NOMBRE DE LA EMPRESA: LABORATORIOS SAN ANGEL SA.

NOMBRE DE LA PRUEBA: Determinación Cuantitativa en microplaca de

Actividad de Biotinidasa, en sangre total de neonatos colectada en papel filtro.
13907241-3 (es) CLAVE DE LA PRUEBA: 40.50.002 1

3307-0010

®
GSP
Neonatal
Biotinidase kit

Instrucciones de uso. Reactivos para 1152 ensayos

Fabricado por:
Wallac Oy,
Mustionkatu 6, FI-20750 Turku, Finlandia

PARA DIAGNÓSTICO IN VITRO

2 13907241-3 (es)
SÍMBOLOS

In vitro diagnostic medical device / Dispositif médical de diagnostic in vitro /

In-Vitro-Diagnostikum / Producto sanitario para diagnóstico in vitro /
Dispositivo medico-diagnostico in vitro / Para uso diagnóstico in vitro

Batch code / Code du lot / Chargenbezeichnung / Código de lote / Codice

del lotto / Número do lote

Packing number / Numéro d’emballage / Packnummer / Número de

envase / Numero confezioni / Número de embalagem

Catalog number / Référence du catalogue / Bestellnummer / Número de

catálogo / Numero di catalogo / Código

Use by / Utiliser jusqu’au / Verwendbar bis / Fecha de caducidad / Utilizzare

entro / Data limite de utilização

Temperature limitation / Limites de température / Temperaturbegrenzung /

Limite de temperatura / Limiti di temperatura / Limite de temperatura

Contains sufficient for ‹n› tests / Contenu suffisant pour ”n” tests / Inhalt
ausreichend für <n> Prüfungen / Contenido suficiente para <n> ensayos /
Contenuto sufficiente per “n” saggi / Conteúdo suficiente para <n> testes

Consult instructions for use / Consulter les instructions d'utilisation /

Gebrauchsanweisung beachten / Consulte las instrucciones de uso /
Consultare le istruzioni per l'uso / Consultar Instruções de uso

Manufacturer / Fabricant / Hersteller / Fabricante / Fabbricante / Fabricado

por

This way up / Haut / Diese Seite oben / Este lado arriba / Questo lato
in alto / Este lado para cima

Recyclable / Recyclable / Recyclebar / Reciclable / Riciclabile / Reciclável

13907241-3 (es) 3

GSP® Neonatal Biotinidase kit

FINALIDAD DEL KIT

Este kit sirve para la determinación cuantitativa in vitro de la actividad de la biotinidasa

humana en muestras de sangre seca en papel de filtro, como ayuda para la detección en
los recién nacidos de deficiencia de biotinidasa mediante el instrumento GSP®.

RESUMEN Y EXPLICACIÓN DEL ENSAYO

La deficiencia de biotinidasa en recién nacidos es una anomalía congénita del

metabolismo caracterizada por la incapacidad para utilizar la vitamina unida a la proteína
de la dieta o para reciclar la biotina endógena derivada del recambio de carboxilasas. La
deficiencia de biotina se desarrolla progresivamente, dando como resultado una
deficiencia de las carboxilasas dependientes de la biotina: propionil-CoA carboxilasa,
3-metil-crotonil-CoA carboxilasa y piruvato carboxilasa. El trastorno es de carácter
recesivo autosómico y los individuos que carecen de actividad de la biotinidasa muestran
una variedad de síntomas que con frecuencia no están presentes en el momento del
nacimiento, lo que dificulta el diagnóstico de la enfermedad mediante observación clínica.
Los síntomas de la deficiencia de biotinidasa profunda no tratada normalmente aparecen
entre los 3 y 6 meses de edad, aunque el momento de su manifestación varía entre
1 semana y 10 años de edad. Los individuos con deficiencia de biotinidasa profunda sin
tratar habitualmente muestran uno o más de los siguientes síntomas: hipotonía,
convulsiones, conjuntivitis, problemas respiratorios, erupciones cutáneas, alopecia,
pérdida auditiva y problemas de visión. Los niños afectados de más edad pueden
desarrollar ataxia y retraso en el desarrollo. El tratamiento con biotina es efectivo pero, si
se demora la terapia, puede que los daños neurológicos no sean totalmente reversibles
[1],[2].

La incidencia informada de la deficiencia de biotinidasa es la siguiente: deficiencia de

biotinidasa profunda (actividad <10%) 1:112,000, deficiencia parcial (actividad 10%–30%)
1:129,000, y deficiencia profunda y parcial conjuntamente 1:60,000 [2].

PRINCIPIOS DEL ENSAYO

El ensayo GSP Neonatal Biotinidase combina una reacción enzimática con un ensayo en
fase sólida de inmunofluorescencia de tiempo resuelto. El ensayo Neonatal Biotinidase se
basa en la capacidad de la enzima biotinidasa para escindir el enlace amida en biotina
marcada con Eu. La reacción enzimática se detiene por la adición de estreptavidina que
tiene una alta afinidad por la biotina (marcada con Eu o biotina libre). Los complejos
estreptavidina-biotina son capturados por el anticuerpo monoclonal en fase sólida dirigido
contra la estreptavidina. El inductor DELFIA® Inducer disocia las moléculas en la solución
en la que se mide la fluorescencia del europio. La fluorescencia medida es inversamente
proporcional a la actividad de la biotinidasa de la muestra.

GSP y DELFIA son marcas registradas de PerkinElmer, Inc.

4 13907241-3 (es)

Eu

Eu
+
Placa recubierta con anti-SA + Placa recubierta con anti-SA

Eu Eu

+
Placa recubierta con anti-SA

Eu

Eu

Inductor
+ DELFIA

Eu

Substrato Estreptavidina Biotinidasa Anti-SA

(biotina marcada con Eu) (SA) (en la muestra) (estreptavidina)

CONTENIDO DEL KIT

Cada kit GSP Neonatal Biotinidase contiene reactivos para 1152 ensayos.

La fecha de caducidad del kit sin abrir viene indicada en una etiqueta exterior. Almacene
el kit a +2–+8 °C excepto para los calibradores de biotinidasa y los controles de
biotinidasa a -30 – -16 °C.
13907241-3 (es) 5
Reactivos

Componente Cantidad Almacenamiento y caducidad

Biotinidase Calibrators 7 cassettes de papel -30 – -16 °C hasta la fecha

(Calibradores de biotinidasa) de filtro 1 con 1 juego de caducidad indicada en la
(valores aprox. en sangre) de manchas de sangre etiqueta.
seca
A 10 U/dL
B 25 U/dL
C 50 U/dL
D 100 U/dL
E 175 U/dL
F 325 U/dL

Las actividades de la biotinidasa exactas se indican en el certificado de control de calidad

específico del lote, incluido en el kit.

Los calibradores se han preparado a partir de sangre total humana, con ProClin® 300
como conservante.

Biotinidase Controls 4 cassettes de papel -30 – -16 °C hasta la fecha

(Controles de biotinidasa) de filtro 2 con 3 juegos de caducidad indicada en la
(valores aprox. en sangre) de manchas de sangre etiqueta.
seca
Bajo 40 U/dL
Alto 160 U/dL

Los valores de los controles del kit medidos por el fabricante se indican en el certificado
de control de calidad específico del lote, incluido en el kit. Cada laboratorio debe
establecer su propio intervalo y valor medio aceptables.

Los controles se han preparado a partir de sangre total humana, con ProClin® 300 como
conservante.

Biotinidase Substrate Reagent 3 viales, 2.8 mL +2–+8 °C hasta la fecha de

(Reactivo de substrato de caducidad indicada en la
biotinidasa) etiqueta del vial.

El substrato listo para usar (biotina marcada con Eu) está en una solución salina
tamponada con Tris-HCl (pH 7.8), que contiene albúmina sérica bovina, y < 0.1% de
azida sódica como conservante.

1
La información sobre el tipo de papel de filtro figura en el cassette.
ProClin es una marca registrada de Rohm and Haas, Co.
2
La información sobre el tipo de papel de filtro figura en el cassette.
6 13907241-3 (es)

Biotinidase SA Reagent 3 viales, 2.8 mL +2–+8 °C hasta la fecha de

(Reactivo de SA de biotinidasa) caducidad indicada en la
etiqueta del vial.

La SA lista para usar (estreptavidina de Streptomyces avidinii) está en una solución

salina tamponada con Tris-HCl (pH 7.8), que contiene albúmina sérica bovina,
gammaglobulina bovina, Tween® 40, un colorante rojo inerte, y < 0.1% de azida sódica
como conservante.

Assay Buffer 3 frascos, 120 mL +2–+8 °C hasta la fecha de

(Tampón del ensayo) caducidad indicada en la
etiqueta del frasco.

La solución salina lista para usar, tamponada con Tris-HCl (pH 7.8), contiene albúmina
sérica bovina, gammaglobulina bovina, Tween® 40, un colorante rojo inerte, y < 0.1% de
azida sódica como conservante.

Anti-SA Microtitration Strips 12 placas +2–+8 °C hasta la fecha de

(Tiras para microtitulación caducidad indicada en la
anti-SA). etiqueta.
12 x 8 x 12 pocillos recubiertos
con IgG anti-estreptavidina
(ratón monoclonal).

Barcode labels for the plate 6 unidades Nota: los códigos de barras
(Etiquetas de código de barras son específicos del lote.
para la placa)

Lot-specific 1 unidad
quality control certificate
(Certificado de control de
calidad específico del lote)

MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO CON EL KIT

Este kit GSP Neonatal Biotinidase se debe usar con el instrumento GSP. Se necesitan los
siguientes componentes, que se pueden obtener de Wallac Oy o PerkinElmer, Inc. y sus
distribuidores.

1. Instrumento GSP (nº de ref. 2021-0010)

2. GSP Wash Concentrate (Concentrado de lavado GSP) (nº de ref. 4080-0010)
3. DELFIA Inducer (Inductor DELFIA) (nº de ref. 3304-0010)
4. Puntas de pipeta (nº de ref. 1235-402 y nº de ref. 2021-4010)

Tween es una marca registrada de ICI.

13907241-3 (es) 7
5. Taladro para cortar los discos de papel de filtro con un diámetro aproximado de
3.2 mm (1/8 de pulgada), p. ej. Wallac DBS Puncher (nº de ref. 1296-071) o Panthera-
Puncher™ 9 (nº de ref. 2081-0010)

Además, se necesita lo siguiente:

- agua de calidad reactivo para laboratorio clínico (CLRW, CLSI) o agua desionizada
equivalente
- tarjetas de muestras con papel de filtro que cumple las normativas locales vigentes

TOMA Y MANIPULACIÓN DE LAS MUESTRAS

Las muestras de sangre deben tomarse mediante una punción en el talón y colocarse
directamente en el papel de filtro.

Los programas de cribado neonatal difieren entre sí en el tipo de muestra requerida. En

Estados Unidos, la recomendación es una mancha de sangre, de aproximadamente
12.7 mm (½ de pulgada) de diámetro, obtenida mediante una punción en el talón y
recogida en papel de filtro. La punción de sangre neonatal en el talón se obtiene
habitualmente de 2 a 6 días después del nacimiento, pero puede que en algunos
programas de cribado los tiempos y el número de muestras sean distintos. Consulte las
normativas de carácter local para conocer los tiempos y las tomas de muestras de cribado
adecuados. El dispositivo de toma de muestras debe cumplir las normativas nacionales.
Los métodos basados en muestras de sangre seca requieren de una obtención,
manipulación y transporte adecuados. El documento LA4-A5 [3] del CLSI describe la
técnica de toma de muestra, cuyos principales puntos se exponen a continuación:

- Limpiar la piel con una gasa mojada en alcohol y dejar secar al aire.

- Realice una punción en el talón del recién nacido con una lanceta estéril o con un
dispositivo de incisión hasta una profundidad de aproximadamente 1.0–2.0 mm. En
los niños pequeños una punción realizada a mayor profundidad puede causar daños
óseos.

- Limpiar la primera gota de sangre. Colocar suavemente el papel de filtro sobre una
gota grande de sangre y, en un solo paso, dejar que se absorba una cantidad de
sangre suficiente como para llenar completamente el círculo preimpreso en el papel
de filtro. Examinar ambos lados del papel de filtro para comprobar que la sangre ha
penetrado y ha impregnado el papel. Si se aprieta excesivamente el sitio de punción,
podría causar hemólisis de la muestra o la mezcla de líquidos tisulares con la
muestra. No colocar varias gotas sucesivas en el círculo (esto ocasiona la formación
de capas).

- Dejar secar la muestra de sangre al aire en posición horizontal durante al menos

3 horas a temperatura ambiente (+18–+25 °C), sin exponer a la luz directa. No
caliente ni apile las muestras durante el proceso de secado.

Panthera-Puncher es una marca comercial de PerkinElmer, Inc.

8 13907241-3 (es)
- Comprobar que se ha rellenado la información necesaria en la tarjeta de toma de la
muestra. La información preimpresa mínima necesaria sobre el dispositivo de toma de
muestras incluye:

- apellido (y nombre si está disponible), sexo, fecha de nacimiento (opcional: hora

de nacimiento), peso al nacer y edad; (indicar si tiene menos de 24 h), y número
de identificación del paciente
- nombre y apellido de la madre
- fecha de toma de la muestra (opcional: hora de toma de la muestra)
- nombre y dirección del remitente (opcional: centro en el que ha nacido)
- nombre y número de teléfono del médico (profesional de atención sanitaria)
- nombre y dirección del programa de cribado de neonatos
- cada tarjeta debe tener un número de serie único y una fecha de caducidad

- Antes de colocar las muestras en un contenedor para transporte, las manchas de

sangre seca de las tarjetas de toma de muestras deben separarse mediante una
barrera física o girarse 180° con respecto a las tarjetas que están inmediatamente
encima o debajo. También se pueden proteger las muestras de sangre colocando un
papel o cartón doblado que las cubra o bien papel cristal entre las mismas.

- Para el embalaje y transporte de la muestra siga las normativas locales de correo y

transporte. Las muestras no deben colocarse en recipientes sellados herméticamente
(por ejemplo, bolsas de plástico o aluminio). Si es necesario, deben incluirse bolsas
desecantes en número suficiente. La humedad y el vapor son perjudiciales para la
muestra de sangre seca.

- Envíe por correo u otro medio de transporte la muestra al laboratorio antes de que
transcurran 24 horas desde que se tomó, a no ser que el laboratorio de cribado lo
determine de otra forma.

Algunos laboratorios de cribado pueden solicitar información adicional en la tarjeta, por

ejemplo si el bebé fue anterior o posterior al término y, en este caso, en qué grado, si fue
un parto gemelar, información acerca de la alimentación y posibles antibióticos, y si se
realizó alguna transfusión de sangre. Consulte las normativas de carácter local y las
políticas institucionales para conocer las desviaciones con respecto a la información
mínima necesaria sobre el dispositivo de toma de muestras.

Estabilidad de las muestras

Se debe prestar especial atención a las condiciones de almacenamiento y transporte de

las muestras de sangre seca (manchas de sangre seca). Almacenar las muestras en
ambientes con temperatura y humedad elevadas aumenta el riesgo de obtener falsos
positivos para el cribado de biotinidasa. Puede observarse una disminución de la actividad
de biotinidasa del 20% después de 3 días a temperatura ambiente con baja humedad
(<30%). La humedad elevada aumentó la degradación de la muestra puesto que puede
perderse aproximadamente el 50% de actividad después de 3 días a temperatura
ambiente con alta humedad. Cuando se almacena a alta temperatura (+37 °C) y alta
humedad (HR por encima de >50%) más del 50% de la actividad puede perderse durante
los primeros cuatro días y pasados siete días puede perderse aproximadamente el 80%
de la actividad [5],[6].
13907241-3 (es) 9
La influencia de la duración, la humedad y la temperatura de almacenamiento en la
actividad de la biotinidasa se ha estudiado 3 mediante varias muestras de sangre total
seca. Los resultados de una muestra que representa el nivel de actividad normal de la
biotinidasa aparecen en el siguiente gráfico.

Actividad de biotinidasa 125 U/dL -20°C en una bolsa

120 sellada con desecante

+4°C en una bolsa

% de la actividad de BTD hasta el día 0

sellada con desecante

100
+4°C (expuesto a las
condiciones
ambientales)
80
+21°C, HR 40%

60 +27°C, HR 40%

+35°C, HR 80%
40

20

0
0 5 10 15 20 25 30 35 40
Duración de almacenamiento (días)

CUIDADOS Y PRECAUCIONES

Para diagnóstico in vitro.

Este kit debe ser utilizado únicamente por personal cualificado.

Este kit contiene calibradores y controles fabricados a partir de componentes de sangre

humana. La sangre humana se ha sometido a métodos de ensayo aprobados por la FDA
o equivalentes, y se han obtenido resultados negativos para el antígeno de superficie de
la hepatitis B, anticuerpos anti-hepatitis C y anticuerpos anti-VIH 1 y 2. No obstante,
deben seguirse todas las precauciones recomendadas para la manipulación de derivados
sanguíneos. Consultar la publicación "Biosafety in Microbiological and Biomedical
Laboratories" del U.S. Department of Health and Human Services o las normas locales o
nacionales.

Tratar todas las muestras como potencialmente infecciosas.

Los calibradores y controles se prepararon con Proclin® 300 como conservante, que
puede producir una reacción alérgica en la piel.

3
Estudio realizado en Wallac Oy, Turku, Finlandia.
10 13907241-3 (es)
Los reactivos contienen azida sódica (NaN 3 ) como conservante. La azida sódica puede
reaccionar con el plomo o el cobre de las tuberías, formando azidas metálicas muy
explosivas. Al limpiar los reactivos, dejar correr gran cantidad de agua para evitar la
formación de azidas.

Todos los residuos se deben eliminar siguiendo la normativa en vigor.

PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO

Consulte el manual del usuario de GSP y el manual del usuario de GSP Workstation para
obtener más información. Antes de cargar los reactivos, lea los códigos de barras del
certificado de control de calidad para introducir la información específica del lote en el
software de GSP Workstation. Los calibradores, los controles y las muestras se pueden
dejar a temperatura ambiente (+19 a +25 °C) antes de su uso, pero todos los reactivos
líquidos deben cargarse refrigerados (+2 a +8 °C) en el instrumento.

Estabilidad de los componentes

Reactivos líquidos

Una vez abiertos, los reactivos deben almacenarse en el carrusel de reactivos hasta que
se usen o hasta que caduquen. El tampón del ensayo, el reactivo de substrato de
biotinidasa y el reactivo de SA de biotinidasa pueden conservarse durante un máximo
14 días en el instrumento.

Tiras

Una vez abiertas, las tiras son estables durante 2 semanas, cuando se almacenan con
desecante a una temperatura entre +2 y +8 °C en su envase original dentro de una bolsa
de plástico sellada.

Calibradores y controles

Una vez abiertos, los calibradores y los controles son estables durante 1 semana, cuando
se almacenan con desecante a una temperatura entre +2 y +8 °C en su envase original
dentro de una bolsa de plástico sellada.

Se ha demostrado que las placas que contienen calibradores y controles perforados en

los pocillos se mantienen estables en el instrumento GSP hasta 15 horas.

Calibración

Debe realizarse una curva de calibración por duplicado para cada lote del kit y lote de
inductor DELFIA Inducer. Después, la curva de calibración será válida durante 24 horas o
hasta que se realice una nueva curva de calibración.
13907241-3 (es) 11
Procedimiento del ensayo

NOTA: Las muestras de sangre seca deben perforarse en las placas de microtitulación
anti-SA antes de la carga.

1. Retire los tapones de las botellas o viales de reactivos y coloque los reactivos en los
cassettes de reactivos tal como muestra la figura siguiente. Asegúrese de que los
códigos de barras son visibles a través de las ranuras de los cassettes de reactivos.
Coloque los tapones antievaporación negros en los viales de reactivo de substrato y
SA.

Tapones antievaporación
Reactivo de
substrato o SA Reactivo de
substrato o SA

Tampón

2. Coloque los cassettes de reactivos en el carrusel de reactivos.

3. Perfore los calibradores, los controles y las muestras en los pocillos. Para reducir al
mínimo la variación de los calibradores y los controles, es recomendable evitar los
bordes exteriores de las manchas de sangre seca; es decir, perforar un máximo de
4 discos de cada mancha de sangre seca en los cassettes de calibradores y
controles.

4. Lea el código de barras de la placa e introduzca la información acerca de las

muestras y los controles en el software GSP Workstation.

5. Compruebe que todos los pocillos tengan un disco de papel de filtro. Cargue las
placas en la cámara de modo que todos los códigos de barras de las mismas estén
orientados en la misma dirección.

6. Coloque la cámara en el cargador de entrada de modo que los códigos de barras de

las placas estén orientados hacia fuera.

7. Espere hasta que se complete la carga y se organicen todas las placas. Si fuera
necesario, cargue más reactivos o consumibles tal y como indique la pantalla.
Después, el ensayo comienza automáticamente.

8. Retire las placas del cargador de salida al final del ensayo.

12 13907241-3 (es)
Procedimiento para ensayos con placas incompletas

Si no se utiliza una placa completa, retire la cantidad de tiras necesarias, colóquelas sobre
un bastidor y coloque el adhesivo del código de barras adjunto tal como se muestra en la
siguiente figura. Si el número de tiras es impar, añada una tira adicional. Debería ser una
tira dummy. Nota: Abra la lámina únicamente desde tres lados, dóblela y guárdela
dejando la información específica de la placa en el embalaje. Guardar las tiras restantes
con desecante en su envase original dentro de una bolsa de plástico sellada.

Coloque la etiqueta adhesiva

de código de barras en la
Adhesivo de placa, de manera que el pocillo
código de barras A1 quede en este lado

NOTAS DE PROCEDIMIENTO

1. Para usar este kit, es necesario leer detenidamente este folleto, el manual del usuario
de GSP y saber utilizar el software GSP Workstation. Los reactivos suministrados con
este kit están pensados para utilizarlos como una sola unidad. No mezcle reactivos ni
códigos de barras de kits que tengan diferentes números de lote. No usar los
reactivos de un kit después de la fecha de caducidad impresa en la etiqueta del
mismo.

2. Cualquier desviación del procedimiento de ensayo puede afectar a los resultados.

3. Manipule todos los frascos y viales con cuidado para evitar la formación de espuma.
La presencia de espuma dará lugar a una detección falsa del nivel de líquido.

4. Manipule las placas con precaución para que los discos no se salgan de los pocillos.
Intente no posar la placa con fuerza y tenga cuidado de que no choquen las placas al
cargarlas en la bandeja de entrada.

5. Asegúrese de que existen las medidas antiestáticas y los controles de humedad

adecuados durante el taladro de muestras de sangre seca para reducir la electricidad
estática que puede contribuir a que los discos de muestras perforados no caigan en el
pocillo previsto de la placa de microtitulación provocando la pérdida o, en raras
ocasiones, duplicando discos de muestras en el pocillo. Los discos de muestra que
faltan se detectan mediante Control de elución. Los discos de muestras perforados
duplicados en un pocillo pueden causar un resultado de cribado falso negativo cuando
una muestra con actividad de biotinidasa normal oculta una muestra con deficiencia
de biotinidasa. Ver también la sección "Control de elución".
13907241-3 (es) 13
CÁLCULO DE RESULTADOS

El sistema GSP incorpora programas para la reducción de datos, y los resultados (curvas
de calibración, actividades de las muestras, etc.) se guardan en el software GSP
Workstation.

Control de elución

El software de GSP contiene una función denominada 'Control de elución'. La finalidad del
'Control de elución' es detectar si faltan discos de muestras en los pocillos antes de medir
la actividad de biotinidasa. Se realiza una medición adicional y, si se sospecha que falta
un disco de muestra, se envía un mensaje de notificación. En este caso, es necesario
volver a analizar la placa completa. Es importante volver a analizar la placa completa,
porque si el disco de sangre que falta fue a parar accidentalmente a otro pocillo, podría
ocultar una muestra con una actividad de biotinidasa baja y, por lo tanto, produciría un
resultado de cribado negativo falso.

Control de calidad

Se recomienda el uso de muestras de control para cerciorarse de la validez de los

resultados día a día. El kit incluye controles a dos niveles distintos. Estos controles deben
realizarse preferiblemente por duplicado en cada ensayo; si el ensayo incluye más de una
placa, deben realizarse controles en cada placa. Cada laboratorio debe establecer su
propio intervalo y valor medio aceptables. La media establecida debe estar en
± 2 desviaciones estándar de los valores indicados en el certificado de control de calidad.
Se recomienda que los laboratorios establezcan sus propios controles a diferentes
niveles, además de los controles incluidos en el kit. Sólo se deben notificar los resultados
de las muestras si los resultados de los controles del ensayo cumplen los criterios de
aceptación establecidos por el laboratorio [7],[8]. Asegúrese de que se cumplan los
requisitos locales y nacionales aplicables.

Asimismo, se recomienda la participación en programas de control de calidad externos.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Al igual que con cualquier otra prueba de análisis in vitro, los datos obtenidos con el kit
GSP Neonatal Biotinidase deben utilizarse únicamente como una ayuda para otros
procedimientos médicos establecidos, y sus resultados deben interpretarse junto con
otros datos clínicos de los que disponga el facultativo.

El kit GSP Neonatal Biotinidase se debe usar para la detección de la deficiencia de

biotinidasa en recién nacidos. No se debe usar para distinguir entre deficiencia de
biotinidasa parcial y profunda.

La bilirrubina conjugada (2.5 mg/dL y superior) y los triglicéridos (250 mg/dL y superior)
añadidos a la sangre total interfieren con esta prueba, ya que disminuyen la actividad de
biotinidasa medida. Los niveles elevados de bilirrubina conjugada y triglicéridos pueden
provocar un resultado de cribado falso positivo de una muestra con una actividad de
biotinidasa medida cercana al valor de corte.
14 13907241-3 (es)
El glutatión (22.5 mg/dL y superior) añadido a la sangre total interfiere con esta prueba al
aumentar la actividad de la biotinidasa medida. Los niveles elevados de glutatión pueden
causar un resultado de cribado falso negativo en una muestra con una actividad de
biotinidasa medida cercana al valor de corte.

Las condiciones y los factores que pueden provocar resultados analíticos anormales en el
ensayo son:
- muestra que no esté impregnada de sangre uniformemente
- muestra expuesta al calor y a la humedad
- disco de muestra perforado demasiado cerca del borde de la mancha de sangre
- muestras obtenidas o secadas incorrectamente
- manchas de sangre que no se eluyen debido al deterioro de la muestra, causado por
la exposición al calor y a la humedad
- contaminación de la tarjeta de toma de la muestra
- determinados lotes de papel de filtro pueden provocar una actividad de biotinidasa
falsamente reducida [4]
- las variaciones estacionales en la medida de la actividad de biotinidasa pueden
causar cambios en la media de la población [6]

Consultar también la sección "NOTAS DE PROCEDIMIENTO".

VALORES ESPERADOS 4 E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

La determinación de resultados aparentemente positivos de deficiencia de biotinidasa se

basa en un valor de corte que permite distinguir entre valores aparentemente positivos y
aparentemente negativos. Cada laboratorio debe establecer sus propios valores de corte.

La deficiencia de biotinidasa es un trastorno hereditario de carácter autosómico recesivo.

Un niño con deficiencia de biotinidasa profunda es homocigótico, normalmente presenta
una actividad enzimática de menos del 10% de la media de la población normal y en
ocasiones no presenta ninguna actividad. Las personas que presentan una deficiencia de
biotinidasa parcial son heterocigóticas para la mutación de deficiencia profunda y tienen
niveles intermedios de actividad de biotinidasa, normalmente del 10 al 30% del nivel
normal. [2]

La determinación de resultados aparentemente positivos de la deficiencia de biotinidasa

se puede basar en un percentil o en el 30% del valor medio normal de la población que
está determinado por el programa de cribado del laboratorio. Tenga en cuenta que si usa
un valor de percentil bajo, muy pocas muestras se hallarán por debajo del límite calculado
(por ejemplo, el percentil del 1% de 500 muestras supone solo 5 mediciones). Si la
población de muestra para determinar el valor de corte es pequeña, la variación normal de
estas pocas mediciones afectará significativamente al nivel de corte y puede ser
considerablemente inferior o superior de lo que debiera ser. Los valores serán más fiables
conforme se vayan incluyendo más muestras a lo largo de un periodo de tiempo más
prolongado. Debe usarse un valor de corte inicial > 1.5% hasta que se establezca de
forma exacta en el laboratorio la distribución de la población de recién nacidos normales.

4
Estudio realizado para Wallac Oy, Turku, Finlandia.
13907241-3 (es) 15
Factores que afectan a la distribución de la población [4],[5],[6]:
- frecuencia de la heterocigosis en la población
- factores ambientales, como la variación estacional, las condiciones de transporte y
almacenamiento de muestras (calor y humedad)
- tiempo entre la toma de muestras y la medición
- papel de filtro usado para la toma de muestras

Si existe algún motivo para creer que las muestras usadas para determinar la distribución
en la población normal están expuestas a un largo tiempo de transporte y/o calor y
humedad que reducen la actividad de la biotinidasa y/o la frecuencia de heterocigosis es
alta en la población, la mediana de la población normal se aproximará a la población
deficiente. Si este es el caso, debe considerarse un valor de corte más conservador.

NOTA: No use un valor de corte basado en los datos recopilados en otro lugar o
mediante otro productos de biotinidasa que no sea el kit 3307-0010 GSP Neonatal
Biotinidase.

El kit 3307-0010 GSP Neonatal Biotinidase se analizó en un laboratorio de cribado de

rutina midiendo la actividad de biotinidasa en 2215 recién nacidos. Las muestras eran
muestras de cribado de rutina. Los percentiles calculados a partir de ellos se muestran en
la tabla 1 que viene a continuación.

Los valores mencionados en esta sección sólo se aplican a este estudio.

Tabla 1. Estadísticas descriptivas del estudio

Percentiles inferiores
n Intervalo* Media Mediana
0.5% 1.0% 1.5%
Actividad
2215 35.9-415 237 239 85.7 101 107
(U/dL)

* Algunos resultados se encuentran fuera del intervalo de medición y no se pueden

considerar como exactos (ver la sección “Notificación de resultados”).
16 13907241-3 (es)
La distribución de frecuencias se muestra en el siguiente gráfico.

GSP Neonatal Biotinidase 3307-0010

300

250
Número de resultados

200

150

100

50

0
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 325 >325
GSP Biotinidase (U/dL)

Las muestras de cribado que dieron valores iguales o inferiores al corte deben
considerarse aparentemente positivas de deficiencia de biotinidasa, deben analizarse otra
vez y/o confirmarse mediante un procedimiento de prueba de diagnóstico.

Notificación de resultados

Se ha demostrado que el intervalo de medición es de 14.8 a 325 U/dL. La muestras con

valores inferiores a 14.8 U/dL se califican como ”<14.8 U/dL”. Estos resultados no deben
considerarse exactos, pero la muestra puede considerarse como de cribado positivo de
deficiencia de biotinidasa.

La muestras con valores superiores a 325 U/dL se califican como ”>325 U/dL”. Estos
resultados no deben considerarse exactos, pero la muestra puede considerarse como de
cribado negativo de deficiencia de biotinidasa.
13907241-3 (es) 17
CARACTERÍSTICAS ANALÍTICAS DEL ENSAYO 5

A continuación, se indican los datos de rendimiento representativos. Los resultados

obtenidos por laboratorios individuales pueden variar.

A continuación se muestra una curva de calibración típica obtenida con el kit 3307-0010
GSP Neonatal Biotinidase.

Precisión

La precisión se determinó de acuerdo con la norma EP5-A2 del NCCLS [9].

La variación del ensayo de GSP Neonatal Biotinidase se determinó utilizando manchas de

sangre seca, 3 lotes de kits y 3 instrumentos GSP. El estudio se realizó con 27 ensayos
durante 20 días; cada ensayo estaba compuesto por 2 placas con 4 replicados por
muestra. El número total de mediciones fue de 216 por muestra. Se utilizó el análisis de la
varianza para calcular los siguientes resultados:

5
Estudio realizado en Wallac Oy, Turku, Finlandia.
18 13907241-3 (es)
Tabla 2. Datos de precisión de GSP Neonatal Biotinidase al emplear una curva de
calibración completa en cada placa

Variación
Actividad media Variación
dentro del Variación total
Muestra de biotinidasa n dentro del lote
ensayo
(U/dL)
DE CV% DE CV% DE CV%
1 15.4 216 1.3 8.3 1.6 10.4 1.6 10.4
2 28.0 216 2.4 8.6 2.8 9.9 2.8 10.1
3 47.9 216 2.7 5.5 4.2 8.8 4.7 9.7
4 136.4 216 9.6 7.0 16.2 11.9 17.3 12.7
5 216.9 216 14.2 6.6 24.6 11.3 26.8 12.3
6 303.6 216 11.9 3.9 18.8 6.2 22.7 7.5

Tabla 3. Datos de precisión de GSP Neonatal Biotinidase al emplear una curva de

calibración válida para 24 horas

Variación
Actividad media Variación
dentro del Variación total
Muestra de biotinidasa n dentro del lote
ensayo
(U/dL)
DE CV% DE CV% DE CV%
1 15.3 216 1.4 9.1 1.7 10.9 1.7 10.9
2 28.0 216 2.5 9.0 2.7 9.8 2.8 9.9
3 48.2 216 3.2 6.5 4.2 8.6 4.6 9.5
4 138.3 216 12.2 8.8 16.5 11.9 16.9 12.2
5 218.7 216 18.7 8.5 24.8 11.3 25.7 11.8
6 301.2 216 12.3 4.1 18.6 6.2 24.6 8.2

Límite inferior de detección

Los límites de blanco, detección y cuantificación se determinaron de acuerdo con la

norma EP17-A del NCCLS [10].

El límite de blanco (LoB) del kit GSP Neonatal Biotinidase es de 9.5 U/dL, definido como
el percentil 95 de una distribución de muestras del blanco (n = 150). El límite de detección
(LoD) es de 14.8 U/dL basado en 360 determinaciones de cinco muestras de nivel bajo. El
límite de cuantificación (LoQ) es de 14.8 U/dL, definido como la actividad más baja con un
CV total igual o inferior al 20%.
13907241-3 (es) 19
Linealidad

La linealidad se determinó de acuerdo con la norma EP6-A del NCCLS [11].

Para GSP Neonatal Biotinidase, el método ha demostrado ser lineal de 7.5 U/dL a
353.6 U/dL.

Interferencia

El kit GSP Neonatal Biotinidase se evaluó con el fin de determinar posibles interferencias
conforme a la norma CLSI EP7-A2 [12].

La bilirrubina conjugada (2.5 mg/dL y superior) y los triglicéridos (250 mg/dL y superior)
añadidos a la sangre total interfieren con esta prueba, ya que disminuyen la actividad de
biotinidasa medida. Los niveles elevados de bilirrubina conjugada y triglicéridos pueden
provocar un resultado de cribado falso positivo de una muestra con una actividad de
biotinidasa medida cercana al valor de corte.

El glutatión (22.5 mg/dL y superior) añadido a la sangre total interfiere con esta prueba al
aumentar la actividad de la biotinidasa medida. Los niveles elevados de glutatión pueden
causar un resultado de cribado falso negativo en una muestra con una actividad de
biotinidasa medida cercana al valor de corte.
20 13907241-3 (es)
Se descubrió que las siguientes sustancias no interfieren a la concentración indicada:

Sustancia analizada Concentración añadida de la sustancia analizada

Hormona adrenocorticotrópica 15 ng/dL
Ampicilina 2.8 mg/dL
Ácido ascórbico 3 mg/dL
Bilirrubina, no conjugada 20 mg/dL
Biotina 500 ng/dL
EDTA 1 g/dL
Gammaglobulina 6 g/dL
Sulfato de gentamicina 0.5 mg/dL
Hemoglobina 1.6 g/dL
Heparina 37.5 mg/dL
HSA 6 g/dL
Sulfato de kanamicina 3 mg/dL
Penicilina G 25 mg/dL
Fenitoína 2.5 mg/dL
Fenobarbital 5.5 mg/dL
Sulfametoxazol 20 mg/dL
Sulfisoxazol 15 mg/dL
Trimetoprima 2 mg/dL
Ácido valproico 25 mg/dL
Vitamina K1 0.2 mg/dL

Comparación de los métodos 6

El kit 3307-0010 GSP Neonatal Biotinidase se comparó con el kit 3018-0010/3018-001B

Neonatal Biotinidase en un laboratorio de cribado de rutina midiendo la actividad de la
biotinidasa en 2231 muestras. Incluyen muestras de cribado rutinarias de recién nacidos
(n = 2215), muestras retrospectivas diagnosticadas como positivas para deficiencia de
biotinidasa (n = 9) y muestras de pruebas con control externo CDC de actividad de
biotinidasa baja (n = 7).

Las distribuciones de frecuencia de las muestras de cribado rutinarias y retrospectivas

medidas con el kit 3307-0010 GSP Neonatal Biotinidase y el kit 3018-0010/3018-001B
Neonatal Biotinidase se muestran en los siguientes gráficos.

6
Estudio realizado para Wallac Oy, Turku, Finlandia.
13907241-3 (es) 21

GSP Neonatal Biotinidase 3307-0010

Retrospectivo Rutina
40 450
Número de resultados retrospectivos

35 400

Número de resultados de rutina

350
30

300
25
250
20
200
15
150

10
100

5 50

0 0
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 325 >325
GSP Neonatal Biotinidase (U/dL)

Neonatal Biotinidase 3018-0010/001B

Retrospectivo Rutina
40 450
Número de resultados retrospectivos

35 400

350 Número de resultados de rutina

30

300
25
250
20
200
15
150

10
100

5 50

0 0
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 325 350 >350
Neonatal Biotinidase (U)
22 13907241-3 (es)
Tabla 4. Estadísticas descriptivas del estudio de muestras de cribado rutinarias de recién
nacidos

Percentiles inferiores
Método n Intervalo* Media Mediana
0.5% 1.0% 1.5%
GSP 3307-0010 2215 35.9–415 237 239 85.7 101 107
(U/dL)

3018-0010/001B 2215 33.0-405 193 191 69.0 85.7 95.0

(U)

* Algunos resultados se encuentran fuera del intervalo de medición y no se pueden

considerar como exactos (ver la sección “Notificación de resultados”).

Rendimiento del cribado

Con datos de muestras de cribado rutinarias de recién nacidos, se determinaron los

valores de corte de GSP Neonatal Biotinidase 3307-0010 y Neonatal Biotinidase
3018-0010/3018-001B calculando la actividad de biotinidasa correspondiente a los
percentiles 0.5, 1.0 y 1.5.

Los resultados del cribado, que incluyen las muestras retrospectivas diagnosticadas como
positivas para deficiencia de biotinidasa y las muestras de pruebas con control externo
CDC de actividad de biotinidasa baja, se muestran en las siguientes tablas.

Tenga en cuenta que los valores de corte empleados en esta sección se aplican
únicamente a este estudio.

Tabla 5. Rendimiento del cribado con el percentil 0.5

3018-0010/3018-001B
Cribado Cribado
positivo negativo Total
≤ 69.0 U > 69.0 U
Cribado
positivo 25* 3 28
≤ 85.7 U/dL
GSP Cribado
3307-0010 negativo 3 2200 2203
> 85.7 U/dL
Total 28 2203 2231

* Incluye las 9 muestras retrospectivas de cribado de actividad de biotinidasa baja y

7 muestras de pruebas con control externo CDC de actividad de biotinidasa baja.

Porcentaje de concordancia general = 99.7 % (IC 99.4 % - 99.9 %)

Porcentaje de concordancia para los positivos = 89.3 % (IC 71.8 % - 97.7 %)
Porcentaje de concordancia para los negativos = 99.9 % (IC 99.6 % - 100 %)
13907241-3 (es) 23
Tabla 6. Rendimiento del cribado con el percentil 1.0

3018-0010/3018-001B
Cribado Cribado
positivo negativo Total
≤ 85.7 U > 85.7 U
Cribado
positivo 32 7 39
≤ 101 U/dL
GSP Cribado
3307-0010 negativo 7 2185 2192
> 101 U/dL
Total 39 2192 2231

* Incluye las 9 muestras retrospectivas de cribado de actividad de biotinidasa baja y

7 muestras de pruebas con control externo CDC de actividad de biotinidasa baja.

Porcentaje de concordancia general = 99.4 % (IC 98.9 % - 99.7 %)

Porcentaje de concordancia para los positivos = 82.1 % (IC 66.5 % - 92.5 %)
Porcentaje de concordancia para los negativos = 99.7 % IC 99.3 % - 99.9 %)

Tabla 7. Rendimiento del cribado con el percentil 1.5

3018-0010/3018-001B
Cribado Cribado
positivo negativo Total
≤ 95.0 U > 95.0 U
Cribado
positivo 40* 10 50
≤ 107 U/dL
GSP Cribado
3307-0010 negativo 11 2170 2181
> 107 U/dL
Total 51 2180 2231

* Incluye las 9 muestras retrospectivas de cribado de actividad de biotinidasa baja y

7 muestras de pruebas con control externo CDC de actividad de biotinidasa baja.

Porcentaje de concordancia general = 99.1 % (CI 98.6 % - 99.4 %)

Porcentaje de concordancia para los positivos = 78.4 % (CI 64.7 % - 88.7 %)
Porcentaje de concordancia para los negativos = 99.5 % (CI 99.2 % - 99.8 %)
24 13907241-3 (es)
GARANTÍA

Los resultados aquí presentados se han obtenido por el procedimiento de ensayo

indicado. Cualquier cambio o modificación en el procedimiento no recomendado por el
fabricante puede afectar a los resultados, en cuyo caso Wallac Oy y sus filiales declinan
cualquier responsabilidad y garantía otorgada, expresa o tácita, sobre la comercialización
del producto y su uso.

En tal caso, Wallac Oy, sus filiales y sus distribuidores autorizados no asumen ninguna
responsabilidad por los daños o perjuicios directos o indirectos.
13907241-3 (es) 25
REFERENCIAS

[1] Wolf, B. (2012): Biotinidase deficiency: “if you have to have an inherited metabolic
disease, this is the one to have”. Genet. Med., 14, (6), 565–575.

[2] Kaye, C.I. and the Committee on Genetics (2006): Newborn Screening Fact Sheets.
Pediatrics, 118, e934–e963.

[3] CLSI (2007): Blood Collection on Filter Paper for Newborn Screening Programs;
Approved Standard – Fifth Edition; CLSI Document NBS01-A5. Wayne, PA: Clinical
and Laboratory Standards Institute.

[4] Mei, J.V. et. al. from Newborn Screening Quality Assurance Program, Centers for
Disease Control and Prevention, Atlanta, GA (2011): Evaluation of Filter Paper
Contributions to Reduced Biotinidase Activity in Newborn Screening Specimens.
Paper presented in Newborn Screening & Genetic Testing Symposium, San Diego,
CA, November 7-10, 2011.

[5] Adam, B.W., Hall, E.M., Sternberg, M., Lim, T.H., Flores, S.R., O'Brien, S., Simms, D.,
Li, L.X., De Jesus, V.R., Hannon, W.H. (2011): The stability of markers in dried-blood
spots for recommended newborn screening disorders in the United States. Clin.
Biochem. 44 (17-18), 1445-1450.

[6] Freer, D.E (2005): Observation on Heat/Humidity Denaturation of Enzymes in Filter-

Paper Blood Spots from Newborns. Clin. Chem. 51, 1060-1062.

[7] Westgard, J.O., Barry, P.L., Hunt, M.R., and Groth T. (1981): A multi-rule Shewhart
chart for quality control. Clin. Chem. 27, 493–501.

[8] CLSI (2006): Statistical Quality Control for Quantitative Measurements Procedures:
Principles and Definitions; Approved Guideline - Third Edition. CLSI Document C24-
A3. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute.

[9] CLSI (2004): Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement

Methods; Approved Guideline - Second Edition. CLSI document EP05-A2. Wayne, PA:
Clinical and Laboratory Standards Institute.

[10] National Committee for Clinical Laboratory Standards (2004): Protocols for
Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation; Approved Guideline.
NCCLS document EP17-A. NCCLS, Wayne, Pennsylvania 19087–1898, USA.

[11] CLSI (2003): Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures; A

Statistical Approach; Approved Guideline. CLSI document EP06-A. Wayne, PA:
Clinical and Laboratory Standards Institute.

[12] CLSI (2005): Interference Testing in Clinical Chemistry; Approved Guideline - Second
Edition. CLSI document EP07-A2. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards
Institute.
26 13907241-3 (es)
PATENTES

El sistema está protegido por las siguientes solicitudes en trámite y patentes concedidas y
sus homólogos:

US 8,221,719 B2 US 2012/0045784 A1 US 7,211,440 B2

FI 120538 B EP 2408930 A2 US 7,381,567 B2
EP 2195310 A1 CA 2752814 A1 EP 1483582 B1
CN 101796047 A CN 102369292 A CA 2,477,385
IN 1450/DELNP/2010 WO/2012/110693 CN ZL03809344.8
IN 226372
JP 4339696 B2

Última revision febrero 2014

13907241-3 (es) 27

Resumen del protocolo del ensayo GSP® Biotinidase

USUARIO GSP
 Retire los tapones de los viales de
reactivos, coloque los reactivos en el
cassette de reactivos y coloque los tapones
antievaporación en los viales de reactivo de
substrato y SA.
 Coloque los cassettes de reactivos en el
carrusel de reactivos.
 Perfore los calibradores, los controles y las
muestras en los pocillos.
 Introduzca los códigos de barras de las
placas y la información sobre las muestras
y controles en el software GSP
Workstation.
 Cargue las placas en el instrumento GSP.
 Espere a que se organicen todas las
placas. Si fuera necesario, cargue más
reactivos o consumibles.
El ensayo comienza automáticamente

 Dispensación del tampón del ensayo

(100 µL/pocillo)
 Dispensación del reactivo de substrato
(5 µL/pocillo)
 Agitado (120 s)
 Incubación (105 min a +37 °C)
 Dispensación del tampón del ensayo
(100 µL/pocillo)
 Dispensación del reactivo de SA
(5 µL/pocillo)
 Agitado e incubación (90 min)
 Medición (control de elución)
 Retirada de discos
 Lavar (x 4)
 Dispensación del inductor DELFIA Inducer
(200 µL/pocillo)
 Agitado e incubación (15 min)
 Medición
 Retirada de líquidos
Al final del ensayo

 Retire las placas del cargador de salida

NOTA:
 El cassette de puntas debe cargarse completamente y el cassette de puntas de residuos
debe estar vacío cuando se inserte en el instrumento.