhidrina a los aminoácidos?
5. ¿Qué es el aspartame y para qué se utiliza?
Materiales y equipo
Recursos Educativos
• Video “Métodos de identificación de aminoácidos y proteínas”
• Laboratorio virtual Amrita “Quantitative estimation of amino acids by ninhydrin”.
Precauciones especiales
El simulador de la segunda parte de esta práctica está realizado en Flash Player,

contenido que ya no puede mostrarse en los navegadores convencionales (Google,
Firefox, Edge). Sin embargo, el contenido sí se muestra en un navegador alterno llamado
Puffin, y que puede instalarse en las tabletas y teléfonos a través de su centro de
descargas.
Procedimiento
Primera Parte: Detección de aminoácidos
1. Observe el video titulado “Métodos de identificación de aminoácidos y proteínas”
al cual se le brindará acceso.
2. Escriba las reacciones que se utilizan en el video para la identificación de
aminoácidos y proteínas.
3. Resuma, en una tabla, los resultados obtenidos en el video para la prueba de
aminoácidos.
4. Responda las siguientes preguntas.
a. Indique la diferencia entre una prueba cualitativa y una prueba cuantitativa.
¿Qué tipos de pruebas son las que se realizaron en esta práctica?
b. ¿Cómo afecta el color inicial de la muestra en una prueba de este tipo?
c. ¿Qué papel cumple el agua desmineralizada, la glicina y la gelatina en las
diferentes pruebas realizadas?
d. La instructora consideró necesario repetir la prueba para tres muestras: la
yema de huevo, el aspartame y el caldo de espinaca. ¿Por qué razón hizo
esto? ¿Obtuvo un resultado diferente en cada intento?
e. ¿Por qué la reacción para el aspartame fue distinta a lo que la instructora
esperaba? Explique su respuesta
f. Correlacione el hallazgo de presencia de aminoácidos con el hallazgo de
presencia de proteínas. ¿Puede explicar la correlación?
g. ¿Cómo mejoraría usted el procedimiento al realizar esta detección?
Segunda Parte: Cuantificación de aminoácidos usando ninhidrina
NOTA IMPORTANTE: Dado que los navegadores usados tradicionalmente ya no

desplegarán el contenido Flash necesario en este laboratorio virtual, debe usarse el
navegador Puffin en un teléfono celular o en una tableta. Este navegador puede
obtenerse gratuitamente desde la tienda de descargas del dispositivo que utilice.
1. Regístrese dentro del sitio de laboratorios virtuales disponible en la página

https://vlab.amrita.edu/ . (Quantitative Estimation of Amino Acids by Ninhydrin:
Amrita Vishwa Vidyapeetham Virtual Lab, 2011)
2. Acceda a la práctica de la siguiente forma:
a. En la página principal, ingrese con el correo que usó para registrarse y su
contraseña.
b. Ingrese a la sección de Biotecnología e Ingeniería Biomédica
(Biotechnology and Biomedical Engeneering).
c. Busque el primer laboratorio virtual de Bioquímica (Biochemistry Virtual
Lab I)
d. Busque la práctica de cuantificación de aminoácidos usando ninhidrina

(Quantitative estimation of aminoacids by ninhidrin). En esta práctica,
hallará varias pestañas. Por su facilidad, puede ver las pestañas distintas
a la práctica en el navegador de su preferencia, y usar Puffin únicamente
para la animación.
i. Theory: contiene la teoría relacionada a la práctica
ii. Procedure: describe el procedimiento a seguir en la simulación
iii. Self-evaluation: contiene una autoevaluación de conocimiento (no
es necesario que lo haga, pero puede ayudarle)
iv. Animation: contiene la práctica
v. Assignment: contiene un ejercicio (no es necesario que lo haga)
vi. Reference: indica las referencias usadas para la creación de la
práctica
vii. Feedback: provee un espacio para dar su opinión si lo desea
e. Para esta práctica, solamente lea la teoría y el procedimiento, y observe la
animación del experimento. Presente la tabla de resultados obtenidos en
la animación.
f. Calcule la concentración de las dos soluciones de concentración
desconocida, presentando la gráfica y ecuación de la curva de calibración
obtenidas.
Post-laboratorio
1. Investigue la base química de las siguientes pruebas para aminoácidos:
a. Reacción xantoproteica
b. Reacción de Millón
c. Reacción de plumbato de sodio
d. Reacción de Sakaguchi
2. Complete la información de la siguiente tabla y encuentre la concentración de la
muestra desconocida. Presente tanto gráfica como ecuación de la curva de
calibración que utilice.
Número de Peso del estándar de Concentración al
Absorbancia a 570nm
muestra aminoácido (mg) disolver en 10 mL
1 0.0 mg 0 g/mL 0.000
2 0.2 mg 0.147
3 0.4 mg 0.318
4 0.6 mg 0.492
5 0.8 mg 0.662
6 1.0 mg 100 g/mL 0.832
7 Desconocido Desconocido 0.412
Bibliografía
Berg, J. M., Tymoczko, J. L., Gatto, G. J., & Stryer, L. (2015). Biochemistry (Eighth
edition). W.H. Freeman & Company, a Macmillan Education Imprint.
Devlin, T. M. (Ed.). (2011). Textbook of biochemistry: With clinical correlations (7th

ed). John Wiley & Sons.
Koolman, J., & Röhm, K.-H. (2005). Color atlas of biochemistry (2nd ed., rev.enl).
Thieme.
Nelson, D. L., Cox, M. M., & Hoskins, A. A. (2021). Lehninger Principles of

Biochemistry. 4381.
Quantitative Estimation of Amino Acids by Ninhydrin: Amrita Vishwa Vidyapeetham

Virtual Lab. (2011). https://vlab.amrita.edu/?sub=3&brch=63&sim=156&cnt=2
Anexo
Investigue el uso que tiene la reacción de ninhidrina dentro de las ciencias forenses y
explique el funcionamiento de la misma.

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Dentro de los organismos vivos se encuentran varias moléculas, a base de carbonos,

En esta práctica, se describen las reacciones para la determinación cualitativa de la

Mediante la práctica, investigación y observación, el estudiante será capaz de:

1. Describir y explicar las diferentes reacciones de los aminoácidos que hacen

2. Llevar a cabo las principales pruebas cualitativas para la determinación de la

3. Cuantificar un aminoácido en solución usando la reacción de la ninhidrina por

4. Deducir las limitaciones de las reacciones de detección cualitativa de

Tal como se muestra en la Figura 1, un α-aminoácido consiste de un carbono central,

Dentro de las proteínas pueden encontrarse veinte tipos diferentes de cadenas

• Aminoácidos hidrofóbicos, con grupos R no polares

2. Investigue la estructura de los 20 aminoácidos comunes en el organismo.

3. ¿Qué es un aminoácido esencial y cuáles lo son para el ser humano?

4. ¿A través de cuál reacción identifica la ninhidrina a los aminoácidos?

5. ¿Qué es el aspartame y para qué se utiliza?

El simulador de la segunda parte de esta práctica está realizado en Flash Player,

NOTA IMPORTANTE: Dado que los navegadores usados tradicionalmente ya no

1. Regístrese dentro del sitio de laboratorios virtuales disponible en la página

d. Busque la práctica de cuantificación de aminoácidos usando ninhidrina

Devlin, T. M. (Ed.). (2011). Textbook of biochemistry: With clinical correlations (7th

Nelson, D. L., Cox, M. M., & Hoskins, A. A. (2021). Lehninger Principles of

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